BIOQUIMICA MOLECULAR, 46

Autor: CESPON OTERO CONSTANTINO .
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: SHP-1 es una protein tirosin fosfatasa citoplasmática que se expresa mayoritariamente en células hematopoieticas: en este trabajo describimos un método cuantitativo para la detección de SHP-1 en extractos celulares; basado en un Elisa de doble reconocimiento entre el mAb 2F12 y un anticuerpo policlonal generado en nuestro laboratorio: la sensibilidad del ensayo es de 0.5 ng manteniendo un rango lineal entre 0.2 - 4 ng. Como curva standard utilizamos SHP1 recombinante y nativa; plurificada por afinidad de la fracción citosólica de bazo humano los valores obtenidos con ambas curvas se compararon mediante el coeficiente de correlación obteniéndose un valor de r=0,99 utilizando este método analizamos el contenido de SHP1 en líneas celulares; linfocitos de bazo y leucemias; no detectando la expresión de SHP1EN los linfocitos procedentes de un paciente con el síndrome de Sezary; ni en la linea celular relacionada, HUT-78 estos resultados se confirmaron mediante Western y Northern Blot. Se ha estudiado la especificidad de sustrato de SHP1 utilizando como sistema la fracción citosólica de plaquetas humanas inactivadas; y fosforiladas con la PTK SRC: en este sistema SHP1 no mostró especificidad de sustrato desfosforilando la mayoría de las bandas fosforiladas por SRC. Como posible mecanismo de regulación analizamos el efecto de oxidantes y reductores sobre la actividad enzimática de SHP1 el GSSG puede inhibir la actividad del enzima a concentraciones proximas a las fisiologicas probablemente a través de la formación de puentes disulfuro con los grupos TIOL del enzima. La identificación de LAGST PI humana como la proteína UQ copurifica con SHP1 de bazo y su posible regulador sobre la actividad fosfatasa; son también discutidos.

Autor: CHIAPELLA MICO CARLOS.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: En este trabajo se ha desarrollado un sistema vegetal capaz de detectar la posible actividad mutagénica de diferentes promutágenos en el test de Ames, similar al sistema basado en fracciones microsomales de hígado de rata. La fracción S117 de Persea americana contiene unos niveles de citocromo P-450 suficientemente elevados y ha permitido desarrollar este sistema. Tanto el 2-aminofluoreno como la meta-fenilendiamina son susceptibles de ser activados por peroxidasas y por monooxigenasas de función mixta vegetales. En la activación de la metafenilendiamina mediada por la fracción S117 de Persea americana únicamente participan las monooxigenasas de función mixta, mientras que en la activación del 2-aminofluoreno también participan las peroxidasas. Este sistema vegetal también ha sido capaz de activar otros promutágenos ensayados. Asimismo se ha determinado con mayor precisión, con la ayuda de inhibidores de las diferentes actividades enzimáticas presentes en los extractos vegetales, en qué proporción intervienen tanto las peroxidasas como las monooxigenasas de función mixta. Dentro de estas últimas se han detectado actividades dependientes del citocromo P-450 y dependientes de la flavín-monooxigenasa, interviniendo ambas en la activación de aminas aromáticas. El patrón mutacional fundamental que se produce en la reversión de la cepa hisD3052 cuando los promutágenos 2-aminofluoreno y metafenilendiamina son activados por fracciones vegetales de Zea mays y de Persea americana es mayoritariamente una deleción GC/CG en el octámero 5'D878-CGCGCGCG-3' al recuperarse el marco de lectura del gen.

Autor: COLLADO RODRIGUEZ MANUEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La investigación se ha centrado en la generación de virus recombinantes basados en el virus vaccinia (VV) que expresan proteínas de fusión entre la proteína. Env del VIH-1 y proteínas altamente antigénicas del VV, p14 y p39. Las proteínas quiméricas han sido caracterizadas, encontrándose diferencias en diversos aspectos tanto estructurales como funcionales. La utilización de los recombinantes en protocolos de inmunización en ratones ha permitido analizar la respuesta inmunitaria que las proteínas de fusión son capaces de inducir. Con algunos de los sueros obtenidos mediante la inoculación de recombinantes de proteínas de fusión, se pudo demostrar una mayor actividad frente a la proteína Env, y mayor capacidad de neutralización de la infección por VIH-1. Las zonas reconocidas por los anticuerpos de estos sueros corresponden a regiones previamente descritas como inmunológicamente importantes, se localizan en regiones constantes y son distintas a la región V3. En vista de las características inmunológicas mostradas por estas proteínas de fusión, parece posible que proteínas quiméricas VIH-VV pudieran ser candidatos potenciales como vacunas contra la infección por VIH-1.

Autor: COLOMINA GABARRELLA M. NEUS.
Año: 1997.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIENCIES MEDIQUES BASIQUES PROGRAMA DE DOCTORADO: FONAMENTS BIOLOGICS DE LA SALUT.

Resumen: Los nutrientes son los factores tróficos más importantes para las levaduras y su limitación provoca una detención del ciclo en la fase G1. Esta respuesta de adaptación a los cambios nutricionales del medio asegura la máxima viabilidad de la célula y permite el inicio de diferentes procesos de diferenciación según las condiciones nutricionales. El ciclo celular de Saccharomyces cerevisiae está regulado en diferentes puntos por mecanismos de control interno que aseguran la proliferación sin ninguna anomalía en los diferentes procesos celulares. Al final de la fase G1, si las condiciones nutricionales son óptimas, se adquiere el compromiso de continuar el ciclo hasta la próxima fase G1. La vía de señalización de limitación de nutrientes esenciales como la fuente de nitrógeno, aún no había sido determinada. Hemos estudiado la regulación de las ciclinas de fase G1 en el modelo de limitación de la fuente de nitrógeno i hemos demostrado que la proteína Cln3 está regulada post- transcripcionalmente de dos formas diferentes: mayor inestabilidad dependiente de la vía de la ubiquitina e inhibición traduccional que provoca la total desaparición de Cln3, causando así la represión de genes dependientes de SBF y MBF en la siguiente fase G1. La presencia de Sic1, inhibidor de los complejos Clb/Cdc28, permite explicar en términos moleculares la detención en G1. En condiciones de limitación nutricional las células diploides también detienen su ciclo en G1, pero inician un proceso diferenciador llamado meiosis, que implica la replicación del DNA, dos divisiones meióticas y la formación de las esporas como unidades de resistencia a condiciones adversas. La proteína Ime1 es la principal inductora de todos los procesos de meiosis y activa la expresión del primer grupo de genes que participan en la replicación premeiótica del DNA y en la profase. En este trabajo demostramos que en las condiciones nutricionales en que se da la meiosis, las ciclinas G1 desaparecen rápidamente pero, de otra parte, se produce una alta expresión de CLB5 que depende de Ime1. Los niveles de Sic1 disminuyen, de forma dependiente de Ime1 también, lo que indica un mecanismo de regulación de la entrada en la fase S premeiótica muy parecido al ciclo mitótico, pero inducido por Ime1 en lugar de Cln3/Cdc28. En mutantes c/n la meiosis se puede iniciar en medio rico, lo que implica a las ciclinas G1 como mediadoras de una señal nutricional sobre el inicio de la meiosis. Las ciclinas G1 inhiben la vía Ime1 mediante dos controles negativos: represión transcripcional de IME1 e inhibición de la acumulación de Ime1 en el núcleo, reprimiendo así la expresión de genes meióticos. Estos resultados demuestran la existencia de un control negativo de los activadores clave de la mitosis sobre los de la meiosis, provocando que estas dos opciones del ciclo celular sean incompatibles.

Autor: CORCHERO NIETO JOSE LUIS.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA I MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA .

Resumen: En el presente trabajo se han estudiado varios aspectos que inciden en el rendimiento de procesos de producción de priteínas recombinantes en Escherichia coli. El primero ha sido el sistema de expresión, en nuestro caso uno termoinducible. En el, la relación entre recuros destinados a síntesis de un enzima recombinante o a biomasa no es constante. Se propone un modelo para este comportamiento asimétrico. Además, se han identificado diversos factores implicados en la estabilidad del vector de expresión. El papel de estos factores varía a medida que aumentan los noveles de expresión génica. Por otro lado, se ha estudiado la influencia de la posición relativa de los dominios homólogo y heterológo sobre algunas características de interés (solubilidad, sensibilidad a proteolisis y antigenicidad del dominio heterológo). Todas ellas están influenciadas por la posición relativa de ambos dominios. También se propone un modelo de degradación de E. coli de proteínas agregadas, el cual postula que puede darse proteolisis sobre proteína insoluble, permitiendo la acumulación de intermediarios solubles.

Autor: CORDOBA PORRAS ALFONSO.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA CLINICA Y PATOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Un número creciente de estudios clínicos y epidemiológicos demuestran que la elevación moderada de la concentración de homocisteína (Hcy) plasmática constituye un factor de riesgo independiente de padecer enfermedad cardiovascular. Diversos estudios indican que la HHM es un hallazgo común en los pacientes con accidente vascular cerebral (AVC). Ello sugiere, junto con otros datos, que el incremento moderado de los niveles de Hcy en plasma es un factor que predispone a la arteriosclerosis y/o trombosis de las arterias cerebrales. Sin embargo, la HHM ha sido poco estudiada en nuestro país. Por tanto, se desconoce su prevalencia en pacientes con AVC, así como sus causas, entre ellas el papel de posibles factores genéticos como la variante termolábil de la enzima metilenotetrahidrofolato reductasa (MTHFR (+/+)), los factores determinantes de este aumento y además no tenemos experiencias de la respuesta de los pacientes con HHM al tratamiento con vitaminas específicas. Para ello se analizaron 110 pacientes (61,8+-12,9 años), ingresados de forma consecutiva los años 1995 y 1996 en los servicios de Neurología de los Hospitales Santa Creu i Sant Pau y Quinta de la Salud L'Alianca, tras haber padecido un primer episodio de AVC clinicamente objetivado y un total de 100 individuos controles sanos (56,5+-17,6 años). Los resultados de este estudio demuestran que, en la población de pacientes con AVC estudiada, la HHM es 7 veces más frecuente en los pacientes (28,2%) que en los controles (4,0%). Esta diferencia en la incidencia de HHM apoya el concepto de que la elevación de la Hcy es un factor de riesgo para el AVC. La HHM basal y post-metionina se presentaron con similar frecuencia en los pacientes con AVC. Ello sugiere que ambos tipos de determinaciones deben ser realizadas para descartar la existencia de HHM. La prevalencia de HHM fue aproximadamente el doble en pacientes con infarto cerebral que en pacientes con isquemia transitoria aguda. Ello sugiere, que ésta se asocia preferentemente con las formas de AVC más graves y fue más frecuente en pacientes con infarto embólico-cardíaco y aterotrmbótico que en pacientes con infarto lacunar. La HHM fue detectada, en su totalidad, en pacientes con uno o más factores de riesgo cardiovascular. La asociación de la HHM con la diabetes (afectación renal) y la dislipemia sugiere que su origen podría ser en muchos casos común, o al menos inter-relacionado. El riesgo para AVC aumenta significativamente al aumentar la concentración de Hcy. Ello sugiere, que el efecto de la HHM podría ser proporcional al aumento de la concentración de Hcy. La interacción del aumento de concentración de Hcy y de colesterol de LDL podría ser clínica y/o fisiopatológicamente relevante para la aparición del AVC. Nuestros resultados no apoyan, de una forma determinante, que la MTHFR (+/+) sea un factor de riesgo para AVC. Los individuos con este genotipo presentaron, en general, menores concentraciones de ácido fólico sérico y menor actividad enzimática específica y residual, respecto a los individuos con los genotipos (+/-) y en especial a los (-/-). Los determinantes biológicos de la variabilidad de la concentración de Hcy basal son la edad, la vitamina B12, el ácido fólico y la creatinina. Mientras que del incremento son la edad y la vitamina B12. Las concentraciones plasmáticas de Hcy basal o postmetionina en los individuos hiperhomocisteinémicos disminuyen aproximadamente del orden del 40% con tratamiento vitamínico. Dado la elevada incidencia de HHM encontrada y teniendo en cuenta la respuesta al tratamiento con estas vitaminas creemos que es recomendable continuar el diagnóstico de este factor de riesgo en éste y los otros territorios vasculares afectados.

Autor: CRUZ LLOSA ARMANDO.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El caso de la alergia a hongos presenta una variada problemática debida, entre otros factores, a la baja potencia de los extractos obtenidos y a la enorme variabilidad de cepa a cepa e incluso de lote a lote. La discusión acerca de cuál es la fuente más idónea para obtener los alergenos contribuye a aumentar la problemática en torno a estos agentes alergénicos. Las especies de hongos objeto de este estudio (Aspergillus fumigatus y Penicillium chrysogenum) tienen gran relevancia en los fenómenos de hipersensibilidad de tipo I y no se encuentran suficientemente estudiadas desde este punto de vista. En el presente trabajo se lleva a cabo una completa caracterización bioquímica e inmunoquímica de los extractos alergénicos de ambas especies. Concretamente se realizan estudios del patrón electroforético por SDS-PAGE e Isoelectroenfoque y se determinó el contenido en azúcares y proteína de las muestras. Además, se realiza un estudio de variabilidad entre diferentes cepas de ambos hongos, cuantificando la misma obteniendo resultados que indican diferencias dependiendo del origen de la cepa. Por otra parte se evalua la comunidad antigénica entre extractos fúngicos de diferente origen y entre diferentes especies de hongos mediante estudios por inmunotransferencia e inhibición del ELISA, utilizando antisueros experimentales y anticuerpos monoclonales producidos frente a los hongos objeto de estudio. Se observa importante comunidad antigénica entre las especies estudiadas. En estudios realizados con sueros humanos se detectan los alergenos mayores y menores de Aspergillus fumigatus y Penicillium chrysogenum y se determina el origen de estos alergenos. Mediante estudios por inmunotransferencia y pruebas in vivo se puede observar que los extractos metabólicos presentan mayor contenido alergénico que los extractos somáticos. Estos últimos tienen más relevancia alergénica relativa en el caso de Aspergillus fumigatus. El carácter patógeno de esta especie puede influir en la mayor proporción de alergenos somáticos. Asimismo, se estudia la naturaleza de los fenómenos de reactividad cruzada entre diferentes especies de hongos. Así, se comprueba la existencia de reactividad cruzada entre Aspergillus y Penicillium, aunque se observa que la comunidad antigénica exhibida por los estudios realizados con anticuerpos monoclonales sólo es responsable en parte de la reactividad cruzada alergénica. Finalmente se obtiene purificación de varios alergenos mediante métodos cromatográficos (sistema SMART).

Autor: CUBELLS MARTINEZ XAVIER.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA B1.

Resumen: Se ha caracterizado la respuesta molecular al etileno en cítricos. Las características observadas apoyan la idea del papel señalizador del etileno en esta planta. La implicación de los genes inducibles por etileno (EIG) durante la maduración natural, estres hídrico/rehidratación, estres salino y frío, sugiere la implicación del etileno en estos procesos. Se ha clonado y caracterizado en Citrus un gen del tipo "sensor de etileno ERS". La modulación de los niveles de CERS por factores del desarrollo puede dar cuenta del incremento observado en la expresión de genes regulados por esta hormona durante la maduración del fruto. Se ha aislado y caracterizado el gen HNL inducible por etileno. Se presentan datos que apoyan que la proteína codificada por este gen no presenta actividad HNL. La presencia de un dominio esterasa sugiere que ésta puede ser su función. Asimismo se presentan pruebas de que la inducibilidad asociada al daño debe residir en la región del promotor.

Autor: CULI ESPIGUL JOAQUIN.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: 1-BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Esta tesis aborda el estudio de las primeras etapas de la especificación de las células precursoras de los órganos sensoriales en Drosophila. Se delimita y caracteriza un elemento enhancer del gen proneural scute que dirige su expresión específicamente en los precursores neurales. Se demuestra que este elemento enhancer es responsable, al menos parcialmente, de la mayor acumulación de scute detectada en las células precursoras de los órganos sensoriales y que es necesario, en ausencia de otros genes proneurales, para la formación de los órganos sensoriales. Este enhancer media un bucle de autoactivación de scute en las células precursoras. Los genes neurogénicos, implicados en mecanismos de inhibición lateral, impiden este bucle de autoactivación. Finalmente, se propone un mecanismo molecular para la especificación de los precursores de los órganos sensoriales.

Autor: DIAZ MARTIN M. AZUCENA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El estudio de las actividades formadora y resortiva del hueso (Remodelado óseo) es de gran importancia, tanto para el diagnóstico como para el seguimiento de las enfermedades metabólicas óseas. Los marcadores bioquímicos de remodelado óseo representan una alternativa eficaz a otras técnicas de estudio del hueso invasivas (histomorfometría) o poco sensibles (radiología). Dado el avance experimentado en este campo en los últimos años y el gran número de nuevos marcadores que han ido apareciendo, el presente trabajo trata de contribuir al esclarecimiento de la utilización de estos marcadores en tres patologías del hueso de gran importancia: OSTEOPOROSIS POSTMENOPAUSICA, ENFERMEDAD OSEA DE PGET, Y DETECCION PRECOZ DE LAS METASTASIS OSEAS ASOCIADAS AL CARCINOMA DE PROSTATA.

Autor: DIAZ PORTILLO JACOBO.
Año: 1997.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR, MICROBIOLOGIA... PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En nuestro estudio pretendemos: 1. Conocer el perfil lipídico de una población infantil de Ceuta de 0 a 12 años de edad; 2. Detectar diferencias en el patrón lipoproteico de las dos etnias mayoritarias de la ciudad de Ceuta. 3. Estudiar el comportamiento del recién nacido frente a los fenómenos de peroxidación lipídica, y su relación con diversos factores perinatales (edad gestacional, peso del neonato, tipo de parto, tabaquismo materno, y complicaciones del parto; sufrimiento fetal agudo, meconio, circular de cordón y diabetes gestacional). Para ello, hemos determinado el perfil lipoproteico (colesterol total, triglicéridos, colesterol-LDL, colesterol-HDL, VLDL, apoproteína A1 y B), y grado de lipoperoxidación (TBARS) en una muestra representativa de la población infantil de Ceuta (compuesta por 1544 neonatos, 309 niños de 12 a 20 meses, y 449 niños de 2 a 12 años). Los resultados obtenidos indican que el perfil lipoproteico de los niños de origen hispano es distinto de sus homólogos árabes, con independencia de la edad y del sexo. Estas diferencias interétnicas aparecen en el nacimiento, son mínimas en el período de la lactancia y máximas en la infancia (2-12 años). En sangre de cordón, el patrón lipoproteico depende de la etnia, sexo, edad gestacional, peso neonatal, existencia de sufrimiento fetal agudo, y antecedentes de tabaquismo materno. El colesterol en sangre de cordón no parece ser un buen predictor del colesterol durante el segundo año de vida, siendo la apoproteína B el parámetro lipídico que presenta una mejor relación nacimiento-segundo año de vida. Los fenómenos de peroxidación lipídica son máximos al nacimiento, y superiores en neonatos pretérmino e hiposómicos. Los hábitos dietéticos adquiridos durante el período de la lactancia pueden modificar el perfil lipídico del niño. El patrón lipoproteico es más aterogénico y la prevalencia de dislipemias infantil en Ceuta es más alta que la mayoría de las poblaciones infantiles nacionales e internacionales comparadas, principalmente en la etnia hispana.

Autor: DIEZ DEL CORRAL BAUBRY RUTH.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La mayor parte de la epidermis de Drosophila melanogaster procede de los discos imaginales, que se subdividen en distintos territorios durante su desarrollo. En esta Memoria se presenta la caracterización de la función del Complejo Iroquois (C-IRO), que incluye los genes araucan, caupolican y mirror, en la subdivisión de la región del disco de ala que corresponde al tergo en notum y axila proximal. En ausencia de los genes del C-IRO, se activan genes específicos de axila en la región del notum de los discos y se desarrollan estructuras de axila proximal en lugar de notum en los adultos. Se propone que los genes del C-IRO están implicados en el establecimiento de un borde entre el notum y la axila proximal, asociado a un pliegue, que influye en el desarrollo de ambos territorios. Los genes del C-IRO también intervienen en el establecimiento de territorios de prevena, de manera semejante a su función previamente caracterizada en la formación del patrón de órganos sensoriales.

Autor: DOCE CEBREIRO JUANA M..
Año: 1997.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA E BIOLOXIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOXIA MARIÑA E ACUICULTURA.

Resumen: La apoptosis es un proceso de muerte celular controlado que se manifiesta en numerosas poblaciones celulares, destacando por su importancia y extensión en la inmunocapacitación de los timocitos. En nuestro estudio observamos que la apoptosis de los timocitos in vitro puede ser inducida por la elevación de los niveles de calcio citosólico, por concentraciones fisiológicas de glucocorticoides o a través de la activación del complejo TCR-CD3 y que esta actividad desciende a medida que se avanza en la inmunocapacitación de los linfocitos T. Comprobamos que la apoptosis de los timocitos inducida por la elevación de calcio citosólico o por glucocorticoides es dependiente de la síntesis de proteínas y mRNA y que la CyA, un conocido fármaco inmunosupresor, inhibe la muerte apoptótica inducida por la elevación de calcio en timocitos aislados y en timocitos fetales, así como la inducida en estos últimos a través de la activación del TCR-CD3. La importancia del microambiente tímico se pone de manifiesto cuando investigamos cómo los componentes celulares y factores solubles del timo regulan la apoptosis, sobresaliendo la actividad inhibitoria de la IL-1 y la IL-2 cuando este proceso es inducido por la elevación de calcio. El estudio de los mecanismos de transducción que podrían regular la actividad apoptótica de los timocitos muestra la clara participación de la PKC y la PKA dependiente de AMPc en la inducción por la elevación de los niveles de calcio citosólico. Finalmente constatamos que mecanismos de fosforilación/desfosforilación participan en la apoptosis inducida por la elevación de calcio en timocitos al observarse un descenso en la concentración de fosfoproteínas en el rango de Pm de 40 a 12 kDa y repetirse este patrón cuando la activación apoptótica se induce directamente a través de la PKC. Esta variación en la concentración de las fosfoproteínas resulta ser dependiente de la síntesis de proteínas, encontrándose que solo las de Pm de 25 kDa y 12.5 kDa poseen residuos tirosina fosforilados. Además la distribución subcelular en los timocitos de algunas de estas fosfoproteínas está notablemente influida por la actividad apoptótica, especialmente la de aquellas localizadas en las membranas y el citosol.

Autor: DOMINGO GARCIA DIEGO.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA II PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: Helicobacter pylori es un bacilo Gram negativo asociado a la producción de patología gastroduodenal como gastritis, úlcera gástrica y duodenal y cáncer gástrico. El microorganismo posee diferentes caracteres de virulencia como las enzimas ureasa, catalasa, factores de adherencia (gen iceA y hpaA) y factores relacionados con la producción de citotoxinas (gen cagA y vacA). El tratamiento de la infección consiste en la combinación de antimicrobianos y agentes que actúan modificando el pH gástrico. El objetivo de este trabajo fue estudiar diferentes características de aislamientos clínicos de H. pylori procedentes de distintas regiones de España (Ibiza, Madrid, Almería y Avilés). Se determinó la sensibilidad de las cepas frente a metronidazol, amoxicilina, claritromicina y tetraciclina. En un número de cepas resistentes a claritromicina se estudió, mediante reacción en cadena de la polimerasa (RCP) y posterior digestión enzimática, el mecanismo de resistencia frente al macrólido. Por otro lado se realizó la detección de los genes de virulencia cagA, vacA, hpaA e iceA mediante técnicas de biología molecular. No se encontró ninguna cepa resistente a amoxicilina ni a tetraciclina y las tasas de resistencia a claritromicina y metronidazol fueron superiores en la región de Madrid, probablemente por el tipo de población estudiada. El gen cagA se detectó en un alto porcentaje en todas las regiones y no se correlacionó con la producción de úlcera. El alelo sl del gen vacA fue el más predominante en todas las regiones. En cuanto a los genes iceA y hpaA las cepas de Ibiza fueron las que menor diversidad ofrecieron y no se encontró relación entre la producción de una patología con la existencia de un patrón determinado.

Autor: ENRIQUEZ DE SALAMANCA ALADRO AMALIA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I. PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La participación de la glándula adrenal en el shock endotóxico es un hecho evidente, ya que tratamientos como la adrenalectomía y la hipofisectomía, aumentan considerablemente la sensibilidad a la endotoxina (LPS). Los estudios realizados con células adrenocorticales (fasciculares-reticulares y glomerulosas) en cultivo, muestran que el LPS altera la funcionalidad de dichas células, inhibiendo su respuesta a las hormonas estimuladoras de la esteroidogénesis y se ha observado que existen diferencias en la acción inhibidora del LPS dependiendo de la hormona estimulante empleada, así como de la hormona esteroídica medida. El mecanismo por el que el LPS ejerce su acción comenzaría por su unión a la membrana plasmática de las células, modificando la unión del ACTH a sus receptores. La unión de la endotoxina a la membrana, altera la transducción de la señal del ACTH, disminuyendo la formación de AMPc y la esteroidogénesis. En los mecanismos iniciales de la acción endotóxica, pueden estar implicados la alteración de la homeostasis del calcio, así como la formación de especies reactivas de oxígeno. Cuando se tratan las células a largo plazo (cinco días) con LPS, se altera tanto la esteroidogénesis estimulada como la basal. Esto último podría estar relacionado con las modificaciones observadas en la ultraestructura de dichas células.

Autor: ESCRIBANO HERNANDEZ M. VICTORIA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: Como contribución al programa Europeo denominado BIOTECH II hemos determinado la secuencia de un fragmento de DNA perteneciente al brazo izquierdo del cromosoma VII de Saccharomyces cerevisiae. En el fragmento secuenciado se localizaron nueve fases abiertas de lectura. Dos correspondían a genes anteriormente descritos y las restantes eran de función desconocida. En la segunda parte del trabajo y dentro del programa Europeo EUROFAN I, se analizaron las ORFs YGL133w, YGL134w, YGL136c, YGL138c, YGL142c e YGL144c. A partir de estos estudios determinamos que el gen YGL142c está implicado en la síntesis del anclaje GPI. YGL136c codifica una posible metiltransferasa, la interrupción de YGL133w afecta a la capacidad de cruce en la cepa de tipo alfa, e YGL144c codifica una probable lipasa. Sobre los otros dos genes no obtuvimos ninguna indicación sobre su posible función en la levadura.

Autor: ESPINOSA MARTIN JUAN CARLOS.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En este trabajo se ha determinado la existencia de un fragmento de ADN de Streptomyces alboniger que incluye todos los genes necesarios para la producción de puromicina. Se ha determinado la transcripción del cluster pur como un transcrito policistrónico que abarca todos sus genes a excepción de pur8, que es monocistrónico. Se ha determinado la posible función de cada una de las proteínas que codifican los genes del cluster. Pur7 es una enzima 3'NH2dATP pirofosfohidrolasa. El gen pur5 es imprescindible para la expresión de pur como se ha demostrado por reemplazamiento y complementación génica. El aminoácido tirosina se incorpora como tal en la molécula de puromicina. Con todos los datos existentes se ha descrito una posible ruta de biosíntesis de puromicina. La expresión del cluster pur en S. lividans se encuentra regulada por el producto del gen bldA, por lo que probablemente sea un sistema de regulación en S. alboniger. La expresión de los genes que se encuentran en 5' del cluster pur está regulada por el producto de uno de ellos (TrgA) y aparentemente no interviene en la expresión de pur.

Autor: FERNANDEZ GALLEGOS M. ROSARIO .
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR (OPCION A).

Resumen: En esta tesis se ha estudiado por primera vez en profundidad la formaldehído deshidrogenasa dependiente de glutatión (FALDH) de Saccharomyces cerevisiae. La purificación y caracterización de la FALDH de esta levadura indica que se trata de un dímero formado por dos subunidades idénticas de aproximadamente 45 kDa. Este enzima es poco activo frente a etanol y es especialmente activo frente a S-hidroximetilglutatión (compuesto derivado de la reacción espontanea entre formaldehído y glutatión). Se ha clonado el gen que codifica la FALDH de esta levadura y se ha secuenciado parcialmente la proteína purificada estableciendo de esta manera la estructura primaria de la proteína. La deleción del gen que codifica la FALDH en levadura indica que la FALDH no es imprescindible para la vida celular. La sobreexpresión del gen que codifica la FALDH confiere a la levadura resistencia a formaldehído indicando que el papel principal de este enzima es proteger la célula de los efectos tóxicos del formaldehído. Mediante mutagénesis dirigida se han identificado los residuos que están implicados en las diferencias cinéticas observadas en esta tesis entre la FALDH de levadura y la de mamífero.

Autor: FERNANDEZ PERRINO FRANCISCO JOSE.
Año: 1997.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE ECOLOGIA, GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA DE MICROORGANISMOS Y DE PLANTAS.

Resumen: Como resultado del desarrollo de la presente Tesis Doctoral se ha determinado la importancia de los aminoácidos situados en las posiciones Gly-150 y Glu-258 de la isopenicilina N aciltransferasa (IAT) de Penicillium chrysogenum, la presencia de un distinto procesamiento entre las IAT de P. chrysogenum y A. nidulans, un comportamiento similar en cuanto a la producción de penicilina para la secuencia Ala-Asn-Ile del extremo C-terminal de la IAT de A. nidulans y para la secuencia Ala-Arg-Leu del extremo C-terminal de la proteína de P. chrysogenum, la ausencia de incremento en la producción de penicilina al amplificarse el gen penDE de P. chrysogenum bajo el control de un promotor más eficiente del metabolismo primario en cepas de dicho microorganismo con alta producción de antibiótico y la necesidad de la presencia de regiones de ADN físicamente próximas en el genoma para la expresión del gen penDE de P. chrysogenum.

Autor: FERRANDEZ BARCA ABEL.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: En los años recientes, la introducción de compuestos aromáticos antropogénicos en el medio ambiente, ha dado lugar a un progresivo deterioro del mismo. Las bacterias, ante este hecho, han respondido adaptándose a las nuevas circunstancias, desarrollando nuevas rutas catabólicas capaces de mineralizar estos compuestos. Escherichia coli, el organismo mejor caracterizado tanto a nivel genético como bioquímico, dispone de sistemas de degradación de compuestos aromáticos. Los derivados aromáticos metabolizantes por E. coli pueden agruparse en dos grupos como son: ácido fenilacético y derivados, ácido fenilpropiónico y derivados. Puesto que estos compuestos aromáticos se encuentran ampliamente disponibles en ambientes naturales (digestión aeróbica de aminoácidos aromáticos, productos derivados de la degradación de la lignina y otros constituyentes de plantas), no pueden considerarse compuestos xenobióticos, y es posible pensar que las rutas responsables de su degradación se encuentren más cerca del metabolismo central. Por lo tanto, el estudio de las rutas de degradación de compuestos en este microorganismo, puede suponer significativos avances en el entendimiento de rutas catabólicas para la mineralización de compuestos aromáticos xenobióticos como las presentes en bacterias de suelo, como aquellas del género Pseudomonas. Hasta la fecha, solamente ha sido descrita una ruta completa para la degradación de compuestos aromáticos en E. coli, la ruta hpa para la degradación del ácido 4-hidroxifenilacético. En esta memoria se recoge el trabajo realizado sobre el resto de rutas para degradación de compuestos aromáticos disponibles en este microorganismo, dando lugar a una visión global sobre su capacidad para mineralizar este tipo de compuestos, así como las posibles perspectivas de su empleo como agente de biorremediación y las relaciones que estas rutas presentan con aquellas para la degradación de derivados aromáticos recalcitrantes.