BIOQUIMICA MOLECULAR, 41

Autor: NUÑEZ SERRET M. ELENA.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.

Resumen: Actualmente se desconoce el mecanismo por el que el virus de la Hepatitis B interaccional y fusiona con la célula hospedadora. Se ha propuesto que los dominios preS del HBV podrían estar implicados en este proceso ya que se trata de regiones expuestas en los viriones en las que se han localizado diferentes zonas capaces de interaccionar con los hepatocitos. Con el fin de estudiar la implicación de los dominios preS de HBV en el proceso de fusión, y dado que se encuentran en muy bajo porcentaje en el antígeno de superficie, ha sido necesario su clonación y expresión. De esta manera se ha conseguido la obtención de cantidades suficientes de proteína dedos subtipos diferentes (ayw y adw). Los resultados obtenidos indican que los dominios preS purificados son capaces de interaccionar con vesículas de fosfolípidos ácidos, siendo la constante de interacción muy elevada y similar a la obtenida en el caso de otras proteínas fusogénicas. Como consecuencia de la interacción, las proteínas se insertan en la bicapa y sufren un cambio conformacional desde una estructura secundaria fundamentalmente aperiódica hacia estructuras ordenadas. Esta interacción provoca, además, la agregación y fusión de las vesículas y la desintegración física de las membranas, procesos descritos en el caso de otras proteínas virales fusogénicas y que podría indicar la importancia de estas regiones en la infectividad del HBV. Finalmente, y con objeto de localizar la zona de la cadena polipeptídica responsable de la interacción de los dominios preS con vesículas de fosfolípidos, se han clonado por separado las regiones preS1 y preS2 y se han realizado estudios similares a los mencionados anteriormente. Los resultados obtenidos indican que es la región preS1 la implicada en estos procesos.

Autor: PROPIN FERNANDEZ JULITA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGICAS.

Resumen: Mediante estudios de hibridación, determinación de secuencia nucleotídica, y medida de la expresión de genes stt de clusters de Streptomyces rochei F20, se han obtenido nuevos datos sobre la organización génica, la estructura y la función de genes biosintéticos (stt). Algunos de los genes descritos, posiblemente esten involucrados en las rutas de biosíntesis de motivos de gulosamina, estreptolidina y beta-lisina. Se realizaron estudios transcripcionales de los genes implicados en el "cluster" biosintético, describiendo que se transcriben temporalmente como policistrones que incluyen los diferentes genes stt-A-sttD y sttF-sttN. La transcripción es dependiente de la temperatura. La secuencia nucleotídica de los genes (sttA y sttM) codifican enzimas clave en ls biosíntesis de estreprotricina por Streptomyces rochei F20, péptido sintetasa I y II. Hemos clonado y secuenciado el gen sttM y purificado la proteína (SttM) que codifica este gen, con un peso molecular de 67,3 kDa. Esta proteína se sobreexpresó en Escherichia coli y se purificó cerca de la homogenidad por cromatografía de afinidad. Los resultados experimentales indicaron que la proteína recombinante SttM tiene especificidad de sustrato a beta-lisina e histidina.

Autor: MARIN ZAMORA MIGUEL.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Lactarius Deliciosus, un hongo ectomicorricico simbionte principalmente del género Pinus, ha sido estudiado porque en nuestro país tiene gran importancia ecológica para nuestros bosques, así como, económica por la recolección de sus carpóforos. El estudio se realizó sobre la optimización de las condiciones de crecimiento del cultivo en laboratorio de L. Deliciosus para la obtención de mayor biomasa de Micelio. Los resultados obtenidos fueron utilizados para la puesta a punto de la producción industrial de Micelio. A partir de este, se realizó la micorrización controlada en vivero de P. Pinea, mediante sistemas de inoculación diseñados. El proceso de micorrización fué controlado mediante diferentes técnicas molecualres de identificación (PCR/RFLP y sondas específicas) para L. Deliciosus.

Autor: RIQUELME PINO GLORIA.
Año: 1998.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El tema de la tesis es la regulación de los flujos ionicos en celulas no excitables, un topico de gran tradición fisiologica y biofisica, y que es la base de los mecanismos de flujo en masa de fluido y control de volumen. El estudio se centra en la caracterización de canales de K+ por tecnicas electrofisiologicas en dos modelos celulares diferentes, celulas Hela, y celulas de tumor ascitico de Ehrlich. Se estudia la dependencia de calcio intracelular y de la concentración de protones en el lado citoplasmico. También se describe el bloqueo del canal del potasio por amonio, por un mecanismo independiente del cambio de pH. Por último se analiza la participación de este canal en los mecanismos de control de volumen celular.

Autor: MAS GUTIERREZ JOSE ANTONIO.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: En este trabajo se presenta la caracterización del gen de la troponina T de Drosophila melanogaster, así como, algunos de los mecanismos que controlan la expresión de esta proteína en los distintos músculos del organismo. La organización genómica del gen de la TnT de D. melanogaster posee algunas características relevantes. Estas incluyen el primer exón no codificante que se encuentra a 23 kb del exon 2. El intrón 1 es inusualmente largo y está implicado en el control de su expresión al igual que en algunos otros genes musculares de D. melanogaster. También presenta un microexón de sólo tres pb y dos sitios de poliadenilación. El exón 4 es el exón más pequeño descrito hasta el momento, reduciéndose así el límite de tamaño de un exón para un correcto procesamiento. El procesamiento alternativo de los exones 3,4 y 5 del gen genera cuatro tránscritos diferentes a lo largo del desarrollo. En el mensajero específico de los músculos de vuelo y de salto están ausentes los tres exones mientras que el mensajero de músculos hipodérmicos de adulto posee los 11 exones del gen. El microexón sólo está presente en este último mensajero no encontrandose en el de músculos hipodérmicos larvarios. Los dos tipos de musculatura hipodérmica sólo difieren en el microexón cuya inclusión en el músculo hipodérmico del adulto hace que aparezca una nueva lisina en la secuencia de la proteína. Cambios postraduccionales en la isoforma específica de los músculo de vuelo y salto parecen estar implicados en la funcionalidad de estos músculos. De hecho, las distintas isoformas de la troponina T se fosforilan "in vivo" en serina y treonina. Para entender los mecanismos de regulación de la transcripción del gen de la TnT a lo largo del desarrollo se llevó a cabo un estudio "in vivo" de transformantes en la línea general, obtenidos por inserción de elementos-P, de la expresión de beta-galactosidasa, en los que se colocó este gen bajo el control de secuencias seleccionadas. El análisis de las líneas transgénicas dio como resultado que tanto la región 5' como in intrón 1 son capaces de dirigir la transcripción del transgen al mismo nivel y con la misma especificidad espacio-temporal, excepto en los músculos de vuelo. Como ocurre en otros genes musculares de D. melanogaster, los elementos que controlan la expresión en este tipo de músculo parecen encontrarse en el primer intrón. Estos resultados indican que secuencias presentes en ambas regiones, intrón 1 y región 5', están implicadas en la regulación transcripcional del gen de la TnT. Por comparación de las secuencias de la región 5' de D. melanogaster y D. viritis se vio que hay una serie de elementos conservados que incluyen cajas E y posibles sitios de unión para los factores de Drosophila, CF-II y PDP-1. También en el intrón 1 hay una serie de secuencias conservadas que parecen estar agrupadas en dos regiones y que incluyen tres sitios de unión para el factor MEF-2, a los que se une la proteína expresada "in vitro" con alta afinidad. Estos sitios MEF-2 se encuentran también en el intrón 1 de otros genes musculares de Drosophila como la MHC y la TnT, lo que apunta a una característica común en la regulación transcipcional de estos genes..

Autor: MORENO BUENO GEMA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: En esta tesis se ha llevado a cabo la clonación y caracterización de una isoforma de caseina quinasa tipo I en Dictyostelium discoideum (DdCKI). La secuencia de aminoácidos deducida presenta un 70% de homología en el dominio catalítico con el de las isoformas de mamífero CKId y CKIe y un 68% de identidad con la sisoforma de levadura Hrr25, implicada en reparación de DNA. El mensajero de DdCKI se expresa de forma constitutiva durante todo el ciclo vital de Dictyostelium. El anticuerpo generado reconoce una banda de masa molecular 49 kDa, tamaño similar al deducido a partir de la secuencia, los niveles de proteína no varían significativamente a lo largo del ciclo vital de este organismo, al igual que la expresión del gen. Cuando se analiza la expresión de DdXKI en bacterias se obtiene una enzima activa que se autofosforila y fosforila caseína, además se detecta una regulación por heparina y polilisina. Ensayos de inmunofluorescencia muestran que DdCKI se localiza tanto en el citosol como en el nucleode células de Dictyostelim. No hemos podido obtener cepas mutantes que presenten el gen de DdCKI alterado, lo que sugiere que esta porteína es esencial para el crecimiento vegatativo de este organismo. La sobre-expresión de DdCKI general células resistentes al tratamiento con Hidroxiurea, no así con cisplatino. Aunque estas células no tienen alteraciones fenotípicas aparentes durante la diferenciación, la sobre-expresión de la proteína provoca un enlentecimiento de los procesos mitóticos..

Autor: MUÑOZ ARREDONDO JAVIER.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Investigar la implicación del FNT-alpha en la génesis del estado de circulación hiperdinámica en la HP y estudiar los factores que median la acción hemodinámica de la citocina en este contexto. El estudio se realizó en un modelo animal de rata con HP por estenosis de la vena porta. Se inyectaron anticuerpos anti-FNT-alpha o placebo a ratas en fase inicial o avanzada de la HP. La administración a corto plazo de los anticuerpos revertió la hiperhemia sistémica y atenuó la esplácnica, aunque no modificó la presión portal. La administración de los anticuerpos a largo plazo sólo atenuó la hiperhemia sistémica, mientras que no modificó ni la hiperhemia esplácnica ni el grado de formación de colaterales portosistémicas. También investigamos la respuesta hemodinámica de los animales con HP a la administración de inhibidores del óxido nítrico y de la prostaciclina. Los incrementos relativos observados en la resistencia vascular sistémica y en la presión arterial media tras la administración de los inhibidores fueron menores en los animales tratados con anticuerpos, tanto a corto como a largo plazo. Así mismo, los anticuerpos provocaron un descenso en los niveles séricos de FNT-alpha, nitratos/nitritos y 6-keto-PGF 1-alpha. Los niveles séricos de glucagón aumentaron tras el tratamiento a largo plazo. Se observó una correlación entre la presión arterial media y los niveles séricos de FNT-alpha parece jugar un papel relevante en la génesis del estado de circulación hiperdinámica asociado a la hipertensión portal y que su efecto es mediado por un incremento en la síntesis de los vasodilatadores endoteliales óxido nítrico y prostaciclina. El mantenimiento de la hiperhemia esplácnica tras la inhibición a largo plazo podría deberse a un mecanismo compensatorio de liberación de glucagón..

Autor: ARREDONDO LAMAS JUAN JOSE.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El análisis evolutivo y funcional de las regiones 5'flanqueantes a los orígenes de transcripción de la PM y la mPM ha demostrado, por una parte, que las regiones proximales son suficientes para dirigir la expresión basal de ambas proteínas. Por otra parte, y con la excepción de la expresión de la PM en los IFMs, el control de la transcripción tanto a nivel espacial como temporal, de las dos unidades de transcripción, esta dirigida por dos regiones de una 800 pb situadas en la región 5'distal del gen y en el intrón 7. La primera de estas regiones controla la expresión de la PM y la segunda la de la mPM. La región que controla la expresión de la PM consta de un solo modulo regulador con dos partes diferenciadas. La parte mas alejada es la responsable de su correcto funcionamiento en todos los músculos y en ella juega un papel esencial el sitio MEF2. La parte más proximal del módulo realiza un papel de modulador positivo de la señal. Sin embargo, la región que controla la expresión de la mPM está dividida en, al menos, dos módulos. Cada uno de ellos controla la expresión de la proteína en una región diferente del cuerpo del animal adulto. El módulo AB es el responsable de la expresión abdominal de la proteína, y el BF2/Tx? de la expresión torácica. En este segundo módulo, el elemento BF2 tiene un papel esencial. Además, los dos promotores presentes en el gen de la PM/mPM funcionan de forma totalmente independiente. No comparten regiones reguladoras de la transcripción. La actividad de cada uno de ellos no se ve influida por la actividad del otro, cuando ambas proteínas se expresan en la misma fibra muscular. La mPm juega un importante papel en el ensamblaje y en el mantenimiento del sacómero durante la actividad muscular. Su extremo carboxilo terminal es muy importante para su correcto funcionamiento. Además, la mPM para poder ejercer su función correctamente tiene que fosforilarse durante el ensamblaje del sarcómero y defosforilarse cuando el sarcómero empieza a funcionar..

Autor: GARCIA RIBAS IGNACIO.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: En los últimos años el tratamiento del cáncer parace haberse estancado en sus logros. La mortalidad entre los adultos sólo ha disminuido en algunos tipos de cáncer gracias a los programas de prevención primaria o secundaria pro no por avances en la terapéutica. Uno de los tumores en el que el progreso se ha estancado es el cáncer de ovario que es la causa más frecuente de muerte por un tumor ginecológico. Actualmente no es posible realizar un diagnóstico precoz y el tratamiento estándar con cirugía y quimioterapia, aunque es útil para prolongar la supervivencia y como paliación, sólo logra curar alrededor de un 20% de las pacientes en estadios avanzados. Por esta razón es preciso investigar y ensayar nuevos tratamientos. La terapia génica ofrece un cambio radical en el paradigma terapbeutico del cáncer que necesita aún desarrollar todo su potencial. En esta tesis hemos generado varias herramientas moleculares que podrían ser de utilidad en su empleo de protocolos de terapia génica en el cáncer de ovario: 1. El tipo más frecuente de cáncer de ovario es el epitelial que sobreexpresa una mucina llamada MUCC1. Se ha demostrado que 700bp de la región promotora del gen MUC1 son suficientes para dirigir la expresión maima y específica de tejido. Hemos utilizado esta secuencia para dirigir la expresión del gen de la timidina kinasa del virus Herpes Simplex (HSVtk) restriengiéndola a los tejidos (y tumores) epiteliales. La HSVtk fosforila al ganciclovir (GVC) (un antivírico no tóxico), que posteriormente se incorpora al DNA durante la replicación produciendo la interrupción del proceso y la muerte celular por apoptosis. Los metabolitos del GVC pueden pasar a células vecinas no transducidas y ser tóxicos para ellas en el llamado efecto bystander que amplía su potencial terapbeutico al no ser preciso modificar todas las células de un tumor para eliminarlas. En esta tesis demostramos que el promotor de MUC1 es capaz de dirigir expresión la expresión génica en células en cultivo de cáncer de ovario y que esta expresión es específica y restringida a líneas MUC1 positivas. Además, hemos comprobado que el promotor de MUC1 es capaz de ser activado po secuencias estimuladoras (enhanceres) heterólogas (por ejemplo del virus SV40) manteniendo la especificidad de tejido. 2. El sistema de expresión inducible por tetracilinas puede tener grandes posibilidades para su uso en terapia génica si se consigue la producción regulada de moléculas citotóxicas por parte de las propias células tumorales. Hemos mejorado el sistema original sustituyendo en el elemento de respuesta a las tetraciclinas al promotor mínimo del citomegalovirus (PminCMV) por promotores ecuarioticos específicos de tejido, como el de MUC1 o el del gen de la tirosinasa. Mediante esta estrategia hemos disminuido la actividad del sistema en el estado no activado sin afectar a su inducibilidad por doxiciclina. Además, hemos demostrado que la secuencia operadora de las tetraciclinas (tetO) puede actuar como un elemento enhancer capaz de activar el promotor de MUC1 en líneas MUC1 negativas. 3. Por último, hemos validado un ensayo in vitro de seinergi farmacológica con el que analizar combinaciones de vectores de terapia génica solos o de éstos con agentes auimioterápicos. Con este ensayo hemos podido comprobar la sinergia entre adenovirus recombinates que expresan el factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-alfa), el interferón-gamma (IFN-gamma) o el HSVtk en presencia de GCV. También hemos comprobado la existencia de antagonismo farmacológico entre el sistema HSVtk/GCV y los quimoterápicos paclitaxel y cisplatino en la línea de cáncer de ovario OVCAR-3..

Autor: SANTAMARIA VELILLA DAVID.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Los orígenes Co1E1 funcionan: como barreras de replicación, deteniendo la progresión de las horquillas de forma polar resultando en la acumulación de intermediarios de replicación con una burbuja interna. La deleción de los diversos componentes funcionales de replicación Co1E1 ha permitido establecer que la asociación estable del RNAII en la región del origen es el único requerimiento indispensable tanto en la iniciación, como en la parada de las horquillas de replicación. El empleo de la técnica de "repeated primer extension" ha puesto de manifiesto que este híbrido es procesado por la RNasa H en dos posiciones, distantes 17 pb, generando dos extremos 3'OH alternativos que son utilizados como cebador para el inicio de la síntesis de DNA. Hemos demostrado que la helicasa replicativa DnaB resulta incapaz de resolver híbridos RNA-DNA. La inhibición de la actividad helicasa de DnaB, que lidera el replisoma, sería la responsable del bloqueo de las horquillas de replicación al interaccionar con el extremo 3'OH del RNAII en su origen Co1E1 inactivo..

Autor: SANCHEZ MARTINEZ M. CRISTINA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Se ha examinado la composición de subunidades e isozimas de la fosfofructokinasa (PFK) en células de tumor ascítico y glándula mamaria murina, el tejido de donde procede el tumor. La PFK tumoral contiene predominantemente subunidades C, siendo las L más abundantes en glándula mamaria, detectándose en ambos tipos de células una variante de la subunidad M de menor movilidad electroforética. Hemos aislado la secuencia codificante completa de la PFK-C tumoral que corresponde a una proteína de 784 aminoácidos y 85,5 kDa, en la que están conservados los residuos propuestos para la unión de substratos y efectores alostéricos y cuya expresión se mantiene constante a lo largo del crecimiento del tumor en ratones, disminuyendo cuando cesa la proliferación celular. Este enzima ha sido sobreexpresado en levadura habiéndose caracterizado como un tetrámero estable, cuyas propiedades reguladoras indican que la subunidad C es mayoritariamente responsable de la ausencia de activación por fructosa-1,6-P2 y la inhibición por P-enolpiruvato, peculiares de la actividad PFK global en células tumorales. Finalmente, la construcción de PFKs quiméricas portando la mitad N-terminal de la PKF-C tumoral y la C-terminal de la PFK-M de músculo humano y viceversa, ha permitido analizar la contribución funcional de cada dominio a la catálisis y el control alostérico, con especial interés en las características diferenciales de estas PFKs..

Autor: SAENZ JIMENEZ M. PILAR.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La sharka es una grave enfermedad que afecta a árboles frutales del género Prunus en gran parte de Europa y en países de otros continentes como India, Chile o Egipto. El agente causante es un virus RNA, el virus de la sharka, plum pox virus o PPV. Pertenece al grupo de los potyvirus, el mayor grupo de virus de plantas y es responsable de graves pérdidas económicas. El proyecto de investigación desarrollado en esta tesis ha permitido, siguiendo varias estrategias, localizar distintas regiones del genoma del virus responsables de diferentes comportamientos biológicos encontrados entre subaislados de un mismo aislado PPV-PS, entre aislados distintos del virus, PPV-PS y PPV-R, y entre PPV y otros potyvirus como el virus de moteado de la venas del tabaco o TVMV y el virus del grabado del tabaco o TEV. En la primera parte de este trabajo, se describe cómo de la población original de PPV-PS se separaron diversos subaislados que producían distinta sintomatología en huéspedes herbáceos. Comprobamos que la presencia de un ácido glutámico en la posición 107 de la proteína HC era suficiente para producir un cambio drástico de los síntomas, sin afectar aparentemente a la acumulación viral. Nuestro segundo abordaje estaba basado en la diferente sintomatología causada por PPV-PS y PPV-R en plantas herbáceas (que denominamos tipo PS o tipo R respectivamente). Gracias a la construcción de virus quiméricos a partir de clones cDNA de PPV-PS y PPV-R, se ha conseguido delimitar regiones suficientes para la producción de cada tipo de sintomatología. En el caso de los síntomas tipo R la región implicada correspopnde los cistrones P3+6K1 y CI del genoma de PPV-R, en el huésped Nicotiana clevelandii, o sólo el cistrón P3+6K1, en Pisum sativum. Para la producción del fenotipo PS en N, clevelandii son suficientes los 519 nucleótidos de la región 3'terminal del cistrón P3+6K1 del genoma de PPV-PS, o los 217 nucleótidos 3' terminales en el caso de P. sativum. Por último se ha demostrado que la proteína HC de PPV es el factor limitante del movimiento del virus en plantas de Nicotiana tabacum, en las que PPV solo infecta la hoja inoculada. Esta deficiencia puede ser complementada en trans por la presencia de la proteína HC (sin inserciones o con inserciones de 3 aminoácidos que no afectan a la región central de la proteína) de TEV expresada en plantas transgénicas que contienen la región 5' terminal del genoma de TEV..

Autor: ROJO CARRASCOSA GEMA .
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En esta tesis doctoral se han abordado distintos aspectos de la replicación del ADN del virus de la peste porcina africana. Para ello, se realizó un estudio al microscopio electrónico de la localización ultraestructural del ADN del VPPA en células Vero infectas, utilizando la técnica de hibridación in situ, con el fin de confirmar la existencia de dos estadíos en la replicación del ADN viral. Por otro lado, se ha estudiado el posible papel que puede jugar la ADN polimerasa replicativa, en la fase nuclear y citoplasmática de replicación del ADN del VPPA, este estudio se llevó a cabo por inmunofluorescencia. Para estudiar, el mecanismo de replicación del ADN del VPPA se han analizado los intermedios replicativos que se sintetizan en el núcleo y citoplasma de células infectadas por sedimentación en gradientes alcalinos de sacarosa. Los datos obtenidos mediante este análisis sugieren que la replicación del ADN del VPPA tiene lugar mediante la síntesis de fragmentos pequeños que se convierten posteriormente en moléculas de tamaño intermedio y finalmente en ADN maduro con horquillas terminales. Por otra parte, se han analizado los intermedios replicativos por electroforesis en campo pulsado detectándose un concatémero dimérico líneal del ADN del VPPA. En conjunto, nuestro datos sugieren un mecanismo de replicación del ADN del VPPA similar al propuesto en el modelo de "iniciación de novo" de Baroudy y colaboradores para el virus de la vacuna, en el que se propone que la síntesis del ADN viral es discontinua y bidireccional. Por otra parte, se ha observado una acumulación masiva de mitocondrias alrededor de las factorías virales que contienen partículas en formación, junto con un cambio dramático en la ultraestructura de estas mitocondrias, que podría ser consistente con una función de estos orgánulos en el suministro de la energía que el complejo proceso morfogenético del virus pudiera requerir. El cambio dramático que se observa en la morfología de las mitocondrias que rodean a las factorías virales es compatible con un aumento en la función respiratoria y formación de ATP. Presumiblemente, un aumento en la función mitocondrial podría conducir a una porducción aumentada de especies reactivas de oxígeno, que podrían provocar un daño al ADN y a las proteínas mitocondriales. El aumento en los niveles de los dos chaperones mitocondriales p74 y cpn 60, determinado mediante western-blot, podría representar un mecanismo de defensa celular para preservar la integridad funcional de las mitocondrias..

Autor: RIVERA TORRES JOSE.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La investigación se ha centrado en la generación de una vacuna bivalente basada en la utilización de poxvirus recombinantes contra las dos enfermedades más importantes que afectan al conejo. La vacuna ha demostrado una elevada eficacia protectora frente a los dos patogenos al mismo tiempo en ensayos experimentales realizados en el laboratorio. También se han realizado las posibilidades de utilizar la vacunación génica como alternativa al modelo clásico de vacunación en estos animales. En los ensayos se ha utilizado el modelo murino como punto de partida para posteriores estudios en el huesped natural..

Autor: MARTIN GARCIA VERONICA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Esta tesis presenta la construcción de distintos vectores retrovirales con objeto de estudiar la viabilidad de un sistema retroviral portador de genes cuya expresión sea regulable. Dicha regulación se abordó mediante dos promotores, uno específico de especie (el promotor del ADN ribosómico humano) y otro regulable mediante la hormona tiroidea (el promotor de la proteína básica de la mielina de ratón). Se obtuvo una expresión específica de especie (humana) del gen de la luciferasa a partir del promotor del ADN ribosómico humano seguido del IRES del virus de la encefalomiocarditis, en experimentos de transfecciones transitorias. El sistema basado en el segundo promotor permitió obtener clones de células productoras con una regulación de la expresión de la luciferasa absoluta. Se obtuvieron células productoras de retrovirus portadores de genes tóxicos cuya expresión se activaba en presencia de la hormona tiroidea, llegando a eliminar un tumor cerebral inducido de 60mm3 de volumen en una rata wistar. La terapia génica retroviral basada en la expresión selectiva de genes tóxicos en las células tumorales en presencia de hormona tiroidea se presenta como una nueva perspectiva para el tratamiento de tumores cerebrales malignos..

Autor: MARQUEZ SOPEÑA LUIS.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El propósito de este trabajo ha sido investigar, "in vitro", en el tejido adiposo de la rata y del hombre, la presencia de receptores para el GLP-1, su efecto sobre el metabolismo lipídico, y sus posibles segundos mensajeros. Sus aportaciones originales son: 1. La presencia de receptores específicos para el GLP-1 en el tejido adiposo de la rata y del hombre, con un número de lugares de unión aumentado en pacientes diabéticos tipo I y II. 2. En el adipocito de la rata normal, el GLP-1, produce la generación de inositolfosfoglicanos, pudiendo éstos mediar sus efectos lipogénicos. 3. En el adipocito humano aislado, el GLP-1, a concentraciones fisiológicas, no sólo tiene efecto lipogénico, sino también lipolítico, que va acompañado de un incremento en el contenido de AMPc, con lo que éste puede ser un segundo mensajero de la acción del péptido sobre la lipolisis. 4. El tejido adiposo, podría tener un receptor con dos sistemas de transferencia de señal distintos, o dos receptores con características independientes..

Autor: MADOZ GURPIDE JUAN.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Se han desarrollado dos métodos que permiten la inmovilización específica, orientada y reversible de enzimas manipulados genéticamente sobre electrodos de oro, y se han aplicado al desarrollo de biosensores. La combinación de la tecnología de monocapas autoensambladas y las técnicas de ingeniería genética nos ha permitido elaborar sistemas de reconocimiento específicos de proteínas sobre electrodos, donde la unión del enzima se controla a voluntad en el primer modelos de "reconocimiento por afinidad a un receptor natural", se utilizó una proteína quimera de beta-galactosidasa fusionada con un receptor para colina, que se unía específica y reversiblemente a una monocapa de colina, con una orientación determinada. En el segundo modelo, "por afinidad hacia receptores generados por mutagénesis dirigida", se empleó la metodología de afinidad de aminoácidos hacia iones metálicos inmovilizados para dirigir diferentes orientaciones en la inmovilización de un mutante de ferrodoxinanadp reductasa..

Autor: GOMEZ DEL ARCO PABLO .
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Se ha determinado durante la realización de esta tesis que diversos antioxidantes activan la JNK en linfocitos T. Esta activación es variable pues el antioxidante PDTC y la NAC activaron la JNK de forma intensa y la BHA debilmente. El PDTC y la BHA activaron la JNK de forma sostenida y la NAC lo hizo de forma transitoria: el PDTC además activó la p38 en linfocitos. El PDTC estimuló la transcripción de c-jun y c-fos y la capacidad de unión de al DNA y la capacidad transactivadora de AP-1 en linfocitos T. Esta activación se llevó a cabo sin afectar la ruta RAS/RAF/MEK/ERK. El PDTC, además, inhibe la unión al DNA y la capacidad transactivadora de NFAT en linfocitos T. Esta inhibición está acompañada de la estimulación de la salida rápida del núcleo de los miembros FNAT1 y NFAT2 en linfocitos T activados; probablemente debido a la estimulación de una o más NFAT quinasa(s). Esta inhibición supone un nuevo mecanismo de inmunosupresión; distinto al observado para CsA y FK506. La p38 y la JNK MAPK se unen in vivo y fosforilan in vitro a NFAT1 en linfocitos. Pero sólo la expresión ectópica de la p38 promueve la exclusión nuclear del factor de transcripción transfectado en células HeLa. Por otro lado, la actividad de la p38 interviene en la exportación de NFAT1 del núcleo de los linfocitos activados. Por tanto, distintos miembros de la familia NFAT son regulados selectivamente por diferentes quinasas y la p38, incialmente descrito como activable por estres, desempeña una importante función en la homeostasis de células del sistema inmune..

Autor: MORENO LAMPAYA EDUARDO.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: 1) cad se expresa exclusivamente en el A10 (analia), un segmento en el que ninguno de los genes del complejo Hox está activo. Este dominio colinda con el dominio de expresión de Abd-B, el gen del complejo Hox con un dominio de expresión más posterior (Casares et. al., 1997). 2) En ausencia de la función cad, las estructuras del segmento A10 se transforman en aquellas correspondientes al segmento inmediatamente anterior, la genitalia de macho. 3) cad reprime la expresión de Abd-B, el gen Hox que actúa inmediatamente por delante de cad en el eje anteroposterior (Sánchez-Herrero et. al., 1985). 4) La expresión ectópica de cad puede inducir el desarrollo de la analia en otras regiones corporales, como la cabeza o el ala. 5) cad se necesita e induce la actividad de genes activos dentro de su dominio como Dll, byn y eve. Por todo esto, cad se comporta como se esperaría de un hipotético gen del complejo Hox localizado 5' de Abd-B que especificase un dominio corporal posterior al especificado por Abd-B. De modo que en esta tesis se propone que cad es el gen Hox que especifica el desarrollo del segmento más posterior de Drosophila, la analia o A10 (Moreno y Morata, 1999)..

Autor: GOMEZ CANO ALFARO MARIA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Objetivo: Significado clínico de la presencia de mutaciones asociadas a resistencia a los farmacos antirretrovirales en individuos VIH-1 +. Análisis de la relación entre estas mutaciones y diferentes marcadores virológicos e inmunológicos, Examen de la aplicabilidad clínica. Resultados y Conclusiones: un reducido grupo de pacientes tratados con ZDV en monoterapia se mantienen con beneficio clínico e inmunológico durante más de cinco años. No hay evidencia de un incremento en la prevalencia de resistencias primarias a los análogos de mucleosidos al comparar pacientes "naive" de 1993 y 1997 (15%). Relación entre progresión rápida de la enfermedad y la aparición de la mutación en el codon 215. En pacientes tratados con al menos dos análogos de nucleosidos durante como mínimo un año aparecen mutaciones asociadas a ZDV y/o 3TC en el 90%. Un 18% de los pacientes pretratados con DDI o DDC presentaron M184V. En cambio en los pacientes expuestos a DDI y DDC la prevalencia de mutaciones asociadas a resistencia a ellos fue baja (inferior al 15%). En pacientes tratados con triple terapia se ha observado que la mutación en la posición 184 aparece más tarce que en pacientes con biterapia. En el análisis de genotipos multirresistentes circulantes en España se encontró que un 2% de pacientes pretratados presentaron el cambio Q151M. La ausencia de emergencia de resistencia en pacientes con carga viral detectable se podría explicar con la hipótesis de viremia residual..