BIOQUIMICA MOLECULAR, 25

Autor: DIAZ GUILLEN MIGUEL ANGEL .
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS.

Resumen: En la región lq31-32 humana, se localiza el agrupamiento génico RCA(Regulator of complement activation). La familia génica RCA comprende genes funcionales que regulan la actividad del complemento y duplicaciones de los mismos, con características de pseudogenes o con funciones diferentes o desconocidas. Hemos construido un mapa genético de esta región cromosómica, analizando un total de 58 marcadores(microsatélites y RFLPs) en 14 familias. Estos estudios genéticos permitieron identificar 2 regiones con elevada recombinación meiótica específicas de mujeres (hot spot). También, hemos elaborado un mapa fisico de la región utilizando paneles de hibridos de radicación. La integración del mapa fisico con el mapa genético ha permitido elaborar un mapa de alta resolución de la región, en donde estan posicionados la mayoría de los genes y marcadores microsatélites descritos para esta localización cromosómico. Mediante secuenciación de una subregión del sistema RCA, se han identificado y caracterizadi 3 nuevos genes:PFKFB2, ZF1 y SRP-72. El gen ZF1 codifica una proteína de función desconocida que presenta en su estructura un dominio zinc finger. Este gen se encuentra sobreexpresado en algunos tumores y líneas celulares. En la región 1q31-32 humana, se han descrito alteraciones genómica en una gran variedad de tumores(ganancias o pérdidas de material genético). Hemos identificado una región mínimo de desequilibrio alélico(AI) en cáncer de mama comprendida entre los marcadores DIS1723-DIS1647, que coincide con una región de elevada recombinación meiótica. Además, mediante estudios moleculares se ha comprobado que el deseguilibrio alélico observado en los tumores analizados está causado por amplificaciones. La amplificación de la región lq31-32 en estos tumores es un proceso complejo que implica tanto ganancias de uno sólo de los alelos como ganancias de ambos.

Autor: APARICIO PEREZ TOMAS.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID .
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CC BIOLOGICAS.

Resumen: pT3.21 es un plásmido presente enla bacteria acidófila Thiobaciluus T3.2. La moléculaha sido secuenciada completamente, presentando un tamaño de 15390 pb. pT3.2I posee una estructura dimérica compuesta por dos unidades prácticamente idénticas e 6.4 Kpb denominadas Géminis1 y Géminis2. Adicionalmente, contiene una secuencia de inserción denominada IST3. En función del análisis de homología de secuencia, las unidades Géminis presentan una región de replicación muy similar a la de los plásmidos de la familia ColE2 y el gen deuna posible enzima alcohol deshidrogenasa(gen adh). La región de replicación de pT3.21 posee el gen rnal, que probablemente codifica un RNA antisentido, los genes repA y repB, que pueden codificar sendas proteínas de replicación y el origen vegetativo de replicación, ori. La proteína RepA es capaz de unirse especificamente a la región del DNA que contiene la secuencia ori y es, probablemente, la proteína iniciadora de la replicación. La secuencia de inserción IST3, homóloga a una serie de elementos móviles descritos en diferentes bacterias, presenta copias en el cromosoma de Thiobacillus T3.2 y en otros plásmidos de la bacteria. Esta secuencia es capaz de mediar su transposición en células de E. Coli, donde se comprobó que era responsable de varios reordenamientos plasmídicos. El gen adh, que se expresa activamente en las células de Thiobacillus T3.2, codifica un enzima perteneciente al Grupo I de alcohol deshidrogenasas de cadena larga dependientes de zinc y NAD(P). Este enzima es capaz de oxidar eficientemente el 2,3-butanodiol y el glicerol, como demuestran los ensayos realizados con la proteína purificada. Thiobacillus T3.2 también es portador de un derivado de pT3.2I compuesto por una sola unidad Géminis y la secuencia de inserción IST3.

Autor: SANCHEZ LORA FERNANDO JAVIER.
Año: 2000.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA MALAGA.

Resumen: En la presente Tesis se ha tratado de estudiar la etiopatogenia del Lupus Eritematoso Sistémico. Para ello, se han estudiado los genes del complejo principal de Histocompatibilidad de clase II y una serie de autoanticuerpos relacionados con la efermedad. Los genes estudiados son HLA-DRB1, -DRB3,-DRB4, -DRB5, -DQA1, -DQB1. A la vista de los resultados, se existen una serie de alelos relacionados conla enfermedas. Estos son: HLA-DRB1-03011, HLA-DQB1-0401 y HLA-DQA1-0402. También nos encontramos muy pocos autoanticuerpos entre los que destaca anti-DNAn. Se ha observado que dependiendo de las manifestaciones clínicas aparecen unos alelos determinados relacionados con autoanticuerpos.

Autor: MARTÍNEZ SENAC M. MAR.
Año: 2000.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Las interacciones lípido-proteína sonrasgos esenciales en las membranas celulares y determinantes en la regulación de las actividdes biológicas de las proteínas. Gracias al empleo de sistemas modelo de membrana y a la síntesis de péptidos modelo de regiones específicadas en las proteínas, se ha facilitado el estudio del grado de perturbación que ejercen las proteínas de membrana sobre la organización de los lípidos y cómo éstos pueden modualr la dinámica y la estructura de las proteínas. Nuestro trabajo ha tratado de profundizar en el conocimiento de las interacciones entre péptidos modelo de diferentes proteínas de membrana, implicadas en la enfermedad de Alzheimer o en la apoptosis, y fosfolípidos con el objeto de otener información sobre la organización de las membranas biológicas y el significado de estas interacciones sobre la estructura y función de la smismas. La enfermedad de alzheimer se caracteriza por la acumulaciónd e depósitos amiloides en el cerebro que se hallan compuestos principalemtne por un péptido de 42 aminoácidos, el péptido beta-amiloide. El fragmento 25-35 posee la misma actividad neurotóxica que el péptido completo. Se ha estudiado su capacidad de iteracción con vesículas que contenían fosfolípidos con cabezas polares de diferentes características mediante diferenes técnicas biofísicas. Se encontró que el péptido beta-amiloide 25-35 se agregó con el tiempo formado fibrillas con hoja plgada-beta. La agregación se aceleró en presencia de fosflípidos con carga negativa, por lo que la interacción se basó en interacciones electrostáticas, que favorecen la agregación del péptido y además, pueden alterar la interfase lípido-agua de la membrana. La apopotosis o muerte celular programada es un proceso de suicidio celular indispensable en el desarrollo y mentenimiento del equilibrio en el interior de los organismo. Uno de sus principales mecanismos reguladores es debido a la presencia de proteínas de la familia Bcl-2 en las membrnas mitocondirales. La síntesis de péptidos que imitan los dominos hidrofógicos C-terminales de diferentes proteínas anti-apoptótica Bcl-2 y de la pro-apoptótica Bal adoptan una estructura en la que predomina la hélice-alfa cuando se insertan en las membranas, donde se comportan como moléculas intrínecas y pueden penetrar en el núcleo hidrofóbico del lípido, rompiendo las propiedades de barrera de la membrana, pudeindo actuar como señales de anclajes de las proteínas a la membrana mitocondrial. Por otro lado, el dominio C terminald e la proteína pro-apoptótica Bax se puede convertir enuna molécula integral de membrana cambiando su cofnormación cuando se integra en la misma. Su residuo de Trp permanece cerca de la interfase lípido-agua y altera las propeidades de barrera de la membrna. Las mutaciones a nivel de la ser184, no impiden la incorporación del dominio a la membrana aunque sí conllevan un cambio en la estructura secundaria, su localización en la membrana y su capacidad de alterar sus propiedades físicas.

Autor: MOINA SANCHEZ M. JOSE.
Año: 2000.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En 1987 se instauró en el Principado de Asturias el Programa Regional de Diagnóstico Prenatal de los Defectos del cierre del tubo Neuronal(DTNs). Desde entonces se han estudiado más de 70.000 embarazos, alcanzándose un alto grado de participación de las gestantes. El análisis de los hallazgos observados en el programa de cribado con clfafetoproteína en suero materno(AFPSM), ha permitido modificar el protocolo establecido inicialmente, consiguiendo optimizar el programa. Asimismo, se ha determinado la sensibilidad, especificidad y eficiencia del programa del cribado con AFPSM y se ha efectuado un seguimiento de la incidencia y prevalencia de este tipo de malformaciones en Asturias, durante los doce años que comprende el estudio (1987-1998). Por otra parte, se ha descrito que las gestantes con niveles elevados de AFPSM, durante el segundo trimestre de gestación, presentan un mayor riesgo de desarrollar complicaciones obstétricas y resultados perinatales adversos. Por ello se realizó un estudio de cohortes históricas de las gestantes que habían participado en el programa de cribado con AFPSM, estudiando la información acerca del pronóstico fetal que se desprendía de los resultados obtenidos en el programa de cribado con AFPSM. Este estudio ha confirmado que la elevación de este parámetro bioquímico durante el segundo trimestre de gestación, podía ser considerada como un factor de riesto positivo para parto pretérmino, recién nacido con bajo peso, recién nacido muerto y, especialmente, aborto espontáneo. No obstante, se obtuvo una baja sensibilidad de la AFPSM como parámetro de cribado para todos los resultados del parto mencionados.

Autor: SALAZAR CALDERON M. ELISA.
Año: 2000.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Mediante el uso de sueros de conejos inmunizados con el extracto excretor-secretor de Fasciola hepatica se identificaron varios genes de una genoteca construida en el fago gt11. Estos cDNAs fueron caracterizados por determinación de su secuencia de nucleótidos y la búsqueda en Bancos de datos de secuencias homólogas. Las regiones de los cDNAs codificadoras de proteínas fueron clonadas en los vectores de expresión de Escherichia coli apropiados para producir las proteínas en cantidad suficiente sin tener necesidad de purificarla del parásito. Estas proteínas heterólogas fueron empleadas para producir anticuerpos en conejos y así identificar a las proteinas nativas en el extracto excretor-secretor. Las proteínas producidas fueron caracterizadas encontrándose tanto por homología como por ensayos funcionales que en su mayoría son antioxidantes perteneciendo a un sistema de defensa del parásito contra los productos ROS (especies reactivas de oxígeno) generados por la respuesta inmune del hospedador. Se han caracterizado las siguentes proteínas: una tiorredoxina peroxidasa(TPx) perteneciente a un grupo de peroxirredoxinas con propiedades antioxidantes; una tiorredoxina(TRX) que además de ser antioxidante es quizás la donadora de los electrones necesarios para la reducción de la TPx haciéndola así activa y una proteína disulfuro isomerasa(PDI) que además de facilitar el plegamiento de proteínas mediante el establecimiento de enlaces disulfuro actúa como donador de electrones, actuando así también como antioxidante. A diferencia de otras TPx descritas, la de F. Hepatica no es específica a grupos tioles, sino que también protege de la inactivación usando ascorbato, lo cual sugiere diferencias funcionales.

Autor: HERNANDO MARTÍN MIGUEL ÁNGEL.
Año: 2000.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En este trabajo se analizan a nivel bioquímico las reacciones de transferencia de cadenas de DNA que cataliza la proteína TrwC y más concretmaente, un dominio de la proteína bien definido, donde reside la actividad relaxasa. TrwC es el enzima que se une al origen de transferencia y cataliza el corte sitioespecífico del DNA que inicia y termina la transferencia del DNA en el proceso conjugativo. Se ha comprobado que la región aminoterminal de TrwC puede considerarse como un dominio, estructural y funcionalmente independiente del resto de la proteína, localizado entre el extremo aminoterminal de la proteína y el residuo de arginina R300. El dominio aminterminal es capaz de llevar a cabo las reacciones que in vitro, caracterizan la actividad relaxa de un enzima: unión de ssDNA, corte y transferencia de ssDNA y relajación de dsDNA. Estas reacciones son específicas de secuencia, siendo el único sustrato válido el sitio nic de R388 y no el de otros sistemas conjugativos. La estructura nativa del dominio aminoterminal de TrwC se recupera espontáneamente, en las condiciones adecuadas, tras denaturalizar la proteína con un tratamiento térmico. Al igual que la estructura, la actividad relaxa, medida a través de las reacciones mencionadas en elpunto anterior, también se recupera. El segmento comprendido entre los residuos 275-293 es un probable candidato para ser el responsable del reconocimiento del dsDNA.

Autor: RODRIGUEZ GONZALEZ M. CRUZ.
Año: 2000.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD CANTABRIA.

Resumen: En esta tesis se describe la caracterización de una proteína, AqpX, que transporta agua en Brucella abortus, Esta proteína es funcional y permite el paso del agua al ser expresa e insetada en las membrnaas de lao oocitos de Xenoopus leavis así como al ser expresada en Escherichia coli. Como esta proteína no trasnporta glicero, se ha clasificado dentro del grupo de las acuaporinas de la familia MIP: el nivel de expresiónde mRNA aqpX es mayor en medios hiperosmóticos, por lo que esta acuaporina la emplea para el trasnporte rápido de agua en determinadas condiciones de estrés osmótico y mantener así un tumorr celular. Sin embargo, no parece necesitarla para sobrevivir en el interior de las células fagocíticas como los macrófagos peritoneales de ratón.

Autor: GÓMEZ GARCÍA M. ROSARIO.
Año: 2000.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: QUIMICA .
Centro de realización: INSTITUTO DE BO VEGETAL Y FOTOSÍNTESIS.

Resumen: Se ha realizado un estudñio sobre la pirofosfatasa inorgánica solubre (sPPasa, EC 3,6,1,1) de distintos organismo fotosintéticos -cianobacterias, bacterias anoxigénicas, microalgas y plantas- usando una aproximación tanto bioquímica como de genética molecualr. Las sPPasas hidrolizan la molécula de pirofosfato inorgánico (Ppi) en dos moléculas de ortofosfato (Pi) enuna reacción exergónica que permite que las reacciones biosintéticas que liberan Ppi trancurran en el sentido correcto. Se ha purifcado y caracterizado fisico-químicamente las sPPasas de tres cianobacterias y una bacteria fotosintética anoxigénica. Las sPPasas de cianobacterias sonproteínas hexamétricas (subunidad de 20 kDa) mientras que las bacterias fotosinteticas presentanuna mayor diversidad de estados oligoméricos. Se han clonado los genes ppa que codifican las sPPasa cianobacterianas y se ha estudiado el efecto que produce la deficiencia en Pi sobre la actividad sPPasa de la cianobacteria Synechocystis sp. PCC 6803, así como la inducción del transcrito del gen ppa en estas condiciones.También se ha caracterizado las correspondientes sPPasas de distitnas microalgas (Chlanydomonas reinhardtti, Cyanophora paradoxa, Euglena fracilis, Ochromonas danica) y de la planta Spinacea oleracea, siendo en todos los casos proteínas de estructura monomérica diferentes de sus homólogas procariotas y localizadas en los orgánulos celualres (plástidos y moticondrias) ya que el citosol de los protists fotosintéticos carece de actividad sPPasa. De c. Reinhardtii se han purificado y caracterizado dos sPPasas con diferente localizacióncelular denominadas sPPasa 1 (cloroplástica ) y sPPasa 2 (mitocondrial). Se ha identificado y validado por expresión heteróloga el cDNA que codifica el polipéptido precursos de la sPPasa 1 de Arabidopsis thaliana, que posee un péptido de tránsito N-terminal. También se han identificado y clonado dos genes ppa de diferente filogenia a partir de uan base de datos de cDNAs de C. Reinhardtii.Dichos genes denomiados ppa I y ppaII, se expresan en condiciones fotoautotróficas y codifican respectivamente los precursores de una sPPasa 1 (tipo eucariótico) y una sPPsa 2 (tipo procariótico), probablemente mitocondrial. La filogenia molecular de las sPPas mitocondriales de eucariotas fotosintéticos (sPPasas procariotas de mciroalgas) y no fotosintéticos (sPPasas eucarióticas de protozoos y hongos) queda por esclarecer.

Autor: GONZÁLEZ RAVINA CRISTINA.
Año: 2000.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: QUIMICA .
Centro de realización: CTRO. DE INVESTIGACIONES CIENTÍFICAS (CARTUJA).

Resumen: La tesis aborda el estudio de la regulación de las enximas o-Acetilserina (tiol) liasa y Serina acetiltranferasa de Chlamydomonas reinhardtii, a fin de conocer mejor la ruta de asimilación de azufre en dicho organismo.Utilizando diversas técnicas de Biología Molecular, se han aislado los genes que codifican dichas enzimas en este alga verde, y se han llevado a cabo estudios de actividdes enzimáticas y nivel de expresión génica en dicho organismo bajo diferenes condiciones nutricionales de azufre y nitrógeno. Otro de los aspectos abordados en esta Tesis ha sido la obtención de anticuerpos policlonales frente a la enzima O-Acetil serina (tiol) liasa de Chlmydomonas, reinhardtil, con objeto de completar los estuidos de regulación, y estudiar los niveles de dicha enzima a nivel de proteína en diferentes condiciones nutricionales así como en células sometidas a limitación de azufre. Todos los estudios realizados epara la estirpe silvestre de este alga verde, se llevaron también a cabo en dos estirpes mutantes sacl y sac3 de chlamydomonas, que se caracterizan por presentar una respuesta anormal a la limitación nutricional. Los reultados obtendios sugieren un cierto acoplamiento regulatorio entre los mtabolismos de azufre y el nitrógeno, y además muestra una coregulación de ambas enzimas, Serina acetiltransferasa y O-Acetil serina (tiol) liasa en Chalmydomonas reinhardtii. Chlamydomonas presenta además una mayor capacidad para climatarse a la limitación nutricional de azufre, siendo su respuesta rápida casi a partir de la primera hora de tratamiento. También se ha puesto a punto en esta Tesis la determinación de actividad enzimática SAT en extractos crudos de este organismo.

Autor: VAZQUEZ RICO IGNACIO.
Año: 2000.
Universidad: SEVILLA .
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Los actuales cambios y tendencias de la sanidad, así como la propia evolución en los últimos años de los laboratorios clínicos, han hecho necesario un abordaje integral de la problemática surgida en estos. La aplicación de las técnicas de Gestión total de la calidad RS capaz de agrupar todas las acciones emprendidas tanto en la organización y la calidad, como en el abordaje de los costes de los laboratorios clínicos para conseguir la satisfacción del cliente al mínimo coste.

Autor: ANTOLÍN MARTÍN M. PILAR .
Año: 2000.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Esta tesis describe la clonación molecular de varias RIPs("ribosome-inactivating proteins") y lectinas presentes en Sambucus nigra L. Y Muscari armeniacum L. Miller, utilizando la técnica denominada RACe ("Rapid Amplification of cDNA Ends"). El saúco (S. Nigra) posee un gran número de RIPs en diversos tejidos, tanto de tipo 1 como de tipo 2, así como numerosas lectinas. Con este trabajo se ha conseguido la clonación de la nigrina 1,RIP de tipo 2 no tóxica presente en las hojas de la planta, asi como de dos lectinas del mismo tejido, una monomérica(SNALm) y otra dimérica(SNALd). Esta última es la primera lectina dimérica aislada en el genero Sambucus. El gen de la nigrina 1 incluye la secuencia de un péptido señal y de un péptido de conexión entre sus dos cadenas constituyentes, que son procesados en la maduración de la proteína. Posee una alta homología con el gen de la RIP de tipo 2 de corteza nigrina b. Los genes de las lectinas incluyen secuencias equivalente al péptidos señal, parte de la cadena A y péptido de conexión de una RIP de tipo 2, que se procesan para rendir las proteínas maduras. Este hecho, junto con la elevada homología que presentan con la cadena B de la nigrina 1, hace pensar en un posible origen común de todos estos genes. Así mismo, se han obtenido los cDNAs correspondientes a cuatro RIPs de tipo 1 presentes en los bulbos de la especie Muscari armeniacum L. Miller, llamadas musarminas, asi como a otra musarmina presente en las hojas. Por comparación con el tamaño de las proteínas nativas se deduce la posibilidad del procesamiento de un péptido(péptido señal) en N-terminal asi como en el extremo C-terminal. Posteriormente se llevó a cabo la expresión en Escherichia coli de uno de los genes de musarminas de bulbo y la puesta a punto de la purificación de la proteína recombinante. Esta proteína tambien ha sido caracterizada, comprobándose que presenta la misma actividad enzimática que su correspondiente nativa.

Autor: LORENZO RIVERA JULIA.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCOLA DE DOCTORAT.

Resumen: El cáncer de páncreas presenta un pronostico desalentador con una incidencia creciente y un tratamiento inefectivo. El mal pronósitco de este cáncer se debe a la dificultad de ser diagnosticado proecozmente, ya que las manifestaciones iniciales de la enfermedad suelen ser vagas e inespecíficas. En el momento del diagnóstico un 85% de los pacientes presentan metástasis. El diagnóstico precoz podría aumentar la eficacia de las medidas terapéuticas disponibles, por lo que el desarrollo de tests para el diagnósitco precoz del cáncer de páncreas es un objetivo importante. Desafortunadamente,no se han descrito marcadores tumorales específicos para esta neoplasia. La utilidad de los marcadores serológicos es limitada ya que el páncreas no es el único tejido origen de estas enzimas, pero la búsqueda de otras enizmas pacreáticas en suero con implicaciones diagnósticas ha sido en gran medida inútil. Nuestros esfuerzos se han basado en el estudio del sistema procarboxipeptidasa/carboxipeptidasa. La medición de la actividad de dichas enzimas en suero es útil para el diagnóstico de diversas enfermedades pancreáticas, sin embargo existen todavía dificultades en la sistematización no pudiéndose establecer como método de rutina en un laboratorio clínico. Por este motivo en este trabajo se ha llevado a cabo un estudio de la expresión de estos enzimas a nivel molecular con la intención de encontrar un método alternativo más resolutivo. En este trabajo se demuestra por primera vez la presencia del RNA de las diferentes procarboxipeptidasas (PCPA1, PCPA2 y PCPB1),las cuales se expresan en el páncreas de individuos sanos, mientras que otros tejidos no expresan ninguna de las tres proenzimas. Los estudios inmunohistoquímicos realizados en páncreas normal con el anticuerpo policional frente a la PCPA2 recombinante muestran que ésta se localiza en las celulas acinares, pero no en los ductos ni islotes de Langerhans. En este estudio también se demuestra la expresión de la PCPA1, PCPB1 y PCPA2 en diversas líneas de adenocarcionomas pancreáticos humanos. LA expresión de la PCPA2 se demostró en las 6 líneas tumorales analizadas, siendo el nivel más bajo en las líneas metastásicas. De esta manera se pudo establecer una correlación inversa entre el grado de diferenciación y el potencial metastásico de las células, y la expresión de la PCPA2. Estos resutlados demuestran que el aumento de procarboxipeptidasas en el suero de pacientes con cáncer de páncreas descrito en la literatura previamente, no estaría causado por un incremento de la expresión de estas enzimas en las células tumorales, sino por el incremento de la secreción de éstas a la sangre a partir del tejido pancreático normal, causado por la inflamación provocada por el tumor primario sobre este tejido. Los resutlados obtenidos en las líneas celulares de adenocarcinomas pancreáticos a nivel de expresión del mRNA, fueron confirmados por estudios inmunocitoquímicos realizados utilizando el anticuerpo policlonal frente a la PCPA2 recombinante.También se analizaron muestras de tumores humanos detectándose la PCPA2 en las muestras correspondientes a carcinomas primarios de tipo ductal (31%), y no detectándose en las tejido metastático. En este trabajo, se ha identificado dos mutaciones puntuales en el gen de la PCPA2 de tres líneas de adenocarcinomas pancreáticos. La mutación, T293 C, no terminaría ningún cambios aminoacído en la cadena polipeptídica. LA mutación, T909 a C, provocaría la situación de la Ile en posición 194, residuo que forma parte del bolsillo de especificidad de substrato, por una Thr. Históricamente, se ha aceptado un origen ductal para el adenocarcinoma pancreático, pero nuestros datos muestran la expresión de productos acinares indicando que las células acinares o las células protodiferenciadas podrían jugar un papel en el origen de los tumores pancreáticos.

Autor: GOMEZ HERRANZ DAVID.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACION CONTINUADA.

Resumen: En este trabajo se ha llevado a cabo un estudio molecular sobre el origen del cromosoma 21 extra en familias con un hijo o interrupción voluntaria del embarazo(IVE) afecto de SD en la comarca del Valles (Barcelona), que presentaba una alta prevalencia de SD entre 1991 y 1996(23,1/10000). Resultados y Discusión: -Se ha observado un exceso de varones entre los individuos SD estudiados (66,6% niños,33,3% niñas; sex ratio=2,0). Este efecto se ha descrito en diversos estudios. -El porcentaje de mosaicismo parental para la trisomía 21, valorado mediante la tecnica de FISH, es del 2,7%, siendo similar al descrito en otras series estudiadas mediante citogenética convencional. -Se ha detectado mosaicismo para la trisomía 21 en dos individuos afectados de SD(nos 4 y 14). En el caso nº 4 el porcentaje de celulas trisomicas en sangre periférica ha descendido rápida y notablemente, detectandose un 80% en un estudio citogenetico al nacer, y un 7,7% mediante FISH 2,5 años más tarde. -El análisis de micosatélites en el cromosoma 21 ha sido muy util para determinar el origen parental y estadio de nos disyución, obteniéndose resultado en 36 de los 38 casos analizados(94,7%). Los dos casos sin resultado corresponden a los dos casos con mosaicismo para la trisomía 21. -La distribución de errores de no disyunción en los casos estudiados ha sido de 88,8% errores maternos (90,6% en MI, 6,2% en MII y 3,1% mosaicismo materno), 5,6% paternos(50% en MI,50% en MII) y 5,6 % mitóticos. No se han observado diferencias estadísticamente significativas entre estos resultados y los observados en otros estudios poblaciones y no poblaciones. -Se ha detectado una reducción de la recombinación entre los cromosomas 21 implicados en la no disyunción en los casos con error en MI materna, observándose un mapa de recombinación de 32,68 cM. Este mapa representa aproximadamente la mitad del mapa femenino normal, pero es similar a los descritos en otros estudios de casos con SD con error en MI materna. -En los casos con error en la MI materna se ha observado que la reducción de la recombinación estaba localizada principalmente en la zona proximal de 21q. Este hecho puede apoyar la hipótesis de que la localización de los quiasmas puede influir en que un bivalente sea susceptible de no disyunción. -Se ha observado que la edad materna entre los casos que no mostraban recombinación era significativamente inferior a la de los que mostraban un entrecruzamiento(31,1 versus 36,1 años), lo que esta en contra de la hipótesis de la linea de producción, según la cual la recombinacion se reduciría al aumentar la edad materna. Por otro lado, este hecho podría apoyar la hipotesis de que los pares de cromosomas aquiasmáticos presenten una segregación anómala independientemente de la edad materna. -Nuestros resultados no sugieren una hipótesis para explicar la alta prevalencia de SD en la comarca del Vallés, que podría deberse a factores desconocidos o al tamaño de la población.

Autor: NAJIB ABDERRAHIM.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Las neurotoxinas Clostridiales producen inhibición de la liberación tanto basal como estimulada por k+ de serotonina en sinaptosomas de SNC de rata. La TeTx al igual que la BoNT/A producen esta inhibición después de una preincubación a 37º C a tiempos largos (horas). Esta inhibición de la liberación de serotonina está bloqueda por los inhibidores de la actividad metaloproteásica. Además, la preincubación a corto tiempo produce diferentes comportamientos por estas neurotoxinas indicadas:TeTx produce una inhibición non competitiva de la captación de serotonina en mayoría de las regiones de SNC de rata, mientras que la BoNT/A produce un ligero aumento de la captación. Hemos encontrado que la TeTx produce una inhibición de dosis- y de tiempo-dependiente de la captación dependiente de Na+ de [3H]serotonin,5-HT. Los inhibidores del transporte de serotonina tales como son fenfluramina (IC50,11.0+-0.9uM), paroxetina(IC50,33.5+-0.1 uM) e imipramina(IC50,89.9+-5.7 uM), son de 3 o 4 ordenes menos potente que la TeTx(IC50,8.7+-1.0 nM) encontrado una inhibición independiente de la temperatura en la preincubación. La unión de [3H] imipramine y la IC50 de la fenfluramina no se afectan depues del tratamiento con la TeTx, lo que indica que la TeTx no actúa directamente en el sitio de alta afinidad de serotonina al transportador de serotonina (SERT) ni afecta el sitio donde actúa la fenfluramina. Los fragmentos con actividad metaloproteásica, L-TeTx y L-BoNT/A, son incapaces de producir el bloqueo de la captación de serotonin, mientras que el fragmento Hc-TeTx y L-BoNT/A, son incapacidades de producir el bloqueo de la captación de serotonina con dosis dependiente (la IC50 varia entre 0.62 a 2.08 nM). Los inhibidores de la actividad metaloproteásica que fueron capaces de bloquear la inhibición de la liberación tanto basal como estimulada por K+ de [3H]5-HT en sinaptosomas de rata, sin embargo fueron incapaces de bloquear la acción de la TeTx sobre el transporte de serotonina. El éster de forbol, TPA(12-O-tetradecanoilforbol 13-acetato) reduce la Vmax sin observar ningún cambio en la Km del transporte de serotonina. El efecto del TPA sobre el SERT y sobre la activación de las PKC clásicas es similar del efecto que se manifiesta por la TeTx, resultando una perdida de la capacidad del transporte y la foforuilación del SERT, la cúal se inhibe con la coapplicación del inhibidor especifico del la PKC bisindolilmaleimida-1. Estos resultados encontraron gracias a los protocolos de inmunoprecipetación y western blot. La genisteína, inhibidor de la actividad tirosina quinasa, produce una inhibioción no competitiva del transporte de 5-HT en sinaptosomas. Este efecto no aparece aditivo por acción de la TeTx. El inhibidor de la actividad tirosina fosfatasa vanadato de sodium (Na3VO4) aumenta la captación de 5-HT, y su coapplicación con TeTx o con genisteína bloquea la acción inhibitoria. El efecto de los receptores con actividad TyrK en el transporte de 5-HT se estudian utilizando el factor de crecimiento nervioso(NGF) y el factor de creciiento fibroblastico basico(bFGF). El NGF y el bFGF producen una activación significativa de la captación de [3H ]5-HT y bloquean la acción de la TeTx. Puesto que, el NGF/TeTx y TPA producen un aumento de la fosforilación del SERT en los residuos de serine, el NGF aumenta la captación de 5-HT al contrario que la TeTx y el TPA. Lo que indica que el NGF y la TeTx regulan el transporte diferentemente. Este trabajo sugiere que una parte de la acción de la TeTx concite en la modificación de las señales de transducción iniciado en los receptores con actividad tirosina quinasa resulta por una foforilación del transporte de serotonina y la inhibición de la captación.

Autor: NARANJO OLIVERO MIGUEL ANGEL.
Año: 2000.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: INSITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE PLANTAS.

Resumen: De los factores ambientales que limitan la productividad agrícola, el estrés salino es, junto a la sequía, el más importante en términos cuantitativos, a escala mundial. Una de las alternativas viables para paliar este problema consiste en la obtención de plantas (transgénicas) más tolerantes a salinidad, meidante el uso de técnicas de "mejora genética molecular". Esto requiere un conocimiento profundo de los mecanismos de respuesta a sal, además de la identificación de los genes implicados en los mismos. El gen LTL1 (por "lithium toleran lipase 1") de Arabidopsis thaliana fue aislado en base al fenotipo de tolerancia a sal que confiere su expresión en la levadura Saccharomyces crevisie. Su sobre-expresión en plantas transgénicas confiere asimismo cierta tolerancia frente a tratamientos con LiCl y NaCl, tanto en ensayos de germinación in vitro como en plantas crecidas en maceta.Sin embargo no se observa tolerancia frente a estrés osmótico, lo que indica una protección específica contra el componente de toxicidad iónica de la sal. Además, en plantas germinadas en medio líquido, el gen endógeno se activa transcripcionalmente, de forma muy rápida, en presencia de estas sales y de otros inductores, como ABA o ácido salicílico. Un fenotipo similar de tolerancia a sal se ha detectado en líneas transgénicas de Arabidopsis expresando el gen SRH1, que codifica una proteína putativa de la familia de factores des plicing "SR-like", que fue aislado mediante la misma estrategia. Estos resultados abren la posibilidad de utilizar ambos genes como herramientas biotecnológicas en la mejora molecular de la tolerancia a sal en plantas cultivadas.

Autor: PASCUAL-AHUIR GINER AMPARO.
Año: 2000.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS .
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULARES Y CELULAR DE PLANTAS.

Resumen: El aumento de las concentraciones salinas en suelos cultivables junto con los cambios climáticos que afectan a todo el planeta, han provocado una reducción de la producción agrícola, y por tanto graves pérdidas económicas; una situación que podría empeorar en el futuro ya que se estima que la población mundial sobrepasará los recurso disponibles. Una de las soluciones posibles es la obtención de plantas resistentes a la salinidad y sequía. La levadura Saccharomyces cerevisiae se utiliza en la actualidad como sistema modelo para conseguir comprender los mecanismos moleculares involucrados en la respuesta al estrés osmótico. Cuano una célula es sometida a un estrés salino se defiende produciendo osmolitos como el glicerol para recuperar la turgencia, y eliminando del citoplasma aquellos cationes que ejercen un efecto tóxico como Na+ y Li+. En este proceso de defensa hay involucrados receptores que transmiten la señal hasta el núcleo a través de proteínas citoplasmáticas, siendo la última consecuencia el aumento de la expresión de genes de defensa. Distintas rutas de transducción de señal intervienen en el estrés osmótico, siendo la ruta HOG la mas estudiada y comprendida actualmente en el caso de la levadura. La ruta HOG está compuesta por una cascada de MAP quinasas y regula la expresión de genes de defensa como son ENA1(bomba de NA+), CTT1 (catalasa) y HSP12 (protector contra el calor). También la proteína quinasa A (PKA) se ha relacionado con la respuesta a distintos tipos de estrés, entre ellos el estrés osmótico. En otros genes de defensa la ruta que regula la transcripción es desconocida. Hal1 es una proteína con un papel importante en la homeostasis de iones, por sobreexpresión confiere tolerancia al Na+ y a otros cationes tóxicos a través de una activacion del transporte de K+ y consiguiente depolarización. Además la expresión de HAL1 esta regulada por la salinidad: en condiciones optimas de crecimiento HAL1 apenas se expresa, mientras que bajo un estrés osmótico se expresa en grandes cantiddes.El objetivo de esta tesis será el análisis de la regulación de la expresión de HAL1 con el fin de comprender mejor los mecanismos de defensa frente al estrés osmótico.

Autor: BAIGES BLANCO ISABEL M..
Año: 2000.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: FAC. ENOLOGIA TARRAGONA.

Resumen: Las acuaporinas o canales de agua son unas proteinas de expresion ubicua cuya función es la de facilitar el transporte de agua a favor de gradiente a través de las membranas biológicas. En esta tesis doctoral se ha estudiado la expresión de acuaporinas en el híbrido Richter-110(Vitis berlandieri x Vitis rupestris) por su mayor resistencia a la sequia posiblemente relacionada con el vigoroso crecimiento radicular. Mediante RT-PCR se obtuvieron sondas especificas para la selección de clones positivos en una biblioteca de cDNA obtenida a partir de mRNA de hoja de Vitis Richter-110. El resultado fue la deteccion de 7 clones distintos de secuencia codificante completa y uno con la secuencia codificante parcial. Las secuencias nucleotídicas completa y uno con la secuencia codificante parcial. Las secuencias nucleotídicas y polipeptídicas pueden obtenerse de la base de datos GENBANK. El analisis de la actividad transportadora se llevó a cabo mediante la expresión heteróloga en oocitos de Xenopus laevis y demostró que al menos tres de las proteinas analizadas son acuaporinas. El estudio de la inducibilidad a nivel transcripcional desveló que dos de estos genes se regulan siguiendo ciclos circadianos siendo la expresión mayor durante la primera parte del día. La expresión genica de estos mismos dos genes en respuesta al estrés hídrico fue ligeramente distinta a los valores control. Mediante la utilización de anticuerpos policlonales se determinó el efecto del estrés hidrico y del acido abscisico(ABA) en la expresión de esta proteinas. El analisis de la expresión genica a nivel transcripcional en distintos tejidos de la planta se realizó mediante Northern inverso (Dot-Blot). Dos de los genes analizados se expresan predominantemente en tejidos radiculares. Se hipotetiza que en el caso de que ambos transcritos se expresen en celulas en expansion, este elevado nivel podria estar relacionado con el vigor del crecimiento de las raices de Vitis Richter-110.

Autor: MEDINA GÓMEZ M. GEMA.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS C.S.I.C.

Resumen: El gasto energético se divide en tres componentes: metabolismo basal, actividad física y termogénesis adaptativa. Esta última se refiere a la energía disipada como calor en respuesta a cambios en estímulos ambientales tales como la exposición al frío o a un exceso de ingesta calórica. Se activa en el tejido adiposo marrón (BAT), tejido presente en la mayoría de los mamíferos, sobre todo en la etapa neonatal. Se ha demostrado que las hormonas tiroideas son necesarias para una completa funcionalidad termogénica del BAT y para la total expresión de la UCP-1. En este trabajo nos hemos centrado en uno de los productos del metabolismo de la T3, el ácido triiodotiroacético o Triac, que se produce en hígado y en otros tejidos por desaminación y descarboxilación oxidativa de la T3. En los estudios de expresión del mRNA de UCP-1, el Triac es más potente que la T3 sobre la estimulación adrenérgica de UCP-1 en adipocitos marrones en cultivo, vía receptores b3-adrenérgicos. El mayor efecto termogénico del Triac se produce a dosis bajas y a nivel del promotor de la UCP-1. Este efecto puede explicarse por suc aptación a nivel nuclear, que es mayor que la de T3, aunque su entrada en las células es menor que la de T3.El efecto del Triac sobre la estimulación adrenérgica de la actividad D2 es bifásico y más potente que el de T3, produciéndose con timpos largos de exposición a Triac y a NE. También se han realizado estudios sobre las nuevas UCPs. El Triac y la T3 tienen efectos per se sobre la expresión del mRNA de UCP-2 en adipocitos marrones, pero no en adipocitos blancos en cultivo.el Triac es más potente que la T3, tanto sólo, como con NE sobre el mRNA de UCP-2, y esta estimulación aumenta con la diferenciación celular, en ausencia de insulina, requiere síntesis de novo de proteína sy se produce a nivel transcripcional. Sin embargo, los estudios sobre la expresión de UCP-3 muestran que el Triac tiene un efecto menor que la T3. Se ha estudiado la relación entre hormonas triorideas, leptina y la expresión de las UCPs. La secreción y la expresión de leptina en adipocitos marrones y blancos en cultivo se inhiben por acción del Triac y de la T3, y se estimulan por insulina. Los estudios del efecto de la leptina sobre la expresión de las UCPs muestran que la leptina aumentan la expresión del mRNA tanto UCP-1 como de UCP-2 dependiendo sus efectos de la dosis y del tiempo de exposición a leptina. Este efecto podría estar mediado por la T3 y el Triac. Los efectos del Triac observados en adipocitos en cultivo se reproducen en ratas controles tratadas con T3 y Triac. En estas ratas, la administración de dosis bajas de Triac produce un hipotiroidismo más leve que el de la T3 y stimula UCP-1 y UCP-2 en BAT. Se ha observado que puede existir una producción de Triac en el WAT a partir de T3. Por último, se ha estudiado de forma preliminar el efecto del Triac en adipocitos humanos en cultivo. El Triac tiene un efecto mayor que la T3 sobre la expresión del mRNA de UCP-2 en preadipocitos subcutáneos humanos en cultivo, con un mayor efectoa deosis bajas de Triac en ausencia de insulina.

Autor: BEAUMONT EZCURRA FRANCISCO JAVIER.
Año: 2000.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El presente estudio se ha realizado para demostrar la hipótesis de que la estimulación de la NAD(P) H oxidasa esta implicada en el aumento de producción de anión superóxido (O2) vascular en las ratas espontaneamente hipertensas (SHR). Este trabajo se realizó en ratas normotensas Wistar-Kioto de 16 y 30 semanas de edad (WKY 16 y WKY30, respectivamente) y en SHR de 16 y 30 semanas de edad (SHR16 y SHR30, respectivamente). Además, un grupo de ratas SHR de 16 semanas fueron tratadas con irbesartan administrado oralmente (20 mg/kg por dia) durante 14 semanas (SHR30-I). La actividad NAD(P) H oxidasa de la aorta se determinó mediante un protocolo quimiluminiscente. La expresión del ARN mensajero (ARNm) se calculo mediante RT-PCR competitiva. La respuesta vascular a la acetilcolina se analizó por estudios isométricos de tensión. La estructura de la pared de la aorta se determinó analizando el grosor de la media (GM) y el area de sección de corte (ASC) mediante analisis morfométricos. La presión arterial sistólica (PAS) se encontraba significativamente aumentada en los dos grupos de animales hipertensos respecto a sus controles normotensos, y sin embargo no se observaron diferencias en cuanto a la PAS entre SHR30 y SHR16. En las SHR30, se observó un aumento en los niveles de ARNm de la p22phox, en la produccion de O2 dependiente dela NAD(P)H oxidasa y una expresión de la p22phox similar a la de las WKY30. Los parametros funcionales y estructurales se encontraban corregidos en SHR30-I presentaban una actividad NAD(P) H oxidasa y una expresión de la p22phox similar a las de las WKY30. Los parametros funcionales y estructurales se encontraban corregidos en SHR30-I. Estos resultados sugieren que existe una asociación entre la sobreexpresión del gen p22phox y la hiperactividad NAD(P)H oxidasa en la aorta de las SHR adultas. El aumento en la produccion de O2 dependiente de la NAD(P)H oxidasa puede contribuir a la disfuncion endotelial y a la hipertrofia de la media.