BIOQUIMICA MOLECULAR, 45

Autor: ARTIGA GONZALEZ M. JESUS.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El gen de la apolipoproteína E (APOE) es considerado el principal factor genético de susceptibilidad para la enfermedad de Alzheimer de tipo senil. Una isoforma común de la proteína ApoE (ApoE4) está claramente asociada al desarrollo de la dolencia, aunque no es necesaria ni suficiente para padecerla. APOE es un gen estrechamente regulado por multitud de elementos dietéticos, hormonales y propios del crecimiento. Sin embargo, no existen trabajos previos sobre la posible existencia de mutaciones en su región reguladora que podrían ser responsables de variaciones en la expresión de la proteína. El trabajo presentado en la presente Tesis Doctoral incluye el desarrollo de técnicas que permiten el análisis molecular de la región reguladora proximal del gen APOE empleando las técnicas de RFLP y DGGE. Así, ha sido posible identificar 4 puntos polimórficos en la región en estudio, así como dos mutaciones puntuales. Además, mediante dichas técnicas, se ha desarrollado un método para el análisis de un elevado número de muestras. Asimismo, se ha realizado un estudio epidemiológico mediante el cual se ha determinado que dos de las variantes encontradas están asociadas a un incremento en el riesgo para desarrollar la enfermedad de Alzheimer. Posteriormente, se ha estudiado la actividad transcripcional exhibida por cada una de las variantes alélicas del promotor APOE encontradas, demostrando que las variantes alélicas asociadas a un mayor riesgo para la enfermedad de Alzheimer presentan mayor actividad transcripcional en células de astrocitoma humano.

Autor: BARNESTEIN FONSECA PILAR.
Año: 1997.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: METODOS EXPERIMENTALES EN BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR.

Resumen: Se ha aislado un clon genómico parcial que codifica a la glutamina sintetasa citosólica de pino. El clon contiene 7 exones y 6 intrones correspondientes a la zona codificante y 980 pares de bases de la región 5 no traducida. El análisis de esta región 5 no traducida utilizando construcciones quiméricas con el gen delator GUS en un sistema homólogo (Pinus pinea) y en un sistema heterólogo (Arabidopsis thaliana) confirma la funcionalidad de dicha región como promotor así como, la modulación de la expresión en función de la luz y la fuente nitrogenada. En la zona distal de dicho promotor se han detectado dos secuencias responsables de la unión a factores nucleares. Dichas unión es específica, dependiente de la presencia de factores proteicos, del grado de fosforilación de los mismos y de la topología del DNA implicado en dicha unión.

Autor: BAYON PRIETO YOLANDA .
Año: 1997.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y FISIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR Y FISIOLOGIA.

Resumen: Las células de astrocitoma humano 1321N1 poseen receptores muscarínicos de tipo M3 y de trombina bien caracterizados. Decidimos estudiar el mecanismo de liberación de ácido araquidónico acoplado a la estimulación de estos receptores en esta línea celular, para lo cual caracterizamos molecularmente la actividad fosfolipasa A2 (PLA2) implicada en la liberación de ácido araquidónico y estudiamos los mecanismos bioquímicos responsables de su translocación y de su activación por fosforilación. La actividad PLA2 detectada correspondió a la PLA2 citosólica (cPLA2), la cual era capaz de translocarse a la membrana en ausencia de incrementos en la (Ca2+)i y de forma dependiente de proteinas G. Por otro lado, su activación por fosforilación fué dependiente de PKC e independiente de kinasas de la familia ERK, apareciendo la enzima c-Jun-N-terminal kinasa como posible candidata a la fosforilación de la cPLA2.

Autor: BENITEZ VERGUIZAS FRANCISCO JAVIER.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR III PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La proteína relacionada con la parathormona (PTHrP) es el principal mediador del síndrome de hipercalcemia tumoral humoral (HTH) y, además, tiene un papel autocrino en el crecimiento de varios tipos celulares, tanto normales como transformadas. El factor transformante del crecimiento (TGF) beta es un regulador bifuncional del crecimiento celular normal y transformado, aunque las células tumorales suelen ser menos sensibles a sus efectos inhibitorios. El tumor Walker 256 (W256) es un tumor mamario de rata, utilizado como modelo de HTH. Nuestros resultados indican que las células W256 producen PTHrP y TGF beta1, éste último de forma inactiva. La PTHrP tiene un efecto autocrino sobre el crecimiento de las células W256, a través de un receptor para PTH/PTHrP distinto al tipo I clonado en riñón y hueso. El TGF Beta1 tiene un efecto bifásico en el crecimiento de las células W256, siendo estimulador a tiempos cortos e inhibidor a tiempos largos, posiblemente a través de un receptor tipo I para TGF Beta. El TGF Beta1 en las células W256 estimula la expresión de PTHrP mediante la estabilización del transcrito, y su propia expresión mediante un aumento de la transcripción génica.

Autor: BIGERIEGO LAFARGA PALOMA.
Año: 1997.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: VETERINARIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Autor: BOLIVAR PEREZ JORGE.
Año: 1997.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se ha realizado un muestreo de sueros entre distintos pacientes del Servicio de Reumatología del Hospital "Puerta del Mar" de Cádiz. De los 147 sueros ensayados mediante inmunofluorescencia, el 57.1%, presentaron anticuerpos antinucleares. Dos de los sueros testados, los denominados suero C.B. y suero J.C., presentaban reactividad nucleolar, y fueron seleccionados con el fin de caracterizar los autoantígenos reconocidos. Se han generado sueros policlonales contra distintas regiones expresadas del factor de transcripción UBF de hámster, que representa uno de los autoantígenos del suero C.B. Estos anticuerpos se presentan como una alternativa a la tinción Ag-NOR, empleada en diagnóstico histopatológico. A partir del suero autoinmune C.B. se han purificado inmunoglobulinas humanas, específicas de la proteína UBF, mediante cromatografía de afinidad, y se han identificado regiones de esta proteína que contienen epitopos implicados en la respuesta autoinmune. Mediante el suero C.B., se ha identificado, clonado y secuenciado el cDNA de un nuevo gen que presenta una expresión diferencial en distintos tejidos de hámster. Este gen codifica para una proteína cuya secuencia contiene una región rica en cisteínas que se agrupan de una forma semejante a la que presentan los dominios denominados "dedos de zinc". Esta proteína presenta una región de aminoácidos de caracter ácido. Asimismo se han presentado datos inmunocitoquímicos sobre su localización nuclear, posiblemente asociada a la heterocromatina. Se ha clonado el cDNA para la proteína FXR1 de hámster. En el presente trabajo se describe por primera vez a esta proteína, relacionada con el síndrome X-frágil, como un autoantígeno humano en un paciente de esclerodermia.

Autor: BOSKOVIC JASMINKA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se ha determinado la secuencia nucleotídica de 19,5 kpb de los cromosomas IN y XIV de Saccharomyces cerevisiae encontrandose un determinante de ARN-Leu y once fases de lectura abierta. Basandose en un análisis informático de la secuencia a la ORF YNL095c se le puede asignar la función de una proteína de membrana y la ORF YNL096w codificaría una proteína ribosómica. Se han eliminado 20 ORFs bien individualmente ó bien tres ó cuatro ORFs en tandem. Los mutantes nulos han sido sometidos a un análisis funcional básico. La deleción simultánea de las ORFs YKR017c, YKR018c, YKR019c e YKR020w presenta fenotipo de crecimiento lento en medio rico. Al menos una de estas ORFs determinaría una proteína implicada en el transporte de algún metabolito. Las deleciones en tándem de las ORFs YKR021w, YKR022c e YKR023w por un lado e YKR023w, YKR024c e YKR025w por otro y la deleción de la ORF YKR023w como los estudios previos sobre la ORF YKR024c indican que la ORF YKR025w es un gen esencial e YKR021w ó YKR022c ó ambas ORFs son genes esenciales para el crecimiento de S. cerevisiae.

Autor: BOUGRIA MOHAMMED.
Año: 1997.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA, BROMATOLOGIA Y TOXICOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA, TOXICOLOGIA Y CIENCIA Y TECNOLOGIA DE LOS ALIMENTOS.

Resumen: El principal objetivo de este trabajo es estudiar el mecanismo por el cual la síntesis de proteínas disminuye durante el envejecimiento. Durante el proceso de envejecimiento se produce una disminución significativa de la síntesis de proteínas en todos los órganos de los distintos organismos estudiados. Sin embargo, hasta el momento no se sabe ni el mecanismo por el que esto ocurre ni que etapa de la síntesis de proteínas se encuentra especialmente afectada. Considerando la principal teoría del envejecimiento, que lo relaciona con el acumulo del daño oxidativo, se ha determinado en primer lugar qué etapa de la síntesis de proteínas (iniciación, elongación o terminación) podría estar más afectada por el envejecimiento. Esto se ha estudiado mediante la determinación de perfiles de polisomas y mediante la determinación del tiempo de terminación de cadenas nacientes de proteínas de tamaño medio. Nuestros resultados ponen de manifiesto que es la etapa de elongación la más afectada. En segundo lugar, se ha estudiado el mecanismo por el que el envejecimiento afecta la etapa de elongación. Para ello, nos hemos centrado en la proteína más relevante en esta etapa, el factor de elongación 2 (EF-2)(Riis y Rattan, 1990) estudiando a nivel molecular las modificaciones post-traduccionales más importantes que puede sufrir esta proteína: oxidación y la ADP-ribosilación. Nuestros resultados ponen de manifiesto que el EF-2 hepático de ratas viejas presenta un mayor grado de daño oxidativo, una menor actividad en término de cantidad de diftamida y un mayor grado de fragmentación, lo cual podría justificar el enlentecimiento de la fase de elongación observada en estos animales viejos. El hecho de que a nivel molecular las modificaciones en el EF-2 sean similares en ratas viejas y ratas jóvenes tratadas con compuestos oxidantes sugiere que los radicales libres pueden estar implicados en la inhibición de la síntesis de proteínas durante el proceso de envejecimiento.

Autor: BRIONES ROSALES M. ELISA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La caracterización funcional de la proteína ribosómica L 12 de S. cerevisiae mediante interrupción génica se ha estudiado clonando los genes RPL 12A y RPL 12B. La interrupción de ambos genes no afecta la viabilidad celular, aún cuando disminuye la velocidad de crecimiento. Este efecto es revertido cuando se expresa la proteína L12 a través de la transformación con un plásmido centromérico conteniendo una de las copias. En la cepa carente de L 12 su ausencia no afecta la cantidad de la proteína PO unida al ribosoma, aún cuando inestabiliza su interacción al ARNr del dominio GTPasa y disminuye la unión de las proteínas YP1 e YP2. La expresión de la proteína bacteriana L 11 en la cepa con ambos genes interrumpidos, resulta en la unión de la proteína heteróloga a las partículas ribosómicas aún cuando no hay recuperación funcional in vivo e in vitro.

Autor: BRUN TORRES ALEJANDRO.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: El gen A179L del virus de la Peste porcina africana comparte homología estructural y de secuencia con genes pertenecientes a la familia de reguladores de la apoptosis ced-9/bcl-2. Mediante su expresión en sistemas virales heterólogos, como el virus de la vacuna (vaccinia) y baculovirus, se ha comprobado que A179L se comporta como un gen supresor de la muerte celular programada inducida por la sobreexpresión de la proteína quinasa R (inducida por interferón) así como de la apoptosis inducida por la infección de células Sf9 con baculovirus a tiempos tardíos. En las células Sf9, la actividad funcional de A179L es dependiente del anclaje celular a un sustrato. Se sugiere que la función del gen A179L es esencial dentro del ciclo replicativo del virus debido a la imposibilidad de generar mutantes de deleción para A179L en el virus de la Peste porcina africana.

Autor: BUSTAMANTE MARTINEZ CRISTINA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El Síndrome de Apnea Obstructiva es una enfermedad descubierta recientemente, poco conocida hasta el momento, especialmente desde el punto de vista de las alteraciones bioquímicas que pueden producirse con el síndrome. Nosotros hemos considerado las apneas hipoxémicas y los despertares durante el sueño como agentes estresores intermitentes y crónicos, capaces de producir una reacción de estrés. Las manifestaciones de estrés se pueden desencadenar a través de respuestas que implican modificaciones en la concentración de determinadas hormonas en sangre u orina. Estas modificaciones pueden interpretarse como el reflejo de la alteración de los sistemas que normalmente controlan los mecanismos del medio interno, como son el sistema simpatoadrenal y el eje hipotálamo-hipófiso-adrenal. últimamente, se han publicado diversos trabajos con resultados contradictorios respecto a las modificaciones de determinadas hormonas en este síndrome antes y después de la aplicación de la CPAPn, que se considera actualmente el tratamiento de primera elección en el SAOS. Esto nos ha llevado a realizar el presente estudio y a plantear la hipótesis y objetivos que se describen a continuación, en este trabajo.

Autor: CALLE VERDU FERNANDO DE LA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Las tiocoralinas son unos nuevos compuestos antitumorales producidos por cepas pertenecientes al género de Micromonospora marina y están incluidas dentro del grupo de Bis-intercalantes de DNA. Se emplean métodos de análisis de regresión múltiple para estudiar el efecto de diversos nutrientes sobre el crecimiento y la producción. Se han aislado dos compuestos muy similares a la Tiocoralina A y se comparan sus actividades biológicas en comparación con equinomicina. Se confirma el mecanismo de acción de la Bis-intercalación por estudios de unión al plásmido pBR322 e igualmente, se analiza la modulación de la actividad catalítica de la topoisomerasa II.

Autor: CAMACHO PAEZ ANA GEMA.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: EXPERIMENTACION Y METODOLOGIA EN SISTEMAS BIOLOGICOS MOLECULARES.

Resumen: El enzima desoxiuridina 5'-trifosfato nucleótidohidrolasa o dUTPasa es un enzima que cataliza la conversión de dUTP hasta dUMP, liberando PPi, y que interviene en la ruta de síntesis "de novo" del timidilato, presentando también un papel esencial en el mantenimiento de la integridad del DNA en todos los organismos vivos. En esta Tesis se describe el aislamiento del gen dut de Leishmania major mediante una estrategia de complementación genética en Escherichia coli, en concreto una cepa mutante que carece de actividad dUTPasa. También se ha llevado a cabo una caracterización del gen y de la secuencia codificante de la proteína, encontrando que este enzima es marcadamente diferente al resto de las dUTPasas descritas hasta el momento, con tan solo una pequeña homología con la dCTPasa-duTPasa del bacteriófago T4. Esta gen ha sido sobreexpresado utilizando el sistema pET-11c y la proteína se ha purificado a homogeneidad en dos pasos. La caracterización posterior de este enzima mostrado que es capaz de actuar sobre dUTP y sobre dUDP, hidrolizándolos ambos hasta dUMP y liberando PPi o Pi respectivamente. El dUMP se ha caracterizado como un inhibidor competitivo de la dUTPasa de este protozoo parásito y se han determinado los parámetros cinéticos para la hidrólisis del dUTP y del dUDP. Ha sido determinado también que este enzima es capaz de complementar la deficiencia de dUTPasa en un sistema eucariota como es levadura, a pesar de la notable diferencia entre ambas dUTPasa, tanto en la secuencia primaria de aminoácidos, como en su peso molecular. La sobreexpresión en Leishmania ha permitido conocer parte de su papel biológico.

Autor: CARCEDO RODRIGUEZ M. TERESA.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Resumen: Las anexinas constituyen una amplia familia de proteínas presentes a lo largo de la escala evolutiva en eucariotas, e implicadas en importantes procesos biológicos tales como coagulación, inflamación, proliferación y diferenciación celular. En este trabajo se estudió la regulación de la expresión de la anexina V humana. Para ello se procedió en primer lugar al aislamiento, caracterización y secuenciación del gen. La región promotora del gen se estudió en mayor profundidad para determinar los elementos de secuencia implicados en la regulación de la transcripción, y se identificaron algunos motivos importantes para que este proceso tenga lugar eficientemente. Por último se estudió la variación en la expresión de la anexina V humana en modelos celulares sometidos a tratamiento con algunos agentes que inducen la diferenciación celular.

Autor: CARPINTERO ARIAS PABLO.
Año: 1997.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Las Beta-timosinas son péptidos secuestradores de actina, por lo que intervienen en la polimerización de ésta y por lo tanto son factores importantes en la regulación del citoesqueleto de actina. En el presente trabajo hemos investigado la expresión de los genes de la timosinas beta 4 y beta 10 durante el desarrollo embrionario temprano del ratón, concluyendo que la timosina beta 4 se expresa fundamentalmente en el sistema nervioso central y periférico de los embriones, así como en células migratorias y en las paredes de los vasos sanguíneos. El gen de la timosina beta 10, por el contrario, sólo se expresa en la capa del manto del sistema nervioso central y periférico, y no hemos encontrado cantidades apreciables de tránscrito de este gen ni en las células migratorias ni en las paredes de los vasos sanguíneos. De estos resultados concluimos que la timosina beta 4 está probablemente relacionada con la formación de extensiones citoplasmáticas, mientras que la timosina beta 10 lo está con algún proceso dependiente del citoesqueleto de actina, relacionado con el proceso de diferenciación. También hemos descrito la expresión de los genes de la timosina beta 4 y beta 10 en el sistema nervioso central de rata, descubriendo que ambos se expresan principalmente en las neuronas del hipocampo, córtex entorrinal y región amigdalina, aunque hemos encontrado diferencias significativas en su expresión en el caso del córtex y el cerebelo. Nuestros resultados sugieren, además, que ambos péptidos podrían estar implicados en fenómenos de plasticidad sináptica y en procesos relacionados con la activación de células gliales.

Autor: CARRIO JARDINES ROBERTO.
Año: 1997.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El descubrimiento de Bc1-2 como primer proto-oncogen que prolongaba la vida de las células inducidas a morir por diferentes estímulos apoptóticos constituyo un paso muy importante en el estudio de la muerte celular programada (MCP). Bc1-2 dio nombre a una familia creciente de proteinas relacionadas estructuralmente, implicadas de una u otra forma en el control de la MCP. A1 fue uno de los primeros genes en describirse, pero su función ha permanecido desconocida. Asi mismo, no se conoce su expresión durante el desarrollo pre y postnatal del ratón. Los hallazgos presentados aquí, indican que este gen prolonga la supervivencia de las células K562, ante estímulos apoptóticos como el AO, ActD y CHX. Mostramos además que A1 se expresa en múltiples órganos no hematopoyeticos, fundamentalmente en el desarrollo embrionario del ratón. Sugerimos además que A1 puede tener un importante papel durante la organogénesis y el desarrollo postnatal del sistema nervioso central, constituyendo un buen marcador topográfico del grado de maduración de la corteza cerebral.

Autor: CASARES PROAÑO PABLO.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: Se identificó una bacteria aislada de salchichón como Lactobacillus plantarum mediante las galerías de identificación API 50 CHL para Lactobacillus. Esta bacteria crece en óptimas condiciones en medio de cultivo MRS, presentando una cinética de crecimiento típica de muchas bacterias lácticas. El uso de la prensa de French, resultó ser un método adecuado para la ruptura celular y para la obtención de un extracto celular con actividad leucina aminopeptidasa (LAP). Partiendo de este extracto celular se logró purificar una LAP a homogeneidad empleando cuatro etapas en la purificación: cromatografías convencionales de intercambio iónico (DEAE celulosa) y de interacción hidrofóbica (Phenyl Sepharose), seguida de cromatografía en FPLC de intercambio iónico (Mono Q) y de tamizado molecular (Superose 12 HR). La LAP fue purificada 520 veces y muestra una actividad específica de 195 U mg-1 de proteína siendo el rendimiento del 31%. El enzima nativo es un homodímero de 74 a 76 kDa constituído por dos subunidades de 37 kDa. El enzima puro libera preferentemente Leu situada en el extremo NH2-terminal de diversos sustratos pero no ácido aspártico ni glutámico. Esta especificidad permite su clasificación como leucil aminopeptidasa bacteriana, apareciendo en la vigente nomenclatura de enzimas registrada como EC 3.4.11.10.

Autor: CASAS TERRON ELENA.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA BIOLOGIA MOLECULAR FTAD. MEDICINA UNIV. VALENCIA PROGRAMA DE DOCTORADO: 30B.

Resumen: La utilización del recién nacido como modelo experimental se debe a la importancia que tienen los radicales libres (rl) y el estrés oxidativo en la patología neonatal. Frente a los productos intermediarios derivados del oxigeno existen una serie de sistemas defensivos como vitaminas, proteínas, catalasa (CAT), glutation peroxidasa (GPx) o superoxido dismutasa (SOD). Todos ellos van a actuar frente a los distintos intermediarios oxigénicos producidos. Estos antioxidantes están en cantidad suficiente para evitar el daño si la producción de rl se mantiene dentro de unos límites fisiológicos. Pero si la producción es excesiva o están los antioxidantes en concentraciones inferiores a lo normal se produce un daño celular. El periodo neonatal se caracteriza por una liberación de sustancias antioxidantes y una disminución de los factores antioxidantes en general, lo que hace de este periodo un tiempo susceptible para el daño celular. Como resultados cabe destacar un incremento de los productos de peroxidación (MDA) en madres portadoras de niños PT (pretérmino). Con respecto a los recién nacidos, hemos observado que la concentración de MDA es significativamente mayor en niñas con retraso del crecimiento intrauterino (RCIU). Por otro lado, el hecho de que a pesar de la comunicación sanguinea entre madre e hijo, el aumento del MDA en la sangre de los niños con RCIU no se corresponda con un aumento de este parámetro en el plasma materno, de la misma forma que el mayor grado de peroxidación existente en la madre protadora de un PT no se acompañe de cambios en el noronato, puedes sugerir la existencia de sistemas detoxificadores existentes en la placenta para evitar el paso de peroxidos entre madre e hijo. Por otro lado las dos situaciones en las que se observa un aumento de niveles de MDA (madres de niños PT y niños con RCIU) presentan una disminución de la actividad SOD mientras que el resto de sustratos antioxidantes no se alteran o se modifican en sentido contrario (GSH). Esto podría sugerir la importancia de esta enzima como primera barrera defensiva contra los radicales oxigénicos, además de estar relacionado con una deficiencia en la maduración enzimática que condicionaria el aumento de peróxidos. El aumento respecto a los controles de GSH en ambos grupos de niños (PT y RCIU) no es facilmente explicable y sugiere un ahorro de grupos sulficrilos y cambios enel metabolismo proteico, aumentando la disponibilidad de grupos SH y la inducción de sintesis de glutation reducido. Al contrario de lo observado con el MDA se comprueba que existe un cierto paralelismo entre los incrementos de GSH en madre e hijo, aunque solo es significativa la diferencia dentro del grupo de PT. Los resultados hallados sugieren la existencia de alteraciones en el metabolismo oxigénico con posibles repercusiones en neonatos con problemas.

Autor: CASQUEIRO BLANCO FRANCISCO JAVIER.
Año: 1997.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: ECOLOGIA, GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA DE MICROORGANISMOS Y DE PLANTAS.

Resumen: En esta Tesis Doctoral se describe la clonación del gen lys 2 de P. chrysogenum, este gen se caracteriza por la presencia de dos marcos de lectura abierta solapados; el primer marco de lectura (ORF1) codifica una proteína de 115 aminoácidos, el codón de terminación de la ORF1 solapa en nucleótido con el codón de inicio de la traducción de la ORF2. Este último marco de lectura codifica una proteína de 1.296 aminoácidos y es la responsable de la actividad alpha-aminoadipato reductasa. En la proteína deducida de la ORF2 se encuentran presentes todos los dominios necesarios para llevar a cabo la actividad asignada a la sununidad grande de la alpha-aminoadipato reductasa. Por otra parte la caracterización del gen lys2, puso de manifiesto, que éste se transcribe como un mRNA de 4,7 kb y que la transcripción de dicho gen está regulada por la presencia de lisina en los caldos de cultivo, tanto en la cepa silvestre de P. chrysogenum, como en la cepa Wis 54.1255. También se describe en esta memoria el primer caso de disrupción génica en P. chrysogenum.

Autor: CASTILLO VARON ANA ISABEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: En esta tesis hemos abordado el estudio de la expresión del gen de prolactina (PRL) por el receptor del factor de crecimiento IGF-1, un receptor de membrana con actividad tirosina quinasa y por los receptores nucleares para la vitamina D3 (VDR) y los proliferadores de proxisomas (PPAR). Hemos encontrado que IGF-1 regula de forma diferente la expresión de los genes de PRL, GH y GHF-1 en las lineas celulares hipofisarias GH3 y GH4C1. En las células GH3, IGF-1 inhibe la expresión del gen de GHF-1, lo que produce un nivel de proteína GHF-1 que es insuficiente para permitir la activación del promotor de PRL. Por el contrario, en las células GH4C1 los niveles de expresión de GHF-1 no se ven afectados por IGF-1, y este factor de crecimiento actúa activando el promotor de PRL. En esta línea celular, IGF-1 activa la ruta de PI3K y la de Ras/MAPK/Ets. Estas rutas actúan conjuntamente para activar el promotor de PRL. La presencia de GHF-1 es esencial para la activación del promotor de PRL por los receptores nucleares VDR y PPAR. Estos receptores activan el promotor de PRL de forma diferente. VDR ejerce su acción mediante la unión a una secuencia localizada entre -45/-27 en la región 5 flanqueante, mientras que PPAR activa el promotor a través de interacciones proteína-proteína.