BIOQUIMICA MOLECULAR, 42

Autor: MARTINEZ DE MENA RAQUEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Estudiamos los mecanismos que regulan la activación adrenérgica de adipocitos marrones. Se han estudiado dos genes importantes en dicho proceso: 1) UCP-1, proteína responsable de la producción de calor e índice de la actividad termogénica, y 2) Actividad Desiodasa 2 (D2), enzima responsable de la producción local de T3, hormona requerida para la termogénesis, estudiándose también la expresión de su mRNA. Se utilizaron cultivos primarios de adipocitos marrones de rata obtenidos a partir de sus células precursoras que proliferan y diferencian en cultivo. Estas células son verdaderos adipocitos marrones ya que, tras la proliferación, expresan la UCP, marcador específico del tejido adiposo marrón. El mRNA de UCP se expresa únicamente tras estimulación adrenérgica en presencia de T3, a través de la vía de los receptores beta3-adrenérgicos, alcanzando niveles máximos cerca de confluencia, que disminuyen durante la diferenciación. La T3 potencia la estimulación adrenérgica de la UCP. El suero (y factores de crecimiento) y la insulina inhiben la estimulación adrenérgica de la UCP, actuando a través de la ruta de la MAPK. La T3, en ausencia de suero y de insulina, es capaz de estimular la expresión de UCP, per se, en ausencia de estimulación adrenérgica. Los glucocorticoides inhiben la proliferación de los adipocitos y aumentan la expresión de UCP, aunque con efectos variables según la dosis y duración del tratamiento. La actividad D2, al igual que la UCP, es estimula adrenérgicamente a través de receptores beta3-adrenérgicos, requiriendo T3 para la estimulación adrenérgica. La vía de la PKC participa en dicha espitulación de la actividad D2. El hipotiroidismo no estimula la D2, mientras el tratamiento prolongado con T3 aumenta la D2. A diferencia de la UCP, tanto la insulina como el suero, vía MAPK, aumentan la estimulación adrenérgica de la actividad D2. La D2 se inhibe por T4, rT3 y Iopanoico. Los glucocorticoides tienen efectos variables sobre la actividad D2 dependiendo de la dosis, duración del tratamiento y estado de diferenciación celular. La T3 estimula el mRNA de la D2, y se requiere y potencia la estimulación adrenérgica de la D2, que ocurre vía receptores beta3. La insulina inhibe la expresión del mRNA de D2 durante la diferenciación. En conclusión, ambos genes se estimulan por vías adrenérgicas beta3, pero la insulina y el suero a través de la ruta de la MAPK modularían de modo opuesto ambos genes..

Autor: JULIAN ESQUIVIAS M. CARMEN.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Rhizoctonia solani Kuhn (teleomorfo: Thanatephorus cucumeris (Frank) Donk) es un hongo, basidiomiceto que causa enfermedades a una gran variedad de cultivos de interés agrícola y forestal. El desarrollo de métodos no químicos de control de R. solani está limitado actualmente por la falta de conocimientos sobre su genética. Para clarificar los mecanismos de incompatibilidad genética, se han estudiado simultáneamente la compatibilidad sexual y la vegetativa para aislados del grupo de anastomosis (AG) 1, y se han demostrado que son dos mecanismos distintos que operan de manera independiente. También se ha estudiado la fructificación de aislados homocariontes y heterocariontes y el comportamiento nuclear de dichos aislados durante la fructificación. Se ha visto que, aunque la fructificación homocarionte tiene lugar por meioisis, no por mitosis y libera esporas que presentan una elevada tasa de germinación, T. cucumeris AG 1 debe considerarse una especie heterotálica. Por último, se ha puesto a punto para T. cucumeris AG 1 una técnica de obtención de marcadores moleculares, denominada AFLP (polimorfismo en longitud de fragmentos amplificados), con la que se generaron marcadores que segregaban entre la progenie del parental y que demostraron que el micelio aéreo formado al aparear homocariontes de distinto tipo sexual era un verdadero heterocarionte reconstituído, y no solo una mezcla de hifas homocariontes. Tamíen se generaron marcadores relacionados con el tipo sexual, que se utilizarán para futuros estudios destinados a profundizar en el conocimiento de los genes de tipo sexual de T. cucumeris..

Autor: EGEA NAVARRO JOAQUIN .
Año: 1998.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: La supervivencia de las neuronas durante desarrollo embriológico y durante la edad adulta está controlada por una serie de fenómenos entre los que destacan los factores neurotróficos y la actividad eléctrica. De entre los factores neurotróficos más estudiados en relación con estos procesos destacan las neurotrofinas y la familia de factores neurotróficos de la familia del GDNF. Los mecanismos intracelulares que median los efectos de los factores neurotróficos y de la actividad eléctrica en la célula neuronal no se conocen con detalle. En los últimos años se han ido dibujando una serie de vías de señalización intracelular que parecen mediar gran parte de estos efectos. Dos de las más estudiadas son la vía constituida por la PI3K y por la Akt/PKB y la vía constituida por Ras y las MAPKs del tipo ERK. En el presente trabajo hemos analizado cada una de estas vías y su implicación en la supervivencia mediada por la despolarización crónica de la membrana plasmática y por diferentes factores neurotróficos (BDNF, GDNF, NTN y PSP), en cultivos primarios de MTNs de embrión de pollo. Gran parte de la supervivencia inducida por los factores neurotróficos analizados depende de la actividad PI3K y no de la actividad ERK-MAPK. Sin embargo, la supervivencia inducida por la despolarización de la membrana plasmática no depende de las actividades de PI3K ni ERK-MAPK. En este caso, este efecto parece estar mediado por alguna proteína la función de la cual depende de calmodulina. Durante estos estudios observamos que la activación de las ERK-MAPK en MTNs despolarizadas estaba regulada positivamente por CaM. Esta regulación se ha observado también en células PC12 despolarizadas y en células PC12 tratadas con NGF o EGF, factores que actúan a través de receptores con actividad tirosina quinasa NTrk y EGFR, respectivamente). El estudio de la naturaleza de esta regulación en células PC12 ha revelado que calmodulina ejerce su efecto a través de la MAPKKK sin afectar la función de elementos que se encuentran por encima en la vía (entre ellos, Ras). En el caso de la estimulación a través de Trk, esta MAPKKK parece ser c-Rag-1 y/o B-Raf. En el caso de la despolarización de la membrana plasmática esta MAPKKK parece ser una proteína diferente de los miembros de la familia Raf.

Autor: LUQUE LOPEZ MIGUEL ANGEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La razón de este trabajo ha sido investigar, in vitro, el efecto, y mecanismo de acción, del GLP-1 -péptido intestinal con carácter de incretina y propiedades antidiabéticas- sobre el metabolismo de la glucosa en el músculo esquelético del hombre, y estudiar las posibles alteraciones, en estados diabéticos, de sus acciones insulino-miméticas, detectadas previamiente en la rata normal. Las aportaciones originales de este trabajo se pueden resumir en lo siguiente: 1. El músculo esquelético de los modelos STZ-NID y STZ-ID se mantiene sensible a la acción insulino-mimética del GLP-1 sobre el metabolismo de la glucosa, detectada, previamente, en el animal normal, en el que, no obstante, el incremento en la síntesis de glucógeno y en la actividad glucógeno sintasa a, inducidos por el péptido, son mayores que en cualquiera de los dos grupos diabéticos. Sin embargo, la acción del GLP-1 sobre la glucolisis en los dos modelos, es significativa sólo en el no-dependiente de insulina. 2. El músculo esquelético del hombre, el GLP-1 tiene efectos insulino-miméticos relativos a una estimulación de la síntesis de glucógeno, de la actividad glucógeno sintasa a, de la oxidación y utilización de glucosa, y de la producción de lactato. 3. La acción del GLP-1 sobre el metabolismo de la glucosa en el músculo esquelético humano -miotúbulos en cultivo-, parece tener, como segundo mensajero, un inositolfosfoglicano..

Autor: GOMEZ SCHOLL FRANCISCO MANUEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El anticuerpo monoclonal PA2,26, generado contra una línea de queratinocitos transformados, reconoce a una proteína de la membrana plasmática que se induce durante la carcinogenesis química de piel de ratón. El antígeno PA2.26 está ausente de la piel normal, pero se expresa en líneas de carcinoma y en tumores inducidos quimicamente. En este estudio de ha realizado la caracterización del antígeno así como el clonaje de su cDNA. PA2.26 es una proteína transmembrana tipo mucina que se localiza en proyecciones de la membrana plasmática como microvillis, filopodios y lamellipodios, donde se asocia a los filamentos de actina a través probablemente de los miembros de la familia de proteínas ERM:ezrina y moesina. La transfección del cDNA de PA2.26 en queratinocitos no tumorigénicos, induce una conversión epitelial-fibroblastoide asociada a una reorganización del citoesqueleto de actina, que conduce a la pérdida de uniones adherentes mediadas por los complejos cadherina/catenina. Las células transfectadas con PA2.26 adquieren además un fenotipo migratorio y tumoral. Estos resultados indican una implicación funcional del antígeno en la motilidad celular y en la carcinogénesis..

Autor: RELLOSO CERECEDA MIGUEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El desarrollo de métodos para la introducción de genes exógenos en animales, ha permitido el estudio de la expresión de genes y las funciones de algunas proteínas. Pero en estos últimos años estas técnicas se han aplicado a células y órganos de forma local e "in vivo", esta tecnología permitirá corregir desordenes genéticos y el estudio de la fisiología de proteínas y promotores en los órganos de interés. En este trabajo los órganos estudiados son los del tracto reproductor femenino. Para inducir estas modificaciones genéticas se inyectaron complejos ADN/liposomas por el oviducto, lo que produjo la transfección del oviducto y del útero. En el oviducto la expresión de los genes exógenos se localizó en el istmo y la juntura útero-tubal, por otro lado el útero la expresión se localizó en la zona basal de las glándulas uterinas. La expresión de los genes marcadores (beta-galactosidasa y GFP) se estudió por diferentes mbetodos tanto histológicos (histoquímica, fluorescencia e inmunohistoquímica) como moleculares (Westhern-bolt, Southern-blot y PCR). Pero la parte fundamental de este trabajo es que se estudió algunos parámetros que afectan a la transfección del útero y del oviducto de los ratones, como son: la duración de la expresión de los genes marcadores, la extensión de la transfección en el tracto reproductor femenino, la eficiencia de dos vectores de transfección y el efecto de los momentos hormonales sobre la transfección..

Autor: GUELL FERRE ANA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este Tesis se ha estudiado la interacción proteína-proteína responsable del sinergismo transcripcional entre el factor hipofisario GFH-1 y los receptores nucleares TR y RXR. Se ha demostrado in vitro la interacción entre GFH-1 y TR, y se han podido identificar los dominios proteicos que participan directamente en la interacción mediante el sistema de los dos híbridos aplicado a levaduras. Estos son los dominios AF-1 y AF-2 de los receptores nucleares y el dominio CHG de GHF-1. Se define, por primera vez, una función molecular en la región de GHF-1 comprendida entre los residuos 72 y 130, implicada directamente en la interacción con proteínas correguladoras de GHF-1. Por otra parte, se han optimizado dos sistemas de expresión y purificación de las proteínas recombinantes rGHF-1 y rGHF-2 en bacterias y se han generado anticuerpos policlonales específicos para estas proteínas. Así mismo, se ha podido comprobar la naturaleza más insoluble de la isoforma rGHF-2, debida a la inserción de 26 aminoácidos producida en el procesamiento alternativo del tránscrito primario de rGHF-1 y que aporta una región de carbacter hidrofóbico que la distingue de rGHF-1..

Autor: HERRERO MATA M. JOSE.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este trabajo se ha diseñado un método sencillo y específico de amplificación y clonado de alelos HLA-A y HLA-B, que permite obtener su región codificante completa a partir de ADNc. Mediante este método se han clonado y caracterizado las especificidades A1 y B61 que forman parte del haplotipo más frecuente y característico de la población gitana española (A1-Cw*1502-B61-DRB1*1404). Además se ha caracterizado la estructura primaria del alelo B*7301 y se ha puesto en evidencia el que presenta numerosas sustituciones inusuales en el locus HLA-B y una mayor longitud en su porción transmembranosa, rasgos que permiten incluirlo en un segundo linaje alélico de este locus. Hemos clonado y secuenciado cuatro nuevos alelos del locus HLA-C, estos se habían detectado como nuevas variantes mediante la técnica de PCR-SSP: Cw*15051, Cw*1602, Cw*0704 y Cw*1701. Su descripción ha puesto en evidencia que el polimorfismo de dicho locus es equiparable al existente en otros loci (2.e: A y B), y ha permitido describir un tercer linaje alélico en el locus HLA-C..

Autor: GIL TORREGROSA BEATRIZ.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El trabajo de esta memoria describe una nueva vía de presentación de antígeno por MHC de clase I que tiene lugar en la vía secretoria y es mediada por furina. Empleando un conjunto de quimeras que contenían un epítopo antígenico, se identificó una quimera que era capaz de generar péptido independientemente de TAP. El empleo de inhibidores de proteasomas descarta la implicación de los mismos en esta vía. Además se observó que la maduración proteolítica en la ruta secretoria de esta quimera está relacionada con la presentación antigénica, lo que sugiere que este nuevo mecanismo tiene lugar en la vía secretoria. Se identificó la proteasa furina activa en el TGN como la proteasa implicada en la maduración y en la presentación antigénica. Se analizó el péptido generado por ambas vías de presentación antigénica y se observó que ambas generan al mismo péptido antigénico. El empleo de otras quimeras con otro epítopo presentado por otras moléculas de MHC de clase I e inserado en la misma posición de la proteína, definió la aplicación general de esta nueva vía para la presentación de antígenos independientemente de las restricciones impuestas por TAP y los proteasomas..

Autor: FERNANDEZ VARELA PALOMA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Las lectinas son proteínas ubicuas representadas en todos los organismos a lo largo de la escala evolutiva y que juegan un papel destacable en el reconocimiento molecular, estando implicadas en una gran variedad de funciones. Se caracterizan por la capacidad de unirse a carbohidratos, aunque la especificidad es diversa. Se han determinado, mediante cristalografía de rayos-X, la estructuras tridimensionales de una lectina heterodimérica glicosilada del plasma seminal de cerdo (PSP-I/PSP-II) y del polipéptido glicosilado del plasma seminal de toro (aSFP) a 2,4 y 1,9 A respectivamente. Ambos pertenecen a una nueva familia de proteínas denomindas Espermadhesinas que intervienen en las primeras etapas de la fecundación animal y estructuralmente poseen un módulo de plegamiento denominado CUB presente en otras proteínas muchas de las cuales están implicadas en procesos de desarrollo. También se han determinado la estructura de la galectina de pollo, CG-16, a 2815 A de resolución, que al igual que el resto de proteínas resueltas de la misma familia, presentan un plegamiento de tipo "jelly roll"..

Autor: FERNANDEZ FERNANDEZ M. ROSARIO.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El trabajo realizado durante esta tesis ha permitido desarrollar los tres objetivos que nos propusimos al inicio de la misma. En primer lugar se ha profundizado en el conocimiento de la proteína de la cápsida (CP) del virus de la sharka. Se han realizado estudios sobre la capacidad de diferentes zonas de la región amino terminal de albergar modificaciones. Asimismo se han realizado estudios para profundizar en el conocimiento de las propiedades inmunogénicas y estructurales de dicha CP. En segundo lugar se han desarrollado varios vectores para la utilización del virus de la sharka, en concreto la región amino terminal de la CP de este, para expresar péptidos antigénicos de interés en la superficie de sus viriones. Las quimeras derivadas de estos vectores han mostrado su utilidad práctica tanto para el diagnóstico de animales y personas que han desarrollado anticuerpos frente a una determinada secuencia peptídica, así como a la hora de inducir una respuesta, específica y eficiente, de anticuerpos o de células T. En tercer y último lugar se ha desarrollado un vector de expresión de proteínas heterólogas completas, que se producen en la planta de un modo independiente del resto de productos virales. Este vector parece expresar la proteína heteróloga de un modo estable y eficiente por lo que serba de utilidad en diversos frentes, tanto a nivel práctico para producir proteínas en gran escala como a nivel teórico para el estudio de la biología molecular del virus de la sharka y de sus plantas hospedadoras..

Autor: DUQUE MERCHAN NATALIA .
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La mayoría de las glomerulonefritis se producen por el deposito de inmunocomplejos en la región glomerular. Los resultados de esta tesis demuestran que los IC desencadenan la activación de la PLC-gammal, la formación de IP3, la movilización de calcio y la activación de NF-kappaB. Además, los IC inducen la expresión y síntesis de quimioquinas, a través de NK-kappaB. En experimentos in vivo intentamos modular la interacción de los IC con los receptores Fc mediante la administración de fragmentos Fc de la IgG en un modelo de nefritis inmune. Al final del periodo de estudio, los animales tratados presentaron una reducción de la proteinuria, una mejoría de las lesiones morfológicas y una disminución de los depositos de C3. También, en estos animales se observó una reducción de la proliferación glomerular, el infiltrado inflamatorio y el acumulo de proteínas de la matriz extracelular, todo esto se acompañó de una marcada disminución de la producción de quimioquinas y factores de crecimiento, así como una menos activación de los factores de transcripción NK-kappaB y AP-1. Estos resultados indican que la administración de fragmentos Fc de la IgG podria bloquear la interacción de los IC con los receptores Fc de las células residentes in vivo, lo que podría representar un nuevo abordaje para el tratamiento de las nefritis inmunes. Nuestros resultados podrían ayudar a una mejor compresión de los mecanismos patogénicos que provocan el daño tisular en algunas enfermedades renales y proporcionar nuevas implicaciones terapeuticas..

Autor: CHIRINOS ESPIN MAYEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Los moldes de transcripción para la RNA polimerasa de T7 se ensamblaron a partir de octámeros de histonas y tres especies diferentes de DNA: dos circulares (pGEMEX-1 pT207-18) y una lineal (T7-207-18). pGEMEX-1 carece de secuencias posicionantes de nucleosomas, mientras pT207-18 y T7-207-18 poseen 18 copias consecutivas de una secuencia posicionante de nuclesomas. Con moldes ensamblados con sólo tetrámeros o deficientes de los dominiso histónicos terminales, se estudió el efecto que producían estas modificaciones, evaluando la acción de diferentes niveles estructurales dependientes de la concentración de sales, y el papel de las mismas en los procesos de iniciación y elongación transcripcional. Encontramos que, en las distintas condiciones salinas estudiadas, la inhibición de la transcripción producida por la unión de octámeros de histonas al DNA disminuye significativamente al utilizar moldes oligonucleosómicos carentes de dímeros H2A-H2B o de los dominios terminales de las histonas, fenómenos que tienen lugar, al menos en parte, a nivel nucleosómico..

Autor: FRONTELO FERNANDEZ M. PILAR.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este estudio se han analizado los efectos del factor TGF-beta1 en la proliferación y diferenciación de queratinocitos normales y transformados de piel de ratón. El hallazgo principal de este estudio es que TGF-beta1 induce una conversión epitelial-fibroblástica (CEF) en queratinocitos transformados de la línea celular PDV, mientras que bloquea el crecimiento y promueve la muerte celular, probablemente por apoptosis, de queratinocitos inmortalizados no tumorogénicos MCA3D. Para que produzca la CEF las células requieren una exposición prolongada de más de dos semanas al factor. TGF-beta1 no modula directamente la expresión de genes de diferenciación epitelial como cadherina E y queratinas. Sin embargo, durante la primera semana de tratamiento, TGF-beta1 induce la deslocalización de cadherina E y beta-catenina, la pérdida de las unioneadherentes mediada por estas moléculas, y estimula la migración celular y la producción de proteasas de maztriz extracelular: uroquinasa y MMP-9. Estos efectos tempranos de TGF-beta1 (remodelación de matriz extracelular y de citoesqueleto) podrían desencadenar la CEF que ocurre posteriormente. En este trabajo se demuestra, asimismo, que la CEF inducida por el factor en queratinocitos transformados en cultivo está asociada, "in vivo", a una transición hacia carcinomas indiferenciados más invasivos y malignos, y a la adquisición de un potencial metastásico. Los resultados presentados en esta Tesis nos llevan a postular una función dual de TGF-beta1 en la carcinogénesis epidérmica, como supresor tumoral dual de TGF-beta1 en la carcinogénesis epidérmica, como supresor tumoral en los primeros estadíos de la carcinogénesis, y como estimulador de la progresión maligna en las últimas etapas del desarrollo tumoral..

Autor: FERRER MARTINEZ MANUEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La presente Tesis Doctoral recoge un procedimiento para la acilación enzimática regioselectiva de uno de los hidroxilos primarios de sacarosa, maltosa, alquil-maltósidos, maltotriosa y leucrosa, utilizando condiciones suaves. En esencia, consiste en hacer reaccionar dichos carbohidratos con el éster vinílico de un ácido grado (caprílico, láurico, mirístico, palmítico o esteárico) en una mezcla de disolventes orgánicos y en presencia de una lipasa. Más concretamente, la acilación se desarrolló en 2-metil-2-butanol (alcohol tertamílico) conteniendo un pequeño porcentaje (no superior al 20% v/v) de dimetilsulfóxido. Algunas lipasas fueron capaces de catalizar la transesterificación, aunque la lipasa de Humicola lanuginosa (inmovilizada sobre tierra de infusorios) fue la más activa. Se optimizó la síntesis de 6-O-lauroil-sacarosa, variando el porcentaje, y la naturaleza del co-disolvente, la relación molar laurato do vinilo:sacarosa, la naturaleza del disolvente y el contenido enzimático. Bajo las mejores condiciones (2-metil-2-butanol/DMSO 4:1 v/v) se obtuvieron conversaciones del orden del 80-98% en 1-3 h. Este estudio demuestra que el uso de mezclas de disolventes pueden ser una alternativa factible para la síntesis de ésteres de di- y oligosacáridos, permitiendo explotar las propiedades catalíticas de las lipasas. La búsqueda de nuevos biocatalizadores aplicables a este tipo de reacciones dio como resultado el aislamiento de una lipasa procedente de residuos de fermentación de Penicillium chrysogenum, que resultó ser activa en la síntesis de ésteres de sacarosa en disolventes polares. Por otra parte, el estudió de cultivos autolisados de hongos filamentosos permitió obtener una batería de lipasas de potencial interés. En este trabajo se han puesto a punto dos sistemas de purificación de ésteres de azúcares basados en extracciones líquido-líquido y precipitación. La última parte de la Memoria se centra en el estudio de las propiedades surfactantes de los mono- y diésteres obtenidos, tales como la CMC, la tensión superficial y la tensión interfacial..

Autor: AREVALO MARTIN JUAN CARLOS.
Año: 1998.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Autor: SALVADOR SANCHEZ JESUS M..
Año: 1998.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El objetivo de este estudio ha sido la identificación de dos tipos de bombas de Ca2+, la Ca2+-ATPasa intracelular (SERCA) y la membrana plasmática (PMCA) en fracciones subcelulares de cerebro de cerdo, y la purificación y caracterización funcional e inmunológica de la PMCA. Hemos identificado el contenido en las isoformas SERCA y PMCA en cerebro. De las isoformas SERCA, la más abundante es la SERCA2b, que se encuentra localizada mayoritariamente en una fracción de cerebro (microsomas) enriquecida en retículo endoplásmico. Además hemos identificado las isoformas PMCA1, 3 y 4 en cerebro, siendo la isoforma PMCA4 la mayoritaria. También se ha purificado la bomba de Ca2+ de membrana plasmática sinaptosomal. Hemos mostrado evidencias de que la PMCA sinaptosomal reconsituida en liposomas preparados por evaporación en fase reserva, es un sistema de transporte activo electrogénico de Ca2+/H+ que genera un potencial eléctrico positivo en la cara lumenal.

Autor: ACEBO PAIS PALOMA.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: El trabajo realizado en esta tesis se ha centrado en el estudio del control de la replicación del plásmido pMV158. Se ha mostrado que este control esta ejercido por dos componentes codificados por el propio plásmido:el RNA antisentido RNA II, y el represor transcripcional, CopG. ambos componentes ejercen un control efectivo, sin que se haya observado jerarquia entre ellos. Se ha definido el nivel de actuación del RNA II, el cual actúa por bloqueo de las señales de iniciación de la traducción del mensajero cop.rep. En cuanto al segundo elemento controlador, CopG, se ha procedido a su purificación a gran escala para realizar análisis de dicroismo circular, ultracentrifugación analitica, filtración en gel y modelado molecular. Se ha conseguido la cristalización y la resolución de la estructura tridimensional de CopG, tanto de la proteína solacomo acomplejada con su DNA diana.

Autor: GARCIA LUGO PABLO.
Año: 1998.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: En el genoma haploide de H. anomala están presentes tres grupos de genes implicados en la asimilación de nitrato. En conjunto, los tres grupos contienen tres genes que codifican nitrato reductasa, dos que codifican nitrito reductasa y tres que codifican ciclinas. Los tres grupos de genes poseen una alta similitud entre sí, tanto en la secuencia de nucleótidos, como en los polipéptidos codificados en cada gen. EL nitrato estimula la transcripción de los genes que codifican la NR y la NiR. Sin embargo, en ausencia de nitrógeno se encuentran un = 30% de los niveles de ARNm alcanzados en nitrato. La actividad y la proteína nitrato reductasa y nitrito reductasa se detectan sólo en medios en los que está presente el nitrato. Los resultados obtenidos indican la existencia de uno o varios mecanismos de regulación post-traduccional para la nitrato reductasa y la nitrito reductasa.

Autor: ARNAU DIAZ LLANOS M. ROSA.
Año: 1998.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: EL objetivo de la tesis fue crear unas cepas de ratones que sean genéticamente mezcla de dos especies diferentes, la de laboratorio (C57BL/6) y una cepa salvaje (spretus). Como estas dos especies se separaron hace mucho tiempo en la evolución (2-3 millones de años), las características fisiopatológicas de ambas son bastante diferentes. Por ejemplo, sabemos que spretus es más resistente a desarrollar tumores de timo y de pulmón inducidos por radiación y por uretano, respectivamente. Es lógico que estas diferencias en la resistencia a agentes carcinógenos vengan codificadas genéticamente. El interés de estas cepas que hemos generado es que mientras que la mayoría del genoma es C57B1/6, hemos seleccionado cromosomas y porciones de cromosoma que proceden de spretus, lo que permite evaluar las influencias de estas porciones del genoma en aspectos fisiológicos/patológicos de los ratones. En resumen, hemos hecho cruces entre animales cuyo genoma hemos tipado molecularmente con marcadores de tipo microsatélite, seleccionando los animales que han heredado un cromosoma de spretus en su totalidad (consómicos) o parcialmente (congénicos). Se trata de una tesis que contribuye esencialmente con recursos nuevos de investigación. Estos recursos serán útiles a grupos interesados en estudiar la base genética de la variabilidad en las respuestas fisiológicas o patológicas apreciables en ratones, como modelo de las diferencias existentes en la población humana. De entrada, estamos utilizándolos para evaluar la susceptibilidad a algunos tipos de cáncer. Se han investigado las limitaciones y posibilidades de esta aproximación metodológica. Así, por ejemplo, hemos podido investigar que zonas del genoma representan una barrera de especiación, mediada por la existencia de genes de esterilidad.