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BIOQUIMICA MOLECULAR, 3



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  • ESTUDIO DE SENESCENCIA REPLICATIVA EN CÉLULAS INMUNOCOMPETENTES DE ENFERMOS TRASPLANTADOS DE RIÑÓN .
    Autor: JIMENEZ MORENO ROSARIO.
    Año: 2003.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: UNIDAD DE INVESTIGACIÓN - HOSPITAL REINA SOFÍA.
    Resumen: Los enfermos trasplantados de riñón con función renal normal con más de 5 años de evolución mostraron un aumento de células T CD4+ que presentaban características de senescencaia replicativa, así como muestra la presencia altos porcentajes de células T CD4+CD28- y un acortamiento de la longitud de telómero. Los enfermos de riñón con Rechazo Agudo y Nefropatía Crónca se observó un aumento de células TCD8+ que presentaban características de senescenca replicativa mostrando un descenso de la expresión de CD28 y un acortamentoacusado de la longitud del telómero. En pacientes con función renal normal no se detectaron niveles de citoquinas inflamatorias en plasma y en orina. Enfermos tasplantados de riñón con Rechazo Agudo y Nefropata Crónica presentaban altos niveles de citoquinas IFN gamma e IL10 tanto en plasma como en orina.
  • ESTUDIO DE LOS MECANISMOS IMPLICADOS EN LA APARICIÓN DE TROMBOSIS GLOMERULAR ASOCIADA A LA ENDOTOXEMIA .
    Autor: SÁINZ GARCÍA SILVIA RAQUEL.
    Año: 2003.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: MEDICINA .
    Centro de realización: UNIDAD INVESTIGACIÓN HOSPITAL REINA SOFÍA.
    Resumen: TNF puede inducir trombosis glomerular independientemente de la activación de la vía NO. Sin embargo, se ignoran los mecanismos celulares y moleculares implicados en la aparición de trombosis. Por ello, en el presente proyecto se analizará si TNF ejerce une fecto directo sobre las células del glomérulo o, por si el contrario, la inducción de trombosis glomerular es consecuencia de la acción de TNF sobre células accesorias, las cuales a su vez inducirían trombosis. También se analiza si la expresión de fosfatidilserina (PS) por parte de células glomerulares contribuye a la aparición de trombosis y, por útlimo, investigamos, si el bloqueo de algún componente de los que participan en la transmisión de señales vía receptor Fas podría impedir la aparición de trombosis. Para ello se emplean ratas Sprague-Dqley y ratones deficientes en Fas, a los que se les inducirá trombosis glomerular mediante la administración de LPS+L-NAME. Se recogen muestras de sangre, orina y tejido renal. Tras los resultados obtenidos se sugiere que el TNF juega unpapel primordial pero neceista unirse al receptor Fas para ejercer su acción. Cuano Fas se activa se generan una transmisión de señales hacia el interior celular que producen una alteración en los fosfolípidos de membrana (PS) y esto genera efectos protrombogénicos, con el consecuente depósito de fibrina y la formación del trombo.
  • ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN GENÉTICA DIFERENCIAL DEL CARCINOMA EPIDERMOIDE DE LA CAVIDAD ORAL MEDIANTE EL ARRAY "ATLAS GLASS HUMAN 3.8 I MICROARRAY". ESTUDIO EXPLORATORIO .
    Autor: SOMOZA MARTÍN JOSÉ MANUEL.
    Año: 2003.
    Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
    Resumen: El carcinoma epidermoide es la neoplasia más frecuente diagnosticada en la cavidad oral, y representa la sexta neoplasia maligna diagnosticada en el mundo. Es más frecuente en varones que en mujeres y su etiología está fuertemente asociada al consumo de tabaco y alcohol. La investigación genética ha experimentado un avance muy importante con el descubrimiento y desarrollo de los arrays de ADN. Esta tecnología, permite por primera vez analizar un número elevado de genes, habitualmente cientos o miles, en un tejido determinado. Además, este tipo de técnica permite analizar simultáneamente la expresión genética en dos tejidos o condiciones experimentales distintas, calculando las diferencias de expresión existentes entre las muestras. El objetivo de esta Tesis Doctroal es analizar la expresión genética diferencial del carcinoma epidermoide de la cavidad oral, por medio del array de ADN, "Atlas Glass Human 3.8 I Microarray". MATERIAL Y MÉTODOS Hemos realizado el análisis de la expresión genética diferencial en 5 pacientes con carcinoma epidermoide de la cavidad oral, diagnosticados de forma consecutiva en el Servicio de Cirugía Oral y Maxilofacial del Complejo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela. En cada paciente, previamente diagnosticado de carcinoma epidermoide, realizamos una toma de biopsia de tejido tumoral y otra de tejido oral sano, en la misma región donde se encuentra el tumor, pero en el lado contralateral de la boca. Ambas muestras se ocngelan inmediatamente en nitrógeno líquido, a -195ºC y son almacenadas a esta temperatura hasta el momento de ser procesadas. Tras la homogeneización del tejido a utilizar, se procedió a la extracción del ARN total de las muestras por medio del Rneasy Minikit (Qiagen, Hilden, Alemania). A continuación, el ARN se transcribe a ADNc de doble cadena, por medio del Superscript Double-Strand cDNA Syntehesis kit (Invitrogen, CA, USA). El ADNc se transcriben nuevamente a ARNm, a la vez que se amplifica, por medi odel sistema MEGAscript (Ambion, Texas, USA). Por último, el ARNm se vuelve a transcribir en ADNc, a la vez que se incorporan los fluorocromos Cy3 (para el tejido normal) y Cy5 (para el tejido tumoral), por medio del CyScribe First Strand cDNA Labelling kit (Amersham Pharmacia Biotech of Piscataway, NJ, USA). Una vez llevada a cabo la hibridación, el array es escaneado por medio del Genetic MicroSystemas (GSM) 418 Array Scanner (Genetic Microsystems, MA, USA). Las imágenes obtenidas del escáner son procesadas con el programa informático Imagene 4.1. La normalización de datos se llevó a cabo mediante la aplicación del método LOWESS. La significación estadística se comprobó mediante la aplicación del t-tes a los logaritmos de los ratios de los dos canales de hibridación, con una p menor 0.05. RESULTADOS De los 3757 genes analizados, encontramos 322 inducidos (8.6%), es decir, que 322 genes estaban sobre-expresados de forma significativa en el tejido tumoral, con respecto al tejido oral normal. En el lado contrario, encontramos 104 genes reprimidos (2.8%), es decir, que 104 genes estaban sub-expresados de forma significativa en el tejido tumoral, con respecto al tejido oral normal. Entre los genes que han mostrado sobre-expresión en el tejido tumoral, el grupo más significativo fue el correspondiente a proteínas implicadas en el metabolismo celular. Entre los genes sub-expresados, el grupo más significativo estaba constituido por proteínas y factores de transcripción.
  • CARACTERIZACIÓN DE UN NUEVO GEN DE LA SUBFAMILIA DE TRANSPORTADORES ABCA DE LEISHMANIA .
    Autor: ARAÚJO SANTOS JOSÉ M..
    Año: 2003.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: INSTITUTO DE PARASICOLOGÍA Y BIOMEDICINA "LÓPEZ-NEYRA" C.S.I.C..
    Resumen: La leishmaniasis es una grave enfermedad parasitaria producida por protozoos parásitos del género Leishmania que presenta diferentes manifiestaciones clínicas dependiendo de la especie. Las forma promastigotes del parásito establecen la infección al ser fagocitadas por los macrófagos del hospedador vertebrado, a lo que contribuyen diferentes factores de virulencia que además favorecen la evasión de la respuesta imune del mamífero. El tratamiento contra la leishmaniasis se basa fundamentalmente en el uso de fármacos, habiéndose observado resistencias del parásito frente a algunos de los compuestos más usados. Se han descrito diversos mecanismos de resistencia a fármacos in vitro, algunos de los cuales están relacionados con la sobreexpresión de proteínas ABC. Las proteínas ABC forman parte de una de las familias de proteínas más abundantes y ubícuas existentes tanto en organismos eucariotas como procariotas, y están implicadas en importantes procesos celulares. En Leishmania, se habían caracterizado proteínas ABC pertenecientes a las subfamilais ABCB y ABCC, cuya función se ha relacionado con resistencia a fármacos. Recientemente, se ha caracterizado en nuestro laboratorio un miembro de la subfamilia ABCA que está involucrado en el tráfico de lípidos a través de la membrana del parásito y cuya sobreexpresión disminuye la infectividad de Leishmania. El trabajo realizado en la presente Tesis Doctoral ha permitido llevar a cabo el aislamiento y la caracterización molecular y funcional de un nuevo gen de la subfamilia ABCA de Leishmania tropica, al que hemos denominado LtrABCA2. Utilizando parásitos transfectados que sobreexpresan la proteína LTRABCA2, hemos observado que esta proteína se localiza principalmente en el bolsillo flagelar y en vesículas internas del parásito. Conociendo la implicación de las proteínas incluidas en esta subfamilia en el transporte de lípidos en células de mamíferos, estudiamos el transporte de lípidos a través de la membrana plasmática de Leishmania. Los estudios funcionales empleando parásitos que sobreexpresan LTRABCA2 mostraron que la sobreexpresión de este transportador disminuyó significativamente la infectividad del parásito así como su capacidad para internalizar análogos fluorescentes de fosfolípidos. Por el contrario, la capacidad exocítica de los promastigotes de Leishmania se incrementó ligeramente tras la sobreexpresión de LTRABCA2 , y no se apreciaron variaciones en la expresión de componentes de membrana del parásito o de la sensibilidad de éstos frente a distintos compuestos como los alkil-lisofosfolípidos. En conclusión, consideramos que LtrABCA2 podría jugar un importante papel en el tráfico de lípidos a través de la membrana plasmática de Leishmania, lo que afectaría a la infectividad y a los procesos de tráfico vesicular del parásito.
  • RIBOZIMAS HAIRPIN Y HAMMERHEAD COMO BASE PARA EL DISEÑO DE RNAS INHIBIDORES .
    Autor: PUERTA FERNÁNDEZ ELENA.
    Año: 2003.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: INSTITUTO DE PARASITOLOGÍA Y BIOMEDICINA LÓPEZ NEYRA.
    Resumen: A principio de la década de los ochenta se describió por primera vez la capacidad de ciertas moléculas de RNA para catalizar reacciones químicas. A estas moléculas de RNA se las denominó ribozimas, y desde entoces han sido sometidas a un exahustiva estudio para determinar sus características. La mayoría de las ribozimas naturales catalizan las reacciones de corte y/o ligación de otras moléculas de Rna (sustrato), de un modo altamente específico de secuencia. Estas características ha hecho que se desarrolle una tecnología de ribozimas encaminada hacia la generación de nuevas herramientas terapéuticas. La catálisis química mediada por ribozimas requiere el contar con motivos catalíticos capaces de interaccionar de un modo efectivo conla moléucla diana. El objetivo principal de esta Tesis Doctoral consistió en la generación de nuevas moléculas inhibidoras, basadas en ribozimas, con las características de interacción al sustrato optimizadas. Estas nuevas moléculas inhibidoras se denominaron RNAs antisense catalíticos. En la Naturaleza existen sistemas en los cuales la regulación de diversos procesos está mediada por la interacción eficiente entre moléculas de RNA; son los sistemas de los RNAs antisense naturales, y un exhaustivo conocimiento de los mismos permite afirmar que la velocidad de asociación entre estas moléculas de RNA, y la especificidad del sistema vienen determinada por la presencia de elementos estructurales tallo-lazo en estas moléculas. El conocimiento obtenido del estudio de estos sistemas naturales nos proporcionó la información necesaria para la generación de los RNAs antisense catalíticos. Se trata de moléculas de RNA compuestas por un motivo catalítico, robozimas hairpin ó hammerhead, y de un motivo antisense, estructura tallo-lazo complementaria a una presente en el RNA sustrato. Las moléculas generadas se ensayaron frente a sustratos artificiales de distinta longitud, comprobándose que son catalíticamente activas y que se presentan mejor actividad que ribozimas convencionales. Por último se diseñaron distintas moléculas inhibidoras, específicas de la región LTR de HIV-1, y se comprobó que procesaban dicho de RNA mucho mejor que ribozimas convencionales in vitro, y de un modo muy eficiente en un cultivo de células eucariotas, lográndose inhibiciones de la replicación viral por encima de un 90% para algunas de las moléculas inhibidoras ensayadas. Estos estudios ponen de manifiesto la capacidad de estas moléculas RNAs inhibidoras como nuevos agentes anti-HIV, y suponen un punto de partida importante para la generación de nuevos fármacos antivirales basados en la utilización de dominios RNA como blanco de acción de dichas moléculas inhibidoras.
  • Posible implicación del ácido salicílico y el etileno como señales mediadoras del bloqueo de inhibidores de proteasas de respuesta a herida. Estudios en Arabidopsis thaliana y Lycopersicon esculentum .
    Autor: MEDINA MARÍA EMILIA.
    Año: 2003.
    Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
    Centro de lectura: Dep. Biotecnologia.
    Centro de realización: Universidad Politécnica de Valencia.
    Resumen: Resultados obtenidos en nuestro laboratorio ( Tesis Doctoral de J. Fayos y otros) demostraron, por primera vez, la existencia de un fenómeno de modulación negativa de la respuesta a herida y a herbívoros (bloque de la síntesis de inhibidores de proteasas I y II) por la activación de la respuesta a patógenos, en plantas de tomate. La presente Tesis tienen como objetivo genral contribuir al conocimiento de los mecanismos moleculares subyacentes a este fenómeno de regulación, y como objetivos concretos: 1) Estudiar la posible existencia de algún motivo secuencia en el promotor de un gen de respuesta a herida ( inhibidor de proteasas) relacionado con el mecanismo de bloqueo de su expresión. 2) Estudio de la implicación del ácido salicílico y del etileno, como señales intermediarias en el referido bloqueo. Las principales conclusiones que se derivan de los estudios realizados con las siguientes; - No se ha encontrado ningún motivo secuencia en el promotor del gen de respuesta a herida estudiado, relacionable con el bloqueo de la síntesis de inhibidores de proteasas de respuesta a herida. - El aumento del nivel de etileno asociado a una inafección patogénica constituye una señal necesaria para que se produzca el bloqueo de la síntesis de inhibidores de proteasas. - Por otra parte, un aumento de etileno producido por aplicación exógena es suficiente para producir el bloquo. - El efecto modulador del etileno sobre la acumulación de inhibidores de proteasas depende de su nivel en los tejidos. Niveles normales de etileno producen un efecto positivo. A niveles altos, la modulación es negativa (bloqueo). - Se propone un modelo para la regulación de la respuesta a herida por etileno.
  • POLIMORFISMOS DEL CLUSTER DE LAS APOLIPROTEINAS AI-CIII-AIV Y DE LA APOLIPOPROTEINA EN EL CONTEXTO DEL SINDROME METABOLICO .
    Autor: CARDONA DIAZ FERNANDO.
    Año: 2003.
    Universidad: MALAGA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: Introducción: El síndrome metabólico es una entidad multifactorial con diversos componentes. Diabetes mellitus, obesidad, hipertensión, hiperlipemia, hiperuricemia y lipemia postprandial. Características comunes de estos componentes son: obesidad, hipertrigliceridemia, alteración de HDL e hipertensión. Estas caracteristicas proceden de alteraciones en el metabolismos de las lipoproteínas.Estas alteraciones se han asociado con diversos polimorfismos en las apolipoproteínas, concretamente en el cluster de las apolipoproteínas AI-CIII-AIV y la apolipoproteína E. Objetivo: Buscar un marcador o conjunto de marcadores que conduzca a la identificación, predicción o entendimiento de las alteraciones que conducen al síndrome metabólico o sus componentes relacionados. Buscar las relaciones de la hiperlipemia postprarndial y el resto de variables del síndrome metabólico. Pacientes y métodos: Un grupo de 18 familias con 66 sujetos, 28 de los cuales diagnosticados con Hiperlipemia Familiar Combinada, sometidos a una sobrecarga grasa. Un grupo de 70 sujetos varones Hiperuricemicos, sometidos a una dieta hipouricemiante durante dos semanas y un grupo control compuesto de 268 sujetos en el mismo rango de edady sexo. Se midió edad, IMC, cintura-cadera, colesterol, triglicéridos, HDL colesterol, LDL colesterol, glucosa, insulina, HOMA, excreción renal de uratos. Se estudió los polimorfismos del cluster de las apoliproteínas AI-CIII-AIV por PCR asociada a RFLPs y los polimorfismos de la apolipoproteína E por PCR asociada a hibridación inversa. Resultados: Se observó que la prevalencia del alelo E2 (43% vs 14% or 74% vs 26%) fue mayor en el grupo de pacientes con gota que en el grupo control
  • ANÁLISIS DE LAS INTERACCIONES MOLECULARES Y DEL TRÁFICO ENTRE EL CITOSOL Y EL NÚCLEO DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN NF-kB (p50/p65) Y DE SU INHIBIDOR IkBa. MECANISMO DE ACCIÓN DE LOS CORTICOIDES Y PROSTRATINA SOBRE LA ACTIVAVION DE NF-kB Y LA REPLICACIÓN DEL VIH.
    Autor: RULLAS TRINCADO JOAQUÍN MIGUEL.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID .
    Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
    Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE MICROBIOLOGÍA.
    Resumen: EN LA PRIMERA PARTE DE ESTE TRABAJO HEMOS ANALIZADO LOS MECANISMOS MOLECULARES INVOLUCRADOS EN LA LATENCIA Y REACTIVACIÓN DEL VIH EN LINFOCITOS HUMANOS. SE HA ANALIZADO EL TRÁFICO DE NF-kB Y DE SU INHIBIDOR IkBa ENTRE EL NÚCLEO Y EL CITOSOL. NF-kB ES EL PRINCIPAL SISTEMA REGULADOR DE LA REACTIVACIÓN DEL VIH. HEMOS ENCONTRADO QUE TANTO NF-kB COMO SU INHIBIDOR RECIRCULAN ENTRE EL NÚCLEO Y EL CITOSOL EN LINFOCITOS HUMANOS EN REPOSO. AL CULTIVARLOS EN PRESENCIA DEL LEPTOMICINA B (LMB), UN INHIBIDOR DE LA EXPORTACIÓN DE PROTEÍNAS NUCLEARES, p65 E IkBa SE ACUMULAN EN EL NÚCLEO. EN ESTAS CIRCUNSTANCIAS HEMOS DEMOSTRADO MEDIANTE UNA INMUNOPRECIPITACIÓN QUE p65/p50 INTERACCIONAN FÍSICAMENTE. AL ACTIVAR A ESTAS CÉLULAS CON PMA, TAMBIÉN SE ACUMULA IkBa EN EL NÚCLEO, AUNQUE NO SE ENCUENTRA UNIDO A NF-kB. AL AÑADIR LMB, SE ACUMULA MÁS IkBa EN EL NÚCLEO, AUNQUE NO SE INHIBIÓ LA UNIÓN DE NF-kB AL ADN EN UN ENSAYO DE RETARDO EN GEL. REALIZANDO UNA TRANSFECCIÓN TRANSITORIA DE UN VECTOR QUE LLEVA EL GEN DE LA LUCIFERASA BAJO EL CONTROL DEL LTR SE HA OBSERVADO QUE LMB INHIBE LA TRANSACTIVACIÓN DEL LTR-VIH EN CÉLULAS ACTIVADAS CON PMA. TAMBIÉN HEMOS DEMOSTRADO UN AUMENTO EN LA CANTIDAD DE IkBa EN LINFOCITOS HUMANOS CULTIVADOS EN PRESENCIA DE DEXAMETASONA QUE CORRELACIONÓ CON UN AUMENTO DE IkBa TANTO EN CITOSOL COMO EN EL NÚCLEO Y UNA INHIBICIÓN DE NF-kB AL ADN. ADEMÁS, EL TRATAMIENTO CON DEXAMETASONA TAMBIÉN RESULTÓ EN UNA DISMINUCIÓN DE LA PROPAGACIÓN DEL VIH EN EL CULTIVO.%&/EN LA SEGUNDA PARTE HEMOS ANALIZADO EL EFECTO DE PROSTRATINA EN LA REPLICACIÓN DEL VIH. PROSTRATINA ES UN ÉSTER DE FORBOL QUE NO INDUCE LA APARICIÓN DE TUMORES Y QUE INHIBE LA REPLICACIÓN DEL VIH "IN VITRO", PERO QUE PARADÓJICAMENTE REACTIVA AL VIH EN CÉLULAS INFECTADAS DE FORMA LATENTE. PARA CONOCER MEJOR EL MECANISMO DE ACCIÓN DE PROSTRATINA, HEMOS ANALIZADO EL EFECTO DE PROSTRATINA SOBRE LA REACTIVACIÓN DEL VIH Y LA EXPRESIÓN DE SUS CORRECEPTORES EN LINFOCITOS HUMANOS. PROSTRATINA TRANSACTIVÓ LAS CONTRUCCIONES DEL GEN DEL ENZIMA LUCIFERASA BAJO EL CONTROL DEL LTR O DE SITIOS DE UNIÓN A NF-kB Y SP1 Y TRANSFECTADAS EN PBMC HUMANAS. EN ALGUNOS EXPERIMENTOS SE TRASNFECTARON PBMC CON LA SECUENCIA COMPLETA DE CLONES VIRALES INFECCIOSOS. PROSTRATINA INDUJO LA TRANSCRIPCIÓN DEL VIH Y LA EXPRESIÓN VIRAL, DETECTADA MEDIANTE LA ACTIVIDAD LUCIFERASA EN LOS EXTRACTOS CELULARES Y LA CONCENTRACIÓN DE LA PROTEÍNA VIRAL p24 EN EL SOBRENADANTE DEL CULTIVO, RESPECTIVAMENTE. PROSTRATINA INHIBIÓ LA EXPRESIÓN DE LOS CORRECEPTORES CCR5 Y CXCR4 Y AL MISMO TIEMPO INHIBIÓ LA INFECCIÓN DE PBMC CON CEPAS X4 Y R5, PERO NO LA INFECCIÓN DE PBMC CON UN CLON VIRAL QUE ENTRA EN LAS CÉLULAS DE FORMA INDEPENDIENTE DE LOS CORRECEPTORES DEL VIH. ESTOS RESULTADOS CONTRIBUYEN A EXPLICAR LOS EFECTOS PARADÓJICOS DE PROSTRATINA. POR UN LADO, MEDIANTE LA INDUCCIÓN DE NF-kB Y DE SP1 PROSTRATINA INDUCE LA REACTIVACIÓN DEL VIH EN CÉLULAS INFECTADAS DE FORMA LATENTE. POR OTRO LADO, LA DISMINUCIÓN EN LA EXPRESIÓN DE LOS RECEPTORES DEL VIH DISMINUYE LA REINFECCIÓN DE NUEVAS CÉLULAS E INHIBE LA PROPAGACIÓN DEL VIH. ESTOS DATOS APOYAN LA POSIBLE UTILIZACIÓN DE PROSTRATINA PARA REACTIVAR AL VIH DESDE EL ESTADO DE LATENCIA Y ELIMINAR LOS RESERVORIOS VIRALES.
  • Regulación del gen del Receptor del IGF-I por Hormonas Esteroideas en Células Ovaricas .
    Autor: García Bermúdez M. Mercedes.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: Facultad de Ciencias .
    Centro de realización: Instituto de Bioquímica (CSIC).
    Resumen: El control de la foliculogénesis depende de las interacciones entre las gonadotropinas pituitarias, FHS y LH, y factores intraováricos como esteroides, citoquinas y factores de crecimiento. Las células de la granulosa ovárica constituyen la mayoría de las células ováricas en el ovario de mamíferos. Su importancia se debe a que alimentan y sostienen al ovocito, y son la fuente principal de las hormonas sexuales, progesterona y estradiol. El papel que los factores de crecimiento semejantes a la insulina ejercen en el control de la proliferación y maduración de las células ováricas es fundamental en la maduración y regulación de las células de la granulosa y de la teca. El IGF-I, a través de su receptor, estimula la proliferación, promueve la diferenciación y actúa como una señal de amplificación de las acciones de las gonadotropinas. El objetivo de este trabajo fue el estudio de la regulación transcripcional del promotor del gen del receptor del IGF-I por esteroides en células de la granulosa ovárica. A partir de los datos experimentales y bibliográficos hemos podido concluir que: en las células de la granulosa ovárica, la expresión del gen del receptor del IGF-I se encuentra modulada a nivel transcripcional por el estradiol. Esta respuesta no está mediada por la unión directa a hemisitios de ERE, si no que implica la interacción de los receptores nucleares para hormonas esteroideas con elementos de respuesta a Sp1 o AP-1 localizados a larga distancia del inicio de transcripción, identificados en esta región por primera vez. La interacción de estos elementos de respuesta distales con los que se encuentran en la región proximal del promotor del receptor del IGF-I podría ser el desencadenante de los efectos mitogénicos y proliferativos que tienen lugar en las células de la granulosa ovárica durante la foliculogénesis.
  • Estudio de los mecanismos moleculares del efecto neuroprotector del NGF frente a genotóxicos .
    Autor: Martínez Gomariz Montserrat.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: Instituto de Investigaciones Biomédicas.
    Centro de realización: Instituto de Investigaciones Biomédicas.
    Resumen: En este trabajo hemos estudiado el efecto del tratamiento con NGF sobre la viabilidad frente al tratamiento con agentes genotóxicos como son la luz ultravioleta (UVC), el cisplatino (cDDP) y la camptotecina (CPT) en células PC12. Nuestros datos muestran que las células que han sido pretratadas con NGF son menos sensibles a estos agentes, esto lleva a un retraso en la ejecución del fenómeno de muerte celular programada o apoptosis dependiente de las vías que desencadena el NGF por su interación con el receptor TrkA. La cinética de activación de p53 en respuesta a luz UVC no se ve modificada por el pretratamiento con NGF, así como tampoco la activación de la quinasa de c-Jun a pesar de que el NGF induce la expresión de la fosfatasa dual específica MKP-1. El NGF activa las rutas de superviviencia ERK y Akt. Sólo la ruta de Akt parece participar en la protección del NGF frente a estos agentes. Otra vía que se activa por el NGF en las células PC12 es la del factor de transcripción NF B. Esta activación en respuesta a NGF es independiente de la degradación de su subunidad inhibitoria I B y parece ser debida al aumento de la actividad transcripcional de su subunidad p65/RelA, mediada por fosforilación dependiente de Akt. La activación de NF B por el NGF induce la expresión de diferentes genes de superviviencia pero ninguno de ellos parece ser responsable del efecto neuroprotector del NGF frente a la luz UVC. Otros factores de transcripción cuya actividad es modulada por Akt son los pertenencientes a la familia Forkhead. El NGF es capaz de bloquear la inducción de la transcripción génica dependiente de Forkhead. Uno de los genes que posee secuencias regulables por Forkhead es L-Fas. L-Fas se induce en respuesta a UVC en las células PC12 y el NGF es capaz de bloquear esta expresión, de forma dependiente de la activación de la quinasa Akt. Estos resultados nos hacen pensar que el NGF retrasa la apoptosis inducida por UVC por medio de la activación de Akt, que es capaz de fosforilar a uno de los factores FKHR-L1 y bloquear la expresión de L-Fas. Los resultados abren la posibilidad de neutralizar la actividad de L-Fas como protección de la neurotoxicidad inducida por quimioterápicos.
  • Papel del factor de transcripción Blimp-1 en la respuesta inmune B T-independiente y T-dependiente .
    Autor: Gómez Soro Mª Pilar.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: Facultad de Ciencias, edificio Biología.
    Centro de realización: Instituto de Salud Carlos III.
    Resumen: Los linfocitos B se desarrollan continuamente a partir de progenitores pluripotenciales en la médula ósea, y una vez que maduran, migran a los órganos linfoides periféricos donde entran en contacto con los antígenos. La interacción con un antígeno inicia una serie de acontacimientos que finalizan con la aparición de células plasmáticas secretoras de inmunoglobulinas, que son las células efectoras de la respuesta inmune humoral. A lo largo de este proceso tienen lugar una serie de cambios fenotípicos y moleculares, entre los que se encuentran las variaciones en los niveles de expresión de diversos factores de transcripción. Nuestro trabajo se ha focalizado en el factor de transcripción Blimp-1. El papel de Blimp-1 se ha postulado en función de estudios iniciales en células tumorales in vitro, como esencial en el proceso de diferenciación de células B a células plasmáticas. Nuestro trabajo se ha centrado en el análisis de la inducción de transcripción de Blimp-1 en células B normales, analizando si en estas células era un requerimiento necesario para la producción de células plasmáticas en diferentes situaciones de activación celular. Para ello estudiamos detalladamente la dependencia de la expresión de Blimp-1 en células B estimuladas in vitro con estímulos Tindependientes (TI) o T dependientes (TD), para lo que llevamos a cabo tratamientos con oligonucleótidos antisentido específicos de Blimp-1. Los datos obtenidos nos sugirieron que, mientras la actividad de Blimp-1, es necesaria en las primeras horas durante la generación temprana de células plasmáticas y preplasmáticas IgM mediante la activación con estímulos TI, esta activación no es necesaria para la emergencia de células plasmáticas en las que se ha producido el cambio de isotipo a través de estimulaciones TD. Por otro lado, hemos analizado el papel de los mediadores solubles en la expresión de Blimp-1 y en la diferenciación in vitro de de células B normales a palsmáticas y hemos comprobado que aunque en los linfocitos B activados con LPS se produce un aumento en los niveles de expresión de algunas citoquinas, ninguna de ellas es necesaria ni suficiente para producir el crecimiento o la diferenciación de células B, aunque contribuyen a la amplificación de la respuesta inmune humoral. El programa de diferenciación hacia células plasmáticas inducido por Blimp-1, implica que ese factor de transcripción produzca cambios en los niveles de expresión de diferentes genes relacionados con el control de la proliferación y el crecimiento celular (Pax-5 y c-myc), apoptosis (A1, MAD-4), y genes necesarios para las funciones características de las células plasmáticas (Xbp-1). Hemos analizado la relación entre la expresión de Blimp-1 y estos genes, observando que Blimp-1 se expresa selectivamente en una población de células plasmáticas y preplasmáticas IgM+CD43+Synd+, en las que el nivel de expresión de Pax-5 dismunuye al mismo tiempo que se produce un incremento en la expresión de Xbp-1. El elevado nivel de expresión de Blimp-1 se corresponde con la inhibición de c-myc y A1, y el aumento de MAD-4, por lo que parece ser responsable del cese del ciclo celular previo a la diferenciación a células plasmáticas, y de la producción de apoptosis en células parcialmente activadas. Por último llevamos a cabo el análisi diferencial de la expresión de Blimp-1 en células B-1 y B-2, dado que está descrita la fuete tendencia de las células B-1 a diferenciar hacia células plasmáticas secretotra sde IgM. Hemos visto que esta tendencia está relacionada con una elevada expresión de Blimp-1 en células B-1, y que también lo puede estar con su elevada supervivencia y la tendencia a la transformación tumoral observada en ellas.
  • JNK-MKP! and PI3K-NFkB: the major pathways controlling cellular response towards Cisplatin in Non Small Cell Lung Cancer.
    Autor: Chattopadhyay Sharmila.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: Instituto de Investigaciones Biomedicas.
    Centro de realización: IIB(Alberto Sols).
    Resumen: El cáncer de pulmón es una de las peores enfermedades de nuestro mundo. El diagnostico se hace en general tarde y la supervivencia es baja. El carcinoma no microcitico de pulmón (CNMP) representa el tipo de tumor mas frecuente y con peor pronóstico de cáncer de pulmón. Optimizar la inducción de apoptosis en este tipo de tumor representa una forma lógica de avanzar en el tratamiento de la enfermedad. Las líneas derivadas e carcinoma o microcítico de pulmón tienen diferentes grados de sensibilidad a cisplatino, el fármaco mas frecuentemente usado solo o en combinaciones para el tratamiento de este tumor. Este fármaco induce diferencialmente la activación de JNK, que a su vez media la inducción de apoptosis. MKP1/CL100 un regulador negativo de JNK, se encuentra sobreexpresada en varias líneas celulares de CNMP, Nosotros la hemos encontrado sobreexpresada en células H460. Expresando siRNA contra MKP1 en esta línea celular, hemos encontrado que el cisplatino induce mas eficientemente la activación de JNK y p38 y esto correlaciona con un aumento de 10 veces, en la sensibilidad a cisplatino y con un menor crecimiento de los tumores inducidos por estas líneas en ratones. Cuando se analizan muestras quirúrgicas de pacientes con CNMP hemos encontrado expresión de MKP1 con localización nuclear en el 80% de los casos. En conjunto los resultados muestran que la inhibición de la expresión de MKP1 contribuye a un menor crecimiento de la línea celular en el tumor y también un aumento de la respuesta a cisplatino sugiriendo que MKP1 representa una buena diana para sensibilizar este tipo de tumores a cisplatino. Hemos buscado otras dianas que modifiquen la respuesta en otras líneas mas resistentes a cisplatino como la línea celular H727 y H1299 y hemos encontrado la ruta de NF B la cual se conoce es activada por la ruta PI3K/Akt. En ambas líneas celulares H727 y H1299 hemos encontrado altos niveles de actividad NF B, por tanto decidimos estudiar esta ruta y las respuestas a cisplatino. Hemos observado que las líneas celulares que no expresan MKP1 se sensibilizan a cisplatino con el inhibidor LY294002. Un inhibidor de PI3K en el caso de la línea celular H1299. En cambio en las líneas celulares que expresan MKP1 H460 y H727, cuando se inhibe la expresión de MKP1 con siRNA muestran una sensibilización al tratamiento con LY294002 y cisplatino, el cual no se observa en las líneas celulares no transfectadas. Buscando estadios posteriores en las rutas de señalización encontramos efectos similares con el inhibidor de NF kB BAY11-7082. Esto nos lleva a la hipótesis de que las rutas que gobiernan la supervivencia de las células de CNMP a cisplatino son JNK/MKP1 y PI3K/NFk B . La modulación de estas rutas nos lleva a una mas productiva interacción del fármaco con la diana que resulta en una mayor respuesta al tratamiento.
  • IMPLICACIÓN DE LA ENDOTELIN CONVERTASA 1 EN LA VÍA SECRETORIA DE PROCESAMIENTO Y PRESENTACIÓN DE ANTÍGENOS POR MHC DE CLASE I MEDIADA POR FURINA .
    Autor: RODRÍGUEZ CASTRO MARTA .
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID.
    Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE MICROBIOLOGÍA, INSTITUTO DE SALUD CARLOS III.
    Resumen: Una vía alternativa secretoria de procesamiento y presentación de antígenos a linfocitos T CD8+ (CTL) por moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) de clase I mediada por furina se definió en nuestro laboratorio. La proteína secretoria HBe de la cápsida del virus de la hepatitis B puede proporcionar eficientemente péptidos antigénicos localizados en su extremo carboxilo para la carga endógena de moléculas de MHC de clase I en ausencia de TAP. Los péptidos precursores liberados por furina de las quimeras de HBe tienen 29-50 aminoácidos. Un recorte de los péptidos precursores es necesario para producir el tamaño final de los ligandos naturales de MHC de clase I reconocidos por CTL. Los objetivos de este trabajo fueron determinar la forma de actuación de furina sobre la maduración de las proteínas, establecer la importancia para la presentación antigénica de los sitios de corte por furina que son esenciales para la maduración de HBe, estudiar el efecto de la modificación de las secuencias flanqueantes al epítopo, e identificar las peptidasas involucradas en el recorte de los péptidos liberados por furina, todo en la vía secretoria de procesamiento y presentación de antígenos independiente de TAP. La presentación antigénica en células deficientes en TAP, infectadas con virus vaccinia recombinantes (rVV) que expresan proteínas quiméricas de HBe con epítopos situados en su extremo carboxilo en presencia de diferentes inhibidores de proteasas, se estudió mediante ensayos de liberación de 51Cr empleando CTL específicos del epítopo y de moléculas H-2Ld. La expresión y maduración de proteínas se analizó mediante inmunodetecciones. Los resultados obtenidos fueron: furina produce la maduración de las proteínas quiméricas cortando directamente a las mismas, el sitio de corte por furina 151RRGR154 no fue suficiente para la presentación antigénica de las proteínas quiméricas, el acortamiento de las secuencias flanqueantes al epítopo, y por lo tanto los requerimientos de recorte, mejoraron la eficiencia de la presentación del epítopo a CTL, y metalo-aminopeptidasas y endotelin convertasa 1 (ECE-1) estaban involucradas en el procesamiento de las proteínas quiméricas en la vía secretoria de procesamiento y presentación. ECE-1 podría mediar la maduración de proteínas, está involucrada en el recorte de péptidos antigénicos precursores mediante su actividad carboxidipeptidasa o endopeptidasa y actúa en la membrana plasmática. Además, la presentación antigénica en la vía secretoria independiente de TAP de una proteína quimérica de HBe mutante con una deleción de todos los sitios de corte por furina, revelaron la implicación de una nueva proteasa, que denominamos nueva convertasa de antígenos (novel antigen converting-enzyme)(NACE), en una nueva vía de procesamiento y presentación de antígenos independiente de TAP. NACE produce maduración de proteínas. La secuencia de aminoácidos ETTVVS es crucial para la acción de NACE. ECE-1 y una metalo-aminopeptidasa están implicadas en el recorte de péptidos precursores producidos por NACE. Furina está implicada de forma indirecta en el recorte de péptidos precursores liberados por NACE. En resumen, hemos mostrado que el procesamiento de antígenos es el resultado de una vía secuencial que implica a furina, a una aminopeptidasa y a ECE-1. Hemos identificado por primera vez a ECE-1 como la proteasa que genera el extremo carboxilo correcto del epítopo y una nueva proteasa (NACE) implicada en procesamiento, en la vía secretoria independiente de TAP para la presentación antigénica por MHC de clase I.
  • LA PROLACTINA EN LOS PROCESOS DE REGENERACION HEPATICA Y OSTEOCONDRAL .
    Autor: MUÑOZ FUENTES JAIME ALBERTO.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CENTRO DE BIOLOGIA MOLECULAR SEVERO OCHOA.
    Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGIA MOLECULAR SEVERO OCHOA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MADRID.
    Resumen: Trabajos previos de nuestro grupo han puesto de manifiesto que el sistema regulador formado por la hormona PRL y su receptor se encuentra presente en el hepatocito y en células pluripotenciales aisladas de médula ósea humana, sin embargo, las bases de la acción celular de este sistema son poco conocidas . En este trabajo se ha determinadado la perturbación que produce la adminidtración de PRL en la regeneración del hígado después de la hepatectomía parcial. Los datos muestran que la prolactina, diercta o indirectamente, acelera la la activación en los factores de transcripción implicados en la proliferación hepática al mismo tiempo que regula los factores de transcripción implicados implicados en la diferenciación del hepatocito. En relación con las células pluripotenciales aisladas de la médula ósea humana (MSCs), los resultados indican que las MSCs cultivadas en las condiciones descritas expresan los genes del desarrollo correspondientes al eje regulador Indian Hh/PRHrP. Estos resultados indican que las MSCs tienen la plasticidad celular mesodérmica y por expresar genes blanco de hueso, son progenitoras de hueso. Además. los resultados muestran que el sistema PRL-PRLR modula la diferenciación osteocondral regulando el factor de transcripción RUNX
  • Modulación esteroidea del receptor de glicina .
    Autor: Blanco Jerez Carmen Rosa.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
    Centro de realización: Hospital Ramón y Cajal.
    Resumen: Estudio de la modulación del receptor de glicina por compuestos esteroideos, centrado en la acción del esteroide sintético RU 5135 y la comparación de su acción con el antagonista estricnina. Para ello se han empleado técnicas de "binding", registros electrofisiológicos y modelización molecular. Entre los resultados originales obtenidos se encuentra la falta de acción de los esteroides naturales estudiados, así como la potente acción antagonista del RU 5135. Esta acción la ejerce RU 5135 actuando como un antagonista no competitivo de glicina y como un inhibidor competitivo en el sitio del receptor de glicina en el que actúa estricnina, si bien con diferencias, tanto en el modo de interacción como en el mecanismo de inhibición, entre ambos antagonistas.
  • ASPECTOS ESTRUCTURALES DE LA ASOCIACIÓN Y EVOLUCIÓN MOLECULAR DE LA METIONINA ADENOSILTRANSFERASA .
    Autor: SANCHEZ PEREZ GABINO FRANCISCO.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS.
    Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS "ALBERTO SOLS".
    Resumen: En cirrosis alcogólica y otras enfermedades hepáticas se ha encontrado una alteración en la proporción de dímeros y tetrámeros de la enzima metionina adenosiltransferasa (MAT). Nuestro interés se ha centrado en elucidar el mecanismo molecular por el que se controla la relación entre ambas formas oligoméricas. En primer lugar, utilizando dos sistemas de replegamiento in vitro, se pudo determinar que la formación del puente disulfuro intramolecular entre las cisteínas 35 y 61 bloquea la interconversión entre dímeros y tetrámeros. Estas cisteínas se localizan en la lámina beta B, donde también se han identificado los residuos implicados en las interacciones entre dímeros en la MAT de hígado de rata. Cuando se mutaron y se sobreexpresaron en Escherichia coli, todos ellos presentaban variaciones en los parámetros cinéticos y en la distribución de dímeros y tetrámeros. Estos resultados sugieren que el equilibrio entre dímeros y tetrámeros parece depender del balance entre las interacciones atractivas y repulsivas, que se establecen en la zona de interacción entre los dímeros. Por otro lado, la alta conservación a lo largo de toda la secuencia aminoacídica permitió identificar hasta 292 MATs en bacterias y eucariotas. Gracias a estas características se pudo elaborar un árbol filogenético en el que se resuelven los principales grupos taxonómicos, con un alto soporte estadístico en sus nodos. Además, del alineamiento se observa cómo el número de residuos en el bucle que conecta las hojas-beta A2 y A3 sirve para distinguir claramente entre secuencias de bacterias y eucariotas. Finalmente, en vertebrados, la duplicación del gen de la MAT es concomitante con la aparición del hígado y páncreas. Además la adaptación de la secuencia de una de las copias, para proporcionar una función más específica en el hígado, se ha producido gradualmente.
  • CARACTERIZACIÓN Y ANÁLISIS TRANSCRIPCIONAL DE LA AGRUPACIÓN GÉNICA SECE-MUSG-RPLK-RPLA DE CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM. ESTUDIO DEL EFECTO DE LA ANULACIÓN DEL GEN RPLA .
    Autor: GONZÁLEZ LAVADO EVA M..
    Año: 2003.
    Universidad: LEON.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA DE LA UNIVERSIDAD DE LEÓN.
    Resumen: Tradicionalmente las corinebacterias son consideradas como microorganismos de gran interés industrial para la producción de aminoácidos y otros metabolitos. Dentro este grupo es C.glutamicum el microorganismo más estudiado, debido a su gran potencial para producir aminoácidos tales como el L-glutamato, L-lisina y L-isoleucina, que en el mercado genera millones de dólares (Schäfer et al., 2001). El interés comercial de C.glutamicum ha dado lugar a la existencia de varios grupos de investigación dedicados al estudio de la genética y la biología molecular de este microorganismo. Esta memoria recoge los resultados obtenidos en el estudio de la agrupación génica SecE-nusG-rplK-rplA. La importancia de esta agrupación reside en la presencia en ella de los genes rplK y rplA, que codifican proteínas ribosomales implicadas en la respuesta estricta. Hasta el inicio de este trabajo la respuesta estricta en C.glutamicum se hallaba poco caracterizada. Existían estudios sobre el gen relA (Wehmeier et al., 1998), que codifica la molécula efectora de la respuesta estricta (ppGpp), pero no así del gen rplK, cuya proteína L11 lleva a cabo la activación del gen relA (Yang e Ishiguro, 2001). Por tanto el planteamiento general de este trabajo fue determinar si el operón L11 descrito en otros microorganismos tenía su homólogo en C.glutamicum, y en caso afirmaitvo, llevar a cabo el análisis del operón en profundidad, mediante el análisis transcripcional, de las regiones promotoras y terminadoras. Además se trato de determinar el tipo de regulación que se da en este operón.
  • EFECTO DE FACTORES NUTRICIONALES Y AMBIENTALES EN CÉLULAS DE ADENOCARCINOMA DE COLON HUMANO .
    Autor: PÉREZ RAMOS PABLO.
    Año: 2003.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: QUÍMICA.
    Centro de realización: BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR I.
    Resumen: El balance entre los procesos de proliferación, diferenciación y apoptosis es clave en la tumorigénesis colorrectal, siendo la dieta uno de los factores que pueden alterarlo. Así, por un lado, la ingesta de grasas se ha relacionado con un aumento en la descarga de ácidos biliares en el intestino y un aumento en la formación de tumores. Por otra parte, las dietas ricas en fibra aumentan la concentración intracolónica de butiraro, nutriente que juega un papel relevante en la renovación del epitelio intestinal. Las células de adenocarcinoma de colon BCS-TC2 y BCS-TC2. BR2 constituyen un modelo adecuado para estudiar el efecto del butirato y de los ácidos biliares. El efecto ejercido por los ácidos biliares es dependiente de su estructura tridimensional. El DCA, CDCA y LCA inducen muerte celular por apoptosis. Así, provocan la activación de caspasa-3 y -9 implicadas en la vía mitocondrial. Los efectos de estos agentes son menos acusados en las células BCS-TC2. BR2 resistentes a la apoptosis inducida por butirato. Otro inhibidor de la desacetilación de histonas, como el buitraro, es la TSA. Este agente induce muerte celular en ambas líneas celulares. Por tanto, la resistencia al efecto del butirato será consecuencia de alteraciones en el transporte y/o metabolización de dicho ácido graso. Aunque el butirato, la TSA y los ácidos biliares inducen apoptosis en las células, sin embargo ejercen efectos distintos en el comportamiento celular. Así provocan diferentes alteraciones en el grado de diferenciación celular, en la capacidad migratoria de las células y en la expresión de proteínas tales como HSP-72, p53, p21 y PKC*, lo que podría estar relacionado con el papel antagónico descrito in vivo para estos agentes. Ambas líneas celulares presentan diferencias en cuanto a su capaciad de adhesión a componentes de la matriz extracelular y de desadhesión del sustrato, lo que puede estar relacionado con sus diferencias en lo que respecta a fenotipo tumorigénico.
  • ESTUDIO DE GENOTOXICIDAD Y CITOTOXICIDAD DE LOS ALMIZCLES KETONE, MOSKENE Y TIBETENE .
    Autor: RUBIO HERRANZ M. CARMEN.
    Año: 2003.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN.
    Resumen: Se realiza un estudio de genotoxicidad y citotoxicidad de los almizcles nitrogenados Ketone, Moskene y Tibetene. Estos tres almizcles son sintéticos y su uso está muy extendido, utilizándose como componentes y potenciadores aromáticos en la fabricación de cosméticos y productos de limpieza. Debido a su uso, estos productos pasarán a las aguas residuales y al medio ambiente acuático. Ketone, Moskene y Tibetene son sustancias persistentes y con una baja degradabilidad, por ello se acumulan en los tejidos grasos de los organismos biológicos, esto nos lleva a pensar en la conveniencia de realizar estudios de toxicidad. En este trabajo se realiza un estudio de mutagenicidad de estas sustancias en el ensayo de Salmonella Typhimurium con las cepas TA98 y TA100 en presencia y ausencia de un sistema externo de metabolización (mezcla S-9). Para continuar el estudio se realizan tres ensayos de citotoxicidad en cultivos celulares con células gonadales de trucha arcoiris (RTG-2), los ensayos utilizados son: Contenido de proteínas totales, Cantidad de LDH (lactato deshidrogenasa) y ensayo de Rojo Neutro para determinación de viabilidad celular. Los ensayos de genotoxicidad son Salmonella typhimurium y los almizcles Ketone, Moskene y Tibetene reflejan la no existencia de carácter mutagénico de estos productos a las concentraciones ensayadas, con y sin activación metabólica. De la misma forma los estudios con células RTG-2 han reflejado que los almizcles estudiados, a ninguna de las concentraciones ensayadas, es citotóxico, resultado coincidente enlos tres tipos de determinaciones realizadas.
  • INDUCCIÓN DE METALOTINEÍNA POR MERCURIO Y SU RELACIÓN CON SISTEMAS DE DEFENSA ANTIOXIDANTE .
    Autor: BANDO POLAINO INMACULADA.
    Año: 2003.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA .
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA, UCM.
    Resumen: El mercurio es considerado como uno de los contaminantes medioambientales más importantes. En todas sus formas químicas, ha sido reconocido como un elemento tóxico y perjudicial para la mayoría de las especies animales. El objeto de esta tesis ha sido profundizar en los efectos que provoca el mercurio inorgánico en forma de cloruro (HgCl2) por la administración oral de dosis no tóxicas (0,1 mg/kg/día HgCl2) durante tres días consecutivos, estudiando su incidencia y toxicidad a nivel hepático, así como dilucidar los posibles mecanismos de destoxificación del metal por este órgano, teniendo en cuenta la función específica que posee el hígado en el metabolismo y destoxificación de cualquier tipo de xenobiótico. En nuestras investigaciones, se destaca como un aspecto importante la relación existente entre la toxicidad del mercurio con los procesos de estrés oxidativo, generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) y peroxidación lipídica, detectada por una mayor concentración de sustancias que reaccionan con el ácido tiobarbitúrico (TBARS) en la célula hepática. Desde la primera dosis de mercurio utilizada, se produce un ligero daño hepático con un aumento significativo de las enzimas marcadoras de lesión hepática (AST, ALT), así como una elevación notable de los parámetros séricos de obstrucción biliar (GGT, ALP). El mercurio provoca estrés oxidativo, como ha sido comprobado por la depleción del glutation reducido y la disminución de los grupos tiólicos de las proteínas celulares. Se ha observado también un aumento significativo en las actividades enzimáticas pertenecientes al sistema de defensa antioxidante celular (SOD, CAT y GPx), así como en la enzima encargada de los procesos de conjugación para la eliminación de xenobióticos (GST). Finalmente se abordó el estudio de la expresión y síntesis de dos proteínas de fase aguda, la metalotioneína (MT), inducida específicamente por metales y cuya función antioxidante es coadyuvante en la función destoxificadora de metales y por el hígado, y el estudio de otra proteína de estrés HSP70 (protein heat shock), que es inducida por numerosos factores, entre ellos los metales. El análisis por Western y Northern blot de estas proteínas en el hígado, nos ha llevado a la conclusión de que la inducción y síntesis de ambas proteínas por la presencia de mercurio, se realiza a nivel transcripcional.
2388 tesis en 120 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92 | 93 | 94 | 95 | 96 | 97 | 98 | 99 | 100 | 101 | 102 | 103 | 104 | 105 | 106 | 107 | 108 | 109 | 110 | 111 | 112 | 113 | 114 | 115 | 116 | 117 | 118 | 119 | 120
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