BIOQUIMICA MOLECULAR, 16

Autor: LLAMA PALACIOS M. ARÁNZAZU.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS .
Centro de realización: E.T.S. INGENIEROS AGRÓNOMOS (UPM).

Resumen: Se ha identificado un putativo transportador tipo ABC de Erwinia Chrysanthemi que se ha denominado YbiT. El gen contiguo a ybiT, denominado pab, muestra similitud de secuencia con proteínas de biosíntesis de antibióticos. El mutante ybiT (BT117) retiene toda la virulencia, pero muestra una capacidad reducida para competir in planta contra la cepa silvestre o contra bacterias endofitas. Por lo que, el gen ybiT, juega un papel en el fitness in planta de la bacteria. Se han estudiado la respuesta diferencial de Erwinia chrysanthemi AC4150 y Erwinia chrysanthemi 3937 frente al estrés ácido presente en el apoplasto vegetal. Asemás, E.chrysanthemi AC4150 no desarrolla una respuesta de tolerancia a ácido, y es sensible a diversos ácidos orgánicos. Se ha obtenido en E.chrysanthemi AC4150 un mutante sensible a pH ácido (5.5) denominado BT119. La secuencia del gen interrumpio en este mutante presenta homología con el gen phoQ de numerosas bacterias. La proteína phoQ forma parte del sistema de regulación de dos componentes phoP-phoQ. El mutante de phoQ es incapaz de crecer en un medio a pH

Autor: UBEDA TOMAS SUSANA.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE PLANTAS.

Resumen: En este trabajo se ha estudiado el papel de las GAs en el desarrollo de las plantas de Nerium oleander (adelfa), a través del estudio de los genes que codifican los enzimas implicados en el metabolismo de las GAs. Para ello, hemos aislado y caracterizado las secuencias de cDNA y las secuencias genómicas de dos genes que codifican GA20oxidasas, enzimas implicados en la biosíntesis de las GAs en adelfa (NoGA20oxl y NoGA20ox2) y las secuencias de tres genes (NoGA2oxl, NoGA2ox2 y NoGA2ox3), que codifican GA2oxidasas, enzimas responsables de la inactivación irreversible de las GAs. Los ensayos enzimáticos de las proteínas obtenidas tras la expresión heteróloga en Escherichia coli de los clones de cDNA aislados muestran que, las proteínas de fusión NoGA20ox1 y NoGA20ox2 convierten GA12 y GA53 en los productos GA9 y GA20 y, que la sproteínas NoGA2ox1, NoGA2ox2 y NoGA2ox3, convierten los substratos GA1, GA9 y GA20 en sus correspondientes productos 2beta-hidroxilados GA8, GA51 y GA29, respectivamente. Además, la NoGA2ox3 cataliza dos oxidaciones consecutivas sobre GA9 y GA20 rindiendo GA51-catabolito y GA29-catabolito, respectivamente, característica que le atribuye una naturaleza multifuncional a este enzima. Estos resultados demuestran que los clones de cDNA NoGA20oxl y NoGA20ox2 codifican enzimas con actividad GA20oxidasa y, que los clones de cDNA NoGA2oxl, NoGA2ox2 y NoGA2ox3 codifican enzimas con actividad GA2oxidasa, todos ellos enzimas funcionales in vitro. La transformación de Nicotiana tabacum con el clon de cDNA NoGA2ox3, bajo el control del promotor 35S, permite la expresión ectópica de este gen y la obtención de plantas de tabaco transgénicas, las cuales poseen un déficit en GAs activas. Los bajos niveles de GAs activas en las plantas transgénicas hace que distingamos dos tipos de fenotipos entre ellas: fenotipo enano (en las líneas L-40 y L-41) y fenotipo semienano (L-45.3, L-43.2 y L-46). Ambos fenotipos se diferencian en la severidad del enanismo, el cual es proporcional a la expresión del transgén (35S:NoGA2ox3). Las principales alteraciones morfológicas detectadas en las plantas transgénicas respecto a las plantas silvestres son: reducción en la altura de las plantas, debida a la disminución en la longitud de los entrenudos; aumento del número de hojas desarrolladas; disminución del tamaño de las hojas, desviación del nervio central, y colaboración más oscura de las mismas; retraso en la floración; aumento del número de flores que abortan antes de llegar a la antesis; alteraciones en los órganos florales desarrollados como la disminución en la pigmetnación de los pétalos y la reducción en el tamaño del filamento y; disminución en la producción de semillas. Todas estas alteraciones morfológicas son revertidas parcial o totalmente con aplicaciones exógenas de GA3. Además, en las plantas con fenotipo enano L-41, el fenotipo es tan severo que produce deficiencias en la germinación y reducción en la longitud del hipocotilo. El retraso en la floración en esta línea es tan acusado que tras 12 meses de cultivo en el invernadero las plantas aún no habían florecido. En este trabajo proponemos la expresión del gen NoGA2ox3 de adelfa como herramienta biotecnológica para la reducción de la altura de las plantas en especies vegetales en que este carácter pueda tener interés.

Autor: BERTOLINI EDSON.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.

Resumen: El cultivo del olivo ha experimentado un creciente interés en los últimos años, no sólo en países del Mediterráneo sino también en Australia y otros países de América, principalmente debido a los beneficios del aceite de oliva en la dieta humana. Aproximadamente 2.5 millones de hectáreas de olivo se cultivan en España, lo que representa alrededor del 28% de la producción total mundial. Este cultivo se ve afectado por un gran número de patógenos, que causan enfermedades con síntomas conocidos, infecciones latentes y otras afecciones de causa no bien determinada. Las virosis descritas en olivo ocasionan infecciones latentes en su gran mayoría y es poco conocido el efecto que causan sobre el huésped. La ausencia de técnicas fiables para su detección en material vegetal, hace que se desconozca el verdadero estado sanitario de las plantas y la importancia económica y agronómica que pueden tener las virosis. Las técnicas de detección de virus utilizadas hasta el momento con material vegetal de olivo se habían limitado a inoculaciones mecánicas en plantas indicadoras herbáceas, al uso de la técnica ELISA y al análisis de ácidos nucleicos de doble cadena. La tuberculosis del olivo, causada por la bacteria Pseudomonas sabastanoi pv.savastanoi es una de las enfermedades más importantes de este cultivo, que está presente en prácticamente todos los países que lo cultivan y causa pérdidas en la producción y en la calidad del aceite. Las técnicas de detección de esta bacteria estaban basadas principalmente en el aislamiento en medio semiselectivo y posterior caracterización bioquímica de los cultivos bacterianos obtendios. Ante la ausencia de técnicas fiables de diagnóstico de virus y de la bacteria en material vegetal del olivo, se han puesto a punto métodos moleculares sensibles y específicos que pueden ser aplicados al análisis de gran número de muestras, de manera rutinaria, para la detección de estos patógenos en olivo. Se han diseñado los iniciadores protocolos y métodos siguientes: 1,- "Multiplex RT-PCR" para la detección simultánea de los seis principales virus del olivo (CMV, CLVR, SLRSV, ArMV, OLV-1 y OLV-2) en material vegetal (Bertolini et al., 2001. Journal of Virological Methods 52, 33-41). 2,- "Nested-PCR" para la detección sensible de Pseudomonas sabastanoi pv.savastanoi (Bertolini et al., 2003. Journal of Microbiological Methods 52, 261-266) en material asintomático. 3,- "Multiplex nested PR-PCR" para la detección simultánea y sensible de CMV, CLRV, SLRSV, ArMV y Pseudomonas savastanoi pv.savastanoi (Bertolini et al., 2003. Phytopathology 93, 286-292). 4,- PCR cooperativa (Co-PCR) (Olmos, Bertolini, Cambra, 2002. Journal of Virological Methods 106, 51-59), tan sensible como "nested-PCR", que puede ser utilizado en cualquier tipo de termocilador para la detección de CMV, CLRV y SLRSV. La aplicación de los métodos desarrollados en este trabajo, ha permitido establecer que el material más adecuado para el análisis de virus son las inflorescencias y los brotes jóvenes sin hojas (el muestreo debe consistir en, al menos, 5 brotes tomados alrededor del árbol) recolectados en primavera. Además, se han determinado en plantas madres d eolivo multiplicadas en España los niveles de infección de los virus: CMV (1.48%), CLRV (3.95%) y SLRSV (7.6%) y de la bacteria Pseudomonas sabastanoi pv.sabastanoi (27%). SE han encontrado infecciones mixtas de CLRV + SLRSV (1.7%) y de algún virus y la bacteria en el 7.6% de las plantas analizadas. No se han detectado los virus ArMV, OLV-4 ni OLV-2. El método "multiplex nested RT-PCR", ha sido adoptado como oficial por el Ministerio de Agricultura Pesca y Alimentación, para el análisis de plantas madres en el programa de certificación de material vegetal de olivo vigente en España.

Autor: FORMENT MILLET JAVIER.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE PLANTAS.

Resumen: Con el objetivo de buscar nuevas dianas de la toxicidad de la sal en células eucariótica, se ha realizado el escrutinio de una genoteca de cDNA de la planta Arabidopsis thaliana para aislar genes que aumentan la tolerancia al estrés salino. Se han aislado de este modo tres cDNAs de A.thaliana que confieren un fenotipo tolerancia a NaCl, LiCl y otros cationes tóxicos al ser expresados en la levadura Saccharomyces cervisiae. Sorprendentemente, los tres cDNAs codifican proteínas aparentemente implicadas en el procesamiento de los precursores del RNA mensajero; una de ellas es un componente específico del esplicesoma, y las otras dos contienen sendos dominios RS (dominio presente en proteínas con diferentes funciones en el procesamiento del pre-mRNA). La expresión de los cDNAs aislados no produce un descenso significativo en la concentración intracelular de litio, lo cual indica que sus efectos no están relacionados con la regulación del transporte iónico. Por el contrario, se han obtenido evidencias de la inhibición del procesamiento de, al menos, algunos intrones específicos en levaduras crecidas en presencia de sal; esto sugiere que el procesamiento del pre-mRNA constituye una nueva diana de toxicidad iónica, no descrita hasta el momento. El carácter general de estos resultados se ve apoyado por el hecho de que la expresión del dominio RS de uno de los cDNAs en plantas transgénicas de A.thaliana también incrementa su tolerancia a LiCl y NaCl. Estos resultados establecen una novedosa relación entre la tolerancia a sal de las células eucarióticas y el procesamiento del pre-mRNA, y sugieren nuevas estrategias para mejorar la halotolerancia de cultivos de interés agronómico. Por otra parte, en el curso del presente trabajo se encontró que la disrupción de la proteína quinasa de S.cerevisiae Sky1p, específica para proteínas SR, produce un incremento de la tolerancia a diversos cationes tóxicos gracias a una reducción en la acumulación intracelular de los mismos. La caracterización psoterior de la cepa mutante en SKY1 indica que dicha quinasa modula el potencial eléctrico de membrana de la levadura a través de la regulación del sistema de transporte de potasio de alta afinidad Trk1,2.

Autor: LISON PARRAGA M. PILAR.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE PLANTAS.

Resumen: Las plantas responden al ataque de insectos, herbívoros y a la herida activando una gran variedad de genes, entre ellos, los inhibidores de proteasas. Estos inhibidores son capaces de inhibir actividades proteolíticas presentes en el tracto digestivo de los insectos, inhibiendo así su crecimiento y desarrollo. En nuestro laboratorio se observó que plantas de tomate de la variedad "Rutgers" tratadas con jasmonato de metilo (hormona implicada en la respuesta a herida) acumulaban en sus hojas altos niveles de una proteína de 21 kDa, a la que denominamos JIP-21. Con el propósito de analizar el posible papel defensivo de esta proteína hemos llevado a cabo su caracterización molecular y bioquímica. Para ello, hemos purificado dicha proteína y hemos obtenido sus correspondientes anticuerpos. A continuación, mediante inmuno-rastreo, hemos aislado el clon de cDNA, cuyo análisis de homología de secuencia indica una posible función de inhibidor de catepsina D. El estudio de la expresión de JIP-21 mediante Northern-blot muestra que el gen se induce exclusivamente en hojas heridas o tratadas con MeJA (jasmonato de metilo), tanto local como distalmente. Mediante RT-PCR hemos detectado niveles constitutivos de mensajero en las flores, el tallo y los frutos de plantas adultas, así como en las raíces de plántulas sumergidas en una solución de MeJA. Se ha obtenido la secuencia genómica completa y se ha visto que el gen no presenta intrones. La regulación de la secuencia promotora parece presentar una serie de singularidades que lo hacen incompatible con sistemas heterólogos, puesto que plantas transgénicas de Arabidopsis thaliana y de tabaco, a las que se ha introducido el gen JIP-21 completo, no producen el patrón de expresión observado en la especie nativa. Asimismo, se han obtenido plantas transgénicas de tomate portadoras del cDNA bajo el control transcripcional del promotor dobel 35S2X del CaMV. Estas plantas muestran altos niveles de expresión constitutiva en ausencia de herida. Por último, estudios bioquímicos han puesto de relieve la ausencia de actividad dela JIP-21 contra la catepsina D, contrariamente a lo que los estudios de homología de secuencia mostraron. Sin embargo, JIP-21 presenta una actividad inhibitoria significativa frente a tripsina y quimotripsina, que pertenece a la familia de las serín-proteasas. De hecho, a pesar de la limitada homología de secuencia de JIP-21 con los miembros de esta familia, estudios in silico muestran que JIP-21 posee un dominio estructural de tipo Kunitz, así como una posible compatiblidad del plegamiento con el Inhibidor de Tripsina de Soja, que es el miembro de referencia de la familia de inhibidores de serín-proteasas de tipo Kunitz. Por tanto, JIP-21 posee no sólo actividad inhibitoria frente a serín-proteasas, sino una estructura similar a la de un inhibidor de esta familia.

Autor: REDONDO HORCAJO MARIANO.
Año: 2002.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS (CIB, CSIC).

Resumen: Los factores de crecimiento para fibroblastos (FGFs) constituyen una familia de proteínas implicadas en una gran variedad de procesos biológicos. Enla actualidad, dicha familia cuenta con 23 miembros, de los cuales, los dos más importantes, que fueron también los primeros en ser identificados, son el factor de crecimiento para fibroblastos ácido (aFGF) y el factor de crecimiento para fibroblastos básico (bFGF). Tanto el aFGF como el bFGF tienen gran afinidad por los glicosaminoglicanos heparina y heparán sulfato; por este motivo, a la familia de los FGFs se le conoce también con el nombre de familia de factores de crecimiento que unen heparina. Los FGFs llevan a cabo una gran variedad de acciones fisiológicas. Sin embargo, la función que les caracteriza es la estimular la proliferación celular. En este sentido, la actividad mitogénica mediada por los FGFs comienza con la interacción de estas proteínas, sobre la superficie celular, con receptores específicos de naturaleza proteica, de tipo tirosina quinasa, por los que tienen alta afinidad. Este tipo de receptores de alta afinidad se activan por oligomerización, y tanto su activación, como la respuesta mitogénica mediada por los FGFs, requiere además de la presencia de glicosaminoglicanos de tipo heparán sulfato presentes también sobre la superficie celular, moléculas que constituyen los receptores de baja afinidad para los factores de crecimiento. Numerosos autores muestran que en la actividad mitogénica del aFGF es necesaria la heparina como requisito previo fundamental en la formación de un complejo ternario con el receptor proteico de la superficie celular. En la presente tesis se asigna un papel dual a la heparina en la estimulación de la división celular inducida por el aFGF. Por un lado, relacionado con la estabilización de la proteína, papel en la que hemos visto puede ser sustituida tanto por el hexasulfato de mio-inositol (mIHS) como por una estabilización intrínseca de la propia proteína. Por otro, con un efecto activador sobre el receptor celular de alta afinidad. Sin embargo, hemos visto también que la dimerización del aFGF no tiene porqué ser un requisito para la actividad mitogénica de la proteína; y que una determinada forma dimétrica estable de aFGF (hemos elaborado una proteína homodimérica de aFGF en la que el extremo amino de la primera subunidad está unido al carboxilo de la siguiente mediante una secuencia de 19 aminoácidos) es capaz de desarrollar capacidad proliferativa independientemente de heparina y de heparina y de heparán sulfato. Además, hemos elaborado un modelo estructural para esta forma dimérica de proteína en su unión al receptor de alta afinidad, y hemos puesto de manifiesto evidencias físico-químicas que encajaría perfectamente en el modelo cristalográfico publicado por otros autores en el que se requiere de heparina.

Autor: PINO DE LA HUERGA IRENE.
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: El cáncer de pulmón constituye una de las causas de mortalidad por cáncer más frecuentes en el mundo; cada año se diagnostican alrededor de un millón de nuevos casos. Menos de un cuarto de los tumores de pulmón diagnosticados son susceptibles de ser intervenidos mediante cirugía y la supervivencia a los 5 años es escasa, menor del 15%. La alta tasa de mortalidad en el cáncer de pulmón es debida a que su detección se suele producir cuando la enfermedad está ya muy avanzada, por lo que durante las dos últimas décadas se han realizado numerosos esfuerzos para detectar esta enfermedad en estadios más precoces. Se han conseguido grandes avances en técnica broncoscópicas, de imagen, en diagnóstico molecular y se han buscado marcadores moleculares para la detección precoz del mismo. Varios trabajos han señalado a dos miembros de la familia de las ribonucleoproteínas heterogéneas nucleares (hnRNP), hnRNP A2 y hnRNP B1, como herramientas para la detección precoz del cáncer de pulmón. Este trabajo pretende profundizar en la implicación de hnRNP A2 y B1 en la carcinogénesis pulmonar, así como averiguar si otros miembros de esa misma familia participan en dicho proceso. Para lo cual hemos elegido de entre los hnRNP conocidos a varias moléculas que, según la bibliografía existente, podrían tener implicación en cáncer: hnRNP A1, hnRNP C1/C2, hnRNP K, alfaCP-4 y ASF/SF2. Hemos estudiado su expresión y localización en tejido normal, hiperplásico y tumoral humano; en líneas celulares derivadas de tumores humanos; y en modelos animales de carcinogénesis pulmonar. Las proteínas de la familia de las hnRNP están implicadas en numerosos procesos biológicos, siendo los más conocidos los relacionados con el metabolismo del mRNA. En este trabajo, hemos pretendido averiguar si en cáncer de pulmón hay alteración en la expresión de estas moléculas, si dicha alteración se podría deber a un mayor requerimiento en la maquinaria de procesamiento del mRNA y si su alteración afecta a la expresión de otras moléculars. Además, hemos intentado conocer si los cambios en su expresión podrían tener relación con factores clínico-patológicos del tumor y con alteraciones en oncogenes o en genes supresores tumorales frecuentes en el cáncer de pulmón.

Autor: PINILLA TENAS JORGE JAVIER.
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La proteína ASCT1 es un transportador de aminoácidos neutros humano, que fu clonado a partir de cerebro humano en 1993. ASCT1 muestra las características funcionales descritas para el sistema ASC. Sin embargo, algunas de las características descirtas para dicho sistema no han sido comprobadas en ASCT1, por lo cual quedaban algunas cuestiones no resueltas cuya resolución ha sido el objetivo de esta tesis doctoral. Así hemos aclarado el papel del Na+ en el mecanismo de intercambio de aminoácidos mediado por ASCT1, donde funciona como un modulador alostérico bidireccionalmente contrasportado. Asimismo hemos demostrado la capacidad de ASCT1 para transportar activamente alanina, y mediar transporte de glutamato, el cual depende del valor de pH extracelular pero no de la concentración extracelular de Na+, al contrario de lo que ocurre con el transportador de alanina. Además, demostramos la capacidad de ASCT1 para transportar prolina e hidroxiprolina, no así glutamina. El transporte de prolina mediado por ASCT1 es menos eficaz que el de alanina, tal y como se deduce de los mayores valores de la constatne de afinidad, de la velocidad máxima que muestra el transporte de prolina respecto al de alanina. En resumen, los resultados obtenidos demuestran que ASCT1 es capaz de acumular alanina. Dicha acumulación no está energizada por el gradiente electroquímico de Na+ sino por la salida de aminoácidos desde el interior celular, debido al mecanismo de intercambio obligatorio de aminoácidos que caracteriza a este intercambiador. Por lo tanto, es sugerido que ASCT1 media transporte activo de sus sustratos de tipo terciario. Hasta la fecha es el primer transportador humano clonado dependiente de NA+ que media transporte activa de sus sustratos.

Autor: PÉREZ-IIZARBE SARAGÜETA MAITANE .
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: El factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), a través de sus receptores VEGFR-1 y VEGFR-2, presenta un doble papel en la homeostasis vascular: además de ser el principal responsable de la angiogénesis, controlar la permeabilidad vascular y participar en el mantenimiento de la integridad endotelial, también puede favorecer el desarrollo de la placa aterosclerótica. El objetivo de este estudio fue determinar si la expresión de este factor de crecimiento y sus receptores estaban aumentada en un modelo de hipercolesterolemia experimental y si el tratamiento con atorvastatina podría reducirla. Para ello se utilizaron ratones apoE deficientes (apoE -/-) de 3 meses, sin aterosclerosis establecidad, y de 6 meses, que presentaban lesiones ateroscleróticas macroscópicamente visibles. Los ratones apoE -/- pre-ateroscleróticos, además de un elevado estrés oxidativo, mostraron una mayor expresión aórtica y cardiaca del VEGF y VEGFR-2 que los ratones normales. Asimismo, se observó un aumento en la expresión del ARNm del VEGFR-1 cardiaco. El tratamiento con atorvastatina, que redujo la peroxidación lipídica, disminuyó la expresión aórtica y cardica del VEGF y VEGFR-2, así como la expresión cardiaca del VEGFR-1. En los ratones apoE -/- ateroscleróticos se observó que el tratamiento con atorvastatina provocó una reducción de la extensión de las lesiones ateroscleróticas y de la expresión del VEGF de las mismas. La sobreexpresión vascular del VEGF y su receptores en la hipercolesterolemia puede constituir un elemento relevante en el inicio y progresión de la aterosclerosis, y la reducción de su expresión podría constituir una estrategia terapéutica en el prevención del desarrollo de esta patología. Este mecanismos podría contribuir a explicar los efectos beneficiosos de la atorvastatina en el tratamiento de la aterosclerosis, tanto la prevención del desarrollo de la lesión como la estabilización de la misma.

Autor: NESPEREIRA RODRÍGUEZ BEATRIZ.
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: El factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) presenta un doble papel en la homeostasis vascular, puesto que es el responsable del mantenimiento de la integridad endotelial, pero también podría favorecer el desarrollo de la placa aterosclerótica al promover la angiogénesis a través de su receptor VEGFR-2. El objetivo de este estudio fue determinar si la expresión de este factor de crecimiento y su receptor estaba aumentada en la hipercolesterolemia debido al incremento del estrés oxidativo, y si la administración de vitaminas C y E podría reducir esta sobreexpresión. Para ello utilizamos, in vivo, ratones apoE deficientes de 2 meses, sin aterosclerosis establecida, y de 5 meses, que ya presentaban lesiones ateroscleróticas macroscópicamente visibles, a los que les administramos ácido ascórbico y alfa o beta-tocoferol e, in vitro, cultivos de células endoteliales de coronaria porcina estimulados con LDL procedentes de cerdos hipercolesterolémicos (LDL-HC). Los ratones apoE deficientes preateroscleróticos mostraron un elevado estrés oxidativo y mayor expresión vascular de VEGF y VEGFR-2 que los ratones normales. El tratamiento con vitaminas redujo la expresión del VEGF en parte a través de la actividad antioxidante de las vitaminas y en parte por las propiedades no antioxidantes. Las vitaminas también disminuyeron la expresión del VEGFR-2 mediante sus propiedades antioxidantes. En los ratones apoE deficientes ateroscleróticos se observó que el tratamiento con vitaminas C y E provocó una tendencia a la reducción de la extensión de las lesiones y de la neovascularización de las mismas. La estimulación de cultivos de células endoteliales con LDL-HC provocó un incremento de la expresión del VEGF y su receptor VEGFR-2, efecto que no causó el tratamiento con LDL procedentes de cerdos control ni con LDL de cerdos que siguieron dieta hipercolesterolémica suplementada con vitaminas C y E. Las vitaminas C y E previnieron el efecto de las LDL-HC. Puesto que el VEGF y su receptor VEGFR-2 son fundamentales en el desarrollo de la placa aterosclerótica, la reducción de su expresión podría constituir una estrategia terapéutica en el prevención del desarrollo de esta patología. Este mecanismo podría explicar los efectos beneficiosos de las vitaminas C y E en el tratamiento de la aterosclerosis.

Autor: MONASTERIO ASTEINZA ALBERTO.
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: La apoptosis es un proceso fisiológico de muerte celular que asegura el continuo recambio de las células en los tejidos en la embriogénesis y en el organismo adulto. Además se han descrito alteraciones en la apoptosis relacionadas con algunas enfermedades. Una característica importante de la apoptosis es la degradación oligonucleosomal del DNA genómico, mediada por la activación de DNsas. En este trabajo se ha detectado un aumento de actividad DNasa en el citosol, los granos de secreción y el núcleo de monocitos de pacientes con patología autoinmunes respecto a los de donantes sanos, cuya actividad aumenta in vitro en respuesta a un pépetido activador. La presencia del NMLA, un inhibidor de la iNOS, neutraliza la estimulación por el péptido. El posterior análisis de las actividades Dnasa mostró la presencia de varias Dnasas implicadas, por lo que se procedió al aislamiento y caracterización de estas enzimas en la línea celular humana U937. Para la detección y análisis de Dnasas, fue necesaria la utilización de ensayos complementarios de actividad, como la degradación de DNA en geles de agarosa, zimogramas y técnicas radiactivas, y la optimización de técnicas fluorescentes de alta sensiblidad, como la del picogreen o el ensayo continuo basado en el fenómeno de resonancia denominado FRET. Se ha demostrado la paricipación de la DFF40 y de otra DNasa de similares características tras las estimulación apoptótica de las céulas U937 con camptotecina y anticuerpo anti-Fas. La DFF40 se detectó por anticuerpos y no por actividad, mientras que la segunda sólo se puso de manifiesto por ensayos de actividad DNasa por falta de anticuerpos específicos. Se trata de una DNasa citosólica, neutra dependiente de magnesio, de unos 40 kDa que migra al núcleo en la apoptosis. En ausencia de estimulación también se detectaron diferentes isoformas de la DNasa II y actividades DNasa de tipo I dependientes calcio y magnesio. Además se ha estudiado el efecto de 21 flavonoides sobre la apoptosis y la activación de DNasas en células U937.Entre ellos la crisina, apigenina, fisetina, quercetina, luteolina, glangina y 3,7-dihidroxiflavona inducen la fragmentación del DNA, el marcaje con anexina V y la disminución de la viabilidad celular. Todos ellos potencian el efecto proapoptótico del TNF-alfa y del anti-Fas. Fisetina, apigenina y la 3,7-dihidroxiflavona provocan la degradación del DNA mediante un proceso dependiente de caspasas y calpaínas, sugiriendo la activación DNasas dependientes de calcio, además de la DFF40. El resto inducen fragmentación dependiente sólo de caspasas y no de calpaínas mediante la activación de DFF40.

Autor: IZAL AZCÁRATE IÑIGO.
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: El factor derivado de lepitelio pigmentado (PEDF) es una glicoproteína miembro de la superfamilia de las serpinas. Se describió inicialmente como producto de secreción del epitelio pigmentado de la retina encargado de promover el desarrollo de la retina neuronal. Relacionado con esto, se han derivado varias actividades como factor neurotrófico y neuroprotector, entre ellas la inducción de diferenciación de células de retinoblastoma (Y-79), la protección frente a la toxicidad inducida por glutamato en neuronas cerebelares y en motoneuronas, la protección frente a la toxicidad inducida por peróxicidad inducida por peróxido de hidrógeno en neuronas de la retina o la protección morfológica y funcional de fotorreceptores. Recientemente se ha descrito una actividad como factor inhibidor de la formación de vasos (Angiogénesis) y como inhibidor del crecimiento tumoral. Las propiedades superficiales de carga de PEDF son de particular relevancia, al permitirle su unión al receptor en la superficie celular. No obstante también confieren a la proteína la capacidad de unir glicosaminoglicanos, componentes de la matriz extracelular. Se ha llegado a proponer mediante modelización molecular un sitio de unión compuesto por aminoácidos de carácter básico. La presencia de glicosaminoglicanos fuenciona meramente como soporte celular, ha sido descrita su participación en la actividad de moleculas señalizadoras extracelulares. Hemos descrito un protocolo de purificación de PEDF sobreexpresado en células eucariotas (BHK) mediante doble cormatografía de intercambio catiónico-aniónico, así como un ensayo ELISA para determinar la concentración de PEDF. Hemos sintetizado péptido componentes de la zona neurotrófica de la proteína y hemos construído sueros frente a éstos. Los sueros han sido caracterizados mediante western blot y ELISA. Se ha realizado el análisis, mediante mutagénesis dirigida, de la unión de PEDF a glicosaminoglicanos. Hemos determinado que los aminoácidos K134,K137,K189,K191 y K214 son directamente responsables de esta unión. En la segunda, hemos analizado la capacidad inhibidora de la angiogénesis del PEDF fuera de los tejidos oculares, tanto in vitro (sobre la línea celular HUVEC) como in vivo (en ratones incoluados con matrigel). Hemos ensayado también la relación de esta actividad con el crecimiento tumoral. Los resultados muestran cómo el PEDF es capaz de inhibir la proliferación, la migración y la formación de vasos por parte de células endoteliales, y cómo la presencia de éste en modelos tumorales en ratones provoca un descenso en la tasa de crecimiento de los tumores gracias a la disminución de la densidad de vasos. Finalmente, hemos tratado de analizar la actividad del PEDF sobre líneas celulares de orígen neuronal (SH-SY5Y, SK-N-MC y CCF-STTG1). Hemos descrito la expresión y secreción al medio de cultivo de PEDF por parte de las 3 líneas utilizadas. La actividad de la proteína de forma autocrina ha resultado inhibidora de la proliferación en células SK-N-MC y CCF-STTG1 y del metabolismo en células SH-SY5Y. El análisis por citometría de flujo de la línea CCF-STTG1 muestra la aparición de una subpoblación que se detiene en la fase G1 del ciclo celular.

Autor: JUNQUERA SÁNCHEZ-VALLEJO CORINA.
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FARMAPHEN S.A..

Resumen: Durante las últimas tres décadas cada vez ha sido mayor el número de evidencias que han establecido una firme asociación entre las anormalidades cromosómicas y determinados tipos de cánceres humanos. La enfermedad mínima residual (EMR) define a un bajo número de células leucémicas, que han conseguido sobrevivir a las diferentes fases del tratamiento de las que se componen los protocolos actuales, manteniéndose por debajo de los límites de detección convencionales. Es, por tanto, fundamental la detección de pequeñas cantidades de estas células en el momento de la remisión clínica. La detección debe ser específica, sensible y reproducible. Se ha desarrollado un sistema de detección para cada una de las traslocaciones t(14;18)y t(15;17) basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y visualización en placa microtiter. Este sistema cuenta con un doble sistema de aseguramiento de la especificidad: los cebadores en la PCR y la sonda específica en la placa microtiter que además confiere más sensibilidad al sistema lo que permite estudiar la EMR. Debido a la falta de un método de referencia entre los distintos centros de diagnóstico este método, debido a sus características de especificidad, sensibilidad y reproducibilidad puede fácilmente aplicarse como estandar entre ellos. Además es un fácilmente automatizable en los laboratorios de diagnóstico convencionales. Para la traslocación t(14;18) se ha desarrollado un sistema de semicuantificación para apoyar la investigación sobre los límites de detección necesarios en la EMR.

Autor: ABASOLO OLAORTUA IBANE.
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Las células del cáncer de próstata derivan de las células epiteliales prostáticas, las cuales expresan el gen de adrenomedulina (AM). Para indagar sobre el potencial papel del gen AM en la progresión del cáncer de próstata, se transfectaron las células PC-3, DU 145 y LNCaP de cáncer de próstata con el gen de AM. La transfeccion del gen derivó en un aumento de la producción y secreción del péptido maduro de AM, mientras que la síntesis del segundo péptido codificado por el mismo gen, el péptido N terminal de la proAM (PAMP), no se vio afectado. La sobreexpresión de AM inhibió la proliferación de las células PC-3 y LNCaP, pero no la de DU 145, probablemente porque estas células presentaban una menor secreción del péptido de AM. De hecho, la adición de altas concentraciones de AM (e incluso PAMP) a los medios de las células, inhibió el crecimiento de las tres líneas celulares en estudio. En las células PC-3, la sobreexpresión de AM arrestó las células en la fase G0/G1 del ciclo celular y inhibió marcadamente el crecimiento de los tumores in vivo. AM también inhibió la apoptosis causada por la falta de suero en DU 145 y la mediada por etopósido en PC-3 y LNCaP. El efecto de AM como en la inhibición de la proliferación celular y la apoptosis fue más intensa en las células PC-3 transfectadas con el gen de AM de rata que en aquellas células transfectadas con el gen de origen humano. PC-3, DU 145 y LNCaP expresan el complejo CRLR/RCP/RAMP2 que actúa como receptor específico de AM. El tratamiento con AM no elevó AMPc en las células prostáticas. En PC-3, estimulaciones cortas de AM elevaron la activación de ERK1/2, pero exposiciones prolongadas al péptido redujeron la activación ERK1/2 por debajo de los niveles basales. En estas células, AM contrarrestó los efectos del etopósido en la activación de ERK1/2 y la reducción de la relación BCL-2/BAX, lo que podría explicar la inhibición de la apoptosis observada en las células PC-3 con sobreexpresión del gen de AM. En resumen, nuestros resultados indican que AM es un factor modulador del crecimiento celular prostático, inhibiendo la proliferación en condiciones normales y evitando también que las células mueran cuando su supervivencia celular está amenazada. AM parece ejerce esta acción moduladora de forma independiente de AMPc, y al menos en PC-3, mediante la regulación de la activación de determinadas MAPK y de la expresión relativa de BCL-2 y BAX.

Autor: VILLAR RAYO MARGARITA M..
Año: 2002.
Universidad: CASTILLA-LA MANCHA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Resumen: El objetivo de este trabajo fue analizar las posibles alteraciones ocasionadas durante el envejecimiento en la vía de señalización de insulina dependiente de PI3K que media el transporte de glucosa en el tejido adiposo epidimal de ratas macho de la raza Wistar de 24 meses de edad, resistentes a la acción hormonal. Los resultados obtenidos revelaron que con el envejecimiento se produce un descenso significativo, tanto en los niveles de expresión de mRNA como en la cantidad de proteína, del receptor de insulina (IR), de los sustratos de dicho receptor más importante en el tejido adiposo (IRS-1 e IRS-3) y del transortador de glucosa sensible a insulina, GLUT4. Durante el envejecimiento se producen alteraciones en la localización subcelular de IR, IRS-1, IRS-3 y GLUT4 en ausencia de insulina, apareciendo una mayor presencia de estas proteínas en las fracciones donde deben desplazarse en respuesta a la hormona. Además, tanto el transporte de glucosa como la fosforilación en tirosina de IR, IRS-1 e IRS-3 en el estado basal, son más elevados en los adipocitos de ratas de 24 meses respecto a los controles de 3 meses de edad, mientras que el transporte y la fosforilación máximos en respuesta a insulina están significativamente disminuidos, lo que sugiere un funcionamiento incorrecto en los mecanismos de iniciación y de terminación de la señal en el tejido adiposo de ratas viejas. El análisis de la proteína Akt/PKB (implicada en la mediación del transporte de glucosa dependiente de insulina en el tejido adiposo) reveló que la cantidad de esta proteína también disminuye con el envejecimiento, encontrándose un defecto tanto en la translocación de la enzima a la membrana plasmática, como en el grado de fosforilación en serina y en la actividad de la misma en respuesta a la insulina. El tramiento con C2-ceramida (inhibidor de Akt/PKB) y RO 31-8220 (inhibidor de PKCs de amplio espectro) aportó nuevos datos sobre la implicación de estas enzimas en el transporte de glucosa estimulado por insulina en el tejido adiposo. La C2-ceramida parece actuar interfiriendo la transmisión de la señal mediada por la hormona. El compuesto RO 31-8220 muestra, en general, un efecto antagónico a la ceramida e incrementa la fosforilación en serina de la Akt en respuesta a insulina, apoyando la función de las PKCs como moduladores negativos de la actividad Akt. Así, en los adipocitos en respuesta a insulina, la actividad Akt/PKB parece estar implicada en la translocación de los transportadores de glucosa , GLUT4, desde las GSV hacia la membrana plasmática, mientras que la PKC, podría modular la translocación de estos transportadores desde los endosomas hacia las GSV y, quizá, el proceso de fusión, anclaje y/o activación en la membrana plasmática. El conjunto de alteraciones detectadas sugieren que con el envejcimiento se desarrolla una resistencia a la acción de la insulina en el tejido adiposo en las etapas tempranas, así como en eventos más tardíos de la vía de señalización mediada por la hormona.

Autor: ONECA AGURRUZA MARÍA.
Año: 2002.
Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: ETSIA- UNIVERSIDAD PÚBLICA DE NAVARRA.

Resumen: El objtetivo de la Tesis fue caracterizar cepas del género Lactobacillus propias de la leche y queso con D.O.Roncal, para la elaboración de un fermento autóctomo para dichos quesos. Para ello se comenzó por estudiar los niveles habituales de lactobacilos en muestras de leche de 22 ganaderías adscritas a la D.O.Roncal que pertenecían a tres zonas ganaderas de Navarra, y de muestas de queso de cuatro queserías adscritas a la misma D.O. En leche, se realizaron tres recogidas de muestras y los recuentos fueron de 10 4 -10 6 ufc/mL observándose diferencias significativas entre recogidas y entre ganaderías y zonas. En cuanto al recuento en queso, se realizaron tres recogidas de muestras en dos años consecutivos. El recuento fue basante uniforme entre las queserías, alrededor de 10 7 ufc/g. Se realizó la identificación y tipado de las especies de lactobacilos aislados de las muestras de leche y queso, por las técnicas de PCR y RAPD. Así pudieron identificarse Lb.paracasei, Lb.plantarum y Lb.brevis en muestras de leche. Prácticamente en todas las ganaderías y zonas, fue Lb.plantarum la especie predominante. En muestras de queso, la especie predominante fue Lb.paracasei y no se encontró Lb.brevis. Hubo un alto porcentaje de cepas sin identificar en leche y en mejor medida en queso, que no pertenecían a las ocho especies estudiadas. Se comprobó que la zona de procedencia de la leche influía en el porcentaje de Lb.paracasei y la quesería influía tanto en éste como en el de Lb.plantarum. Por RAPD, se establecieron grupos de similitud. Así se pudo observar que la mayoría de las cepas del queso, no provienen de la leche de las ganaderías que les sirven. Posteriormente se procedió a la selección de cepas posibles constituyentes de un cultivo iniciador por los criterios: A,- Que provinieran de leche que dieran quesos con alta calificación sensorial. B,- Que resistieran la maduración del queso. C,- Que presentaran distintas actividades acidificantes. Así se seleccionaron tres cepas de Lb.paracasei, dos de Lb.plantarum y una de Lb.brevis. Para estudiar sus actividades se realizaron dos elaboraciones de pasta de queso "modelo" a la que se añadieron, por seprado: las cepas seleccionadas, las mismas lisadas por sonda de ultasonidos y el fermento industrial utilizado normalmente en la elaboración de queso Roncal y se incubaron en botes cerrados a 30ºC durante 10 días, tomándose muestras a los 0,2,5,7 y 10 días. A estos tiempos, se midieron los valores de pH, extracto seco, recuentos microbiológicos, activiad proteolítica mediante el seguimiento de las caseínas a lo largo de los 10 días por Electroforesis Capilar y la actividad peptidásica estudiando los aminoácidos por HPLC. Dos de las cepas de Lb.paracasei, presentaron los menores valores de pH; se detectó heterogeneidad de dicho parámetros dentro de especie. Al término de los diez días el recuento microbiológico, en todas las cepas, es de 10 7 -10 9 ufc/g. Las cepas con actividad proteolítica superior fueron P1 de Lb.plantarum y Lb.brevis lisada. Las que se comportaron de manera similar al fermento industrial fueron las tres cepas de Lb.paracasei. En cuanto a la actividad peptidásica, fueron nuevamente las cepas de L.paracasei las que presentaron un comportamiento similiar al fermento industrial, el cual presentó la mayor actividad; los menos peptidásicos, fueron las cepas de Lb.plantarum.

Autor: PAZ FERNÁNDEZ-ESPAÑA MARÍA.
Año: 2002.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: INSTITUTO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD.

Resumen: En bivalvos marinos la diferenciación sexual de la gónada podría reflejarse en una expresión proteica sexo-dependiente. Elegimos como modelo el bivalvo hermafrodita. Pecten maximus, que presenta un ovotestis en cuyas diferentes partes, masculina y femenina, se realiza de modo simultáneo espermatogénesis u oogénesis, respectivamente. El análisis electroforético de los patrones proteicos de la parte masculina y femenina de la gónada nos permitió detectar y caracterizar parcialmente dos tipos de polipéptidos cuya expresión está asociada con la espermatogénesis u oofénesis. El polipéptido específico para el tejido testicular es similar a esterasas, y se denominó "Esterase-like polypeptide" (ELP). ELP representa hasta un 8% del total de proteínas solubles del tejido testicular, y no se detecta en el tejido ovárico. ELP es un polipéptido no glicosilado, de peso molecular aparente 39 kDa y punto isoeléctrico 6.1. Mediante técnicas inmunoquímicas se identificó este polipéptido como una proteína similar a las esterasas del tracto reproductivo masculino de M.galloprovincialis (MAP) y D.virilis (esterasa S.). Su composición en aminoácidos se caracteriza por un alto grado de similitud con la de MAP de M.galloprovincialis y esterasa S. De D.virilis. Sin embargo, la huella peptídica del ELP no reveló homologías significativas ni con las obtenidas de MAP y esterasa S, ni con las almacenadas en las bases de datos. En el tejido testicular de P.maximus se detectó ELP: en la membrana, esperma y fluido luminal de los folículos espermáticos; en la parede de los gonoductos colectores y en el tejido conectivo inter-folicular. Los niveles de ELP disminuyen después del desove. Entre los polipéptidos "ovario-predominantes" del ovotestis de P.maximus, detectamos polipéptidos con propiedades similares a la fibronectina de mamíferos, a los que denominamos "Fibronectin-like polypeptides" (FLPs). Los FLPs se detecan tanto en el tejido testicular como en el ovárico, siendo su concentración en este último hasta cuatro veces mayor. No se han detectado FLPs ni en las células germinales ni en los fluidos gonadales. Estos polipétidos de peso molecular aproximado de 185 y 200 kDa manifiestan una reacción de cruce positiva con anticuerpos monoclonales contra la fibronectina humana y contra sus diferentes dominios ("N-terminal domain", "cell attachment domain"). En el tejido ovárico los FLPs se detectaron en las membranas foliculares y tejido conectivo extra-folicular, así como en el tegumento y pared del tubo digestivo, pero no en los oocitos. Polipéptidos análogos de esterasas, asociados al tejido gonadal testicular, y análogos de fibronectina, asociados al tejido ovárico, han sido detectados no sólo en P.maximus si no también en el tejido gonadal de otras especies de moluscos bivalvos: 1,- Mytilus galloprovincialis, Mytilus edulis, Venerupis pullastra, Ruditapes philippinarum y Dosina exoleta (gonocóricos). 2,- Aequipecten opercularis (hermafrodita simultáneo). 3,- Ostrea edulis (hermafrodita consecutivo rítmico). 4,- Crassostrea gigas (hermafrodita consecutivo alternativo). La identificación y caracterización de dos tipos de proteínas, "Esterase-like polypeptides" y "Fibronectin-like polypeptides", asociadas al tejido testicular u ovárico, respectivamente, en ocho especies de moluscos bivalvos demuestra que dichos polipéptidos pueden servir como marcadores proteicos del dimorfismo sexual del tejido gonadal.

Autor: PÉREZ RODRÍGUEZ MONTSERRAT.
Año: 2002.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE VIGO.

Resumen: En esta Tesis Doctoral se proprociona dos métodos genéticos para la detección e identificación de todas las especies de merluza (Merluccius spp.) con fines ecuménicos. Los dos métodos de diagnóstico proporcionados para comprobar la presencia de merluza o bacalao en una muestra, se basan respectivamente en la amplificación de un fragmento de 193 pb del espaciador ITS1 de los genes ribosómicos, y de un fragmento de 122 pb del Citocromo b del ADN mitocondrial. En caso positivo, se amplifica un framento de 602-659 pb de los genes ribosómicos que incluye al ITS1, o el extremo 5' de 464 pb del gen Citocromo b, y se aplica de modo secuencial una batería de 4 ITS1 ó 3 Citocromo b endonucleasas de restricción, que generan patrones de bandas característicos de cada una de las especies de merluza. La importancia aplicada de los dos procedimientos radica en que se proporciona a los Organismos Oficiales, a los laboratorios homologados de control de calidad (ANFACO-CECOPESCA) y a los laboratorios de investigación, una herramienta de diagnóstico genético segura, precisa, rápida, barata, y de gran sencillez técnica e interpretativa. Su homologacion y aplicación permite afrontar el diagnóstico alimentario, sanitario, comercial y científico. Sus aplicaciones más inmediatas son el control de calidad y de las importancias, el fraude al consumidor y la vigilancia en sanidad alimentaria en los circuitos comerciales, el asesoramiento en el etiquetado al sector transformador, la genética forense de pesquerías y diversos estudios científicos básicos y aplicados de hibridación y flujo génico entre especies.

Autor: FERRÉ PALLÁS NATÀLIA.
Año: 2002.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAT MEDICINA I CIÈNCIES DE LA SALUT. URV..

Autor: GONZÁLEZ-QUEVEDO ALVAREZ ROSA.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La reactivación de la telomerasa es una alteración genética muy frecuente en células tumorales, habiéndose encontrado actividad de dicha enzima en aproximadamente un 80% de los tumores humanos. Sin embargo, en la mayor parte de los tejidos normales no se detecta, hecho que ha despertado grandes expectativas en cuanto a su potencial como marcador pronóstico, diagnóstico y como diana en la terapia anticancerígena. En el presente trabajo hemos analizado la actividad de dicha enzima en una población de 266 muestras patológicas y en sus correspondientes controles de tejido normal, encontrando que, efectivamente, más de un 80% presentaron reactivación de la misma. La actividad telomerasa ha demostrado ser un factor de mal pronóstico en nuestra población de tumores no microcíticos de pulmón, y conferir tendencia a dicho pronóstico adversa pacientes afectados de tumores colorrectales.Además, hemos encontrado que la expresión de la protéian supresora de tumores p16, constituye un factor protecot en los pacientes afectados de tumores de pulmón con actividad telomerasa positiva. En esta población de pacientes de pulmón, también hemos estudiado la expresión de la oncoproteina c-Myc, que ha demostrado ser un factor pronóstico independiente de estadio. Asimismo,hemos analizado las pérdidas de heterocigosidad en el brazo corto del cromosoma 3, encontrando que se trata de una alteración molecular frecuente en carcinomas de pulmón y colorrectales. En concreto, las pérdidas alélicas en el marcador D3S1260 confieren un pronóstico adverso a los pacientes afectados de ambas patologías. Nuestros datos moleculares pueden ser de gran utilidad a nivel clínico ya que permitirán establecer grupos de pacientes con mayor riesgo de sufrir recidivas tumorales y que puedan beneficiarse de protocolos terapéuticos más adecuados.