BIOQUIMICA MOLECULAR, 48

Autor: GONZALEZ MEANA M. VICTORIA.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Resumen: El carcinoma epidermoide de cabeza y cuello (HNSCC), una de las neoplasias más frecuentes en el mundo, se asocia etiológicamente al consumo de tabaco y alcohol. La tasa de supervivencia a los cinco años (50%) no ha variado en los últimos años. El establecimiento de un modelo genético que correlacione las alteraciones moleculares con las etapas del desarrollo del HNSCC podría contribuir a evaluar los pronósticos. Las regiones con frecuente pérdida alélica (LOH) reflejan la presencia de genes supresores de tumores (TSGs), que codifican proteínas capaces de inhibir la proliferación celular. El análisis de microsatélites en 40 pacientes de HNSCC reveló la existencia de varias regiones de LOH: 17p13 (58,1%), 9p21(61,3%), 3p (62,5%). El estudio de TSGs presentes en ellas, (PCR-SSCP, secuenciación directa, digestión con endonucleasas y Southern blot) reveló las siguientes alteraciones: mutaciones en p53 (7/40); deleciones en homocigosis de p16 (20%) y p15 (10%); hipermetilación de la isla 5'CpG de p16 (20%) y p15 (5%). Los genes FHIT (E5-6) y CTNNB1 (E3), eran normales en todos los casos. LOH-17p13 o LOH-9p21 se correlacionaban con el grado de diferenciación tumoral, lo cual sugiere la relevancia de los genes p53 y p16 en el desarrollo de estos tumores.

Autor: GONZALEZ PASTOR JOSE EDUARDO.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: La Microcina C7 (MccC7) es un antibiótico peptídico que inhibe la síntesis de proteínas. Su estructura consiste en un heptapéptido lineal cuyo grupo amino terminal está substituido por un grupo formilo, y el carboxilo terminal por el fosfodiéster del ácido 5'-adenílico y n-aminopropanol. Los determinantes genéticos implicados en la producción de MccC7 e inmunidad a la misma se encuentran en un segmento de DNA de 6,2 kb del plásmido pMccC7 de Escherichia coli. La secuenciación de este segmento ha confirmado la existencia de seis genes adyacentes. Los cinco genes mccA, B, C, D y E, son imprescindibles para la producción de MccC7 extracelular, y constituyen un operón, cuyo promotor, mccp, se ha localizado delante de mccA, mccC y mccE confieren además inmunidad. El sexto gen, mccF, adyacente a MccE, se transcribe en sentido contrario a los restantes, y codifica una proteína que, sin participar en la producción, confiere inmunidad. El gen mccA tiene tan sólo 21 pb, y codifica la parte heptapeptídica de la MccC7. Teniendo en cuenta el fenotipo de mutantes, los perfiles de hidrofobicidad de los productos génicos, y la similitud de secuencia con otras proteínas cuya función se conoce, se propone que los polipéptidos MccB y MccD están implicados en la maduración del heptapéptido MccA, MccC en la exportación de la microcina, y MccE en la modificación del blanco de acción, presumiblemente el ribosoma. La producción de MccC7 se induce al entrar las células en fase estacionaria, como consecuencia de la activación del promotor mccp. El complejo AMPc-CRP es indispensable para esta activación, y la subunidad s de la RNA polimerasa para la inducción óptima. Experimentos de "footprinting" con DNAsal, han demostrado la unión del complejo AMPc-CRP a la región de mccp, en la posición -59.5 respecto al origen de transcripción. La RNA polimerasa reconstituida con s, o con 70, el factor sigma vegetativo, puede iniciar in vitro la transcripción a partir de mccp. En ambos casos la transcripción es estimulada por el complejo AMPc-CRP. Concluimos que la transcripción del operón en fase estacionaria se debe esencialmente a la unión del complejo AMPc-CRP y de la RNA polimerasa con la subunidad s al promotor mccp.

Autor: GONZALEZ RAMON NIEVES.
Año: 1997.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: El suero de cerdo contiene una proteina de PM 120 K que se induce intensamente durante la fase aguda provocada por la inyección de trementina. Esta proteína, denominada pig MAP se ha aislado mediante: cromatografía de filtración en gel, cromatografía de afinidad en azul de Cibacron, e intercambio iónico en DEAE Sephadex A-50. Las secuencias parciales de aminoácidos de la proteína completa y de algunos de sus fragmentos de proteolisis mostraron homología moderada con las cadenas H del Inhibidor de tripsina inter-alfa (ITI). Pig MAP es homóloga de la proteína plasmática humana PK-120/IHRP recientemente clonada. Se han detectado proteínas homólogas a la pig MAP en los sueros de oveja, vaca y rata, especie en la cual también es una proteína de fase aguda. En el cerdo, durante la fase aguda provocada por trementina o por trauma quirurgico la concentración plasmática de pig MAP aumenta hasta 30 veces respecto del valor normal (0.5- 0.8 mg/ml). Aumentos comparables se han observado en modelos experimentales de patología porcina: infección con Actinobacillus pleuropneumoniae, por el virus de Aujezsky y otras. Asimismo se ha observado que pig MAP aumenta mucho en cerdos de campo con patologías agudas diversas: PRRS y otras patologías respiratorias, Aujezsky, meningitis estreptocócica, hembras con abortos, etc. En hepatocitos de cerdo aislados se ha demostrado que la pig MAP y la haptoglobina son proteínas de fase aguda inducibles por IL-6 siendo el efecto mayor para la pig MAP. IL-1 y TNF no producen efecto de inducción.

Autor: GONZALEZ SANCHO JOSE MANUEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Desde hace décadas existen numerosos estudios sobre la relación entre las hormonas tiroideas (triyodotironina o T3 y tiroxina o T4) y el cBancer de mama. En ellos, se ha intentado correlacionar el estado tiroideo y/o la disfunción de la glándula tiroidea con la aparición de este tipo de cáncer. Los resultados son muy contradictorios, habiéndose descrito tanto un efecto beneficioso como perjudicial del hipotiroidismo e hipertiroidismo. A pesar del evidente interés, no existe hasta el momento ningún estudio sobre la acción de T3/T4 sobre las células del epitelio de mama. Con el fin de comprender mejor los efectos de T3, de su receptor TR/c-ErbA y de su homólogo retroviral el producto del oncogén v-erbA hemos expresado exógenamente ambos genes erbA en una línea celular de epitelio de mama no transformada denominada EpH4. El análisis de la acción de T3 en las células EpH4 + TRalfa-1 revela que es capaz de estimular la expresión génica y la secreción de las metaloproteasas estromalisina-1 y -2. Además produce un incremento de la secreción de actividad gelatinolítica tipo IVB. T3 afecta también al fenotipo epitelial, disminuyendo la adhesión intercelular y afectando a la distribución polarizada de marcadores epiteliales en las células EpH4 + TRalfa-1. Asímismo, causa una destrucción de las estructuras tubulares tridimensionales que estas células forman en geles de colágeno. La proliferación de las células EpH4 + TRalfa-1 también es modulada por T3 a través de al menos dos mecanismos: la regulación de la maquinaria del ciclo celular mediante la inhibición de la expresión de ciclina D1 y el aumento de la del inhibidor p27Kip1 y, la reducción del crecimiento autocrino debido a la secreción de un factor de crecimiento de tipo EGTF/TGFalfa. El oncogén v-erbA, por su parte, no altera ni la proliferación ni el fenotipo de las células EpH4. Hemos estudiado también la regulación de la expresión del gen tenascina-C en las células EpH4. Este gen codifica una glicoproteína de matriz extracelular que es sobre-expresada en tumores de mama y en otros cánceres. La hormona tiroidea y también la 1,25-dihidroxivitamina D3 y los glucocorticoides son capaces de inhibir la expresión de este gen en diferentes líneas celulares de mama tanto normales como malignas. La acción de estas hormonas parece deberse a una regulación de la vida media del RNA mensajero de tenascina-C. Finalmente, hemos profundizado en el análisis de la interferencia transcripcional entre los receptores nucleares y el factor de transcripción AP-1 formado por dímeros de las familias Jun y Fos. Nuestros resultados indican que diversos receptores nucleares, incluído TR/c-ErBAalfa-1, activados por sus ligandos respectivos son capaces de interferir con la fosforilación amino-terminal de c-Jun y, por tanto, con la activación de AP-1 mediante el bloqueo de la vía de señalización de la quinasa amino-terminal de c-Jun (JNK). Los resultados presentados en esta Tesis demuestran claramente que T3 modula la biología y características de las células de epitelio de mama, hecho que podría ser relevante tanto durante la fisiología normal de la glándula como en procesos neoplásicos.

Autor: GRILLO DOLSET M. JESUS.
Año: 1997.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: VETERINARIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA, MEDICINA PREVENTIVA Y SALUD PUBLICA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA, MEDICINA PREVENTIVA Y SALUD PUBLICA.

Resumen: En la primera parte del presente trabajo hemos analizado la calidad de 18 vacunas Brucella melitensis Rev 1 y Brucella abortus B19 producidas en nuestro país, utilizando tanto los criterios microbiológicos habituales como el modelo murino de referencia. Todas las vacunas analizadas (excepto una B19 conteniendo un bajo número de bacterias viables) cumplían con las características microbiológicas de la Legislación española, pero tres vacunas Rev 1 y una vacuna B19 poseían una actividad biológica deficiente en el modelo murino de referencia. La interpretación estadística de los resultados obtenidos en este modelo biológico está basada en procedimientos gráfico-numéricos que presentan inconvenientes de orden práctico y no permiten establecer la existencia de una relación directa entre Virulencia Residual e Inmunogenicidad en todos los casos que se analizan. Por ello, hemos utilizado procedimientos informáticos más actuales para la determinación de ambos parámetros. Una modelización Probit usada para determinar la Virulencia Residual mostró resultados muy similares a los obtenidos con el procedimiento gráfico de referencia, pero simplificó su determinación. Sin embargo, cuando la comparación de los valores de Inmunogenicidad se realizó mediante una t de Student se obtuvieron resultados diferentes a los del procedimiento gráfico de referencia. Con estos procedimientos estadísticos alternativos, cuatro de las vacunas Rev 1 analizadas poseían una calidad biológica deficiente. Además, la utilización de estos procedimientos estadísticos alternativos puso en evidencia la existencia de una relación directa entre la pérdida de Virulencia Residual y la pérdida de Inmunogenicidad de las vacunas. Independientemente de los procedimientos estadísticos utilizados, el estudio realizado ha demostrado la existencia de una relación directa entre determinados parámetros microbiológicos y alteraciones en las propiedades biológicas de las vacunas. Concretamente, la disociación de la fase y tamaño coloniales en Rev 1 está asociada con una pérdida de su actividad biológica y la menor sensibilidad a la penicilina de las cepas vacunales está relacionada con un aumento de su Virulencia Residual. Por el contrario, el porcentaje de colonias resistentes al eritritol en las vacunas B19 no presenta ninguna relación con variaciones en su Virulencia Residual. En la segunda parte de esta Tesis hemos estudiado la relación existente entre determinadas características fenotípicas de Brucella y su virulencia en ratones. Para ello, hemos utilizado mutantes puntuales de Brucella abortus, obtenidos mediante técnicas de mutagénesis por transposición o recombinación génica. La producción de catalasa o ureasa y la capacidad para metabolizar el eritritol no están relacionadas con la virulencia de esta especie bacteriana. Sin embargo, los dos mutantes sensibles a la polimixina B estudiados presentaron una escasa o nula capacidad de multiplicación esplénica y se eliminaron rápidamente de la totalidad de los bazos de los ratones inoculados.

Autor: GUAL RUIZ DE CONEJO ARANZAZU.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En el trabajo presentado se lleva a cabo la caracterización de las dos subunidades que componen el enzima terminasa del bacteriófago SPP1 de Bacillus subtilis, su interacción con otras proteínas morfogenéticas y su efecto sobre ADN sustrato, a la vez que se ponen de manifiesto otras actividades asociadas a estas proteínas. Se demuestra que la subunidad menor de la terminasa, G1P, se une específicamente a secuencias comprendidas dentro del sitio pac y se caracteriza la unión a pacL, la parte del mismo que no se encapsida una vez que se ha producido el corte en el concatémero de genomas fágicos. Se ha identificado el dominio de oligomerización (la proteína G1P se comporta como decámero en solución) y lugares de unión a ADN, a G2P y a G6P (la proteína portal). La subunidad mayor, G2P, presenta actividad endonucleolítica, la cual, una vez que la proteína se une a G1P y a posibles factores que inducen cuvatura en el ADN, se hace específica de secuencia. G2P, además, posee actividad ATPasa que se ve potenciada en presencia de G1P y de G6P. Así pues, parece deducirse del trabajo que la terminasa actúa reconociendo la secuencia pac, corta el concatémero de ADN y lo introduce en la cápsida vacía con gasto de energía suministrada por la hidrólisis de ATP. En el proceso interviene G6P y algún factor que induce curvatura en el ADN. Cuando la procápsida está llena, se corta de nuevo el ADN, aunque en esta ocasión el corte es inespecífico de secuencia. Posteriormente se comenzaría un segundo ciclo de encapsidación a partir de este último extremo cortado.

Autor: HERNANDEZ PRESA MIGUEL ANGEL.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Las enfermedades cardiovasculares son una de las principales causas de muerte de nuestra sociedad. La formación y progresión de la placa aterosclerotica es un proceso en el que intervienen un gran numero de genes inflamatorios y que puede conducir a su rotura con la subsiguiente formacion de un trombo, originando este los eventos isquemicos mas graves. En esta tesis se muestran algunos de los factores que estan implicados en la formación y desestabilización de la lesion ateromatosa como el MCP-I, IL-8, PDGF-B, TNF, IL-I, colageno I. Tambien analizamos la actividad del factor nuclear kappa B implicado en la regulación de algunos de los factores anteriormente mencionados, en un modelo de aterosclerosis experimental en conejo. Hemos utilizado dos farmacos distintos que bloquean dos rutas muy distintas; por un lado la ruta de formación de la angiotensina, donde utilizamos un inhibidor de la enzima de conversion de la angiotensina (eca) y analizamos su contribucion a esta patologia. Por otro lado bloqueamos la principal enzima implicada en la ruta de biosintesis del colesterol, la HMG-COA reductasa, comprobando la influencia de los altos niveles de lipidos sobre la expresion de genes pro-inflamatorios. Los resultados mostrados en esta tesis ayudarian a explicar algunos de los efectos beneficiosos de los inhibidores de la eca y de la HMG-COA reductasa encontrados en muchos ensayos clinicos, al contribuir a la estabilizacion de la placa aterosclerotica.

Autor: HERNANDO SEBASTIAN RAQUEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Estudio sobre el efecto que tiene la realización del ejercicio agudo sobre la velocidad de síntesis y la expresión de las proteínas de estrés (proteínas de 70 kDa, 60kDa y HSP90) en dos tipos de músculo esquelético, músculo sóleo formado por fibras lentas y el músculo EDL, formado por fibras rápidas. Ambos músculos intervienen de manera diferente durante el ejercicio en carrera a ras de suelo, EDL no activo o poco activo y sóleo activo. Asi mismo la modulación por el entrenamiento y otros factores como el patrón de impulsos nerviosos que inervan a un músculo (Control nervioso) y el tratamiento con diferentes esteroides anabolizantes y agonistas beta 2 adrenérgicos (Control endocrino). Por último descripción y mecanismo de generación de las isoformas o variantes de carga para diferentes proteínas de estrés y su modificación por el ejercicio, entrenamiento, patrón de impulsos nerviosos y tratamientos hormonales (hormonas esteroídicas y agonistas beta 2 adrenérgicos).

Autor: HOYA MANTECON MIGUEL DE LA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se ha clonado el promotor del gen GHF 1 humano. Se extiende a lo largo de 1500 pb. Una región proximal de 250 pb está muy conservada respecto a los promotores de roedores. No hay regiones adicionales homologas. Se han identificado 14 sitios de autorregulación, un sitio mixto GHF1/OCT1 y un sitio mixto GHF1/AP1. Se ha determinado la existencia de sitios de autorregulación positiva y negativa. El sitio AP1 está implicado en la represión del promotor inducida por TPA.

Autor: HURLE BECHER BELEN.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL .

Resumen: El gen murino que codifica el receptor Tnfr2/p80 del Factor Necrosante de Tumores (Tnfr2) se extiende -35 kb en el genoma de ratón y consiste en 10 exones (de tamaños comprendidos entre 35 pb y 2.6 kb) y 9 intrones (de tamaños comprendidos entre 322 pb y -16 Kb). Todos los sitios donadores y aceptores del procesamiento de los intrones se ajustan a las secuencias consenso AG/GT. Los sitios del inicio de la transcripción y del final de la pauta de lectura se localizan en los exones 1 y 10 respectivamente. El gen Tnfr2 carece de caja TATA canónica y se transcribe a partir de un único sitio de inicio de la transcripción incluido en una secuencia que se ajusta al motivo consenso del iniciador (Inr) localizada 70 pb por encima del ATG que inicia la pauta abierta de lectura. Se ha identificado en la secuencia 5' flanqueante del gen una unidad compleja de integraciones de elementos SINES entre las posiciones (-5117) y (-3568) así como diversas secuencias consenso de unión a distintos factores de transcripción dentro de la primera kb, incluyendo sitios de unión para los factores Sp-1, STAT3, AP-2, INF- y NF-kB. Los análisis funcionales sugieren que la región -705/-412 contiene un elemento regulador negativo en cis e indican que la actividad transcripcional del promotor mínimo ensayado (156 pb) es inducible por el tratamiento con LPS. En todas las células murinas se coexpresan dos transcritos del Tnfr2 de tamaños 3,2 y 4,1 kb. Si bien no se encontraron diferencias de procesamiento alternativo de los exones codificantes, los estudios de hibridación y de amplificación del extremo 3' del gen sugieren que el transcrito más corto se procesa utilizando una secuencia de poliadenilación críptica alrededor de la posición 2734 en el extremo 3' no traducido. El análisis comparativo de los extremos 3' no traducidos del gen murino Tnfr2 y su homólogo humano TNFR2 muestra una alta divergencia entre sus respectivas estructuras.

Autor: IGLESIAS GONZALEZ JOAQUIN.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El fosfato es uno de los nutrientes más importantes para todos los seres vivos; sin embargo, es muy poco soluble en los suelos. Por ello, las plantas y otros organismos han desarrollado sistemas de respuesta a crecimiento en suelos con baja concentración de fosfato asimilable. Mediante estrategias basadas en la purificación y secuenciación parcial de proteínas, se ha identificado un clon de una ribonucleasa. Asimismo, mediante estrategias de hibridación diferencial se ha clonado un gen altamente inducible (AtPSI4), que codifica un ARN sin un marco de lectura abierto con un tamaño acorde con el transcrito y que podría actuar como un riborregulador y/o a través de un péptido de muy pequeño tamaño. El estudio de genes quiméricos por fusión traduccional de regiones promotoras de estos genes, con la región codificante del gen delator GUS, ha permitido obtener más datos sobre su patrón de expresión.

Autor: IZAGUIRRE ARRIBALZAGA NESKUTS.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA ANIMAL Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA ANIMAL Y EVOLUTIVA.

Resumen: En este trabajo se ha realizado la caracterización genéticade 3 poblaciones prehistóricas asentadas en el País Vasco, comprendidas entre el neolítico y Edad del bronce. A pesar del estado fragmentado del ADN recuperado y de la presencia de sustancias inhibidoras, se ha logrado analizar vía PCR 7 polimorfismos de restricción del ADNmt. Estos han permitido establecer la presencia, hace ya 5.000 años de la mayoría de los haplogrupos caucasoides. Sin embargo, la ausencia del hapogrupo V, ha creado una fructifera discusión sobre el origen y difusión de este haplogrupo. La escasez de datos sobre estos polimorfismos en población actual limita las posibles inferencias en torno al origen de la población vasca. Este trabajo constituye la base sobre la que se pueden fundamentar futuros análisis evolutivos y que nos permitirán trazar una imagen más real del origen y evolución de la diversidad biológica de los grupos humanos.

Autor: JIMENEZ LARA ANA M..
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: Las acciones de la vitamina D3, la triiodotironina y el ácido todo-trans retinoico están mediados por factores de transcripción dependientes de ligando, los denominados receptores nucleares. Estos regulan la transcripción de un gran número de genes, uniéndose a secuencias específicas en sus regiones reguladoras. Generalmente, estas secuencias están formadas por repeticiones del motivo PuGG/TTCA dispuestas en distinta orientación y separadas por un número de nucleótidos variable. En esta tesis hemos demostrado que la vitamina D3(VD3) es un potente antagonista de la actividad transcripcional de las hormonas tiroideas (T3) y el ácido todo-trans retinoico (atRA) en células GH4C1, de origen hipofisario, tanto en elementos de respuesta compuestos por palíndromes invertidos (TREpal) como en elementos compuestos por repeticiones directas. En estos últimos, la separación entre los dos motivos determina la actividad transactivadora o transregresora de VD3. El efecto inhibidor de VD3, también tiene lugar sobre la activación por ácido retinoico del promotor del gen RARB2 humano. Hemos demostrado que aunque el heterodímero RXR/VDR se une eficientemente al elemento presente en el promotor del gen RARB2 y al elemento TREpal, esta unión es improductiva desde el punto de vista transcripcional. Al contrario que RXR/RAR, el heterodimero RXR/VDR no presenta una polaridad definida en el elemento de respuesta presente en el promotor del gen RARB2(BRARE). Además, in vitro impide la unión de RXR/RAR y de RXR/TR probablemente debido a la formación de heterodímeros RAR/VDR y TR/VDR sin capacidad de transactivación y unión a estas secuencias. La expresión de E1A, una proteína viral que actúa como un co-activador en el promotor RARB2, revierte parcialmente el efecto inhibidor de VD3. Estos resultados sugieren que VD3, a través del heterodímero RXR/VDR, interfiere la transactivación por atRA, compitiendo con RXR/RAR por la unión a elementos de respuesta comunes, en los que no es capaz de transactivar, y por la unión a factores (co-activadores) que potencialmente podrían mediar la actividad transcripcional de ambos ligandos.

Autor: LABRADOR LOPEZ DE AZCONA JUAN PABLO.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La familia Eph de receptores tirosina quinasa han sido implicados en el desarrollo del sistema nervioso de vertebrados. Los receptores Eph se pueden dividir en dos subgrupos dependiendo de los ligandos que son capaces de unir. Con el fin de entender mejor las interacciones entre ligandos y receptores Mapeamos la región responsable de la unión del ligando en los receptores Eph. Utilizamos una serie de mutantes de delección y mutantes de sustitución y pudimos localizar el dominio de unión a ligando en un dominio globular situado en el extremo N-terminal del receptor EphB2 cuando interacciona con su ligando ephrina-B1. Con el ensayo de formación de focos de células transformadas fuimos capaces de demostrar que el dominio globular de EphB2 es capaz de conferir actividad transformadora en el receptor huerfano EphB5. Finalmente ampliamos nuestros estudios de unión a otros miembros de ambos subgrupos de especificidad y se hizo aparente la utilización del mismo dominio por todos los ligandos y receptores de la familia Eph.

Autor: LAFUENTE MONASTERIO M. JOSE .
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: Como contribución al proyecto de secuenciación del genoma de S. cerevisiae hemos determinado y analizado la secuencia nucleotídica de dos fragmentos de 15.5 y 10.6 Kb respectivamente. Dichos fragmentos estan localizados en el brazo izquierdo del cromosoma XV. El análisis de la secuencia reveló la presencia de 16 fases de lectura abierta que codificarian proteínas mayores de 100 aminoacidos, cuatro de ellas completamente internas. Se encontraron los genes SMF1, RP55A, RP28A, HRP1 y HXT11, el pseudogen YOL153c compuesto de una fase de lectura abierta interrumpida por dos codones de terminación en fase y las fases de lectura abierta YOL155c, YOL154w, YOL119c y YOL118c. El análisis fenotipico de estas cuatro últimas se ha realizado dentro del proyecto europeo de análisis funcional (EUROFAN). Se interrumpieron dichas fases de lectura abierta en las cepas diploides FY1679 y CENPK2 de S. cerevisiae. Se analizaron los haploides interrumpidos y los diploides homocigotos generados. En ninguna de las condiciones ensayadas se encontraron diferencias con respecto a las células silvestres. En el presente trabajo tambien se ha demostrado que DGT1-1 y BPC1-1 son alelos mutantes del gen silvestre MTH1 y se ha puesto de manifiesto mediante el sistema del doble híbrido la interaccion de Mth1p y Dgt1p con Snf3p. El defecto que presenta el mutante DGT1-1 en la expresión de los genes que codifican los transportadores de glucosa, puede deberse al bloqueo de la señal generada por el sensor de alta afinidad de glucosa Snf3p.

Autor: LAMELAS SUAREZ POLA M. LUZ.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Autor: LARGO CARAZO RAQUEL .
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La mayoría de las enfermedades renales crónicas progresan hasta la situación terminal independientemente del origen del daño. En los últimos años se ha descrito que la hipertensión arterial y la proteinuria mantenida son dos de los factores más importantes implicados en éste fenómeno. En esta tesis, en dos modelos experimentales de daño renal, se aborda la implicación de estos factores a través de un nexo común como es la síntesis de mediadores vasoactivos, la angiotesina II (Ang II) y la endotelina-1 (ET-1). En el modelo de hipertensión arterial se aportan datos que sugieren que la ET-1 puede ser uno de los péptidos relacionados con el sistema renia-angiotensina. Se observó un incremento en la expresión de ET-1 y de sus receptores FTA y FTB. La modulación de la enzima convertidora de la Ang II disminuyó dicha expresión. En el estudio de un modelo de proteinuria persistente inducido por sobrecarga proteica, se aportan datos que sugieren la activación del sistema renina angiotensina local. En este mismo modelo también se ha estudiado la activación del factor nuclearkappa B que regula la transcripción de muchos genes implicados en el daño tisular. Este factor podría participar en el daño renal inducido por la activación del sistema renina angiotensina en situaciones de protenuria intensa y mantenida, lo que constituiría un nuevo mecanismo de daño renal.

Autor: LARRUCEA BILBAO SUSANA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El Factor J (FJ) es un inhibidor del complemento que actúa sobre la vía clásica y la vía alternativa. Hemos demostrado mediante citometría de flujo que el FJ soluble interacciona con las líneas celulares Jurkat, K562 y JY y también con diferentes poblaciones leucocitarias. El FJ inmovilizado en placas de plástico es capaz de inducir la adhesión de estas células. La especificidad se demuestra mediante el bloqueo de esta interacción con un anticuerpo monoclonal anti-FJ y con el FJ soluble. La adhesión tiene lugar a 37 C. pero no a 4 C y es inhibida por la citocalasina B, el nocodazol y la 2-DO-glucosa y azida sódica. Los glicosaminoglicanos como la heparina, el heparán sulfato y los condroitín sulfato A, B y C inhiben la unión celular al FJ, así como el tratamiento con condroitinasa ABC. Hemos aislado el receptor del FJ por cromatografía de afinidad, cuya secuenciación lo ha identificado como la nucleolina. La interacción de la nucleolina purificada con el FJ se ha demostrado por ensayos de ELISA y ligand-blot. La nucleolina purificada y un anticuerpo monoclonal antinucleolina inhiben la interacción celular al FJ inmovilizado. El FJ es internalizado por las células tras incubación a 37 C. La unión de las células al FJ induce la fosforilación en tirosina de varias proteínas.

Autor: LOMBARDIA FERREIRA LUIS JOSE.
Año: 1997.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA AMBIENTAL.

Resumen: Esta memoria recoge el análisis de la regulación transcripcional de 103 ORFs de función desconocida de los cromosomas VII y XIV de Saccharomyces cerevisiae. Este trabajo se engloba en el Consorcio B2 del proyecto europeo EUROFAN: "Análisis de los niveles de RNA". Los niveles absolutos de expresión indican que un 3,9% de las ORFs son de alta expresión, 33% de expresión media y 46,6% de baja expresión. La regulación a nivel transcripcional del 67,2% de las ORFs cuantificadas resultó ser constitutiva. El resto de las ORFs se distribuyeron entre los diferentes tipos de regulación por fuente de carbono, nitrógeno, fase estacionaria, choque osmótico y choque térmico, siendo el grupo mayoritario las que presentan inducción por glucosa. En general la respuesta reguladora fue pequeña, con un factor de inducción o represión cercano a dos y sólo un 18,5% mostró respuestas cuantificables por un valor superior a 5. Sólo un 6% de las ORFs está implicada en la adaptación aerobiosis/anaerobiosis. Tras el análisis de los promotor "in silico" se comprobó que sólo un 10-30% de las ORFs presentan regulación concordante con la presencia de sitios de unión para factores transcripcionales específicos.

Autor: LOMBO BRUGOS FELIPE A. .
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Resumen: En la presente tesis se describe el aislamiento, a partir de la especie Streptomyces argillaceus ATCC 12956, de dos zonas del ADN implicadas en la biosíntesis del antitumoral mitramicina. -una región en la que un gen denominado mtmR codifica una proteína que actúa como un regulador positivo de la producción de mitramicina. -una segunda región en la que se han secuenciado otros dos genes, mtmD y mtmE, que codifican una dTDP-D-glucosa sintasa y una dTDP-D-glucosa 4,6-deshidratasa respectivamente, implicadas en la biosíntesis de los 2,6-dideoxiazúcares. La mutación en el gen mtmD ha posibilitado el aislamiento de una nueva molécula, denominada premitramicinona. Finalmente, utilizando los genes tcmH y tcmG, que codifican una monooxigenasa y una bioxigenasa de la ruta de biosíntesis de tetracenomicina C en Streptomyces glaucescens se ha logrado la modificación de la premitramicinona, obteniéndose premitramicinona H.