BIOQUIMICA MOLECULAR, 47

Autor: FLORES FLORES CESAR.
Año: 1997.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR -A PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR-A.

Resumen: La acetilcolinesterasa (AChE) de suero fetal bovino (SFB) -una forma molecular tetramérica (molécula G4s; "s" de secreción)- se purificó unas 90.000 veces por cromatografía de afinidad en matriz de edrofonio agarosa. La enzima purificada se caracterizó, determinándose su coeficiente de sedimentación y su masa molecular. Se corroboró la naturaleza serín-esterasa de AChE por el marcado del centro activo con el organofosforado (3H)-Diisopropilfluorofosfato. Además, se comprobó que de los 5 sitios potenciales de N-glicosilación de la AChE de SFB, cuatro al menos están glicosilados. Se demostró que tanto las interacciones hidrofóbicas como los enlaces disulfuro intervienen en la asociación de las subunidades que componen los tetrámeros de AChE. La transformación de las formas G4s hidrofílicas en moléculas G2 y G1 anfifílicas sugirió que el carácter anfifílico de la subunidad de AChE deriva de alguna región polipeptídica hidrofóbica, y no de un glicolípido o un ácido graso unidos a la proteína. Se realizaron estudios estructurales, demostrándose que la subunidad de AChE posee una conformación muy flexible, que puede ser fundamental para generar la serie completa de formas moleculares. Particularmente interesante fue la identificación de un estado de "glóbulo fundido", que podría representar un intermedio común para distintas alternativas de plegamiento. Por otro lado, se estableció que el epítopo para el anticuerpo AE-1, generado contra la AChE de eritrocito humano, consiste en un dominio conformacional de la enzima. En el caso de la AChE de otros orígenes distintos del eritrocito humano, se formarían inmunocomplejos estables a través de la unión del AE-1 con dos subunidades del mismo oligómero de AChE, lo que explicaría la ausencia de interacción entre el anticuerpo y los monómeros de la enzima de SFB, cerebro humano y músculo esquelético de conejo. Finalmente, se comprobó que la AChE de distintas fuentes no incorpora grupos fosfato tras la incubación con proteína quinasa A.

Autor: FRAGA LUIS GERARDO DE LA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: INGENIERIA INFORMATICA PROGRAMA DE DOCTORADO: INGENIERIA INFORMATICA.

Resumen: Se abarca el estudio y la realización de programas informáticos de las etapas de procesado de imagen involucradas en el proceso de la obtención y refinamiento de los parámetros de translación y orientación de imágenes de proyección bidimensionales. Este proceso es necesario para realizar la reconstrucción tridimensional, y además, mejorar la resolución de la misma. El estudio se divide en dos grandes grupos: las metodologías basadas en prototipo y las no basadas en un prototipo. Todos los programas desarrollados están disponibles en XMIPP (J. Strat. Biol. 116,1996) el software de uso público desarrollado por nuestro grupo de trabajo, para el procesado de datos de microscopía electrónica.

Autor: GADEA VACAS JOSE.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En una primera parte, se aisla y caracteriza el clon genómico correspondiente a PR1b1, un gen implicado en la respuesta defensiva de las plantas frente a infecciones patogénicas. Se analiza el patrón de expresión de dicho gen en plantas transgénicas, utilizando un gen marcador. Este gen se expresa en las cercanías de las lesiones creadas como consecuencia de la infección. En una segunda parte, se caracterizan los clones genómicos pertenecientes a dos genes de ascorbato peroxidasa, eliminadores intracelulares de H2O2. Se analiza el patrón de expresión en plantas transgénicas, y se realizan estudios referentes a la regulación de la expresión de dichos genes. En concreto, uno de ellos es regulado a través de un intrón situado en la secuencia genómica que confiere expresión constitutiva en hojas. Además, este gen presenta una característica inducibilidad por herida, regulada a nivel traduccional, que nos sugiere que estos detoxificadores pueden estar actuando eliminando el H2O2 que se produce ante situaciones defensivas de diversa índole.

Autor: GALIPIENSO TORREGROSA LUIS.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: Dentro del Programa Nacional de Mejora de Variedades de Cítricos llevado a cabo en el Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA) se detectó una nueva enfermedad transmisible por injeto en un kumquat Nagami (clon SRA-153). En este trabajo de tesis determinamos que el patógeno causante de esta enfermedad era transmisible a otras especies cítricas algunas de las cuales eran de interés económico, causando en éstas síntomas de incompatibilidad. También aislamos una partícula viral asociada a esta enfermedad y pusimos a punto métodos de laboratorio para la detección de la misma. Estos métodos estaban basados en la técnica de hibridación molecular y en la técnica de PCR precedida de una retrotranscripción, también llamada RT-PCR.

Autor: GAMEN SIERRA SUSANA.
Año: 1997.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La muerte celular programada (PCD) o apoptosis es una forma de muerte celular en la cual la célula contribuye activamente a su propia muerte. Las alteraciones en la apoptosis se asocian con diversas enfermedades (procesos autoinmunes, cáncer, enfermedades degenerativas...), de ahí que haya asumido una gran importancia el conocimiento de los mecanismos bioquímicos que conducen a la PCD. La apoptosis se caracteriza por una serie de cambios morfológicos que incluyen el encogimiento de la célula, la condensación de la cromatina y la posterior fragmentación del DNA y del núcleo. Diferentes estímulos pueden activarla: señales mortales (TNF, Fas ligando), falta de señales de supervivencia y daño al DNA. En este trabajo hemos estudiado el mecanismo de PCD inducida por proteínas de relevancia en el sistema inmune, como el TNF, el ligando de Fas y las proteínas perforina, granzimas y granulisina. Se ha analizado la implicación de los radicales libres oxigenados, las caspasas y la ceramida en la apoptosis inducida vía TNF y Fas. También se ha estudiado el mecanismo de muerte ejercido por drogas citotóxicas como la doxorrubicina y por una nueva proteína citotóxica, la granulisina. Además, se ha iniciado el análisis del mecanismo de protección de la apoptosis vía Fas efectuado por la proteína quinasa C. La implicación de radicales libres se ha evaluado utilizando inhibidores de la cadena de transporte electrónico mitocondrial y células carentes de DNA mitocondrial (células p). La utilización de diversos inhibidores peptídicos específicos de proteasas de la familia ICE ha permitido analizar su participación en diversos tipos de PCD. El papel de la ceramida se ha estimado mediante la incubación de las células con diversos tipos de ceramidas y tambieén mediante el análisis de los lípidos celulares. Además, se ha estudiado la apoptosis vía TNF y Fas en presencia de inhibidores de esfingomielinasas y tras la modificación del contenido celular en ceramida y esfingomielina. Los resultados obtenidos han confirmado que los radicales libres oxigenados no están implicados en la activación de la PCD. En todos los tipos de apoptosis analizados se ha comprobado la activa participación de las caspasas que, en el caso de la apoptosis vía Fas y la causada por doxorrubicina, controlan completamente la muerte de la célula. Por otro lado, la apoptosis puede tener lugar en ausencia de la generación de ceramida, que es una consecuencia de la actividad de las caspasas.

Autor: GARCIA GARCIA FERNANDO.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y MICROBIOLOGIA CLINICA.

Resumen: El VHG es un virus de origen humano, que se puede transmitir a través de derivados sanguíneos, que pertenece a la familia Flaviviridae y que es capaz de producir hepatitis. Los estudios sobre este virus han demostrado una alta tasa de coinfección con el VHC. En la tesis se encuentran resultados que establecen una asociación significativa entre estos dos virus, y se demuestra como factores del VHC influyen sobre el VHG limitando su patogenicidad y permitiendo una mejor respuesta al tratamiento por parte de este. Así mismo se analizan dos técnicas comerciales de biología molecular en distintos grupos de población y se avisa de la posibilidad de que estas técnicas se adapten en breve a los laboratorios de Microbiología clínica. Por último se emplea una técnica de Heterodúple Mobility Assay que hasta ahora no había sido usado en ningún caso en nuestro Pais para el estudio de la variabilidad genética no sólo de este virus, sino de otro de una gran importancia como es actualmente el VHG. En resumen la Tesis analiza desde todos los puntos de vista científicamente interesantes la detección de ARN del VHG en suero y células y su coinfección con el VHC.

Autor: GARCIA GARCIA M. BIBIAN.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: En este trabajo hemos identificado una serie de factores de crecimiento que estimulan la síntesis de DNA en preadipocitos marrones en cultivo, entre los que destacan el aFGF y el bFGF. El activador fisiológico del tejido adiposo marrón, la NE, no se comporta como un potente mitógeno por si solo, pero potencia el efecto de otros mitógenos como el EGF, la vasopresina, la endotelina-1 y el bFGF. Su efecto potenciador se reproduce con el agonista beta-adrenérgico isoproterenol, pero no está mediado por incrementos de cAMP. Los ésteres de forbol así como el ácido araquidónico son potentes mitógenos para estas células y su acción está mediada a través de la activación de la PKC. Las isoformas delta y epsilon de PKC parecen ser importantes para el estímulo mitogénico por estos agentes. Los factores de crecimiento aFGF y bFGF, no sólamente se muestran como potentes mitógenos sino que permiten la expresión del marcador de diferenciación de los adipocitos marrones, UCP. Al contrario, tanto el EGF como la vasopresina, son mitógenos que impiden la diferenciación termogénica de los adipocitos marrones. La T3 modula ambas acciones.

Autor: GARCIA GARCIA MIGUEL ANGEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Las variantes alélicas -491A y -427C del promotor del gen APOE están asociadas a un aumento en el riesgo de padecer la enfermedad de Alzheimer de tipo senil en la población española. Las variantes alélicas traen consigo variaciones en la actividad transcripcional del promotor en células de astrocitoma. Existe una correlación directa entre el riesgo de padecer la enfermedad y la actividad transcripcional de estas variantes. Hemos desarrollado un modelo matemático que permite estimar la prevalencia de la EA en función de la edad, del alelo APOE4 y tipo de promotor APOE. La proteína CBF-A se une a la región del polimorfismo -219. El cAMP y el ácido retinoico regulan el promotor APOE en células de astrocitoma a través del factor de transcripción AP-2. La fosforilación de la serina 239 del AP-2 por la PKA regula la actividad del factor en respuesta a un aumento intracelular de cAMP. La serina 258 del AP-2 es necesaria para la unión del factor al DNA y para ejercer su efecto estimulador de la transcripción. Los oncogenes SET y DEK interaccionan in vitro con el AP-2.

Autor: GARCIA GIL LUCIA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La descendencia de madres tratadas con delta-9-tetrahidrocannabinol (delta-9-THC) durante la gestación y la lactancia sufre alteraciones en la funcionalidad de distintos sistemas de neurotransmisión durante el desarrollo. Estas alteraciones parecen normalizarse cuando estos animales alcanzan la edad adulta, sin embargo, sospechamos que todavía persisten cambios irreversibles que, no siendo patentes en condiciones basales, sí podrían manifestarse en determinadas circunstancias como, por ejemplo, tras la administración de determinados compuestos que afecten a procesos clave de la neutransmisión de estos sistemas. En esta tesis doctoral hemos estudiado la posible existencia de estos cambios irreversibles producidos por el tratamiento perinatal con delta-9-THC en animales adultos. Concretamente, hemos estudiado la funcionalidad adulta del sistema dopaminérgico, GABAérgico y anandamidérgico, así como cambios en la vulnerabilidad a otras drogas de abuso derivados del tratamiento perinatal con delta-9-THC.

Autor: GARCIA LACOBA MARIO.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Están demostrados los efectos de la insulina (Ins) y el IGF-I como factores de crecimiento en la neurogénesis del SNC de muchos organismos. Estos factores ejercen su acción a través de receptores de membrana específicos. Durante el desarrollo de la retina neural (tejido representativo del SNC) del embrión de pollo, se ha detectado la expresión de los mRNAs de los receptores de Ins e IGF-I. En la neurorretina de E6 (proliferativa) la unión de IGF-I es 4 veces superior a la de Ins, que se une de manera atípica y que se corresponde con una subunidad alfa de 125KD de un receptor híbrido. En la retina de E12 (diferenciativa) la unión de Ins es típica y la proporción relativa de receptores híbridos es menor. En las dos retinas la unión de Ins a configuraciones monoméricas de los receptores es mayor que la de IGF-I. Además, estas formas heterogéneas son funcionalmente activas, manteniendo su capacidad de autofosforilación y su actividad tirosina quinasa frente a substratos exógenos (poli (E,Y)4:1 e IRS-I).

Autor: GARCIA MARTINEZ FERNANDO.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Los péptidos presentados por todos los subtipos de HLA-B27 estudiados, excepto B*2701, presentan un único motivo deanclaje de Arg2, aunque no puede descartarse la presentación minoritaria de péptidos con motivos de anclaje diferentes. La estructura de la subcavidad B de HLA-B27 estudiados, excepto B*2701, presentan un único motivo de anclaje de Arg2, aunque no puede descartarse la presentación minoritaria de péptidos con motivos de anclaje diferentes. La estructura de la subcavidad B de HLA-B27 determina la capacidad de unir óptimamente péptidos con Arg2. La modificación de la estructura de esta subcavidad disminuye la selectividad por este residuo y favorece la entrada de otros, en particular Gln. Los motivos peptídicos del subtipo B*2703 son similares a los de B*2705. En B*2703 la interacción de Arg2 con la subcavidad B es mas N-terminal con la subcavidad A es más débil que en B*2705. Estos datos son la asociación de B*2703 a la espondilitis anqulipoyética. El polimorfismo de B*2701, influye de forma directa en el motivo peptídico de anclaje en posición 2, permitiendo la unión in vivo de péptidos con Arg2 y Gln2. Este efecto es debido al residuo Y74. Existe una correlación entre la incapacidad del subtipo B*2706 de presentar péptidos con Tyr C-terminal y su no asociación con la EA. B*2701, 04, y 06 pero no B*2703, son capaces de unir in vivo un péptido de la propia molécula de HLA-B27 que comprende las posiciones 169-179, homologo a péptidos de enterobacterias. La presentación de este péptido no se correlaciona con la asociación de los subtipos a la EA. La disparidad antigénica del subtipo B*2710 con respecto a B*2705 no es debida a la presentación de péptidos muy diferentes ni a diferencias conformacionales de los péptidos unidos, sino a un efecto directo del cambio V152E sobre la interacción con el TCR.

Autor: GARCIA RATO AVELINA.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Resumen: La melatonina es una hormona producida por la glándula pineal que presenta acciones oncostáticas. Así, en tumores mamarios cuyo crecimiento es dependiente de estrógenos esta hormona presenta efectos Antiestrogénicos. El objetivo general de este trabajo ha sido determinar el mecanismo por el que esta Hormona ejerce estas acciones antiestrogénicas, utilizando como sistema experimental las células MCF-7. Receptor de estrógeno-positivas, que derivan de un carcinoma de mama humano. En estas células hemos Observado que la melatonina inhibe el efecto mitogénico de los estrógenos, asi como la expresión génica controlada por un elemento de respuesta a estrógenos. Por ello hemos estudiado de que modo la melatonina está interfiriendo con la vía de señalización mediada por el receptor nuclear de estrógenos. Nuestros resultados indican que este efecto inhibidor no se debe a que la hormona pineal impida la unión del estradiol al receptor de estrógenos, la fosforilación del receptor o la localización nuclear del mismo. Sin embargo la Melatonina está inhibiendo la unión del receptor de estrógenos al elemento de respuesta a estrógenos, produciendo una inestabilización de la unión del receptor al DNA. También disminuye la afinidad de una Proteína con una masa molecular de 110 kilodaltons al elemento de respuesta a estrógenos, que parece jugar un importante papel en la estabilidad de la unión del receptor de estrógenos al DNA.

Autor: GARCIA RODRIGUEZ FERNANDO MANUEL.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA VEGETAL PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA DEL CRECIMIENTO Y DESARROLLO EN PLANTAS SUPERIORES.

Resumen: Los genes nfe y daph se localizan en el plásmido críptico pRmeGR4b de Sinorhizobium meliloti GR4. Los primeros se han asociado a la mayor competitividad e infectividad que presenta esta cepa con respecto a otras que no los poseen. Durante la simbiosis los genes nfe se transcriben mayoritariamente de forma independiente, cada uno desde su propio promotor y no parecen regularse entre ellos. Su expresión coincide con la de los genes nifA,H y puede regularlos Nifa, mientras que la expresión de nfeD podría ser dependiente de otro activador transcripcional a su vez controlado por los niveles de oxígeno en el nódulo. El gen nfeA probablemente no codifica ninguna proteína, y su función puede ser asegurar unos niveles mínimos de transcripción de los otros genes nfe durante el establecimiento de la simbiosis con alfalfa, incluso antes de producirse la fijación de nitrógeno. Los productos de los genes nfeB y nfeD están presentes en el nódulo. Estos genes codifican proteínas de 36.500 y 34.000 d, que se localizan en el citoplasma y en la membrana de los bacteroides respectivamente. La mutación de los genes dapAh y dapBh del plásmido pRmeGR4b, provoca una disminución en la capacidad de formar nódulos a pH ácido. Los mutantes dapAh, además, pierden la capacidad de fijar nitrógeno, competitividad. De este modo y como otros genes encontrados en plásmidos no simbióticos parecen afectar el proceso de la simbiosis de manera indirecta.

Autor: GARCIA RODRIGUEZ PALOMA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: DEL DEPTO DE BIOQUIMICA/FACULTAD DE MEDICINA .

Resumen: Nuestro estudio se ha centrado en el análisis de proteínas reguladoras del ciclo celular que pudieran estar implicadas en la endo_replicación, proceso que consiste en la entrada en repetidas fases S en ausencia de mitosis, durante la diferenciación del megacariocito. Para este estudio hemos utilizado diferentes líneas celulares que presentan distinto grado de diferenciación hacia linaje megacariocítico. Los resultados que se presentan muestran que la endo_replicación va acompañada de una expresión mantenida de ciclinas A y E, así como un mantenimiento de los factores de G2/M (ciclina B y cdc2). Sin embargo, no se produce activación del complejo mitótico debido a una disminución de los niveles de la fosfatasa cdc25C, disminución que parece necesaria, aunque no suficiente, para la entrada en endo_replicación en estas células. Otra aportación a este trabajo lo supone el hecho de que la ciclina E parece estar implicada directamente en la entrada en ciclos de endo_replicación, y la función de la ciclina E parece basarse en una activación de la expresión de ciclina A, por efecto directo sobre su promotor. Finalmente, este estudio sugiere que la entrada en endo_replicación puede establecerse en células megacarioblásticas, y sin intervención de señal diferenciadora alguna, por conjunción de expresión mantenida de ciclina E y disminución de cdc25C, como hemos conseguido por silenciamiento de esta proteína.

Autor: GOMEZ HERNANDEZ NURIA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y B. MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: Utilizando los modelos viricos: virus fiebre aftosa y gastroenteritis porcina transmisible, se han empleado los genes VPI y glicoproteina S de los respectivos virus para transformar plantas y expresar proteinas, estudiando la respuesta inmune y propiedades antigénicas.

Autor: GOMEZ JIMENEZ M. CARMEN.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA VEGETAL PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA DEL DESARROLLO EN PLANTAS SUPERIORES.

Resumen: Se aisla un ADNc de cadena completa (caaco1) a partir de ARN de ejes embrionarios de semillas de garbanzo (Cicer arietinum L. var. Castellana). Este ADNc presenta una alta homología con ACC oxidasas de diferentes especies de plantas y su expresión heteróloga en E.coli induce una proteína de 38 kDa que es reconocida por un anticuerpo obtenido frente a la ACC oxidasa de manzana. Los extractos de bacterias que expresan dicha proteína presentan actividad ACC oxidasa in vitro. Por todo ellos podemos afirmar que caaco1 codifica a una ACC oxidasa de garbanzo. Se obtiene una IgG monoespecífica frente a la ACC oxidasa (38 kDa) y se utiliza para los experimentos de inmunolocalización en ejes embrionarios. Los resultados demuestran una doble ubicación de esta proteína: extracelular (apoplasto y pared celular) e intracelular (citosol), no encontrándose evidencias de una localización vacuolar. El abordaje del mecanismo de transporte de la ACC oxidasa a través del plasmalema está siendo diseñado. Se aisla, a partir de ARN de ejes embrionarios de semillas de garbanzo, un ADNc que codifica a una posible ACC sintasa. Este ADNc muestra una elevada homología con otras secuencias de ACC sintasa de plantas. Mediante análisis genómico se demuestra que la ACC oxidasa y ACC sintasa están representadas en Cicer arietinum por una familia multigénica. El transcrito para la ACC oxidasa no es específico de semillas ya que se ha encontrado en otros órganos de la planta siendo su nivel de expresión diferente. La mayor abundancia de ARNm se encuentra en tallos, hojas maduras y flores. Durante la embriogénesis zigótica de semillas de garbanzo se desencadena la producción de etileno, estando implicadas tanto la ACC sintasa como la ACC oxidasa. Sin embargo, el nivel de expresión de ambos genes permanece prácticamente inalterado a lo largo del proceso embriogénico, lo que sugiere que la inducción de ambas enzimas es a nivel post-transcripcional. Estos resultados son los primeros descritos y podrían sugerir una implicación del etileno en la embriogénesis de esta semilla. El nivel de expresión de la ACC oxidasa depende del programa de desarrollo de la semilla de garbanzo. Durante la embriogénesis, el transcrito aparece en los cotiledones y en el eje embrionario. Sin embargo, con el proceso de desecación de la semilla desaparece la actividad transcripcional en los cotiledones, manteniéndose esta ausencia durante el proceso germinativo. Se concluye que el cotiledón no participa en la producción del etileno desencadenante de la emergencia radicular de esta semilla. Durante la germinación de semillas de garbanzo se induce la producción de etileno en el eje embrionario, alcanzando el valor más alto cuando tiene lugar la emergencia radicular (24 horas). En este momento hay una acumulación de ACC y del ARNm de la ACC oxidasa, así como una máxima actividad de esta enzima la cual está regulada a nivel transcripcional durante la germinación. En los períodos posteriores a la emergencia radicular descienden todos estos parámetros debido a que la producción de etileno disminuye un 60% a las 72 horas. Sin embargo, esta disminución puede ser revertida y aumentada fuertemente en presencia de ácido indol acético (AIA), el cual provoca una acumulación del ARNm de la ACC oxidasa, sugiriendo que la expresión de este gen es inducible por auxinas. La comprensión y explicación a nivel molecular y fisiológico de todos los resultados obtenidos en esta Memoria con respecto a la ACC oxidasa de semillas de garbanzo pasan obligatoriamente por el estudio en profundidad de la expresión diferencial de los diferentes genes pertenecientes a la familia multigénica de esta enzima. Visto ésto, se habrá avanzado sustancialmente en el conocimiento de la regulación por etileno del programa de desarrollo de esta semilla de leguminosa.

Autor: GONZAGA FERNANDEZ LUZIMAR.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE CATALUÑA.
Centro de lectura: INGENIEROS INDUSTRIALES.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: ENGINYERIA QUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR ESTRUCTURAL.

Resumen: El DNA es flexible, puede curvarse, deformarse, y presentar conformaciones transicionales. Básicamente, la forma del DNA depende de dos factores: la secuencia de bases y las condiciones de su entorno. Con este trabajo se ha pretendido aportar nuevos datos sobre dos cuestiones planteadas a nivel de análisis estructural del DNA por cristalografía de rayos X: 1) la influencia de la secuencia del DNA, y 2) las condiciones de cristalización en la propia conformación de la molécula. El presente trabajo de tesis se ha centrado en la cristalización y en el estudio estructural mediante la técnica de difracción de rayos X de dos oligonucleótidos: el octámero d(pCpCpCpGpCpGpGpG)2 y el dodecámero d(CpGpCpCpCpGpCpGpGpGpCpG)2, con el objetivo de evaluar el efecto de la secuencia de bases, del empaquetamiento y del entorno en la conformación del DNA. Las secuencias de DNA estudiadas son ricas en CG. La determinación de estas estructuras contribuirá a un conocimiento más preciso del A-DNA: influencia de la secuencia, de las condiciones del entorno del DNA y la naturaleza de la interacción entre DNA y otras moléculas. Todo ello es básico para la comprensión de los fenómenos en los cuales el DNA está implicado. En primer lugar se ha efectuado un análisis de las diferentes condiciones que pueden ser utilizadas sistemáticamente para cristalizar una misma secuencia de bases en diferentes sistemas cristalinos. En segundo lugar se hizo un estudio de la influencia de la concentración de contra-iones en la cristalización y conformación de un mismo fragmento de DNA. Paralelamente se ha realizado un estudio de las condiciones de cristalización en presencia de la proteína 0. Todos los estudios de cristalización se han abordado de forma sistemática, probando diferentes precipitantes, diversos contraiones y diferentes condiciones de pH, a fin de evaluar la influencia de todos esos factores en el crecimiento de cristales del complejo entre el dodecámero CpGpCpCpCpGpCpGpGpGpCpG y la proteína FI0. Se ha realizado una caracterización de la variabilidad conformacional de la secuencia pCpCpCpGpCpGpGpG que fue cristalizada en 5 formas diferentes, con disminución progresiva del volumen de la celdilla unitaria. El CpGpCpCpCpGpCpGpGpGpCpG también fue cristalizado en formas diferentes. En todos los cristales estudiados los oligonucleótidos forman dúplex de A-DNA. El dodecámero presenta una curvatura excepcionalmente acusada en la parte central. Los octámeros no están tan curvados. El valor de las desviaciones atómicas RMS entre las 2 formas más distintas del octámero es de 1.7 A. Los parámetros de la hélice varían significativamente cuando se comparan las estructuras de los octámeros. En el octámero el giro promedio, por ejemplo, varia entre 33.5 y 35.7 , mientras en el dodecámero vale 29 . El valor elevado del giro hace que la anchura del surco mayor en el octámero más compacto sea muy pequeña (0.7 A). Este trabajo confirma que el mismo fragmento de A-DNA puede exhibir variabilidad estructural significativa cuando es cristalizado en distintas condiciones. Los resultados obtenidos son especialmente interesantes, pues permiten observar los cambios en los parámetros conformacionales de una misma secuencia en función de las condiciones de cristalización; es decir, observar la misma secuencia y secuencias relacionadas en un entorno distinto. Los parámetros estructurales, como curvatura y la separación de los grupos fosfatos en el surco mayor varía de manera casi continua cuando las condiciones de cristalización son modificadas. La observación que el A-DNA puede cerrar o abrir su surco mayor es una característica que podría tener implicaciones en las eventuales funciones biológicas del DNA en la forma A.

Autor: GONZALEZ FERNANDEZ FERNANDO.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En estudios in vitro realizados en nuestro laboratorio se observó que la expresión de la óxido nítrico sintasa inducible (NOSi), en cultivos de células del músculo liso incubadas con citoquinas, estaba disminuida en presencia de células endoteliales (CE). El objetivo de este estudio fue analizar la expresión de la NOSi en la pared arterial en la desendotelización in vivo. La denudación endotelial por balón (DE) se realizó en la carótida izquierda de ratas Wistar (6 ratas por cada experimento). La expresión de la NOSi se determinó por Western blot. La NOSi estaba ligeramente expresada a las 6,24 y 48 horas después de la DE, sin embargo, se observó una gran expresión de la NOSi a los 7, 14 y 30 días tras la DE. El siguiente objetivo fue analizar el papel de las plaquetas en la pequeña expresión de la NOSi, observada inmediatamente después de la DE. Ratas trombocitopénicas mostraron un aumento en la expresión de la NOSi, en los primeros momentos tras la DE (6 a 48 horas). El bloqueo de la glicoproteína IIb/IIIa (GP IIb/IIIa), por tratamiento con el anticuerpoabciximab aumentó al expresión de la NOSi en los primeros momentos tras la DE. Este resultado no se observó al usar una IgG no específica. No obstante, el aumento de NOSi encontrado en las ratas tratadas con abciximab fue menor que el obtenido en las ratas trombocitopénicas. La administración conjunta de un inhibidor de la gliceproteína Ib (GP Ib), el acido aurin-tricarboxílico (ATA) y abciximab, se encontró que aumentaba la expresión de la NOSi se expresa en la pared arterial varios días después de la DE mientras que inmediatamente después de la DE sólo se encuentra una ligera expresión de la NOSi. Las plaquetas, a través de un mecanismo dependiente de la GP IIb/IIIa y del GP Ib, juegan un papel importante en la disminución de la expresión de la NOSi después de la DE. Futuros estudios delimitarán la importancia de favorecer la capacidad de generar NO por la pared vascular en los primeros momentos tras la DE.

Autor: GONZALEZ GARCIA ANA M..
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La tirosina quinasa p56!ck desempeña un papel fundamental tanto en el desarrollo como en la funcionalidad de los linfocitos T. En este trabajo se describen dos nuevas funciones de esta proteína implicadas en el mantenimiento de la homeostasis del sistema inmune. En primer lugar, utilizando como modelo la linea celular Jurkat, se ha demostrado que p56!ck es necesaria para la inducción de apoptosis tras la estimulación del receptor clonal en células T activadas. Este proceso se encarga de mantener la tolerancia periférica y de limitar la expansión de la respuesta inmune. La tirosina p561ck participa en esta respuesta regulando la expresion del ligando de Fas. En segundo lugar, hemos establecido la implicación de p56!ck en la inducción de supervivencia a través del receptor de IL-2 de afinidad intermedia en linfocitos humanos en reposo aislados de sangre periférica. Se ha caracterizado, además, la vía de señalización iniciada por esta quinasa, determinándose la participación de la fosfatidilinositol 3 quinasa y de mediadores de la supervivencia celular como Bcl-x y Bcl-2. Estos resultados refuerzan la importancia de p56!ck en el sistema inmune, estableciendo la capacidad de esta molecula de regular diferentes respuestas biológicas actuando en conjunción con otras moléculas intracelulares.

Autor: GONZALEZ LECHUGA M. CARMEN.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La rata Zucker (fa/fa) es un modelo de obesidad genéticamente determinada. Estos animales presentan resistencia a la insulina, con hiperinsulinemia, glucemia normal o ligera hiperglucemia, hiperlipidemia, y una tolerancia a la glucosa anormal. La obesidad de estos animales comparte muchas similitudes con la obesidad observada en humanos que se acompaña de resistencia a insulina o NIDDM. En estas situaciones, se ha demostrado que la producción de glucosa hepática es menos sensible a la supresión por insulina y glucosa. En este trabajo hemos estudiado la modulación por insulina y por glucosa de la gluconeogénesis, la cual juega un papel fundamental en la producción de glucosa hepática, en hepatocitos aislados de ratas (fa/fa). También estudiamos la modulación de la vía gluconeogénica por sulfonilureas, así como su mecanismo de acción, en hepatocitos de estos animales. Estos agentes son hipoglucemiantes orales ampliamente usados en el tratamiento de la NIDDM, que se sabe inhiben la gluconeogénesis hepática por un mecanismo relacionado con el aumento en los niveles de hexosas 6-fosfato y F-2,6-P2, producido por la activación de la glucogenolisis por dichos agentes. Nuestros resultados muestran que los hepatocitos aislados de ratas (fa/fa) son resistentes a las acciones a corto plazo de la insulina, glucosa y sulfonilureas sobre la vía glucolítica/gluconeogénica. Teniendo en cuenta estos resultados, sorprende el hecho de que los hepatocitos de estos animales tengan más GK, PFK-1 y PK, mayor contenido de F-2,6-P2 y menor actividad PEPCK, lo que indicaría que sí hay una respuesta a la hiperinsulinemia In vivo. Nosotros postulamos que posiblemente en el hígado de la rata Zucker (fa/fa) se haya producido una adaptación de la vía glucolítica/gluconeogénica a la hiperinsulinemia presente en estos animales, en condiciones basales. Como consecuencia de esta adaptación, estos animales tienen mayor nivel de actividad PK y mayor contenido de F-2,6-P2, quedando el margen de actuación de la insulina, glucosa y sulfonilureas sobre estos parámetros disminuido. Y de la insulina, glucosa y sulfonilureas sobre estos parámetros disminuido. Y esto contribuiría a la resistencia observada a estos agentes en sus acciones a corto plazo sobre la vía gluconeogénica.