BIOQUIMICA MOLECULAR, 44

Autor: ANTON GARCIA ANA ISABEL.
Año: 1998.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Los genes ribosomicos han sido extensamente utilizados para establecer relaciones filogeneticas entre organismos. Sin embargo, existen muy pocos estudios de comparacion de genes ribosomicos entre miembros de una especie con el proposito de conocer el modo de evaluacion de estas secuencias. Esta tesis doctoral contribuye al conocimiento de la evolucion del operon ribosomico, mediante la secuenciacion de los genes rRNA 16S y 23S y de sus regiones espaciadoras intergenicas en varios operones y cepas de Escherichia coli. Los operones ribosomicos fueron amplificados mediante el diseño de cebadores especificos para cada locus ribosomico y los productos de PCR fueron secuenciados. El analisis de secuencias determino la diversidad de secuencia en los operones ribosomicos y la localizacion de regiones variables en los genes rRNA, que coinciden con helices de estructura secundaria, en las que se han encontrado varias secuencias diferentes y que en todos los casos, conservan el apaeramiento de bases suficiente para mantener la estructura secundaria de la region variable. Ademas, se ha analizado la presencia de secuencias altamente variables del operon rrn en todas las cepas de la colección ECOR, estableciendo la distribucion de dicha diversidad de secuencia en una poblacion natural de cepas de E.coli. Los datos obtenidos tambien se han aplicado a una poblacion de cepas uropatogenas de E.coli observandose una asociacion entre grupos intraespecificos de estas ceps y ciertas secuencias variables del operon rrn. Finalmente, esta tesis aporta datos sobre los posibles mecanismos de evolucion molecular, a partir de los fenomenos moleculares observados entre cepas de divergencia relativamente reciente.

Autor: TUCA RODRÍGUEZ ALEJANDRO .
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.

Resumen: Se ha demostrado que las metodologías que se han puesto a punto permiten cuantificar el contenido nuclear de T3 y el número de receptores de T3 en muestras de tejido adiposo marrón. En ratas adultas, las exposición aguda al frío no modifica el contenido nuclear de T3 en tejido adiposo marrón, mientras que la exposición crónica al frio provoca un aumento en la concentración nuclear contraste, el hipotiroidismo estricto provoca un descenso del 50% en el contenido de T3 en los núcleos de tejido adipo marrón. Este ahorro de T3 viene acompañado de una reducción en el número de receptores, manteniéndose un grado de ocupación similar al de los controles. En general, se deduce que el tejido adiposo marrón mantiene la capacidad de regular su estado tiroïdeo en la vida adulta, en respuesta a cambios fisiológicos (adaptación crónica al frio) o patológicos (hipotiroïdismo). En lo que respecta al desarrollo del tejido adiposo marrón, todos los perfiles ontogénicos estudiados demuestran que dicho tejido alcanza la capacidad potencial para responder a hormonas tiroïdeas a dia 20 de vida fetal, anticipandose a otros tejidos como hígado, corazón, cerebro o hipófisis. Los estudios realizados sugieren que las hormonas tiroïdeas pueden estar involucradas en el establecimiento del fenotipo diferenciado de les células del tejido adiposo marrón durante la vida fetal.

Autor: PÉREZ PÉREZ VIRGILI.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Autor: CAUDEVILLA ASENSIO CONCHA.
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: La carnitina octanoiltransferasa (COT) es la enzima responsable de la exportación de aciles-CoA del peroxisoma al citoplasma, ejerciendo así un papel importante en la regulación de la oxidación peroxisomal de ácidos grasos. El gen COT en rata es de copia única sin embargo da lugar a la formación de tres transcritos maduros. El procesamiento de los pre-mRNAs de COT tiene lugar, de forma natural, por cis y por trans-splicing. El transcrito más ligero se produce por cis-splicing y presenta la organización exónica ya descrita. Los otros dos transcritos de mayor tamaño son producto de una reacción de trans-splicing y contienen, respectivamente, el exón 2 y los exones 2 y 3 repetidos. Esto permite la posible formación de nuevas proteinas COT. El procesamiento de los pre-mRNAs de COT de rata por trans-splicing puede ser explicado por la presencia de secuencias exónicas (cajas ESE) en el exón 2 que le convierten en un buen dador de splicing in vivo e in vitro. Este proceso de trans-splicing observado en la rata no ha sido detectado en otros mamíferos analizados. La causa de este hecho radica en la secuencia de nucleótidos de una de las cajas ESE conservada en todas las especies analizadas a excepción de la rata. Estudios de microinyección de pre-mRNAs truncados en núcleo de células en cultivo, demuestran la capacidad del exón 2 de COT para dar trans-splicing con otros genes distintos de la COT permitiendo así la generación de nuevas proteínas.

Autor: MEDINA CARMONA JOSE ANTONIO.
Año: 1998.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El cáncer microcítico de pulmón, ha sido tratado en nuestra área sanitaria con esquemas secuenciales. Datos de la literatura apoyan el hecho de que la administración de quimiorapia y radioterapia conjunta, aumentan el porcentaje de respuestas completas y por lo tanto de la supervivencia global. En enero de 1993 se diseño un protocolo terapeutico, que integra en el tiempo la administración de quimioterapia, con esquema cisplatino y etopósido, junto a la radioterapia. En este protocolo se han incluido 55 pacientes, diagnósticados de cáncer microcítico de p- con enfermedad limitada al tórax. Los resultados obtenidos, muestran unas respuestas globales del 95% , con un 66% de respuestas complettas. Estos datos reflejan una clara ventaja, en cuanto a la obtención de respuestas completas, frente al esquema clásico secuencial, que muestra porcentaje de respuestas completas del 22%. El precio que habia que pagar por alcanzar este por centaje de respuestas, ha sido un incremento en la toxicidad hematologica y esofágica.

Autor: GRACIA GARCIA SILVIA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El conocimiento y caracterización de las distintas fuentes de variabilidad biologica es importante para profundizar en el conocimiento del valor semiologico de las magnitudes determinadas en el laboratorio clinico. Los objetivos de esta tesis han sido la detección y caracterización de la variabilidad biológica debida a ritmos circadianos de 1440 minutos y de 720 minutos de periodo, y la cuantificación de la variabilidad biologica aleatoria intradiaria de un grupo de 29 magnitudes. Para elo se han realizado 6 extracciones sanguineas a intervalos regulares de 4 horas durante 24 horas a un grupo de 25 individuos presuntamente sanos (12 mujeres y 13 hombres, 24-42 años). A partir de los resultados obtenidos en cada individuo se ha calculado la variabilidad biologica aleatoria expresada como coeficiente de varriaciion biologico. Para el estudio de los ritmos biológicos se ha utilizado el metodo del cosinor y el analisis de Fourier. Los resultados del estudio de la variabilidad biologica aleatoria intraindividual han sido muy heterogeneos y la mediana del coeficiente de variacion biologico intraindividual ha oscilado entre el 0% y el 50%. Se ha detectado la presencia de ritmos de 1440 minutos de periodo en la concentración de leucocitos, neutrofilos, linfocitos, plaquetas, protrombina, activador tisular del plasminogeno, inmunoglobulinas A y M, componentes C4 y B del complemento, transferrina y hierro. Se ha detectado un ritmo de 720 minutos de periodo en la concentracion de inhibidor 1 del activador tisular del plasminogeno. Se ha detectado una funcion ritmica de 1440 minutos y 720 minutos de periodo en la concentracion de eritrocitos, de hemoglobina, la determinacion conjunta de eosinofilos, basofilos y monocitos, la fracción del volumen de los eritrocitos, el "tiempo de tromboplatina parcial activada", la antiplasmina y la concentracion de inmunoglobulina G y componente C3 del complemento. No se ha detectado ningún tipo de ritmo en el resto de magnitudes estudiadas.

Autor: COLELL RIERA ANA.
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA, UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: El consumo crónico de alcohol se correlaciona íntimamente con el desarrollo de una lesión hepática. A pesar de la gran cantidad de estudios realizados, los mecanismos responsables del desencadenamiento y progreso de la hepatopatía alcohólica no están aún del todo caracterizados. La oxidación del etanol en el hepatocito da lugar un estrés oxidativo y una lipoperoxidación celular. Paralelamente, y como resultado del metabolismo del etanol, se producen importantes alteraciones en la mitocondria que pueden contribuir a incrementar este estrés oxidativo, llegando a comprometer la viabilidad celular. Puesto que el glutation mitocondrial (GSHm) es la única defensa frente a esta producción de radicales libres (ROS), la limitación de los niveles de GSHm podría tener consecuencias adversas en el mantenimiento de la viabilidad celular. Estudios previos realizados en modelos animales de intoxicación crónica de etanol, mostraban una disminución selectiva del GSHm, sin que se produjera ninguna alteración en los niveles citosólicos. Esta disminución precedía tanto la disfuncionalidad mitocondrial como la lesión hepática. Al analizar el GSHm en situaciones de producción de estrés oxidativo, observamos que jugaba un papel fundamental en el mantenimiento de la funcionalidad mitocondrial, al controlar la disponibilidad de ROS, en concreto peróxido de hidrógeno, generados desde el complejo III de la cadena respiratoria. Asimismo, la limitación del GSHm, favorecía la activación de factores de transcripción como el NF-kB, por tanto, a través del control del entorno oxidativo celular, el GSHm intervenía en la regulación de genes nucleares. Estudios previos mostraban que la disminución del glutation mitocondrial inducida por el alcohol era resultado de un defecto en el transporte desde el citosol a la matriz mitocondrial. Los estudios cinéticos del transporte de glutation mitocondrial revelaron la existencia de dos componentes, de alta y baja afinidad para el GSH. El consumo crónico de etanol afectaba a ambos. A su vez, observamos que cambios en las propiedades transportador de GSH. Así, el incremento del parámetro de ordenamiento de membrana inducido por el etanol, provocaba una disminución en la velocidad de transporte inicial de GSH. La administración de S-adenosil-metionina (SAM) recuperaba los niveles de GSHm através del mantenimiento de una apropiada fluidez de membrana. El factor de necrosis tumoral (TNF) juega un papel crítico en el desencadenamiento de la enfermedad hepática alcohólica. Estudios recientes mostraban como el TNF ejercía sus efectos citotóxicos a través de la generación de ROS desde la mitocondria. Aunque el mecanismo de señalización no está del todo caracterizado, existen evidencias que involucran al metabolismo de los esfingolípidos y en concreto, a las ceramidas, en este proceso. Al estudiar el efecto de ceramidas en la mitocondria, observamos que provocaban un incremento en la generación de ROS a nivel del complejo III y la disminución de los niveles de GSHm acentuaba su efecto, detectándose un mayor grado de peroxidación lipídica y disfunción mitocondrial. Al investigar el papel del GSHm en la susceptibilidad de los hepatocitos alcohólicos frente al TNF, descubrimos que el GSHm era un factor crítico en el control de la viabilidad celular, puesto que la disminución de sus niveles inducida por el etanol sensibilizaba a los hepatocitos frente a al TNF, amplificando la producción de ROS inducida por el TNF. La recuperación de los niveles de GSHm por administración de SAM prevenía esta mayor susceptibilidad.

Autor: BECERRA FERNÁNDEZ MANUEL.
Año: 1998.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La hidrólisis enzimática de la lactosa constituye la base de los procesos biotecnológicos más prometedores que están siendo desarrollados actualmente para aprovechar el azúcar del suero de leche. La mayor limitación al desarrollo de estos procesos deriva de los elevados costos asociados a la extracción de la beta-galactosidasa de levaduras por se intracelular. Se intentó una reducción del costo de la preparación enzimática mediante diferentes estrategias: la primera de ellas consistió en el desarrollo de cultivos en fase sólida, consiguiendo una mejora de un 152% en el rendimiento de producción de dicha enzima en relación con los cultivos líquidos; la segunda estrategia fue el desarrollo de un sistema recombiante que promovía la secrección de la beta-galactosidasa de Kluyveromyces lactis, hasta un 50%, a través de modificaciones genéticas, paralelamente se utilizaron mutantes de Saccharomyces cerevisiae que lisan a temperaturas no permisivas, obteniendo un porcentaje de liberación enzimática al medio de cultivo de un 93-83%, y mutantes super-secretores que mantuvieron los porcentajes de secreción en torno al 10% durante más de 100 horas. Mediante ingeniería genética se indujo la capacidad de crecimiento en lactosa cepas de S. Cerevisiae como alternativa para el tratamiento del lactosuero.

Autor: CADAHÍA RODRÍGUEZ JOSÉ LUIS.
Año: 1998.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: CIENCIAS .

Resumen: Esta memoria recoge el análisis de la regulación transcripcional de 100 ORFs situadas en el cromosoma IV de S.cerevisiae. Este trabajo se engloba en el consorcio B2 del proyecto europeo EUROFAN: "Análisis de los niveles de RNA". La mayoría de las ORFs analizadas son de función desconocida, todas ellas se expresan, a excepción de una, que permanece en la categoría de ORF "in silico". Los niveles absolutos de expresión indican que un 6% de las ORFs son de alta expresión, un 29% de media y un 40% de baja expresión. El 42% de las ORFs resultaron ser constitutivas y, el resto, presentan distintos tipos de regulación (glucosa, nitrógeno, choque térmico, choque osmótico), siendo la mayoría reguladas por fuente de carbono y sólo un 18% presentó respuesta a distintos tipos de regulación. Los análisis "in situ" lico de los promotores indicaron que este tipo de análisis puede ser de gran utilidad combinados con estudios de análisis funcional, pero no por si solos. En este trabajo también se han detectado tres ORFs que responden al regulador Rox1 y una que responde al regulador Hap1.

Autor: ACEVEDO GASMAN M. FRANCISCA.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA COD. 210 PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL COD. 021001.

Resumen: Se han completado los clones cDNA que codifican sacarosa sintasa de tipos I y II en trigo. Se ha estudiado la distribución de las subunidades SS1 y SS2 en diferentes tejidos de trigo, como también en centeno, avena, arroz y maíz. Se han optimizado los parámetros físicos y biológicos para la expresión transitoria de DNA, mediada por bombardeo de microproyectiles, en endospermo en desarrollo de cebada, para la evaluación funcional de promotores en este tejido. Estos parámetros han sido útiles además en endospermo en desarrollo de trigo. Se ha secuenciado el gen que codifica sacarosa sintasa de tipo II de cebada, y este se compone de 15 exones y 14 intrones. Se han caracterizado el promotor, primer exón y primer intrón de los genes Ss1 y Ss2 que codifican sacarosa sintasa en cebada. Se han identificado elementos que pudiesen estar involucrados en regulación de expresión.

Autor: ACIN SAINZ ALBERTO.
Año: 1997.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA INTERNA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR.

Resumen: El gen humano que codifica la proteína intercambiadora de aniones 2 (AE2) posee 23 exones y 22 intrones con una longitud total de 18 kb aproximadamente. El tamaño de los exones oscila entre las 90 pb del exón 18 y las 255 pb del exón 17, mientras que el de los intrones varía entre las 80 pb del intrón 4 y las 2161 pb del intrón 1. Experimentos de "primer extension" y RACE 5' sugieren que el gen posee múltiples sitios de inicio de transcripción. El extremo 5' del gen contiene la potencial región promotora, en la que se pueden observar numerosas secuencias consenso reguladoras de la transcripción. Entre ellas se encuentran varias cajas GC, E, y CACC, así como un CRE. Sin embargo, no se observa caja TATA o iniciador.

Autor: AGUDO BARRIUSO MARTA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El centrómero juega un papel esencial en el reparto de los cromosomas en la división celular, sin embargo, es uno de los componentes genómicos más dificiles de analizar en eucariotas superiores debido a que se encuentra inmerso entre grandes bloques de secuencias mediana y altamente repetidas. El propósito de este trabajo ha sido el clonaje y caracterización de las secuencias del centrómero (región h17-18) del cromosoma Y de Drosophila melanogaster. Datos previos demostraron que existe un acúmulo del retrotransposón telomérico TART en la región h16 y de HeT-A en h19, así, tomando estas secuencias como punto de partida para adentrarnos en la región h17-18 rastreamos una genoteca en YACs con sondas de ambos retrotransposones y aislamos 12 clones. El siguiente paso fue localizar en el genoma los clones positivos utilizando FISH a cromosomas metafísicos, de esta manera asignamos 9 clones a regiones heterocromáticas concretas. De todos ellos, el YAC yw6F11 era el más interesante puesto que procedía de la región h18. El análisis molecular de este clon determinó que en él existía un tándem formado por las regiones 3'UTR de HeT-A y TART, que fue llamado satélite CHT (Centromeric HeT-A and TART satellite). El estudio de este clon nos permitió realizar un mapa físico de la región centromérica del cromosoma. Las secuencias presentes en esta región sugieren que este centrómero deriva de un telómero.

Autor: ALABADI DIEGO DAVID.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: Se ha estudiado la regulación del metabolismo de poliaminas (PAs) en ovarios no polinizados de guisante y de tomate y en frutos jóvenes. Se ha mostrado que, al igual que en guisante, existe una correlación entre un nivel alto de espermina y la presenescencia de los ovarios de tomate, y un nivel bajo y el desarrollo del fruto inducido por auxinas y giberelinas. Además, se ha mostrado la presencia de la actividad arginasa en ovarios de tomate, y su actividad se regula dirigiendo el metabolismo de nitrogeno hacia la síntesis de Arg. durante el desarrollo del fruto. Se ha visto que las actividades espermidina sintasa y espermina sintasa están presentes en ovarios y frutos jóvenes de guisante, y son responsables del aumento de la cantidad total de ambas PAs tras la inducción de la fructificación por tratamiento con giberelinas. Hemos aislado un cDNA de la ODC de tomate, y dos cDNAs de espermidina sintasa de guisante y uno de tomate. Los estudios de expresión muestran incrementos transitorios en el nivel de mRNA de los genes de enzimas de biosíntesis de PAs, a excepción del de la espermidina sintasa 2 de guisante, durante el desarrollo temprano del fruto en guisante y en tomate.

Autor: ALDUDO SOTO JESUS.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: DPTO. BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: Hemos encontrado 3 nuevas mutaciones en el gen PS-1 en pacientes con la enfermedad de Alzheimer presenil: M233L, L282R y A409T y la primera mutación en el promotor del gen PS-1:-280C-G. La mutación E318G parece una variante poco frecuente del gen y no es patogénica. La contribución genética de las mutaciones PS-1 a la enfermedad de Alzheimer presenil en la población española es del 5%. Existe una asociación entre el alelo 2 del polimorfismo del intrón 9 del gen PS-1 y la enfermedad de Alzheimer senil y no existe asociación con 2 polimorfismos de la región 5' no traducida del gen. La mutación -280C-G está en una zona de regulación específica de tejido al mostrar diferencias en la actividad transcripcional en células de neuroblastoma y astrocitoma y en la interacción con factores nucleares específicos. El factor de transcripción AP-2 estimula la actividad transcripcional del promotor PS-1 aunque no es el responsable de las variaciones transcripcionales producidas por la mutación -280C-G.

Autor: ALMEYDA ARTIGAS ROBERTO JAVIER.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PARASITOLOGIA I BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: 021A PARASITOLOGIA HUMANA Y ANIMAL.

Resumen: Los objetivos del presente estudio fueron los de caracterizar parcialmente el ADN ribosomal de algunas de las especies del género Gnathostoma, evaluar su utilidad en sistemática molecular, así como establecer parentescos filogenéticos al interior de otros órdenes de nematodos sacernenteos. Así, las secuencias completas del 18s rADN de tres especies mexicanas de gnatostomos (G. binucleatum, G. neoprocyonis y G. turgidum) están constituidas por 1796 pares de bases (pb) y presentan un contenido de G + C del 50%, arrojando su comparación un valor de similitud genética extremadamente elevado (99,6%). Las secuencias parciales del gen 5.8s rARN (126 pb de su extremo 3'), determinadas para las tres formas ya mencionadas más otras tres (G. almeydai, G. oligomucronatum y G. spinigerum), revelaron diferencias nucleotídicas nulas entre sí, teniendo un contenido de G + C del 50,7%. Sin embargo, ambos genes ribosomales se significan como buenos marcadores moleculares en la diferenciación de géneros y pueden ser empleados en análisis filogenéticos de nematodos secernenteos. Las secuencias completas del ITS-2 rADN de las seis especies citadas, revelaron la existencia de tres grupos: aquellas parásitas de Marsupialia (Ga, Go y Gt), de Felidae/Canidae (Gb y Gs) y de Procyonidae (Gn).

Autor: ALONSO GARCIA ANDRES.
Año: 1997.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y FISIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOFISICA DE LOS PROCESOS DE TRANSPORTE EN MEMBRANAS BIOLOGICAS.

Resumen: En el presente trabajo hemos estudiado algunos fenómenos inflamatorios que se producen en la reacción pasiva reversa de Arthus (RPRA), un modelo experimental de reacción de hipersensibilidad de tipo III, y los mediadores que intervienen en ellos. Hemos demostrado, con argumentos farmacológicos, que el PAF media la extravasación de plasma rico en proteínas en la RPRA. Asímismo, hemos mostrado que el PAF media de liberación de óxido nítrico (NO) en los macrófagos peritoneales de ratas a las que se había inducido la RPRA. Posteriormente hemos estudiado los mecanismos de señalización intracelular implicados en la inducción de la expresión de los genes de la óxido nítrico sintasa inducible (NOS2) y de la quimjiocina CINC-1 (cytokine-induced neutrophil chemoattractant) por los inmunocomplejos (IC) en los macrófagos peritoneales de rata. La inducción de estos genes por los IC se produce a través de vías de señalización en las que intervienen tirosina kinasas. Además, en la inducción de NOS2 interviene el factor de transcripción NF-kB. Por otro lado, el NO exógeno puede regular de forma negativa la inducción de la expresión de NOS2.

Autor: AMARITA VEGA FELIX.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO .
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Los biosensores son dispositivos bioelectrónicos empleados en la estimulación de moléculas. Estos sistemas suelen estar dotados de gran sensibilidad y rapidez. Un biosensorrequiere la unión de un biocatalizador (o varios) a un sistema transductor de señal, y por último, la recuperación de una serie de datos. Según el componente catalítico de un biosensor; éstos pueden dividirse en sensores enzimáticos, sensores microbianos y sensores híbridos; en este trabajo se desarrollan prototipos de sensores para el análisis de lactosa en productos lácteos.

Autor: ARAUJO ESPEJEL M. MACARENA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR (FACULTAD DE CIENCIAS, SECCION BIOLOGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Hemos utilizado la Reacción de la Polimerasa en Cadena como instrumento para amplificar proteína quinasa implicadas en el desarrollo temprano del Sistema Nervioso (SN). Hemos aislado clones correspondientes a 12 genes diferentes, entre los que se encuentran diferentes receptores de la familia Eph de tirosin quinasas, y un nuevo miembro de esta familia, al que hemos denominado c-Eph A7. Hemos aislado el gen completo a partir de una libreria de ADNc de embriones de pollo de 2 días de desarrollo. El análisis de su patrón de expresión por hibridación in situ en embriones enteros y en secciones, revela su restricción a territorios dorsales en las etapas tempranas del desarrollo y en diferentes Sistemas: en el embrión temprano, la retina, los somitos y el primordio de la extremidad. En etapas posteriores en el embrión temprano la expresión se restringe a los prosomeros 1 y 2 del diencéfalo y todos los rombómeros del rombencéfalo; lo que sugiere un papel para este gen en la regionalización antero-posterior y en la determinación de territorios dorsales. En etapas posteriores en estos mismos Sistemas su expresión se correlaciona con el desarrollo de ciertos tractos axonales. Ensayos funcionales mediante manipulación experimental en el primordio del ala indican su papel en la guía axonal en el Sistema Nervioso.

Autor: ARIAS RAMOS PALOMA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La expresión y purificación del producto del gen regulador actII-ORF4 en condiciones heterólogas, nos ha permitido caracterizar a nivel molecular el último eslabón en la secuencia reguladora para la producción del antibiótico poliquétido actinorrodina en S. coelicolor J1501. Hemos demostrado que el producto génico es una proteína de unión a ADN, y que esa unión parece ser necesaria para la activación de la transcripción del resto de los genes biosintéticos del "cluster" de actinorrodina. Por otro lado, la proteína ActII- ORF4 mutante, no funcional, de la cepa S. coelicolor JF1 presenta, al igual que la silvestre, capacidad de unirse a las regiones intercistrónicas del "cluster" act, pero a diferencia de ésta, no tiene capacidad de activar la transcripción de los genes biosintéticos de la ruta.

Autor: ARRAZTIO GARCIA ANA M..
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La termoestabilidad está definida por una serie de factores, entre los que destaca el hecho de que las proteínas procedentes de termófilos sean termoestables per se. En algunas ocasiones, se han estudiado las características que determinan esta termoestabilidad, y mediante su aplicación, se han intentado termoestabilizar proteínas mesófilas. Dos aproximaciones alternativas son la evolución molecular y la construcción de proteínas híbridas. En este trabajo, se ha intentado termoestabilizar el gen cat-194, que codifica para resistencia a cloranfenicol. Sin embargo, tras realizar la mutagénesis al azar mediante ultravioleta, se obtuvo un gen que, si bien es activo a 65 C, no se encuentra mutado. Por otra parte, se construyeron proteínas híbridas entre la glucosamina sintasas (GlmS) de Thermus y E. coli. Estas proteínas híbridas, conteniendo cada una un dominio de cada organismo, presentaban propiedades intermedias de estabilidad entre las de las proteínas parentales. Además, tenían afectada su catálisis, lo que sugiere que las proteínas híbridas tenían alterado su equilibrio monómero inactivo- dímero activo. Por último, mediante estudios de modelados pudo predecirse que la proteína que contenía el dominio amino-terminal de E. coli era la más inestable, lo que quedó probado con los estudios realizados tanto en extractos crudos como en extractos puros. Como conclusión, podemos decir que las proteínas híbridas son un método de obtener propiedades intermedias entre dos proteínas, así como una forma de estudiar sus propiedades catalíticas.