BIOQUIMICA MOLECULAR, 49

Autor: LOPEZ ALCOROCHO SANCHEZ JUAN MANUEL.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se ha desarrollado un método específico para la detección del virus B de la hepatitis (VBH) de tipo salvaje y de los mutantes en la región pre-core. Este método se aplicó para el análisis de la distribución de las variantes del VBH en la región pre-core en muestras de suero e hígado de pacientes no tratados y en muestras de suero de pacientes asintomáticos y de pacientes tratados con interferón (IFN) o con predniso-e IFN. La mayoría de los pacientes estaban infectados en suero y en hígado por la mezcla de tipo salvaje y mutante, existiendo una concordancia en la distribución en ambos compartimentos. Se ha demostrado que la presencia del mutante no está relacionada con un agravamiento de la enfermedad ni tampoco con una peor respuesta al IFN. En los pacientes tratados con prednisona e IFN, la proporción de mutante tiende a disminuir durante el tratamiento con prednisona, mientras que esta proporción tiende a aumentar durante el tratamiento con IFN.

Autor: LOPEZ DELGADO M. INES.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El objetivo de este trabajo ha sido estudiar el efecto directo del GLP-1t sobre el metabolismo hepático de la glucosa, en la Diabetes Mellitus. Para ello, se han utilizado hepatocitos aislados de ratas normales y tratadas con estreptozotocina -modelos de diabetes tipo 1 y 2-. Las aportaciones originales de este trabajo se pueden englobar en 4 apartados: 1. En el hepatocito aislado de la rata diabética tipo 1 y 2, el GLP-1t ejerce efectos insulinomiméticos sobre el metabolismo de la glucosa, estimulando la actividad glucógeno sintasa a, la síntesis de glucógeno, y la oxidación y utilización de glucosa, de forma similar que en ratas normales, si bien en las de tipo 1 la sensibilidad al péptido parece ser menor, y el número de receptores parece estar aumentado. 2. La activación de la glucógeno sintasa a hepática por GLP-1t es rápida, ocurre a dosis fisiológicas del péptido, y es dependiente de glucosa. 3. Un inositolfosfoglicano permite estar involucarado en el mecanismo de acción del GLP-1t en el hígado. 4. El hecho de que el GLP-1t mantenga sus efectos insulinomiméticos en el hígado de los dos tipos de diabetes experimental hace suponer la utilidad de este péptido como agente terapeútico no sólo en la diabetes tipo 2, sino también en colaboración con la insulina, en la de tipo 1.

Autor: LOPEZ GUERRERO JOSE ANTONIO.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA MOLECULAR Y EVOLUTIVA CODIGO: 194A.

Resumen: Se pretende esclarecer el significado biológico y oncológico de las alteraciones del gen supresor p53 en 102 pacientes con cáncer de pulmón (CP). En este sentido, se ha recogido que la pérdida de la actividad biológica de p53 es un acontecimiento que tiene lugar durante la progresión y desarrollo del CP humano. Además, la pérdida de la función de p53 como freno molecular de la división celular, incrementa los índices proliferativos de los tumores portadores de una mutación de p53, así como la inestabilidad cromosómica, confiriendo un fenotipo más agresivo. Por otra parte, el procedimiento molecular de los polimorfismos de conformación de cadena sencilla (PCCS) es más fidedigno para la detección indirecta de alteraciones de p53 que los métodos inmunológicos, ya que en muchos casos la detección de alteraciones del patrón de expresión de p53 pueden deberse a causas fisiológicas o a la sensibilidad del método de detección empleado, como lo sugieren los resultados de western blot que se relacionan con un comportamiento nativo de p53. Finalmente, el presente estudio recoge que el grupo de carcinomas epidermoides se caracteriza por ser menos agresivo y de mejor pronóstico que el grupo de los adenocarcinomas, más indiferenciados y de peor pronóstico.

Autor: LOPEZ LAGO MIGUEL ANGEL.
Año: 1997.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La activación de los linfocitos T a través del TCR está asociada, entre otros acontecimientos, con la hidrólisis de los fosfolípidos de inositol y la producción resultante de polifosfatos de inositol y diacilglicerol, los cuales regulan los niveles de calcio intracelular y la activación de PKC. El término PKC se refiere a una familia de serín-treonín proteín quinasas compuesta de al menos 11 isoformas. Estos isotipos son todos activados por fosfolípidos y, con notables excepciones, por diacilglicerol. Sin embargo estas difieren en gran medida en su sensibilidad al Ca2+. Aunque está bien establecido que las PKCs desempeñan un importante papel en la activación de estas células, se conoce muy poco acerca de las funciones de las distintas isoformas. Para explorar este aspecto, transfectamos la línea celular Jurkat con plásmidos que expresan fragmentos del ARNm de PKCalfa o PKCbeta en la orientación antisentido y determinamos los efectos de esta transfección sobre el proceso de activación. Los resultados preliminares mostraban que las poblaciones as-PKCalfa-pREP3 y que las poblaciones as-PKCbeta-pREP3 respondían de modo opuesto a la inducción de la expresión del IL-2R, lo que sugería que estas dos isoformas desempeñaban diferentes funciones en la activación de las células T. Sólo fuimos capaces, sin embargo, de demostrar la reducción de los niveles de PKCalfa en las poblaciones recombinantes as-PKCalfa-pREP3, de las que aislamos dos clones con una reducción significativa de los niveles del enzima. Los niveles de las isoformas PKC psi y lamda estaban también reducidos en estos dos clones, mientras que los niveles del resto de las isoformas permanecían inalterados. Por otra parte, los niveles del ARNm de PKCalfa en las líneas celulares mutantes para esta isoforma también eran deficitarios, lo que sugiere que la inhibición de la expresión de esta enzima podría producirse a través de un mecanismo dependiente de la RNasa H. Estos dos clones mostraban alteraciones en diversos aspectos de la activación. La inducción de la expresión del IL-2R, la activación del promotor de la IL-2 y la secreción del TNFalfa estaban significativamente desfavorecidos en estos dos clones en comparación con los clones control. Los datos obtenidos también demuestran que PKCalfa puede regular los factores de transcripción AP-1 y NF-AT pero no el NF-kB. Por otra parte, no hallamos evidencias que indiquen que PKCalfa conduzca las señales provenientes del PMA hacia las ERKs. Por último, las células mutantes experimentaban alteraciones de la morfología y manifestaban una menor capacidad proliferativa.

Autor: LOPEZ SOLANILLA EMILIA.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL .

Resumen: En este trabajo se han estudiado dos determinantes de la resistencia a péptidos antimicrobianos en dos bacterias fitopatógenas distintas. En R. solanacearum se ha comprobado que es necesaria una biosíntesis correcta de LPS de membrana externa para la resistencia a péptidos antimicrobianos. Los mutantes afectados en la biosíntesis de LPS resultan ser avirulentos en plantas de tabaco, posiblemente debido a la sensibilidad de estas cepas frente a compuestos tóxicos de la planta entre los que se encuentran los péptidos antimicrobianos. En E. chrysanthemi se ha identificado un sistema de detoxificación de péptidos antimicrobíanos denominado sistema SAP que está conservado en patógenos de animales. Este sistema, capaz de discernir entre distintos tipos de péptidos juega un papel central, en la virulencia de esta bacteria. Los datos obtenidos tras la obtención de una cepa mutada en este sistema apoyan el papel de los péptidos antimicrobianos como mecanismo de defensa de las plantas.

Autor: LUCCA OSORIO MARISOL DE.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Los Objetivos de esta memoria fueron estudiar las mutaciones causantes de PKU en la población latinoamericana, su origen y distribución, así como la caracterización de nuevas mutaciones encontradas en el gen de la PAH. Los resultados de este trabajo demuestran la alta heterogeneidad presente en Latinoamérica, que concuerda con la diversidad étnica existente. Este trabajo confirmó la utilidad del análisis de los polimorfismos intragénicos como marcadores para establecer el origen y distribución de las mutaciones durante la historia humana reciente. El estudio de estos polimorfismos reveló que todas las mutaciones encontradas excepto V388M, están sobre el mismo haplotipo que en poblaciones europeas sugiriendo un efecto fundador en regiones específicas de Europa y subsecuente expansión a América en varias oleadas de migraciones humanas. La mutación V388M, presenta en Chile 2 orígenes diferentes, uno europeo y otro posiblemente asiático o amerindio, generado por recurrencia. La utilización de la técnica de DGGE demostró ser el más eficaz para completar el estudio del espectro mutacional en Latinoamérica. Los estudios de expresión de la mutación S349L en sistemas Eucariotas y Procariotas demostraron que es una mutación causante de enfermedad, con actividad enzimática nula, probablemente debido a un efecto sobre la oligomerización de las subunidades de la PAH.

Autor: MACIAS GONZALEZ MANUEL.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: FISIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El objetivo principal de esta tesis ha sido la purificación y caracterización del receptor nuclear de la melatonina en hepatocitos de rata. Para ello se aislaron los núcleos y se investigó la localización nuclear de la melatonina en hepatocitos de rata, mediante técnicas de microscopía electrónica y citometría de flujo. En segundo lugar, se purificó el receptor de la melatonina principalmente mediante cromatografía de afinidad. Finalmente, se caracterizó el receptor nuclear de la melatonina mediante técnicas de autorradiografía, electroforesis e inmunotransferencia. La identificación del receptor nuclear de la melatonina se consiguió mediante el uso de ligandos específicos para éste. Por técnicas de inmunocitoquímica y citometría de flujo se demostró la presencia de melatonina en dichos núcleos. Durante el proceso de purificación del receptor se obtuvo el máximo rendimiento tratando el homogeneizado de núcleos con 25-65% de sulfato amónico, siendo esta fracción la utilizada en cromatografía afinidad. La caracterización de las proteínas purificadas determinó la presencia de dos proteínas que se unían especificamente a la melatonina de 64 y 74 kDa respectivamente.

Autor: MADRID GONZALEZ RICARDO.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL .

Resumen: En S. cerevisiae, la ausencia del transportador de alta afinidad para el potasio, codificado por el gen TRK1, da lugar a una levadura incapaz de crecer a concentraciones micromolares de K y a la aparición de un componente de baja afinidad para este catión, no observado en las células de tipo salvaje. La naturaleza de este componente cinético es discutida en esta memoria. Mediante la aplicación de técnicas de citometría de flujo, se ha logrado estimar diferencias en los potenciales de membrana en los diferentes mutantes trk-, demostrándose que elevados potenciales de membrana dirigen y median la entrada de baja afinidad del K, implicando a los transportadores TRK1 y TRK2 en el control del potencial eléctrico de la membrana de esta especie. La expresión heteróloga de los transportadores de K HAK1, de Schwanniomyces occidentalis, y HKT1 de trigo, complementan la deficiencia de K de las céculas trk1trk2 pero sólo HKT1 suprime las diferencias en el potencial de membrana. Es por lo tanto, posible, que un nuevo miembro de la familia TRK estuviera presente en S. occidentalis, cumpliendo el papel regulador del potencial de membrana que HAK1 no es capaz de completar en S. cerevisiae. Mediante técnicas de PCR y de hibridación en colonia se ha identificado el gen SoTRK1.

Autor: MANGOLD ATILIO J..
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PARASITOLOGIA I BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: 021A PARASITOLOGIA HUMANA Y ANIMAL.

Resumen: Las secuencias completas del gen 18S rARN de ocho especies de garrapatas europeas (B. annulatus, D. marginatus, H. punctata, H. lusitanicum, I. ricinus, R. bursa, R. pusillus y R. sanguineus) y las secuencias parciales del gen mitocondrial 16S rARN de las mismas especies, más R. turanicus, se obtuvieron mediante la técnica de secuencia cíclica directa de ADN amplificado por PCR. Las secuencias obtenidas se analizaron para evaluar la utilidad, que como marcador molecular, tenía cada gen, para utilizarlo en estudios taxonómicos y/o evolutivos de las garrapatas. Los resultados indicarían que el gen 18S rARN de las garrapatas sería un buen marcador molecular para estudiar las relaciones a nivel de las subfamilias y familias de garrapatas. Por el contrario el gen mitocondrial 16S rARN de las garrapatas sería un buen marcador molecular para el diagnóstico específico y para determinar las relaciones evolutivas entre taxones estrechamente relacionados.

Autor: MARAÑON LIZANA CONCEPCION .
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BASES MOLECULARES Y CELULARES DE LA PATOLOGIA DEL SISTEMA INMUNE.

Resumen: En este trabajo se ha abordado el estudio de los mensajeros procedentes de los genes H2A del parásito Trypanosoma cruzi, tanto a través de la caracterización molecular de dichos mensajeros, como en el estudio de su expresión regulada en los distintos estadios morfológicos del parásito, y su acoplamiento al estado replicativo de la célula, caracterizándose los diferentes puntos de control de estas expresiones diferenciales. En la segunda parte se ha procedido a la caracterización de la respuesta inmune inducida por la proteína de choque térmico HSP70 del parásito, estudiándose no sólo la respuesta humoral, sino también la respuesta linfoproliferativa y citotóxica, tanto frente a la proteína recombinante completa, como frente a sus determinantes antigénicos. Igualmente, se estudió el papel de la respuesta inmune frente a la proteína HSP70, tanto humoral como celular, en el modelo de infección experimental en ratones. De nuevo se estudió la respuesta frente a la proteína recombinante completa, así como frente a sus determinantes antigénicos.

Autor: MARTIN GORDILLO FERNANDO.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: 1. Se construyó una línea de empaquetamiento estable de vectores retrovirales con tropismo por células CD4+, mediante la quimereris de la proteína de la envuelta del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y las proteínas gag-pol del virus de la leucemia murina de ratón (MLV). Este sistema de empaquetamiento no funcionó debido a la exclusión estérica de la proteína de la envuelta de HIV de partículas de MLV, lo que las hacía no infectivas. 2. Se diseñó un sistema de empaquetamiento transitorio desprovisto de integrasa basado en MLV. Este sistema permite la formación de partículas virales recombinantes capaces de completar la retrotranscripción y entrada en el núcleo de la célula huésped. Esta situación es idónea para optimizar la interacción de los DNAS homólogos viral y celular. 3. Se diseñó un sistema de empaquetamiento transitorio basado en MLV para que las partículas virales producidas sean capaces de infectar células que no se dividen. Dicho sistema permite la formación de partículas virales infectivas que son capaces de transducir tanto células en crecimiento logarítmico como células activadas en reposo.

Autor: MARTINEZ ALEPUZ PAULA.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: 030 A BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: La levadura Saccharomyces cerevisiae es un eucariota unicelular utilizado como organismo modelo para el estudio de procesos biológicos. El trabajo presentado en esta Tesis consiste en la identificación y caracterización del gen MSN5 de S.c. Este gen fué clonado inicialmente como un supresor en multicopia de mutaciones termosensibles en el gen SNF1 que codifica una quinasa esencial para una correcta regulación de la expresión génica en función de la concentración de glucosa en el medio. MSN5 codifica una proteina de 1223 aminoácidos con una expresión elevada y aproximadamente constante en todas las condiciones estudiadas. Aunque el gen MSN5 no es esencial para el crecimiento en condiciones óptimas de la levadura, sí es necesario para el correcto funcionamiento de las rutas de señalización que deben activarse en respuesta a algunas circunstancias: frente al estrés producido por la ausencia de fuente de carbono, altas concentraciones de Ca2+,Na+, Li+,Mn2+,OH-, o altas y bajas temperaturas, y frente a la presencia de feromonas sexuales en el medio. Diversas interacciones genéticas también sugieren que MSN5 puede intervenir en la regulación del ciclo celular. Estos resultados nos llevan a proponer que Msn5p realice algún proceso celular básico común a todas las condiciones estudiadas.

Autor: MARTINEZ ARENAS JESSICA ISABEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se logró desarrollar un protocolo para introducir ADN en Streptomyces alboniger. Esto permitió analizar la función de dos de los genes que participan en la ruta de biosíntesis de puromicina en el propio organismo productor. El análisis de la función de los genes napH y pur8 se realizó gracias a la obtención de mutantes por deleción génica. Se obtuvieron mutantes simples y dobles en napH y pur8. Con los resultados que se tienen hasta el momento se puede inferir que la deleción de los primeros siete dominios transmembrana de pur8 afecta la función de conferir resistencia a puromicina en el organismo productor. Con respecto a napH se determinó que la deleción de este gen afecta la expresión de los restantes genes de la ruta incluyendo pur8 que está codificado en un transcrito monocistrónico y que se transcribe en forma independiente de los genes de biosíntesis. Lo que implica que de alguna manera existe una regulación de la expresión ya sea por que napH o bien alguno de los intermediarios de la ruta desencadena una señal que controla la expresión de la ruta.

Autor: MARTINEZ GARCIA M. PILAR .
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La expresión del receptor de neurotrofinas trkB está regulada por la hormona tiroidea (T3) durante el desarrollo del cerebro de rata. Los niveles de ARNm aumentan en la corteza cerebral en animales con hipotiroidismo neonatal inducido. Mediante ensayos de transcripción "in vitro" con cortezas de animales hipotiroideos y controles de día 15 postnatal (P15), han demostrado que la regulación por T3 de trkB es a nivel transcripcional. Posteriormente, se analizaron 7 Kb de la región 5'flanqueante del gen murino trkB. Mediante ensayos de transfección transitoria, la actividad del fragmento de 7 Kb unido al gen testigo CAT aumentó en presencia del receptor de la hormona tiroidea en ausencia de T3, mientras que la adición de T3 produjo represión. La transfección de diferentes deleciones de la región promotora de trkB demostraron la presencia de dos promotores alternativos. En el extremo más 3', el promotor 2 se localiza en un intrón. En la proximidad de este promotor se ha localizado medios sitios de respuesta al receptor de T3 (T3RE), que unen el receptor en ensayos EMSA (in vitro) y que es responsable de la bajada de la expresión del gen en presencia de T3. El análisis de secuencia a localizado elementos CRE y de la familia de homeoproteínas POU.

Autor: MARTINEZ MERINO ANTONIO.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL .

Resumen: Introducción: El Pepsinógeno C es una aspartil-proteinasa sintetizada principalmente por la mucosa gástrica. Sin embargo está presente en un 30% de los carcinomas de mama en donde, además, andrógenos glucocorticoides y progestágenos regulan su expresión. Objetivos: Realizar un extenso análisis inmunohistoquímico de la expresión del Pepsinógeno C en carcinomas humanos y su relación con diversas características morfológicas de los tumores y el estado de los receptores de andrógenos. Material y métodos: Se examina mediante el método inmunohistoquímico de biotina-estreptavidina, la capacidad de producir Pepsinógeno C en una amplia variedad de carcinomas humanos en relación a sus características morfológicas, así como el estado de los receptores de andrógenos por el mismo método. Resultados: De 312 tumores, 109(34,9%) mostraron tinción positiva para el Pepsinógeno C. Esto ocurrió en los gástricos, pancreáticos, renales, prostáticos, vesicales, endometriales, ováricos y melanomas. No mostraron tinción positiva los colo-rectales, de cervix uterino, pulmón o basocelulares. La expresión de Pepsinógeno C estuvo asociada con una buena diferenciación histológica en los de estómago, próstata, mama de varón y endometrio. Se encontró tinción positiva para receptores de andrógenos en carcinomas de mama, endometrio, ovario, próstata y melanomas. No se encontró relación significativa entre la expresión de Pepsinógeno C y los receptores de andrógenos. Conclusiones: El Pepsinógeno C puede ser expresado por una gran variedad de carcinomas. Su expresión se asocia con características de menor agresividad y puede estar relacionada con posibles alteraciones hormonales asociadas con el desarrollo tumoral.

Autor: MARTINEZ PASTOR M. TERESA.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA I BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: 030 A.

Resumen: Los genes MSN2 y MSN4 de Saccharomyces cerevisiae fueron aislados como supresores en multicopia de Snf1p, quinasa implicada en la desrepresión de genes reprimidos por catabolito. MSN2 y MSN4 codifican proteínas con dos dedos de cinc en su extremo carboxilo terminal, motivo típico de unión a DNA. En este trabajo se demuestra que MSN2 y MSN4 desempeñan un papel importante en la respuesta a estrés de levadura. La doble mutación de estos genes produce un fenotipo de sensibilidad general al estrés. Su sobre-expresión confiere a las células mayor capacidad de resistencia a situaciones de estrés. El defecto de resistencia del doble mutante msn2 msn4 se debe a la expresión defectuosa de diversos genes de respuesta a estrés. Estos genes están regulados por la unión directa de Msn2p y Msn4p a los elementos STRE presentes en los promotores de los mismos. Msn2p y Msn4p se unen in vitro e in vivo a la secuencia STRE, que regula la respuesta a múltiples estreses. Por ello proponemos que Msn2p y Msn4p son los factores transcripcionales que regulan este elemento.

Autor: MAS LOPEZ ANTONIO.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se analizaron variables virologicas (carga viral, parametros de cultivo viral) y factores del huesped (linfocitos T CD4+, polimorfismo en el gen CCR5) y su posible asociacion a una progresion mas rapida o lenta de la infeccion por VIH-1. Se observo una relacion entre carga viral elevada y progresion mas rapida. Tambien entre presencia de una delecion del gen CCR5 en heterozigosis y progresion mas lenta (en adultos y niños), pero no entre delecion y tasa de infeccion vertical (madre a hijo). Se observaron alteraciones en el genoma del VIH-1 en la region Nef-LTR, unicamente en pacientes progresores lentos. Se describen las caracteristicas serologicas y virologicas (secuencias de aminoacidos) de cuatro pacientes infectados por VIH-1 grupo o, un grupo del VIH-1 muy divergente respecto al grupo M que es el mas comun. Se analizaron secuencias de las regiones C2V3, gp41 y dominio polimerasa de la RT de los cuatro pacientes, siendo uno de ellos un progresor rapido. Se analiza genotipo si y aparicion de resistencias a TTO.

Autor: MIRANDA GARCIA ISABEL.
Año: 1997.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIRUGIA GENERAL PROGRAMA DE DOCTORADO: CIRUGIA.

Resumen: En este trabajo se estudia la eficacia de la transducción de un adenovirus suicida en cultivos celulares y tumores sólidos (carcinoma epidemoide) y el efecto terapéutico antitumoral que se obtiene al administrar Ganciclovir. En la primera fase de estudios in vitro se valoró el grado de transducción de tres líneas celulares humanas provenientes de carcinomas epidemoides de cabeza y cuello por el adenovirus recombinante AdCMV1acZ. Posteriormente se valoró la eliminación tumoral en cultivos celulares después de ser infectados por el adenovirus suicida AdCMVtk y recibir posteriormente tratamiento con Ganciclovir. En la 2a fase o de experimentos in vivo, se utilizó un modelo animal de carcinoma epidemoide de cabeza y cuello utilizando ratones desnudos. Después de transcurrir 10 días de la inyección subcutánea de células tumorales se inyectó AdCMVtk o AdCMVlacZ, según fuera el grupo tratado o grupo control. Transcurridas 48 horas, se trató con Ganciclovir y al 19o día se sacrificaron los animales, se extirparon las masas tumorales y se midieron y procesaron histológicamente. Como conclusiones, cabe señalar la eficacia del vector utilizado para transducir las células tumorales empleadas, así como la eficacia del tratamiento con Ganciclovir, tanto en cultivos celulares como en el modelo animal utilizado. Asimismo, se determina el método estereológico de Caballieri como método válido y preciso para valorar la respuesta en los diferentes experimentos.

Autor: MOHAMED RABEE ASHHAB YAQOUB.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CEL.LULAR I FISIOLOGIA, UNITATA D'IMMUNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELLULAR .

Resumen: Las Quimiocinas son una familia de pequeñas citocinas secretadas con capacidades reguladora y de quimiotaxis sobre leucocitos hacia lugares de inflamación. Se clasifican en cuatro subfamilias de acuerdo a la posición relativa de sus dos primeras cisteínas: CXC o alfa, CC o beta, C o gamma y CX3C o delta. La expresión de estas proteínas se encuentra aumentada en diversas situaciones definidas por infiltraciones linfocíticas. Por su parte, las enfermedades autoinmunitarias se caracterizan por un reclutamiento de monocitos y de diversos subtipos de linfocitos a los sitios de inflamación. Esta migración parece estar regulada por señales quimiotácticas producidas localmente, tales como las quimiocinas. El propósito de este trabajo ha sido el estudio de las quimiocinas beta en glándulas tiroideas de pacientes afectados por enfermedades tiroideas autoinmunitarias (AITD): 1) búsqueda de nuevas quimiocinas que pudieran expresarse en glándulas infiltradas por leucocitos y 2) la determinación del perfil de expresión de distintos miembros de esta subfamilia. Para lograr estos objetivos se emplearon técnicas de PCR con iniciadores de secuencia degenerada dirigidos a secuencias conservadas entre estas citocinas. Entre los resultados se encuentran dos nuevas mutaciones puntuales: 1) T230 a C, (silente) en el gene MCP-1, detectada en una muestra tiroidea de un paciente con la enfermedad de Graves, 2) G159 a T, en el gene RANTES, que ocasionaría a nivel proteico el cambio Ala45 a Ser, detectada en un clon de células T obtenido de otro tiroides con Graves. Entre los resultados también se encuentra una nueva variante truncada de MIP-1beta cuyo ADNc presenta una delección de los primeros 15 pb del exón 3. La delección de los cinco aminoácidos correspondientes, desde Phe65 hasta Arg69, afectaría a la estructura de hoja beta del MIP-1beta y podría tener importantes consecuencias funcionales. A nivel génico se ha encontrado una mutación que explica la aparición de la variante truncada por la utilización de una señal críptica de escisión intrónica. El dinucleótido invariante AG del sitio receptor en la escisión del intrón 2 aparece sustituido por el GG, en un segundo locus poco estudiado de MIP-1beta. Esta mutación se ha detectado en una proporción importante (30%) de una muestra de individuos, tanto en heterocigosis como en homocigosis, sin encontrar asociación con enfermedad. Este segundo locus de MIP-1beta es funcional y tiene un nivel de expresión reducido (25%) respecto al del locus descrito inicialmente. Su alelo normal, sin alteraciones de escisión intrónica, codifica una proteína idéntica a la del primer locus salvo por el cambio Gly70Ser. Se predice que esta isoforma tiene propiedades estructurales diferenciales. En cuanto al segundo objetivo, se ha desarrollado y aplicado un método original que permite determinar la expresión relativa de las distintas quimiocinas beta en un tubo de reacción único. Se ha determinado el perfil de expresión de MIP-1alfa, MIP-1beta, MCP-1, MCP-3 y RANTES en tiroides de pacientes con Graves (GD) y de pacientes con bocio multinodular (MNG). Los tejidos con GD expresan más MIP-1alfa (p=0,017) y MIP-1beta (p=0,002) que los MNG. También se detecta mayor expresión de MCP-1 y de RANTES en GD, aunque sin diferencias estadísticamente significativas. No se detectó MCP-3 en ningún tiroides. Los resultados sugieren una implicación de MIP-1alfa y MIP-1beta, conocidos quimioatrayentes de células T CD8+ y CD4+, en el desarrollo y/o mantenimiento de los procesos autoinmunitarios como la GD. No se puede descartar una contribución de RANTES o de MCP-1 sin realizar un estudio más amplio. Se ha encontrado una fuerte correlación en la expresión de MIP-1a y MIP-1b (p

Autor: MOLINA MORENO JOSE MIGUEL.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA .
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: 275 A.

Resumen: En este trabajo se ha estudiado la proporción de las batalactamasas plasmídicas TEM-1, TEM-2, y ROB-1 presentes en 177 cepas de Haemophilus influenzae recogidas en el Servicio de Microbiologia del Hospital la FE de Valencia. Basamos el estudio en técnicas moleculares (PCR, FRLPs, y secuenciación de ácidos nucleicos) comparando los resultados obtenidos con los de las técnicas microbiológicas clásicas (prueba del nitrocefin, y estudio de CMI para los antibióticos ampicilina, coamoxiclav, cefaclor y loracarbe). Durante el estudio apareció un gen mutante derivado de blaTEM-1UN 37,2% portaba alguno de los siguientes genes de resistencia : blaTEM-1(41,5%), blaTEM-1(mutante), (46,2%) y blaTEM-2(12,3%).Un 24,6% de estas cepas portadoras de gen blaTEM dieron negativo a la prueba del nitrocefin, correspondiento el 62,5% a (TEM-1/TEM-2) Y EL 37,5% al mutado. Esto indica que las cepas con la mutación son más expresivas, y por tanto más resistentes. Para confirmar esta hipótesis se estudiaron estadísticas las CMLs de todas las cepas resistentes genotípica y/o fenotipicamente. Al comparar el mutante con TEM-1 se observa no hay diferencias significativas para la ampicilina ni para el coamoxiclav, pero si para cefaclor y loracarbef, siendo las CMIs del mutado superior que las de TEM-1. Cuando comparamos el mutante con TEM-2 no hay diferencias significativas. Con respecto a la otra beta-lactamasa ogjeto de estudio, ROB-1 hicimos un estudio paralelo. ROB-1 aparecia en el 3,9% del total de las cepas y en el 9,7% de los positivos. Al comparar con los otros grupos resistentes observamos que hay diferencias significativas para todos los antibióticos excepto para el coamoxiclav siendo las CMIs muy superiores para las cepas ROB-1 Un 8,8% de cepas fue positivo al nitrocefin no presenta ninguno de los genes de resistencia estudiados (P.C.R. negativa), esa resisntecia se debe a otro gen distinto a los estudiados.