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BIOQUIMICA MOLECULAR, 15



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  • ANÁLISIS MUTACIONAL DE LOS GENES BRCA1 Y BRCA2 EN MUJERES CON CÁNCER DE MAMA PRECOZ .
    Autor: MARTÍNEZ FERRANDIS JOSÉ IGNACIO.
    Año: 2002.
    Universidad: VALENCIA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSITAT DE VALÉNCIA.
    Resumen: Los genes BRCA1 y BRCA2 confieren una alta susceptibilidad al cáncer de mama, explicando entre el 30-40% del cáncer de mama familiar. Además estos genes han sido relacionados con el cáncer de mama precoz. Se ha realizado un cribano de mutaciones en los genes BRCA1 y 2 es una muestra de 124 mujeres con cáncer de mama diagnosticados antes de los 41 años, donde la frecuencia de mutaciones BRCA encontrada fue relativamente baja (5,6%), en consecuencia, tales mutaciones tienen una contribución limitada al cáncer de mama precoz en población española. El riesgo de una mujer con cáncer de mama precoz de ser portadora de mutación en BRCA1 o BRCA2 aumentaba en las mujeres con una familia de primer grado con cáncer de mama, un familiar varón con cáncer de mama o un familiar con cáncer de ovario. Mujeres con tales características pueden beneficiarse especialmente del test genético. Además, la detección de mutaciones más prevalente en población española (tales como y3006x y 924del5 detectadas en este trabajo) puede facilitar el cribado posterior de estos genes en mujeres de nuestra población. Se ha identificado polimorfismos en genes de baja penetrancia que podrían estar relacionados con el cáncer de mama precoz, y a diferencia de lo que ocurre con los genes de alta penetrancia, como BRCA1 y BRCA2, estas variantes parecen estar relacionadas con el cáncer de mama esporádico. El estudio de estos polimorfismos puede permitir establecer mejor los rupos de riesgo de cáncer de mama a la hora de aplicar medidas preventivas, lo que supondría un mejor rendimiento en el coste-beneficio de los recursos dedicados para los servicios de salud a la prevención de esta enfermedad.
  • IDENTIFICACIÓ I CARACTERITZACIÓ DE TRANSPORTADORS DE COURE D'ALTA AFINITAT D'ARABIDOPSIS THALIANA .
    Autor: SANCENÓN GALARZA VICENTE ENRIQUE.
    Año: 2002.
    Universidad: VALENCIA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: F. BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
  • HISTONE ACETYLATION AS A MECHANISM OF GENE REGULATION: A THREE GENE CASE STUDY .
    Autor: BOUKABA ABDELHALIM.
    Año: 2002.
    Universidad: VALENCIA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
  • REGULACIÓN DE LA FOSFATASA SUPRESORA DE TUMORES PTEN .
    Autor: TORRES IBÁÑEZ JOSÉ MANUEL.
    Año: 2002.
    Universidad: VALENCIA .
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÉNCIA.
    Resumen: PTEN es un gen supresor de tumores localizado, en humanos, en la región cromosómica 10q23, que codifica para una proteína de 403 aminoácidos con actividad fosfatasa. Se ha descrito que PTEN, al desfosforilar a la quinasa de adhesiones focales y a la proteína adaptadora Shc, puede regular la migración y adhesión celulares (revisado en Tamura et al., 1999). Asimismo, PTEN puede actuar como una fosfatasa de lípidos al desfosforilar el segundo mensajero lipídico: fosfatidil inositol (3,4,5) trifosfato PTEN, al actuar como una fosfatasa de lípidos, regula una gran variedad de procesos celulares modulados por la ruta de señalización celular de los proto-oncogenes: fosfátil inositol 3-quinasa y proteína quinasa B (revisado en Maechama et al., 2001; Waite & Eng, 2002). En esta tesis doctoral se ha abordado el estudio de posibles mecanismos reguladores de la función de PTEN, como la fosforilación y la proteólisis mediada por caspasas. Las conclusiones obtenidas de este trabajo de tesis doctoral son: 1,- PTEN es fosforilada y por la proteína quinasa CK2 in vitro y, posiblemente, in vivo. Los fosforilados son: Ser370, Ser385 y, en menor grado Thr385 y/o Thr383. 2,- PTEN es un sustrato de caspasa-3 in vitro y, posiblemente, in vivo. Los sitios de corte de caspasa-3 son: Asp301, Asp371, Asp375 y Asp384. 3,- La fosforilación de PTEN por CK2 estabiliza a la proteína frente a la degradación por el proteasoma, y dificulta su proteólisis por la caspasa-3 en los residuos Asp371, Asp375 y Asp384. 4,- El cote de PTEN por la caspasa-3 puede inhibir su asociación con la proteína de andamiaje S-SCAM.
  • ESTUDIO DE LA RECUPERACIÓN INMUNOLÓGICA TRAS LA ADMINISTRACIÓN DE TRATAMIENTOS ANTIRRETROVIRALES DE GRAN ACTIVIDAD, EN NIÑOS INFECTADOS VERTICALMENTE POR EL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA DE TIPO 1 .
    Autor: SIRERA PÉREZ RAFAEL.
    Año: 2002.
    Universidad: VALENCIA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARI LA FE DE VALENCIA.
    Resumen: La historia natural de la infección por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) se ha modificado drásticamente gracias a los tratamientos antirretrovirales de gran actividad (TARGA). Éstos han mostrado ser muy superiores en eficacia antiviral a terapia convencional, frenar la progresión de la inmunodeficiencia, disminuir la morbilidad y mortalidad de los infectados y han permitido conocer mejor la etiopatogenia de enfermedad. El principal objetivo del TARGA es reducir la viremia hasta valores indetectables durante la mayor cantidad de tiempo y así impedir la pérdida paulatina de los linfocitos CD4+. Para comprobar si tras un largo periodo de TARGA se produce una verdadera y efectiva recuperación inmunológica, tanto cualitativa como cuantitativa, se ha realizado el presente estudio en niños infectados verticalmente por el VIH y sometidos a tratamiento. Atendiendo al cambio que han sufrido los niveles de carga viral plasmática a lo largo del periodo retrospectivo de nuestro estudio, se han agrupado los niños en tres categorías de eficacia antiviral, alta, media y baja. Y en ellos se han analizado diversas poblaciones y subpoblaciones linfocitarias de sangre periférica, el nivel de citocinas plasmáticas, las respuestas proliferativas linfocitarias in vitro y también la producción de citocinas in vitro. Nuestros hallazgos ponen en evidencia que tras cuatro años continuados de TARGA, los niños VIH+ se benefician inmunológicamente de estos tratamientos. En ellos se puede objetivar una recuperaicón de los linfocitos CD4+, un reequilibrio de los linfocitos CD8+ circulantes y la normalización de las respuestas funcionales a estímulos policlonales. La calidad de la supresión viral conseguida es el factor limitante más importante que define la intensidad y la cronología de los eventos inmunológicos recuperados. Pero aunque la disminución de la carga viral no sea absoluta, se puede alcanzar un nivel de inhibición de la expansión viral que permita que se recuperen las subpoblaciones de linfocitos CD4-t-. La constatación de células CD8+ efectoras antivirales persistentes y la generación de nuevos linfocitos CD8+ a partir de precursores, sugiere que el nivel de eficacia terapéutica observado, aunque insuficiente para erradicar definitivamente el virus, suponen una buena contención de la enfermedad a la espera de que se generen nuevos diseños terapéuticos que los consignan definitivamente.
  • TRANSFERENCIA INTERCELULAR DE NITRÓGENO EN LA CIANOBACTERIA FORMADORA DE HETEROCISTOS ANABAENA SP. PCC 7120 .
    Autor: PICOSSI GOÑI SILVIA M..
    Año: 2002.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: INSTITUTO DE BIOQUÍMICA VEGETAL Y FOTOSÍNTESIS (UNIVERSIDAD DE SEVILLA).
    Resumen: En este trabajo se han abordado algunos aspectos del metabolismo del nitrógeno en la cianobacteria Anabaena sp. PCC 7120. Se han estudiado, por una parte, sistemas de transporte de aminoácidos y su implicación en el crecimiento a expensas de nitrógeno atmosférico y, por otra parte, la expresión de los genes del metabolismo del a cianoficina y su implicación en el metabolismo diazotrófico de esta cianobacteria. El sistema de transporte de aminoácidos neutros N-I, que es el del tipo ABC, está implicado en el metabolismo diazotrófico de Anabaena. También participan en dicho metabolismo el transporte y degradación de urea, así como el catabolismo de la prolina, que es el único aminoácido transportado exclusivamente por el sistema N-I, Los genes del metabolismo de la cianoficina en Anabaena sp. PCC 7120 presentan una regulación muy compleja que permite a esta cianobacteria mantener una expresión basal relativamente alta de estos genes en todas las condiciones celulares y, por otra parte, permite que dichos genes se expresen diferencialmente según sea el tipo celular y la condición nitrogenada de que se trate. No obstante, la síntesis de cianoficina no es un proceso imprescindible para Anabaena sp., pueda vivir a expensas del nitrógeno atmosférico.
  • REGULACIÓN POR RADICALES LIBRES DE OXÍGENO DE DIFERENTES VÍAS DE SEÑALIZACIÓN EN CÉLULAS FAGOCÍTICAS (CALCINEURINA, MAP QUINASAS Y NF-KB) Y EN CÉLULAS VASCULARES .
    Autor: EL BEKAY RAJAA.
    Año: 2002.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: La angiotensina II activa los neutrófilos humanos, vía el receptor AT1, implicando la activación de la NADPH-oxidasa, de la ruta de las proteínas MAP quinasas, de la síntesis y la actividad de la calcineurina y de la actividad de unión del NF-kB al DNA, dependientemente de la tirosina quinasa y del Ca2+ intracelular. Los datos obtenidos sugieren la existencia de una interdependencia entre las vías de activación de la NADPH-oxidasa y las rutas de activación de las MAP quinasas dependiente de la angiotensina II en neutrófilos humanos. La angiotensina II produce un incremento en la concentración del Ca2+ citosólico, que proviene principalmente de la liberación de los depósitos intracelulares, y en menor medida, de la entrada del Ca2+ extracelular. Asimismo, la hormona induce la síntesis y la activación de la calcineurina. Este hecho está acompañado de la activación del NF-kB y de la desaparición previa del Ik-B. La angiotensina II induce la producción de O2 en anillos de aorta de rata. De manera novedosa observamos que la ciclosporina A produce también un efecto potenciador, aunque la presencia simultanea de ambos agentes no determina un efecto cooperativo, sugiriendo que ambos siguen rutas comunes de activación de la NADH-oxidasa. La norfloxacina activa a la NADPH-oxidasa en los macrófagos peritoneales. Esta activación es dependiente de las proteínas quinasas y del AMP cíclico. Las organelas de los mamíferos son importantes dianas intracelulares de la norfloxacina.
  • CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE LA ASPARTATO QUINASA DE S.CEREVISIAE .
    Autor: MARINA LOSADA PABLO.
    Año: 2002.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: Durante la presente tesis se han puesto a punto sendos sistemas de purificaicón de las aspartato quinasa silvestre y la producida como una fusión. El estudio de ambas ha permitido conocer que la estructura cuaternaria nativa es, en ambos casos, hexatiérica. Del mismo modo se ha analizado la estructura cuaternaria de la aspartato quinasa producto del alelo mutante HOM3-R2. Esta también ha resultado ser hexamérica. Se ha descrito la existencia de un cambio conformacional que la aspartato quinasa sufre en presencia de treonina y que está asociado a la inhibición por treonina. Este estudio, junto con un análisis detallado de los fenómenos de cambio conformacional e inhibición y del comportamiento de la aspartato quinasa producto del alelo mutante HOM3-R2, ha permitido desarrollar un modelo que explica el proceso de inhibición por treonina.
  • ALELOS CLASE II DEL SISTEMA PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD EN LA CARDIOPATÍA REUMÁTICA .
    Autor: FLORES DOMINGUEZ CARMINA.
    Año: 2002.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: La Cardiopatía Reumática (CR) es una complicación de la Fiebre Reumática (FR), la cual es una secuela de una infección por Estreptococo del grupo A nivel faríngeo. No todos los pacientes que padecen una infección faríngea estreptocócia padecen FR, lo cual se podría explicar con la teoría de la existencia de componentes genéticos que confieran susceptibilidad genética para padecer la enfermedad. Los alelos codificados en el Sistema Principal de Histocompatibilidad se han relacionado con diversas enfermedades a fin de encontrar dichos componentes, en cuanto a esta enfermedad se cuenta con pocos datos a la fecha. Estudiamos a 98 pacientes mestizo-mexicanos con el diagnóstico de CR realizado por Médicos Cardiólogos del Instituto Nacional de Cardiología Ignacio Chávez en México, D.F y 99 controles sanos no relacionados. Fueron clasificados según el patrón de daño valvular que presentaron en: 1,- Daño en válvula mitral. 2,- Daño multivalvular. 3,- Daño en válvula aórtica. Se obtuvo una muestra de 5-10 ml de sangre de la cual se extrajo ADN genómico, el cual fue amplificado por técnica de PCR, determinando los alelos HLA mediante técnicas moleculares (Kit Amplicor). Los resultados se analizaron posteriormente con la prueba del X2, la prueba Exacta de Fisher y el valor de p fue corregido según Yates. Encontramos una frecuencia elevada del alelo HLA-DR16 (pC=0.009, RM=3.9,95% IC=1.3-12.2, FE=6.8%) subtipo DRB1*1602 en el grupo de pacientes (pC=0.007, RM=5.3, 95% IC=1.4-23.8, FE=6.2%). La frecuencia del alelo HLA-DR11 se encontró disminuido en el grupo de pacientes (pC=0.018, RM=0.33, 95% IC=0.12-0.85) al compararse con los controles. El haplotipo HLA-DR16-DQA1*0501-DQB1*0301 se encontróo más frecuentemente en el grupo de pacientes que en los controles. Por último, los pacientes que presentaron daño multivalvular presentaron una frecuencia elevada del alelo HLA-DR16 (pC=0.004, RM=4.8, 95% IC=1.5-16.6, FE=8.9%) al compararse con el grupo control. Concluimos que el alelo HLA-DR16 podría jugar un papel importante en la susceptibilidad genética para CR y el subtipo HLA-DRB1*1602 podría utilizarse como marcador de la susceptibilidad genética para CR.
  • EFECTO DE LA PANCREASTATINA EN EL TEJIDO ADIPOSO .
    Autor: GONZÁLEZ YANES CARMEN.
    Año: 2002.
    Universidad: SEVILLA .
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: BIOQUÍMICA MÉDICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR.
    Resumen: La PST producida por proteolisis de la cromagranina A, actúa sobre el tejido adiposo blanco de rata, estimulando la lipolisis y la síntesis de proteína y contrarregulando la acción de la insulina en la captación de glucosa, producción de lactato lipogénesis y síntesis de glucógeno. Estos efectos metabólicos están mediados a través de un mecanismo de señalización en el que está implicado un receptor de membrana acoplado a una proteína Gq/11 (y en menor medida a una proteían Gi1,2) que activa a una PLC-B3, la cuál estimula a una PRC clásica. La fosforilación en ser/thr por PRC del receptor de insulina y sus sutrato produce la inhibición posterior de las actividades enzimáticas de PI3k, PKB y GS, lo que conduce a la inhibición de los procesos metabólicos mediados por la señalización de la insulina como la translocación de GLUT-4 a las membranas y la síntesis de glucógeno. Además la PST actúa sobre el metabolismo energético, inhibiendo la expresión de leptina y en su secreción, así como estimulando la expresión de UCP-2
  • PAPEL DE LA OXIDACIÓN DE PROTEÍNAS IMPLICADAS EN LOS MECANISMOS REGULADORES DE LA APOPTOSIS (BCL-2 Y ANT) INDUCIDA POR EL ÓXIDO NÍTRICO EN CÉLULAS SECRETORAS DE INSULINA .
    Autor: CAHUANA MACEDO GLADYS MARGOT.
    Año: 2002.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSIDAD DE SEVILLA.
    Resumen: Los estudios relacionados con los mecanismos moleculares de acción del óxido nítrico (NO) son muy diversos; sin embargo, es mucho lo que se desconoce sobre ello. Un aspecto trascendental es su papel como modulador de la apoptosis. En otras tesis doctorales anteriormente realizadas en nuestro laboratorio se ha descrito que el NO a elevadas concentraciones induce apoptosis en las células RINm5F. En esta tesis presentamos evidencia de que las acciones apoptóticas del NO están relacionadas mecanísticamente con su capacidad de oxidar lípidos y proteínas. En la primera parte de la tesis mostramos que tanto el NO generado endógenamente por inducción de la iNOS por acción de la IL-1beta como el NO derivado de donadores químicos inducen la formación de productos finales de la peroxidación de lípidos, siendo dicha peroxidación disminuída significativamente por la superóxido dismutasa y la catalasa. En la segunda parte dela tesis mostramos que dos proteínas importantes en el control de la apoptosis, Bcl-2 y ANT, son oxidadas por acción del NO. Esta oxidación está principalmente mediada por los productos finales de la lipoxidación avanzada (ALEs) generados por el NO, ya que tanto al aminoguanidina (AG) como la piridoxamina (PM), inhibidores de la formación de los ALEs, cancelan la oxidación producida por el NO; asimismo, la AG y la PM disminuyen significativamente la apoptosis inducida por el NO. En la tercera parte de la tesis presentamos evicencias sobre el papel de la GAPDH en la apoptosis inducida por el NO. El NO inhibe la actividad de la GAPDH e induce su translocación desde el citoplasma al núcleo; estos efectos son dependientes de la formación de los ALEs inducida por el NO, ya que tanto la AG como la PM los cancelan.
  • CONEXIÓN ENTRE RECOMBINACIÓN Y BIOGENESIS DEL RNA: THP1 Y OTRAS PROTEINAS FUNCIONALMENTE RELACIONADAS .
    Autor: GALLARDO ORTEGA MERCEDES.
    Año: 2002.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: Esta tesis describe la identificación y caracterización de unas proteínas de S.cerecisiae que conectan la intestabilidad genérica con el metabolismo del MRNA. Estas son Thp1, Sac3 y Nab2. Tph1 y Sac3 forman un complejo proteico estable, mientras que Nab2 se identificó un supresa en multicapa del mutante Thp1A. La ausencia de cualquiera de estas proteínas provoca un fenotipo de hiper-recombinación entre repeticiones directas asociadas a un efecto durante la transcripción.
  • ESTUDIOS ESTRUCTURALES DE DISINTEGRINAS AISLADAS DE VENENOS DE SERPIENTES .
    Autor: MORENO MURCIANO M. PAZ.
    Año: 2002.
    Universidad: VALENCIA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
    Resumen: La presente tesis doctoral ha permitido establecer estudios de correlación estructura-función de desintegrinas, proteínas aisladas del veneno de serpiente de la familia Crotalidae y Viperidae. Las disintegrinas inhiben la actividad normal de las integrinas de la familia B1 y B3 compitiendo con los ligando propios de éstas. La selectividad de inhbición de las disintegrinas se debe esencialmente a la variabilidad estructural del bucle de unión, generado por mutaciones o delecciones. Por otra parte, las disintegrinas se generan un procesamiento proteolítico de metaloproteasas dependientes de Zn++. Estas proteínas existentes en el veneno de serpientes han evolucionado de manera divergente de proteínas de la familia ADAM, ubículas en la membrana plasmática de células de organismos multicelulares de toda la escala evolutiva.
  • CARACTERIZACIÓN DE GENES RSF IMPLICADOS EN EL CONTROL DEL CICLO CELULAR EN LEVADURA .
    Autor: QUERALT BADÍA ETHELVINA.
    Año: 2002.
    Universidad: VALENCIA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.
    Resumen: En S.cervisiae, al igual que en células de mamífero, el principal control durante el ciclo celular está situado al final de la fase G1, en un punto llamado START (Cross 1995). En START se coordina el crecimiento con la división celular; la célula sólo entrará en un nuevo ciclo celular si ha alcanzado un tamaño crítico y las condiciones medioambientales son apropiadas. Un proceso clave en START es la activación de un programa de transcripción específico de la fase G1 tardía. Dos factores de transcripción similares, SBF y MBF, son los responsables de esta regulación de la expresión génica. Con el objeto de un mejor conocimiento de los mecanismos moleculares que controlan START y la transición G1/S en el ciclo celular, se inició una estrategia de rastreo genético diseñada para identificar genes cuya mutación sea letal en combinación con una deleción en el gen SWI4 (Igual et al. 1996). De dicho rastreo se aislaron 14 mutantes rsf ("requiring SWI four"). La caracterización preliminar de estos mutantes puso de manifiesto que Swip4p interviene en muchas y variadas funciones además, e independientemente, de la regulación de las ciclinas CLNI, 2 (Igual et al.1997). Durante el presente trabajo se han caracterizado dos de estos mutantes rsf. En el caso del mutante clb5swi4, se ha demostrado la conexión funcional de la ciclina Clb5p, de la ruta PKC y el factor de transcripción SBF en procesos de metabolismo del DNA y en el mantenimiento de la integridad celular. Por otro lado, se ha descrito que el gen ROT1, relacionado con la ruta PKC, participa en la salida de mitosis y en citoquinesis. En el segundo caso, la caracterización del mutante msn5swi4 realizada los últimos años ha permitido identificar una relación funcional entre el factor de transcripción de ciclo celular SBF y la carioferina Msn5p. También se ha demostrado que Msn5p participa en el control de Start regulando la transcripción dependiente de SBF. Msn5p se requiere para la exportación de Swi6p en la transición G2/M del ciclo celular. La exportación de Swi6p al citosol es esencial para su funcionalidad y es un proceso de regulación que actúa en cada ciclo celular. Nuestros resultados son un buen ejemplo de la importancia de la regulación espacial en el control del ciclo celular. En el caso de Swi6p el concepto de regulación espacial va más allá en el sentido de que un interruptor funcional de la proteína se acopla a cambios en la localización subcelular.
  • ANÁLISIS FUNCIONAL DE LA REGIÓN N-TERMINAL DE LA HMG-COA REDUCTASA DE ARABIDOPSIS .
    Autor: LEIVAR RICO PABLO.
    Año: 2002.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAT DE QUÍMICA - UNIVERSITAT DE BARCELONA.
    Resumen: Las plantas sintetizan una gran variedad de compuestos de naturaleza isoprenoide a través de una ruta metabólica muy compleja y ramificada. La enzima HMG-CoA reductasa (HMGR) cataliza la conversión de HMG-CoA en mevalonato, una etapa limitante de flujo para la biosíntesis de isoprenoides en el citosol-retículo endoplasmático (RE). En Arabidopsis existen dos genes (HMG1 y HMG2) que codifican para tres isoformas de la enzima: HMGR1L, HMGR1S y HMGR2. Las isoformas HMGR1L y HMGR1S son idénticas en secuencia, pero la isoforma HMGR1L contiene una extensión N-terminal de 50 aminoácidos (región 1 Lextra). Múltiples estudios sugieren que distintas isoformas de HMGR estarían implicadas en la biosíntesis de isoprenoides particulares, aunque no existen datos preciosos sobre el posible mecanismo que determinaría tal especialización. En este trabajo se ha utilizado la proteína fluorescente verde para analizar el papel del dominio N-terminal de las isoformas HMGR1L y HMGR1S en su localización subcelular. Se comprobó que la presencia de la región 1Lestra en la isoforma HMGR1L es responsable de su localización exclusiva en el RE, lo que contrasta con la distribución preferencial de la isoforma HMGR1S en estructuras vesiculares de 0.5-2 um. Como resultado de un escrutinio mediante la técnica del doble híbrido para la búsqueda de proteínas que interaccionen con la región N-terminal citosólica de la isoforma HMGR1L, se identificaron las proteínas PR2A1, PR2A2, KLC1. PR2A1 y PR2A2 resultaron ser subunidades reguladoras B" de la proteína fosfatasa 2A (PP2A) que interaccionan de manera selectiva con la región N-terminal citosólica de las isoformas HMGR1L y HMGR1S, pero no con la de la HMGR2. Además, se observó que la interacción es modulada por calcio, lo cual sugiere que la PP2A podría formar parte de la cascada de señalización celular que permitiría ajustar la actividad HMGR a los estímulos ambientales y de desarrollo. Por otro lado, KLC1 resultó ser homóloga a las cadenas ligeras de quinesina de tipo I. También se determinó que KLC1 interacciona de manera selectiva con la región N-terminal citosólica de la isoforma HMGR1L, pero no con la región correspondiente de la HMGR1S ni de la HMGR2. Esta interacción es mediada por la región 1Lextra, lo cual sugiere un posible papel de KLC1 en la localización subcelular de la isoforma HMGR1L. Considerando la localización subcelular y la interacción específica con PR2A1, PR2A2 y KLC1, se presenta un modelo de especialización funcional de las isoformas HMGR1L y HMGR1S en el cual la biosíntesis de mevalonato ocurriría en dos compartimentos subcelulares: el RE y las estructuras vesiculares, las cuales constituirían un nuevo comportamiento para la biosíntesis de isoprenoides en plantas.
  • LA HIPERPLASIA SUPRARRENAL CONGÉNITA POR DEFECTO EN LA ENZIMA 21-HIDROXILASA: CARACTERIZACIÓN POR EL SISTEMA HLA Y APORTACIÓN DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR .
    Autor: PLENSA NEBOT M. ISABEL .
    Año: 2002.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: La hiperplasia suprarrenal congénita (HSC) comprende un conjunto de trastornos hereditarios de la esteroidogénesis, causados por la deficiencia de alguna de las enzimas necesarias para la conversión del colesterol en cortisol. El más frecuente es el déficit en 21-hidroxilasa, responsable de cerca del 90% de los casos de HSC. El déficit en 21-hidroxilasa es una enfermedad hereditaria autosómica recesiva, causado por una alteración genética en el gen CYP21B que codifica la enzima. Esta enfermedad presenta un espectro de manifestaciones clínicas muy amplio; desde formas severas que se presentan al nacimiento, en las que la virilización puede ir o no acompañada de un síndrome pierde sal, hasta formas más leves en que los signos de virilización se presentan más tardíamente. La incidencia de las formas clásicas de este déficit, oscila alrededor de 1:100.000-15.000 nacimientos, mientras la de las formas no clásicas se ha estimado en 1:1.000 en la población blanca, con marcadas variaciones étnicas. El objetivo ha sido la caracterización clínica, biológica y genética de la HSC por déficit en 21-hidroxilasa de una población de la Comunidad Autónoma de Catalunya, con el fin de poder realizar un diagnóstico etiológico concluyente y establecer el consejo genético familiar completo. Han colaborado 53 familias (106 cromosomas no emparentados) con al menos un hijo diagnosticado de HSC por déficit en 21-hidroxilasa, siendo el total de individuos estudiados de 214. De este total, 71 son pacientes que según los síntomas clínicos fueron clasificados en: 13 SW; 5 SV y 53 NC; 102 son progenitores y 41 son hermanos de dichos pacientes, ninguno de ellos clínicamente afecto. Para la determinación de la función hormonal se practicó una prueba de estimulación con corticotropina (test de ACTH), con valoración de las concentraciones plasmáticas de 17-hidroxiprogesterona antes y tras 30 minutos de la inyección. La determinación de los antígenos de Clase I y Clase II del Sistema HLA, se realizó mediante la técnica de Microlinfocitotoxicidad. El análisis genético consistió en la detección de grandes reordenamientos mediante la técnica de Southern blot, y la detección de nueve de las mutaciones puntuales más comunes mediante el diseño de una nueva metodología en la que se emplean dos estrategias según la mutación a detectar: ganancia o pérdida de al menos una diana de restricción en el producto de PCR amplificado a partir de DNA genómico o creación de una diana de restricción por amplificación (ACRS-PCR) y posterior digestión con una enzima de restricción apropiada. El test de ACTH se confirma como fiable, ya que no se observaron falsos positivos ni falsos negativos en los valores obtenidos de 17-hidroxiprogesterona post estimulación. El nomograma de 17-hidroxiprogesterona proporciona un patrón hormonal que facilita, en la mayoría de los casos, el diagnóstico de las distintas formas de presentación clínica del déficit. No se observó la presencia del antígeno HLA-Bw47 en ninguno de los grupos analizados. Las formas no clásicas se encuentran significativamente asociadas al haplotipo HLA-B14-DR1, mientras que las formas clásicas al antígeno HLA-B5(w51). La metodología utilizada para el análisis molecular del gen, ha permitido detectar la mutación causal en el 89,62% de los cromosomas afectos, evaluados globalmente, consolidándose ésta como altamente efectiva en el diagnóstico de esta patología. Las mutaciones más frecuentes observadas han sido: Intrón 2 (50%) en SW; Intrón 2 (50%) y I172N (16,6%) en SV y V281L (61,5%) en NC. El análisis de los pedrigrees ha permitido diagnosticar veintiséis formas crípticas y revelar en dos casos la presencia de mutaciones originadas de novo. La concordancia hallada entre el genotipo y el fenotipo ha sido del 97,2%, de ahí, que las predicciones desde el genotipo han de ser hechas todavía con gran cautela.
  • CLONATGE I ANÁLISI TRANSCRIPCIONAL DEL PROMOTOR DEL GEN SP1 .
    Autor: NICOLAS FARRES MARTA.
    Año: 2002.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA (UB).
    Resumen: El factor de transcripción Sp1 se caracteriza por su unión a las cajas GC de regiones promotoras de gran variedad de genes. El interés de este trabajo se ha centrado en el estudio de la regulación del gen Sp1. Adicionalmente, relacionado con Sp1 y debido a que Sp1 es el principal regulador del gen dihidrofolato reductasa (dhfr) y que este enzima, la dhfr es la diana del agente quimioterápico metotrexato (MTX), en este trabajo también hemos establecido una relación entre Sp1 y el incremento de la resistencia aparecida después del tratamiento con MTX mediada por TPA. En relación a la primera parte, hemos clonado un fragmento de 1593 pb de la región 5' del gen Sp1. El inició de transcripción lo hemos situado a -63 nt relativos al inicio de la traducción. En esta secuencia promotora hemos identificado posibles sitios de unión para los factores de transcripción: P53, E2F, SP1, C/EBP, NF-Y, CREB, AP2 y AP1. Mediante delecciones de este fragmento hemos identificado la región mínima promotora del gen en los 217 nt upstream del inició de transcripción, dentro de esta secuencia había sitios potenciales de unión para: NF-Y, C/EBP, AP2, SP1UPSTREAM, SP1DOWNSTREAM Y E2F. Mediante ensayos de retardación de la movilidad electroforética hemos demostrado la unión de los factores Sp1, Sp3 y NF-Y en esta región mínima promotora del gen Sp1. Para examinar el papel de Sp1 en su regulación, hemos sobrexpresado Sp1, juntamente con un plásmido reprotero a base de luciferasa controlado por la secuencia mínima promotora de Sp1. La sobrexpresión de Sp1 activa la propia actividad transcripcional. Al sobrexpresar Sp3 no hemos observado una diferencia significativa, pero al sobrexpresar Sp3 junto con Sp1 hemos determinado que la activación provodada por Sp1 quedaba contrarrestada al sobrexpresar Sp3. La sobrexpresión de los factores de transcripción NF-Y y E2F también son capaces de activar la transcripción del gen Sp1. En la región mínima promotora del gen Sp1 hemos determinado una secuencia que contiene una caja solapada de NF-Y y de Sp1. En esta secuencia solapada hemos demostrado que los dos factores de transcripción compiten para la unión, a pesar de que el factor de transcripción NF-Y se une preferentemente. Cuando mutamos la secuencia correspondiente a NF-Y, Sp1 se une con más fuerza. A nivel funcional esto se traduce en que la mutación de la secuencia de NF-Y dentro de la caja solapada, provoca un aumento de la transcripción de Sp1, este hecho no significa que NF-Y tenga un efecto negativo, sino que en este caso, Sp1 se puede unir con más fuerza y activar la transcripción más intensamente que NF-Y. La transcripción de Sp1 está regulada por un complejo general que gobierna la transcripción. Este hecho permite explicar que aunque se produzca la mutación de alguna de las secuencias diana de factores de transcripción, este factor, puede continuar activando la transcripción ya que se une al complejo general de transcripción. Referente a la segunda parte hemos demostrado que se produce un aumento de los niveles de mRNA y de proteína Sp1 después de tratamiento con TPA. Este aumento de los niveles de Sp1 podría explicar el aumento de resistencia al MTX por una activación directa de la DHFR.
  • ESTUDIO DE LOS MECANISMOS DE ACCIÓN DE LA PROTEÍNA TAT DEL VIH SOBRE LA MAQUINARIA CELULAR. IDENTIFICACIÓN DE GENES CELULARES REGULADOS POR TAT Y SUS IMPLICACIONES TERAPÉUTICAS .
    Autor: CALZADO CANALE MARCO ANTONIO.
    Año: 2002.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA. UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA.
    Resumen: El ciclo de infectivo del VIH (virus de la Inmunodeficiencia humana) se encuentra regulado tanto por factores celulares como virales, destacando por su importancia la proteína viral Tat. La proteína Tat del VIH es una proteína transactivadora necesaria para la replicación viral, que actúa principalmente mediatne el control que ejerce sobre la elongación de la transcripción o mediante la interacción con otros factores de transcripción celulares. Mediante la acción de la proteína Tat y otras proteínas virales, el virus es capaz de modular la expresión génica del huésped con el fin favorecer el ciclo viral. El desarrollo de esta tesis se ha centrado en el estudio de los mecanismos de acción de la proteína Tat del VIH sobre la maquinaria celular y la identificación de genes celulares regulados por esta proteína viral. Inicialmente describimos los mecanismos bioquímicos y moleculares que regulan la apoptosis en presencia de Tat. Mediante técnicas de differential display hemos logrado identificar una serie de genes celulares regulados por esta proteína bajo diferentes condiciones, y cuyos productos participan en importantes procesos biológicos de la célula huésped. Por su importancia en el control de la transcripción, hemos desarrollado nuestro trabajo en el complejo de proteínas CPSF (cleavage and polyadenylation specificity factor), el cual aumenta la expresión de una de las proteínas del complejo (CPSF3) en diferentes líneas celulares. Mediante experimentos de sobre-expresión y silenciamiento mediante técnicas de ARNm de interferencia hemos demostrado que esta subunidad ejerce un importante papel regulador sobre la expresión génica celular y viral. Además de las funciones descritas para GPSF3 sobre la maduración del ARNm, en este trabajo también presentamos evidencias de una posible actividad reguladora sobre la transcripción de esta subunidad. Así, el aumento de la expresión de CPSF3 por la proteína Tat del HIV podría representar un novedoso mecanismo por el cual este virus favorece el procesamiento del ARNm, provocando un incremento tanto en la expresión génica celular como viral.
  • MECANISMOS DE REGULACIÓN DE LOS FACTORES INTERCAMBIO DE LA FAMILIA RAS-GRF .
    Autor: AROZARENA MARTINICORENA IMANOL.
    Año: 2002.
    Universidad: CANTABRIA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: DPTO. BIOLOGÍA MOLECULAR.
    Resumen: Las proteínas Ras actúan como interruptores moleculares regulando el inicio, duración y finalización de un gran número de procesos celulares. Estas GTPasas son activadas de forma transitoria por diversos estímulos extracelulares que inducen la activación de los Factores de intercambio de nucleótidos (GEFs), que catalizan el intercambio de nucleótidos GDP por GTP sobre las proteínas Ras. Este estudio se ha centrado en la familia de GEFs de Ras en mamíferos, Ras-GRF/Cdc25Mn. Ras-GRF reúne un complejo conjunto de motivos estructurales que incluyen un dominio de homología de Db1 (DH), presente en proteínas que interaccionan con GTPasas de la familia Rho, y cuya función no está del todo esclarecida. En este estudio hemos descrito como el dominio DH es necesario para la translocación a membrana de Ras-GRF1, localización necesaria tanto para estimular el intercambio GDP/GTP sobre Ras, como para activar a la proteína kinasa activada por mitógenos (MAPK). Además, y de una forma sin precedentes hasta el momento, hemos observado que estos procesos están regulados por la GTPasa de familia Rho, Cdc42. Hemos encontrado que únicamente la forma unida a GDP de Cdc42 previene el acceso de Ras-GRF1 a membrana y la activación de la vía Ras/MAPK por el GEF, aunque no hemos obsrvado una interacción directa entre ambas proteínas. También hemos demostrado que la catálisis de intercambio de nucleótidos sobre Cdc42 facilita la activación de MAPK inducida por Ras-GRF1. Además se ha observado que la potenciación de activación de MAPK por Ras-GRF1 inducida por ionomicina, que induce elevaciones intracelulares de calcio, también esta regulada por Cdc42. Profundizando en ete mecanismo de regulación, se ha demostrado que el mantenimiento de Cdc42 unido a GDP sobreexpresando RhoGDI (Factor inhibidor del intercambio de nucleótidos para proteínas de la familia Rho), inhibe la activación de MAPK inducida por Ras-GRF1. Por otro lado, tanto la activación basal como la inducida por ionomicina o ácido lisofosfatídico (LPA), no se veían afectadas en absoluto por la sobreexpesión de Cdc42QL (mutante constitutivamente unido a GTP), o por mutantes activados de proteínas efectoras de Cdc42. Interesantemente, la inducción de la forma GTP en Cdc42 anula el efecto inhibitorio de Cdc42 sobre las funciones de Ras-GRF1. Por otro lado, hemos observado que tanto Ras-GRF1 como Ras-GRF2 activan a H-Ras de manera diferencial en Retículo Endoplásmico (activación regulada por el dominio DH) y en membrana periférica, por otra parte, ninguno de estos GEFs mostró capacidad de activar el reservorio de H-Ras en el Aparato de Golgi. Por último, aunque de manera preliminar, hemos observado que Cdc42 regula negativamente el intercambio de nucleótidos sobre H-Ras tanto en Retículo Endoplásmico como en Membrana Plasmática.
  • ESTUDIO COMPARATIVO DE LOS GENES MAX Y MAD. EXPRESIÓN DIFERENCIAL Y EFECTOS EN PROLIFERACIÓN CELULAR .
    Autor: MAULEÓN MAYORA ITSASO.
    Año: 2002.
    Universidad: CANTABRIA.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSIDAD CANTABRIA.
    Resumen: La red Myc-Max-Mad está formada por un grupo de factores de transcripción cuyas funciones están involucradas en procesos celulares tales como proliferación, diferenciación y apoptosis. Existe amplia información sobre c-myc, cuyas funciones están bien estudiadas. Para ejercer su función, c-myc interacciona con max que a su vez puede interaccionar con cualquiera de los genes de la familia mad que antagonizan la función de c-myc. El principal objetivo de este trabajo fue estudiar si los genes mad tienen diferentes funciones, y profundizar en su regulación y su expresión. Para ello nos planteamos los siguientes objetivos: * Comparar la función y la regulación de los genes de la familia mad en el crecimiento celular, la diferenciación celular y la apoptosis en distintos tipos celulares de manera comparativa. * Estudiar la expresión de los genes de la familia mad en muestras clínicas de leucemias de origen mieloide. * Estudiar la regulación de los genes de la familia mad en un modelo "in vivo" de proliferación celular sincronizada, es decir, hepatocitos de hígado regenerante. La conclusión general de este trabajo es que la regulación de la expresión de c-myc, max y los genes mad es diferencial en los distintos modelos y que las funciones no son redundantes.
2388 tesis en 120 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92 | 93 | 94 | 95 | 96 | 97 | 98 | 99 | 100 | 101 | 102 | 103 | 104 | 105 | 106 | 107 | 108 | 109 | 110 | 111 | 112 | 113 | 114 | 115 | 116 | 117 | 118 | 119 | 120
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