BIOQUIMICA MOLECULAR, 43

Autor: DIAZ CAZORLA MANUELA.
Año: 1998.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA .

Resumen: Entre las vías de síntesis del óxido nítrico (NO) y de las prostaglandinas existe una estrecha interacción que resulta especialmente significativa durante la respuesta inflamatoria. El presente trabajo de investigación se concibió con el propósito de estudiar la regulación de la expresión de la ciclooxigenasa tipo 2 (COX-2) por NO en células mesangiales humanas. El conjunto de las observaciones realizadas a lo largo de este trabajo sugieren que en un primer momento, el NO potenciaría la respuesta inflamatoria amplificando tanto su propia síntesis como la expresión de COX-2. Sin embargo, posteriormente cuando los niveles de NO alcanzan un determinado límite o las células consiguen cierto grado de activación, este radical podría contribuir a la inhibición de la expresión de COX-2 y de la óxido nítrico sintasa inducible (NOSi), limitando de este modo la amplitud y duración de la respuesta inflamatoria.#

Autor: HERAS VAZQUEZ FRANCISCO JAVIER LAS .
Año: 1998.
Universidad: ALMERIA.
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.

Autor: SERNA LOPEZ JOSE.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Durante el desarrollo del embrión de pollo normal y en un modelo de retraso de crecimiento por cultivo ex ovo, se estudian la expresión de los factores de la familia de la insulina en diversor tejidos, demostrándose que esel IGF-I, al menos en parte, el responsable del retraso del crecimiento, y que el páncreas embrionario es el tejido que en mayor medida contribuye a los niveles séricos, aunque el IGF-I también se encuentra expresado en otros tejidos. En el cerebro del embrión cultivado ex ovo, hay disminución de la expresión de IGF-I respecto al embrión normal. Además, al final del desarrollo, en este cerebro hay una inducción de la expresión de proinsulina, sugiriendo una posible compensación entre los factores de la familia. Durante la formación de la retina, el IGF-I se expresa en el embrión al menos desde el día 5 y aumenta según avanza el desarrollo. La insulina presenta en este sistema dos ondas de expresión, una en día 4-6 y otra en día 15-17. El transcrito de proinsulina en el embrión prepancreático y en el hígado embrionario posee un tamaño mayor que el pancreático. La proteína generada durante el desarrollo embrionario en tejidos extrapancreáticos y prepancreáticos es proinsulina, sin procesar a insulina, y está presente fundamentalmente en estructuras procedentes de las tres capas embrionarias, pero sobre todo en las de estirpe neural. El IGF-II se encuentra en las capas extrarretinianas del ojo. Durante el desarrollo temprano del embrión, antes de la aparición del páncreas, hay expresión de proinsulina, sin procesar a insulina, mientras que la expresión de IGF-I no se presenta hasta el inicio de la organogénesis. La expresión de IGF-II es compleja en cuanto a su transcripción, pues ambas hebras del DNA se transcriben tanto en el embrión temprano como en la retina más avanzada. Los dos transcritos de este gen están poliadenilados. La proteína IGF-II está presente en las membranas basales y en las estructuras de estirpe mesenquimal.#

Autor: ZULUETA FRANCES JOSE.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El objetivo de este trabajo fue explorar a máquina la respuesta oxidativa de las células endoteliales de pulmón en hipoxia-reoxigenación, así como investigar la regulación de ciertas enzimas responsables de dicha respuesta. En comparación con células mantenidas en normoxia, la reoxigenación de células endoteliales previamente mantenidas en hipoxia resultó en un incremento significativo en la formación de radicales libres de oxígeno. Este incremento se produjo tanto a nivel intracelular, por parte de la xantina oxidasa, como a nivel extracelular, por parte de una oxidasa localizada en la membrana citoplásmica con características similares alas de la NADPH oxidasa del neutrófilo. Los oxidantes formados en este proceso fueron el superóxido,el H2O2 y, probablemente, el peroxinitrito, producto de la reacción entre el óxido nítrico y el superóxido. Por otro lado, la hipoxia tuvo efectos importantes sobre la expresión y actividad enzimática de dos enzimas de la familia de las óxido nítrico sintetasas. La expresión y actividad de la óxido nítrico sintetasa constitutiva de célula endotelial (eNOS) disminuyeron significativamente en hipoxia mientras que aumentaron en hiperoxia. La inducción por citoquinas de la óxido nítrico sintetasa inducible (iNOS) en células endoteliales quedó atenuada de forma significativa en hipoxia. En cambio, la reoxigenación resultó en un incremento en la formación de oxido nítrico por encima de los niveles basales.#

Autor: PASCUAL BRAVO ALBERTO.
Año: 1998.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Los RNA transferentes se sintetizan como precursores y deben ser madurados post-transcripcionalmente a RNA transferentes maduros. La maduración del extremo 5' de los RNAs transferentes la realiza la ribonucleasa P (RNasa P). La RNasa P bacteriana posee dos subunidades, una RNA y otra proteína. El RNA cataliza la reacción en ausencia de proteínas en determinadas condiciones in vitro. En esta tesis se ha estudiado la RNasa P de cianobacterias. Se ha clonado el gen codificante del componente RNA de la cianobacteria Pseudanabaena sp. PCC 6903. Se ha colonado el gen codificante del componente proteico de la RNasa P de Synechocystis sp. PCC 6803. La proteína se ha purificado en Eschecrichia coli y se han producido anticuerpos contra la proteína purificada. Se ha caracterizado funcionalmente la RNasa P de Synechocystis. Hemos obtenido las condiciones óptimas para la actividad de la holoenzima y de la subunidad RNA. Hemos determinado que la secuencia CAA presente en los extremos 3' de los RNA transferentes no es importante para el reconocimiento de sustratos por la RNasa P de Synecho.#

Autor: GARCIA DOMINGUEZ MARIO.
Año: 1998.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: En el presente trabajo se han analizado los mecanismos de regulación de la actividad glutamina sintetasa (GS) en Synechocystis 6803. Se ha estudiado el posible papel de la proteína PII en la regulación de la actividad y en la regulación transcripcional del gen de la GS (glnA). Dicha proteína se modifica en función de las condiciones nitrogenadas por el estado de modificación no está implicado en la regulación de la GS a ningún nivel. La transcripción del gen de la proteína PII (glnB) depende del regulador NtcA y se induce fuertemente en condiciones de carencia de nitrógeno. Mediante copurificación con GS inactivada por amonio se han indentificado 2 proteínas de 7 y 17 kDa implicadas en la inactivación de la GS. Se han identificado también los genes que las codifican y mutantes de los mismos confirman el papel de las proteínas en la inactivación de la GS. Las proteínas expresadas en E. coli pueden inactivar in vitro GS purificada. Los genes que codifican ambas proteínas tienen una máxima expresión en presencia de amonio, mostrando un patrón contrario al del gen gInA. Dicha regulación está bajo el control del regulador transcripcional NtcA que al contrario de lo que ocurre en el caso de los genes glnA y glnB, en estos casos actúa como represor de la transcripción.#

Autor: AVILA PADILLA SERGIO.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FAC. DE FARMACIA, MEDICINA, VETERINARIA U. C.M..

Resumen: Los avances científicos realizados en los últimos años, han mejorado sensiblemente los problemas derivados de la litiasis urinaria. Algunos procesos patológicos que conducian a la formación de cálculos, tales como infecciones ó sedimentos úricos, actualmente han dejado de ser relevantes, gracias a la implantación de técnicas de diagnóstico precoz y a otras, tales como la litotricia. Además, el uso de antibióticos específicos, tambien ha permitido reducir sensiblemente el tamaño de los cálculos que hoy día requieren tratamiento. Por todo ello, el objetivo de esta Tesis Doctoral ha sido realizar un estudio sistemático de la evolución en el diagnóstico y tratamiento de la litiasis urinaria. De tal forma, que este trabajo puede aportar a urólogos y médicos de familia una guia para la rápida identificación de los cálculos renales por su aspecto, así como una completa tabla de espectros de radiación infrarroja de todas las posibles composiciones químicas incluidas la de las muestras ficticias más frecuentes. El conocimiento de la composición química es esencial para plantear el tratamiento, evitar recidivas y paliar muchas de las complicaciones derivadas de la litiasis.

Autor: CASTRILLON LOPEZ PATRICIA.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: EN LA ACTUALIDAD SE SABE QUE EL SISTEMA INMUNITARIO Y EL NEUROENDOCRINOLOCO ESTÁN INTIMAMENTE RELACIONADOS EN EL MANTENIMIENTO DE LA HOMEOSTASIS CORPORAL: ADEMÁS; AMBOS PRESENTAN RITMOS CIRCADIANOS EN SU FUNCION; QUE DEPENDEN DEL PARÁMETRO Y DE LOS TEJIDOS ANALIZADOS; Y QUE ESTÁN MODULADOS POR MULTITUD DE FACTORES, TANTO DE ORIGEN EXÓGENO COMO ENDÓGENO: PARA ESTUDIAR ESTAS INTERRELACIONES HEMOS UTILIZADO UN MODELO ANIMAL DE ARTRITIS ADYUVANTE, INYECTANDO ADYUVANTE COMPLETO DE FREUND A RATAS MACHO: ESTE TRATAMIENTO PRODUCE UNA HIPERACTIVACION DE LA FUNCION INMUNITARIA QUE ALTERA, EB FASE TEMPRANA, PARÁMETROS ENDOCRINOS COMO LA SECRECION DE ALGUNAS HORMONAS HIPOFISARIAS, E INMUNITARIOS COMO LA CAPACIDAD PROLIFERATIVA Y EL PORCENTAJE DE DISTINTAS SUBPOBLACIONES LINFOCITARIAS EN GANGLIOS LINFÁTICOS SUBAXILARES. UNA VES CARACTERIZADOS LOS PATRONES DIARIOS DE LOS DIFERENTES PARÁMETROS ANALIZADOS, Y LOS EFECTOS QUE LA INMUNIZACIÓN PRODUCE, ESTUDIAMOS COMO EL TRATAMIENTO PREVIO CON MELATONINA ES CAPAZ DE REVERTIR ALGUNOS DE LOS CAMBIOS PRODUCIDOS POR EL FREUND. DE TODOS LOS DATOS CONCLUIMOS QUE: EXISTEN PATRONES CICAANUALES DE ALGUNOS DE LOS PARÁMETROS ESTUDIADOS, CARACTERIZAMOS POR PRIMERA VEZ LOS PATRONES CIRCADIANOS DE DISTINTAS SUBPOBLACIONES LINFOCITARIAS EN RATAS MACHO DE LA CEPA WISTAR, Y QUE LA MELATONINA PODRÍA SER UN SINCRONIZADOS ÚTIL EN EL TRATAMIENTO DE LA ALTERACIONES EN FASE TEMPRANA PRODUCIDAS POR LA INYECCION DE ADYUVANTE COMPLETO DE FREUND.

Autor: SANTAMARIA RUIZ DE AZUA IÑIGO.
Año: 1998.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las cisteín-proteasas son una familia de enzimas involucradas en muchos procesos celulares normales, entre los que se incluye el recambio de proteínas intracelulares, la activación de precursores hormonales y la remodelación ósea. Además, se ha sugerido que estos enzimas proteolíticos juegan un importante papel en diversos procesos patológicos, como enfermedad de Alzheimar, enfisema pulmonar, artritis reumatoide e invasión tumoral y metástasis. Hasta el comienzo de este trabajo se habían descrito y caracterizado a nivel de secuencia aminoacídica, ocho cisteín-proteasas humanas pertenecientes a la superfamilia de la papaína:catepsina B,catepsina L, catepsina H, catepsina S, catepsina C,catepsina O, catepsina K y catepsina W. Dado que parece claro que el grupo de las cisteín-proteasas juega papeles fundamentales tanto en procesos normales como patológios, incluyendo procesos tumorales, en este trabajo nos dispusimos a examinar la posibilidad de que existan nuevos miembros sin caracterizar de esta familia de enzimas proteolíticos producidos por tejidos tumorales humanos. Mediante el uso de una novedosa estrategia, hemos podido identificar y caracterizar funcionalmente tres nuevas cisteín-proteasas humanas: catepsina L2, catepsina Z y catepsina F, así como caracterizar la estructura génica de la catepsina O, una cisteín-proteasa aislada a partir de un carcinoma humano, que se localiza en 4q31-32. Todas ellas son proteasas activas de la familia de la papaína, con características diferenciales entre ellas. Así, la catepsina L2, que guarda una identidad de secuencia del 80% con la catepsina L, pertenece al grupo de cisteín-proteasas de expresión restringida en el organismo, expresándose, unicamente, en tipo y testículo, donde se le supone una función específica. Su expresión aberrante forma parte del fenotipo tumoral de carcinomas diversos, pero muy especialmente de los de colon y mama. La catepsina Z, con una región propeptídica inusualmente corta, posee una expresión ubicua en el organismo, pero se encuentra sobreexpresada en un número significativo de tumores, especialmente de origen pancreático; esta sobreexpresión se ha relacionado con su participación como gen diana de amplicon ubicado en 20q13.3. Además, la catepsina Z es la única proteina que se conoce capaz de unirse específicamente al receptor de distribución ERGIC-53, cuyas mutaciones producen la enfermedad de la deficiencia combinada de los factores V y VIII. Finalmente, la catepsina F, de expresión ubicua y sobreexpresión en carcinomas de cérvix, presenta una prorregión muy larga cuya función todavía se desconoce, pero que estaría asociada con el correcto plegamiento de la proteína y su localización subcelular. No se descarta su participación en el amplicón 11q13, implicado en carcinomas de cabeza y cuello.

Autor: ALONSO GONZALEZ VIOLETA CECILIA.
Año: 1998.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: En la presente tesis doctoral se utiliza la técnica RAPD(Random Amplified polimorphic DNA), con diferentes finalidades. Se usa para caracterizar diferentes especies del género Leishmania obteniéndose un patrón de amplicación característico para cada una de ellas el cual permite su identificación. Los fragmentos obtenidos tras la amplificación son analizados para conocer su naturaleza obteniéndose que ninguno de los analizados se encuentra repetido en el genoma y que los fragmentos que amplifican se encuentran favorecidos para ello. Los fragmentos amplificados se utilizan también para el diseño de cebadores específicos para la identificación de L. Braziliensis desde cultivo y desde muestras biológicas como sangre, etc. Dos de los fragmentos amplificados denominados Lb26 y Lb30 se utilizan como sondas para la realización de una búsqueda en una genoteca de cDNA de la que se obtuvieron diversos clones. De estos clones fueron secuenciados y caracterizados dos de ellos, codificantes para la proteína ribosomal L-14 y para una histona H1 de L. Braziliensis. El gen que codifica para la histona H1 es de copia única y se transcribe en un solo ARNm.

Autor: PALUMBO ANGELA.
Año: 1998.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Esta Tesis propone la caracterización, localización y función del sistema renina-angiotensina en el ovario, así como identificar la apoptosis en el ovario en los distintos compartimentos y en varias condiciones fisiológicas y patológicas. Para conseguir estos objetivos se realizaron los siguientes estudios: 1. Inmunohistoquímica con anticuerpos anti-renina y anti-angiotensina II en ovarios de rata y humanos, normales y poliquísticos. 2. Cultivos de células de la granulosa luteínica humanas estimuladas con AngII y cuantificación por radioinmunoensayo de las hormonas esteroideas en el medio de cultivo. 3. Inhibición de la ovulación y maduración ovocitaria mediante saralasina, inhibidor receptorial de la AngII, en ratas inmaduras estimuladas con gonodatrofinas. 4. Identificación de la apoptosis mediante extracción y análisis electroforético del DNA y mediante marcaje in situ en la atresia folicular y en el cuerpo luteo. 5. Estudio de la apoptosis en un modelo de rata con ovarios policísticos. El resultado de estos estudios han demostrado que el ovario posee un sistema renina-angiotensina intrínseco, controlado por las gonodotrofinas hipofisarias. La angiotensina II explica varias acciones autocrinas y paracrinas en el ovario y puede regular la esteroidogénesis ovárica tanto a nivel de los folículos como a nivel del cuerpo lúteo, sugiriendo un papel de la Angiotensina II en los procesos que conducen a la maduración de los ovocitos. Por otra parte, se ha demostrado que la apoptosis es el mecanismos básico de la atresia folicular, así como en la formación y regresión del cuerpo lúteo.

Autor: PERDOMO HERNANDEZ GERMAN MANUEL .
Año: 1998.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Esta Tesis estudia la regulación de las enzimas nitrato y nitrito reductasa en la levadura H. Polymorpha. Utilizando vectores de expresión no regulables por la fuente nitrogenada y fusiones de regiones 5´no codificantes de los genes nitrato reductasa(YNR1) y nitrito reductasa(YNI1), fusionadas al gen reportero lacZ, se concluye que la regulación de la nitrato reductasa es fundamentalmente a nivel de la transcripción y que las fuentes de nitrógeno reducidas no poseen efecto postranscripcional sobre el ARNm,proteína o actividad nitrato reductosa. Sin embargo, existe una inactivación de la proteína en ausencia de fuente de carbono. La nitrito reductasa, también se regula fundamentalmente, a nivel de la transcripción. Además se ha realizado la expresión heteróloga del gen nia2, que codifica la nitrato reductosa de N.tabacum bajo el control de tres promotores diferentes, en una cepa de H. Plymorpha mutante para el gen YNR1. Para ello, se construyó un nuevo vector de expresión con las secuencias promotra y terminadora del gen YNR1, obteniéndose un nivel de expresión similar a una cepa silvestre, cuando se expresa el gen nia2 bajo el control del promotor del gen YNR1 de H. Polymorpha.

Autor: PENA SUBIRA RAMONA NATACHA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: VETERINARIA .
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Autor: SAULEDA OLIVERAS SILVIA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FAC. BIOLOGIA, UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: INTRODUCCION:En 1995 se identificó en el suero de pacientes con hepatitis no A-no E un nuevo agente viral que fue denominado como GBV-c o HGV. El virus G(GBV-C/HGV) es un virus RNA, de cadena sencilla positiva, que pertenece a la familia de los flavivirus y que tiene una organización molecular similar a la del virus de la hepatitis C(HCV). OBJETIVOS: Estudiar la dinámica de la infección por el GBV-C/HGV e interpretar los diferentes patrones de sus marcadores serólogicos(RNA y anticuerpos E2); conocer la prevalencia en nuestra población general y en grupos de riesgo de exposición parenteral; determinar prospectivamente la incidencia de transmisión transfusional de GBV-C/HGV y establecer su impacto socio-sanitario. MATERIAL Y METODOS: Se incluyeron 2210 donantes de sangre consecutivos, 8 receptores de sangre GBV-C/HGV RNA positiva, 150 pacientes con marcadores de exposición a VHC que abarcaban todo el espectro clinico-patologico de la hepatitis C, 42 enfermos con hepatitis aguda postransfusional y 32 pacientes con inmunodeficiencias primarias. Se realizaron determinaciones cualitativa y cuantitativa del RNA del GBV-C/HGV por RT/PCR y RT/PCR en tiempo real, y de anticuerpos E2 por ELISA. RESULTADOS: El 16,6% de los donantes de sangre fueron positivos para algun marcador de exposición a GVB-C/HGV. La media de edad de los individuos anti-E2 positivos fue significativamente mayor que la de aquellos con infeccion activa. La prevalencia de GVB-C/HGV en pacientes VHC positivos fue cercana al 50% sin diferencias entre los que tenian antecedente transfusional y los que no referian ningún factor de riesgo parenteral conocido. El porcentaje de exposición a GVB-C/HGV modificara la historia natural de la hepatitis C ni la respuesta a tratamiento antiviral con interferón. La prevalencia de infección activa por GVB-C/HGV en el grupo de hepatitis agudas postransfusionales tanto por VHC como no A-no E fue de sólo del 15%. El seguimiento prospectivo de los receptores de sangre GVB-C/HGV RNA positiva mostró que la presencia de anticuerpos anti-E2 previos a la inmunodeficiencia primaria fueron portadores de infección activa, porcentaje significativamente mayor que en donantes de sangre. Ninguno de los sujetos con infeccion activa aislada por GVB-C/HGV mostró alteracciones de las pruebas de función hepática. CONCLUSIONES. La infección por GVB-C/HGV es frecuente en nuestro medio y está fuertemente asociada a los factores de riesgo parenteral. El virus puede producir infección aguda transitoria o persistente de larga duración, aunque esta no se asocia a ningun sintoma o alteracion bioquimica sugerente de enfermedad hepática y la tendencia es la resolución espontánea de la infección con el tiempo. La coinfección GVB-C/HGV con HCV no modifica la historia natural de ésta ultima ni su respuesta a tratamiento con interferón. Con estos datos se puede afirmar que en nuestro medio no se justifica el tamizaje para virus GVB-C/HGV entre los donantes de sangre.

Autor: FERRAGUT MAS RAFEL ANGEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Se han desarrollado y optimizado sistemas para la detección de anticuerpos anti-nucleares mediante inmunoensayos en fase sólida de tipo ELISA. Se ha desarrollado un ELISA para la detección y cuantificación de anticuerpos anti-DNA bicatenario (dsDNA) usando DNA plasmídico como substrato antigénico. Se han optimizado las condiciones de sensibilización de las microplacas y de ejecucción del ensayo, mediante estrategia univariante. Se ha evidenciado la importancia de la fuerza iónica del enzimoinmuno ensayo sobre su eficacia diagnóstica, siendo mucho más específica y sensible para el diagnósitco de lupus eritematosos sistémico la cuantificación de anticuerpos de elevada avidez en condiciones de elevada fuerza iónica. Se ha puesto de manifiesto la utilidad restringida del standard internacional anti-dsDNA WO-80 de la OMS solo como calibrador para ensayos realizados en condiciones de elevada fuerza iónica y para la cuantificación exclusiva de anticuerpos anti-dsDNA de elevada avidez. El ELOSA desarrollado presenta, respecto a la inmunofluorescencia indirecta sobre Crithidia Lucilae, valores de sensibilidad y especificidad diagnóstica del 95,4 y 87% respectivamente. Considerando un valor discriminante de 45 UI/mL. Se ha desarrollado un ELISA cualitativo para la detección de anticuerpos dirigidos contra las proteínas Sm, U1-RNP, Scl-70, Juo-1, SS-A y SS-B del extracto nuclear soluble (ENA), utilizando como substrato antigénico una mezcla de péptidos nativos y recombinantes. Las condiciones de sensibilización de las microplacas se han optimizado mediante estrategia multivariante, con un diseño experimental factorial de composición central y utilizando la metodología de las superficies de respuesta para la toma de decisiones sobre las condiciones óptimas de sensibilización. El ELISA desarrollado permite determinar la presencia de anticuerpos dirigidos contra cualquiera de los antígenos descritos con una sensibilidad y especificidad diagnósticas superiores al 74,7 y 93,1% respectivamente, considerando un valor discriminante de 20 UA/mL-

Autor: ESPINOSA RUIZ ANA.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: I.B.M. Y C.P..

Resumen: HAL3 es un gen de la levadura Saccharomyces cerevisiae que codifica un subunidad inhibidora de la proteina fostasa PPZ1. Mediante su interacción con esta proteina regular importantes procesos en la vida de la célula, como son la homeostasis iónica, el ciclo celular y la integridad de la pared celular. El trabajo descrito en la tesis doctoral es la búsqueda de genes homólogos a HAL3 en la planta modelo. Arabidiopsis thaliana. Se han clonado dos genes de Arabidopsis thaliana, AtHAL3a y AtHAL3b, con elevada homologia de secuncia con HAL3. AtHAL3a y AtHAL3b se expresan en todos los órganos d ela planta. AtHAL3a presenta mayor expresión en flores, silicuas y semillas. AtHAL3b presenta un nivel basal de expresión menor, y su ARN mensajero no se acumula en semillas. Ambos genes respodnen a la presencia de NaCI en el miedo incrementando su expresión, pero no a la hormona ácido abscísico. AtHAL3 se expresa en embriones y tejido vascular de planta adulta. AtHAL3 se complementa parcialmente la ausencia de HAL3 en la elevadura Saccharomyces cerevisiae, restaurando la tolerancia a sal de una cepa de levadura deficiente el HAL3. AtHAL3a une una molecula de FMN por mólecula de proteína, es por lo tanto una flavoproteína. La presencia de este cofactor posibilita una acitividad o regulación redoz el enzima. Las plantas transgénicas que sobrexpresan ATHAL3a presentan un crecimiento más rápido y tolerancia a NaCI in vitro. Las plantas con silenciamiento del gen endógeno mediante la técnica antaisentido muestran un fenotipo de crecimiento lento.

Autor: GIL-MASCARELL REVERT M. ROSARIO.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: I.B.M Y C.P..

Resumen: La salinización de los suelos de cultivo es uno de los problemas más antiguos en la agricultura. La salinidad influye negativamente en la producción agrícola y a que la sal es tóxica para el crecimiento de las plantas. Hay pocos paises que utilicen el regadío que no estén afectados por la salinización. Para abordar este problema debemos conocer las bases moleculares de la toxicidad salina. Para ello, en nuestro laboratorio hemos utilizado la levadura Saccharomyces cerevisiae como sistema modelo. Este organismo es adecuado para el estudio de procesos celulares en plantas ya que las plantas y los hongos poseen unos sitemas de homeostasis de iones en sus membranas muy similares. Una estrategia que se ha utilizado en el labortatorio para encontrar genes relacionados con la tolerancia sal, fue la de aislar genes de levadura que por sobreexpresión confieran tolerancia a sal. Los genes aislados por esta estrategia se denominaron genes HAL. Se conoce bastante bien el mecanismo de toxicidad de sodio para uno de estos genes, el gen HAL2. La paroteina codificada por este gen es una diana especifica de la toxicidad del sodio en Saccharomyces cervisiae. En este trabajo se ha cristalizado hal2p y se ha profundizado en su caracterización bioquímica. Basándonos en los conocimientos que tenemos de Hal2p en levadura y pensando que es importante para entender la toxicidad salina en plantas se encontró por medio de una búsqueda en las bases de datos de cDNA de Arabidopsis thaliana parcialmente secunciados, un gen como homologia de secuencia con HAL2. Este gen ha sido denomiado AHL. Se ha demostrado que AHL complementa la interrupción del gen de levadura. Se ha purificado su proteina y esta muestra la misma actividad catalitica que Hal2p. Además, AHL también se inhibida in vitro fuertemente por iones Na+. Estos datos sugieren que AHL puediera ser una diana de la toxicidad del sodio en plantas.

Autor: LÓPEZ CORONADO JOSE MIGUEL.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: E.T.S.I. AGRONOMOS.

Resumen: En este trabajo se han conseguido aislar, mediante una estrategia de complementación de una cepa de la levadura modelo Saccharomyces cervisiae, que presenta una interrupción al gen HAL2 con el marcador LEU2, dos genes pertenecientes a la crucífera Arabidopsis tahliana y un gen de Rattus norvegicus, que son capaces de complementar la auxotofia de metionina presentada por la cepa de levadura empleada en el ensayo. De los genes de A. Thaliana, uno (AtASALI) ya había sido descrito en el bibliografía, el otro (AtSAL2), y el Rattus norvegicus (RnPIP) no estaban descritos. Caracterizamos molecularmente estos nuevos genes, mediante el empleo de análisis "Northern" y "southern", asímismo, caracterizamos las proteínas que codificaban, mediante la determinación de su especificidad de sustrato, Km para los distintos sustratos, y sensibilidad a cationes (Na+, Li+ y Ca+). Como resultado del presente trabajo, se pudo ampliar el conocimiento de la denominada Familia de fosfatasas de pendientes de Mg2+ y sensibles a cationes, y adescrita en la bibliografía, con la asignación de la proteína AtSAL2 al grupo de las PAP fosfatasas de esta familia, y RnPIP a un nuevo grupo de la que esta proteina es al primera descrita de una serie de proteinas de secuencias altamente conservadas en todos los organismos animales estudiados.

Autor: VICENTE COLOMER M. JOSÉ.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS .
Centro de realización: ETSIA.

Resumen: La acremoniosis del melón es una de las enfermedades más importantes de este cultivo en España, cuyo agente causal, durante más de una década, fue identificado como Acremonium sp. Por no ser clara suposición taxómica. En esta tesis doctoral se planteó la aplicación de diversas técnicas moleculares y genéticas en la búsqueda de marcadores genéticos que pudieran proporcionar mayor información acerca de la situación taxonómica y variación genética de los aislados de Acremonium sp. En relación a las especies del género Acremonium morfológicamente más similares. A partir del estudio de la compatibilidad vegetativa mediante la utilización de mutantes auxótrofos de la ruta del nitrato, el análisis del polimorfismo del ADN mitocondrial mediante RFLPs hibridación Southern y el análisis del polimorfismo del ADN total mediante su amplificación al azar por reacción en cadena de la polimerasa (RAPDs), se han encontrado evidencia a nivel genético que confirman la reciente identificación de estos aislados como una nueva especie denomiada Acremonium cucurbitacearum.

Autor: ZAPICO FERNANDEZ ERNESTO JAVIER.
Año: 1998.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DPTO. MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA(UNIV. ALCALA).

Resumen: La lignina es un polimero tridimensional amorfo que presenta un serio escollo desde el punto de vista tecnológico en la fabricación de papel. Una amplia gama de hongos basidiomicetos han sido estudiados con vista a obtener enzímas que puedan degradar en forma selectiva este bipolímero. El hongo Coriollopsis gallica ha sido objeto de una serie de investigaciones con el fin de determinar su potencialidad como agente deslignificante. Se ha encontrado que C. Gallica excreta lacasa, se ha clonado, secuenciado y obtenido el correspondiente ADNc de un gen para la casa. Se han realizado los estudios correspondientes a la regulación de la transcripción de este gen, encontrandose que responde a fuente de carbono y a compuestos flavínicos. Una vez estudiados los mecanismos de regulación de la transcripción se han llevado a cabo experimentos con efluentes industriales, producidos en el proceso de obtención de pulpa de papel, obteniéndose excelentes resultados en terminos de porcentaje de decoloración de los efluentes tratados con este hongo, correlacionándose la perdida de color con la actividad lacasa extracelular. Se han realizado las aproximaciones moleculares en lo que respecta a expresión de proteinas recombinantes en un hongo filamentoso,por otra parte se han iniciado los trabajos que permitan en un futuro cercano disponer de un sistema de expresión homóloga.