BIOQUIMICA MOLECULAR, 51

Autor: PRECIADO LOPEZ MIGUEL ANGEL.
Año: 1997.
Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PRODUCCION AGRARIA PROGRAMA DE DOCTORADO: PRODUCCION AGRARIA.

Resumen: Se han analizado los genes p53 y p16 CDKN2 en 147 pacientes con tumor de vejiga y el grado de ploidía cromosómica en 75 de esos pacientes. EL gen p53 se ha estudiado mediante PCR-SSCP y en un subgrupo de 42 pacientes se ha analizado el nivel de expresión de la proteína p53. El gen p16 CDKN2 también se ha estudiado mediante PCR-SSCP y además se ha analizado el estado de metilación de so promtor. Se ha hecho PCR-SSCP múltiple de los exones 5-9 de p53 en una reacción y en otra la secuencia codificante de p16. Se ha encontrado que las mutaciones de p53 tienen una relación directa con la progresión tumoral e inversa con el tiempo de recurrencia y supervivencia. Las alteraciones de p53 no aportan mejor pronóstico que el estadio. Las mutaciones puntuales de p16 no están asociadas con el tumor de vejiga. La metilación de p16 parece asociarse con un menor tiempo de progresión y de supervivencia. El grado de ploidiía tiene una implicación directa con la recurrencia y la progresión tumoral. De los modelos de predicción, sólo el que predice los pacientes éxitus tendría utilidad clínica.

Autor: PUJADAS ANGUIANO GERARD.
Año: 1997.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA I BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA INDUSTRIAL.

Resumen: El trabajo realizado ha permitido identificar ocho zonas conservadas en la secuencia de la beta- amilasa. Estas secuencias estan relacionadas con la función y con el mantenimiento de la estructura de la enzina ademas de ha identificado un cambio conformacional, que afecta a la parte final de la tira-beta 6 (341 FTC 343). Este cambio conformacional está estrechamente relacionado con la actividad enzimática.

Autor: RAMIL TOJEIRO ELVIRA.
Año: 1997.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA AMBIENTAL.

Resumen: El análisis funcional del promotor del gen K1CYC1 que codifica para el gen citocromo c de la levadura Kluyveromyces lactis abarca el estudio de la región de 868 pb en dirección 5' respecto al ATG y capaz de sobreexpresar genes de baja expresión como CYC7 de S. cerevisiae. El análisis de deleciones internas y unidireccionales del promotor fusionado a lacZ ha permitido caracterizar varias regiones reguladoras multifuncionales entre las posiciones -868 y -477 que incluyen consensos para Abfl y Cpf1. Los estudios de interacción DNA-proteína han permitido caracterizar la presencia de factores que se unen específicamente al consenso para Cpf1. En la región que abarca -475--338 aparecen elementos activadores que no corresponden a consensos previamente descritos, y en los que la unión del factor es independiente de oxígeno, hemo y fuente de carbono. Los consensos con UAS1A y UAS1B en las posiciones -306 y -259 se corresponden con una región activadora en la que se ha demostrado la unión específica de la proteína Hap1p de S. cerevisiae; sin embargo, no se ha observado la unión de factores de K. lactis. El consenso con UAS2 en posición -207 carece de efecto sobre el promotor de K1CYC1.

Autor: RAMIREZ ARCOS SANDRA MARITZA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Hemos clonado y secuenciado el operón nar de T. thermophilus HB8 que codifica una nitrato reductasa respiratoria de membrana que le permite a esta bacteria crecer en anaerobiosis total en presencia de nitrato y por lo tanto no puede seguir siendo considerada como aerobia estricta sino como anaerobia facultativa. Esta nitrato reductasa es termófila y se induce por nitrato y en baja presión parcial de oxígeno; además es una enzima cepa específica que se transfiere por conjugación a la cepa HB27 por un mecanismo similar al de las cepas Hfr de E. coli. También se ha identificado un origen de replicación en la zona posterior al operón nar que posiblemente corresponde al plásmido que dirige la transferencia. Mediante el análisis de las zonas adyacentes al operón nar hemos identificado un posible citocromo tipo c que podría actuar en la transferencia de electrones o como sensor de anoxia. En la región posterior describimos dos genes que posiblemente codifican los transportadores de nitrato y de nitrito.

Autor: RAMOS DIAZ M. ANGELES.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Este trabajo doctoral se centra en el estudio de Pseudomonas putida, especie no patógena que en la actualidad posee un creciente interés debido principalmente a su enorme versatilidad metabólica. P. putida es capaz de degradar numerosos compuestos aromáticos originados por la actividad industrial y agrícola del hombre, por lo que esta especie tiene una especial relevancia en el campo de la biodegradación. Las propiedades catabólicas de Pseudomonas estan en muchos casos asociadas a la presencia de plásmidos, entre ellos los plásmidos TOL que permiten la degradación de tolueno y xilenos, el plásmido TOL pWW0 es el arquetipo de los plásmidos TOL. Los genes catabólicos se encuentran incluidos en los transposones Tn4651 y Tn4653. Este plásmido contiene 117kb, y pertenece al grupo de incompatibilidad IncP9. Es autotransmisible, y se transfiere y replica establemente en bacterias del género Pseudomonas sensu stricto, así como a algunas enterobacterias. Las distintas aplicaciones mencionadas pueden implicar la liberación de este microorganismo al medio ambiente, y determinan que el estudio de la dispersión de genes a otros microorganismos adquiera importancia. Los plásmidos autotransmisibles portan toda la información genética requerida para su transferencia y movilización. Durante este proceso, algunos plásmidos pueden promover la co-transferencia tanto de plásmidos no-conjugativos como de ADN cromosómico. Además algunos plásmidos pueden promover la transferencia de ADN desde la bacteria receptora hacia la donadora, fenómeno que se conoce como retrotransferencia. En este trabajo se evaluó la capacidad del plásmido TOL pWW0 para movilizar ADN cromosómico, tanto de forma directa como bidireccional, y se profundizó en el conocimiento del proceso de retrotransferencia, indagando tanto en los pasos de conjugación necesarios para que el proceso tenga lugar, como en los elementos moloculares implicados en el mismo. Por último, mediante el empleo de técnicas de electroforesis en campo pulsante, se elaboró un mapa físico y genético de Pseudomonas putida KT2440 que permitió valorar los resultados obtenidos en los ensayos de movilización cromosómica.

Autor: RIPIO TORIJA M. TERESA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PATOLOGIA ANIMAL I (SANIDAD ANIMAL) PROGRAMA DE DOCTORADO: SANIDAD ANIMAL II.

Resumen: Esta Tesis Doctoral se ha centrado en la caracterización del sistema de regulación de la virulencia de L. monocytogenes, mediado por el activador transcripcional PrfA. En primer lugar, determinamos los niveles basales de expresión de los factores de virulencia de L. monocytogenes in vitro, lo que nos permitió definir por primera vez el fenotipo silvestre de esta especie en lo que se refiere a la producción de factores de virulencia, así como identificar y caracterizar mutantes que sobreexpresan constitutivamente dichos factores. Identificamos el origen genético del fenotipo variante de sobreexpresión de los factores de virulencia, que consiste en el cambio de aminoácido GlyI45Ser en el regulador PrfA. Esta sustitución bloquearía a la proteína reguladora en una conformación constitutivamente activa con independencia de la presencia o no de un cofactor todavía no identificado, que sería necesario para activar a PrfA en las cepas silvestres. Tales observaciones nos han permitido establecer un modelo coherente que explica la regulación PrfA-dependiente. También caracterizamos el sistema de regulación de la virulencia a nivel transcripcional, analizando los efectos de la mutación en PrfA, la temperatura, la composición del medio extracelular y la fase de crecimiento bacteriano. Finalmente, demostramos que la capacidad de L. monocytogenes de utilizar glucosa-I-fosfato es estrictamente dependiente de PrfA y se coexpresa con los factores de patogenicidad, pudiendo constituir un nuevo factor de virulencia de Listeria.

Autor: RODRIGO ALIAGA MIGUEL.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIRUGIA. UNIVERSIDAD DE VALENCIA PROGRAMA DE DOCTORADO: CIRUGIA (040-A).

Resumen: Análisis de la pérdida de heterocigosidad en 57 tumores renales mediante el empleo de 8 marcadores microsatélites del brazo corto del cromosoma 3, correspondientes a las regiones 3p13-p25. (1) El 73,2% de los carcinomas renales convencionales (CRC) tienen pérdida a nivel de 3p. (2) No se ha demostrado pérdida de 3p en ningún otro tipo histológico de tumor epitelial renal del adulto. (3) La existencia de deleciones intersticiales múltiples sugiere la existencia de más de un gen supresor implicado en la oncogénesis renal. (4) El marcador D3S3553 (3pl4.2) presenta el mayor número de pérdidas genéticas. (5) La pérdida de 3p no está correlacionada con el grado nuclear ni con el estadio tumoral. (6) La detección de la pérdida de heterocigosidad mediante análisis de microsatélites constituye una nueva estrategia para el diagnóstico diferencial de los tumores renales.

Autor: RODRIGO CASTRO ISABEL .
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Durante la progresión tumoral, y en concreto en la carcinogénesis de piel de ratón, la desaparición de la molécula de adhesión celular cadherina E(CD-E) se ha relacionado con una mayor capacidad invasiva. Para estudiar el papel de esta molécula en la tumorogénesis hemos bloqueado su expresión en la línea celular de queratinocito de ratón E24, tumorogénica, pero no metastásica, mediante la trasfección con un cDNA antisentido de CD-E. Los transfectantes antisentido aumentaron su capacidad invasiva y adquirieron propiedades metastásicas. Además se ha observado una correlación inversa entre la CD-E y la proteasas de matriz extracelular MMP-9. Por otra parte, para estudiar la regulación de la expresión de la CD-E en la carcinogénesis, hemos analizado la actividad transcripcional de la región 5' del gen de CD-E en diferentes líneas celulares representativas de los distintos estadíos de la progresión y con niveles variables de CD-E. Una región comprendida entre las posiciones -178/+92 respecto del inicio de la transcripción mostró actividad específica. Mediante estudios in vivo e in vitro, se han encontrado en esta región elementos que regulan positivamente la transcripción: región rica en GC de unión a SP1 y AP2 y caja CCAAT, y elementos que la regulan negativamente: secuencia palindrómica E-pal y elemento de unión a factores Ets.

Autor: RODRIGUEZ GARCIA M. ISABEL.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO .
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Resumen: Hemos aislado y caracterizado el cDNA de la anexinaV de ratón a partir de una genoteca de macrófagos murinos. Su secuencia nos ha permitido identificar dos nuevas secuencias en las bases de datos que hemos clasificado como anexinas V, en carpa y pez cebra. La secuencia de aminoácidos deducida de la de nucleótidos del cDNA de ratón nos permitió su comparación con la de otras especies en la que estaba descrita esta proteína y pudimos realizar un estudio filogenético de la subfamilia. Además nos permitió calcular una tasa de cambio de aminoácidos de 0,04. Utilizando el cDNA como sonda se aisló y caracterizó el gen correspondiente que abarca aproximadamente 50 kb del genoma del ratón y está formado por 14 exones y 13 intrones. El exón 1(no codificante) se presenta en dos formas alternativas que llevan asociados dos promotores con características distintas: uno con caja TATA y otro sin ella, con un alto contenido en G+C y con varios posibles sitios de unión para el factor de transcripción Sp1. Además en el intrón 4 se localizó un retrovirus endógeno MuERV-L. Por otra parte, se purificó la proteína humana recombinante y se utilizó como antígeno en ensayos ELISA con sueros de pacientes con artritis reumatoide. Se encontraron niveles elevados de autoanticuerpos contra la anexina V del tipo IgG en los enfermos, comparándolos con los controles sanos.

Autor: ROJO DE LA VIESCA ENRIQUE.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL .

Resumen: Se han identificado distintas rutas de transmisión de las señales de herida en Arabidopsis thaliana. El ácido jasmónico participa en la transducción de señal a través de una de las rutas, que provoca la activación génica en zonas de la planta alejadas de las heridas. Los oligogalacturonidos liberados de las pectinas de pared en las céculas heridas activan la otra ruta, que induce la expresión génica en las zonas cercanas a la herida y bloquea, por un mecanismo de regulación cruzada, la activación de la ruta dependiente de JA en esas zonas. Se han identificado eventos de fosforilación reversible de proteínas que regulan las dos rutas caracterizadas.

Autor: RONCHEL BARRENO M. CARMEN.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Para la utilización de microorganismos manipulados genéticamente en el medio ambiente sería deseable controlar su supervivencia en dicho hábitat. Los sistemas activos de contención biológica permiten controlar la expresión de una función letal a través de un sistema regulador que responda a señales externas del medio. En este trabajo se ha construido un sistema modelo de contención biológica asociado a la degradación de aromáticos. Para la construcción de este sistema se han utilizado dos genes de lisis diferentes: el gen gef de E. coli y el gen E del falgo PhiX174. El sistema activo de contención biológica fue funcional tanto en E. coli como en P. putida. En ambos casos, la inducción de la expresión del gen de lisis condujo a la muerte celular. En P. putida, tras la expresión del gen de lisis, se produce una disminución del número de células viables, una liberación de proteínas al medio, un eflujo de 86 RB+ y las células aparecen vacias al observarlas al microscopio electrónico de transmisión. Se realizaron también ensayos de microcosmo con las cepas construidas y en todos los casos las cepas se comportaron según su diseño.

Autor: ROPERO GRADILLA PALOMA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: Las talasemias son un grupo de anemias hereditarias que se caracterizan por la ausencia total o parcial de síntesis de las cadenas de globina que constituyen la hemoglobina. Cuando la cadena afecta es la alfa se denomina alfa talasemia y beta talasemia, cuando es beta. Hasta la década de los 80, se sabía que la alteración responsable se localizaba en los genes siendo por lo tanto hereditaria, pero es a partir de esta fecha cuando se empieza a conocer el tipo de mutaciones y donde se localiza. Con este trabajo se ha intentado poner de manifiesto la gran heterogeneidad de la beta talasemia en España, ya que esta enfermedad está relacionada con zonas donde existió la malaria. Por ello hemos pensado que sería interesante conocerla.

Autor: ROSARIO RUIZ PEDRO.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El estudio ha sido realizado empleando un modelo experimental de alcoholismo crónico. Se objetivan por primera vez un incremento en el contenido de fosfatidilcolina y fosfolípidos relacionados metabólicamente en hipocampo y córtex de rata alcohólica, tras administración crónica de Citidina-5' -difosfocolina (CDP-Colina) por vía oral. Se demuestra una reducción de las actividades enzimáticas Fosfolipasa A2 y Fosfolipasa D, significativamente elevadas por efecto del etanol, después de tratamiento crónico con CDP-Colina. Igualmente, la CDP-Colina ocasiona la reversión de diversos marcadores colinérgicos en hipocampo, severamente afectados por la ingesta crónica de etanol, principalmente el transporte de alta afinidad de colina y la biosíntesis de acetilcolina. Los estudios de microdiálisis "in vivo" demostraron, por primera vez, incrementos de los niveles de colina y acetilcolina en hipocampo tras administración aguda y crónica de CDP Colina en ratas normales y alcohólicas. La sobreexpresión de la subunidad NMDAR1 del receptor glutamatérgico en hipocampo de rata alcohólica y abstinente fue reducida tras el tratamiento crónico con CDP-colina. Similarmente se objetivó una reducción de la densidad de receptores opiáceos "mi" y "delta" siguiendo el mismo protocolo experimental de tratamiento. Finalmente el tratamiento con CDP Colina logró aliviar significativamente los síntomas físicos mostrados por los animales con síndrome de abstinencia alcohólica.

Autor: ROUZAUT SUBIRA ANA.
Año: 1997.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR.

Resumen: En trabajos previos de nuestro Departamento se describen péptidos cuya capacidad inmunopotenciadora ha sido ampliamente descrita, de modo que añadidos a un cultivo de CLMN produce entre otros efectos: una inducción de la producción de citoquinas, aumento en los niveles de expresión de moléculas HLA-DR e inducción de la enzima iNOS. Hemos utilizado la técnica de RNA-Fingerprint para identificar genes que puedan estar implicados en el proceso de diferenciación de los monocitos inducido por péptidos. Al comparar células estimuladas y no estimuladas encontramos ocho secuencias que se expresan de modo diferencial: cinco corresponden a genes conocidos (gp91phox, Catepsina D, p21, 18S rRNA y gamma-actina), una es homóloga a DRP2 mediador de señales inducido por semaforinas y dos no son conocidas. Existe una correlación entre el proceso de maduración de los monocitos, basado en medidas de expresión de marcadores de superficie y la expresión de estos genes, de modo que permite explicar las posibilidades efectoras de las células a lo largo de su diferenciación.

Autor: ROVIRA PATO LLUIS.
Año: 1997.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: FISIOLOGIA IV PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOPATOLOGIA Y PATOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Las moleculas principales aglutinantes en la respuesta humoral inmunológica en la dorada (sparus aurata) ha sido estudiada bajo diferentes condiciones. En primer lugar las inmunoglobulinas tetraméricas tienen un peso molecular de 760 KDa. Las lectinas halladas pertenecen al tipo S (DRICKMAMER 1988). En la enfermedad de invierno de la dorada, el estrés crónico intermitente presenta unos efectos letales a las dos semanas de tratamiento, mientras que si los peces han sido vacunados presentan una mayor resistencia que les confiere supervivencia, aunque no se desarrolla una respuesta humoral específica. Con un tratamiento continuado (15 días) de T C baja a 9 grados C, se logra reproducir parcialmente los efectos de la enfermedad de invierno. Diferentes tecnicas como son crioconservación de linfocitos, separación celular mediante centrifugación de gradiente discontinuo y citometría de flujo, han sido adaptadas con exito a los peces.

Autor: RUBIO TEXEIRA MARTA M..
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR -030 A.

Resumen: El objetivo de esta tesis ha sido el de desarrollar estirpes de S. cerevisiae capaces de usar lactosa como fuente de C, con el fin de utilizarlas en procesos de fermentación inustrial para el aprovechamiento biotecnologico del lactosuero. Este residuo del proceso de fabricación de quesos es muy contaminante por el elevada cantidad de materia orgánica que contiene, principalmente en forma de lactosa. Su metabolización por S. cerevisiae es interesante por las potenciales aplicaciones posteriores de esta levadura en el sector alimentario. Así, se ha introducido esta nueva capacidad en ella mediante la integración estable en su genoma de los genes LAC de K. lactis, necesarios para la entrada e hidrólisis del disacárido a compuestos perfectamente metabolizables por S. cerevisiae. Los estudios de expresión de los genes en distinta dosis y bajo control de distintos tipos de promotor han indicado que la eficacia de S. cerevisiae para usar esta fuente de carbono es comparable a la de K. lactis con ambos genes en copias múltiples y bajo control de un promotor inducible por galactosa. Se han introducido características adicionales como la de utilizar simutaneamente almidón y la de flocular según la fuente de carbono presente en el medio. La capacidad de utilizar lactosuero será combinada con nuevas propiedades de utilidad industrial.

Autor: RUIZ ARRIBAS ALBERTO.
Año: 1997.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA, BIOQUIMICA Y GENETICA MICROBIANA .

Resumen: Streptomyces halstedii JM8, aislado de muestras de paja, posee un sistema xilanolítico que consta de al menos dos proteínas de 45 y 33 kDa, denominadas Xys1L y Xys1S respectivamente, que presentan actividad endoxilanásica y que se detectan en el sobrenadante de cultivo. Ambas proteínas son productos de un único gen, XysA. Este codifica una proteína modular de 48 KDa, Xysl, en la que se distinguen cuatro regiones: péptido señal, dominio catalítico, región bisagra y dominio de unión a celulosa. La proteína Xys1L se obtiene por pérdida del péptido señal. Posteriormente, la eliminación del dominio de unión a celulosa en Xys1L da lugar a XyslS. La superproducción de ambas formas se llevó a cabo en diferentes especies de Streptomyces, obteniéndose los mejores resultados con S. parvulus. Xys1L y Xys1S se purificaron mediante cromatografía de intercambio aniónico, y se determinaron sus características bioquímicas. Sobre los sustratos ensayados, las dos enzimas presentan actividad óptima a pH 6.3 y 60 grados C, y son muy estables en un amplio rango de pH (4 a 10) y de temperatura (4 a 50 grados C). La expresión del gen xysA se ve afectada por la fuente de carbono presente en el medio de cultivo. El xilano es el mejor inductor, mientras que la glucosa posee un papel represor. La sensibilidad a la fuente de carbono probablemente está mediada por una serie de secuencias repetidas presentes en la zona promotora. El promotor de xysA es capaz de dirigir la expresión de otros genes tanto de JM8 como de otros orígenes. Finalmente, se han detectado genes homólogos a xysA y proteínas similares a Xys1L y Xys1S en varias cepas del género Streptomyces. Algunas de las proteínas identificadas (similares a Xys1L) se unen a celulosa cristalina, lo que sugiere la posibilidad de una transferencia horizontal de este gen entre las distintas especies.

Autor: RUIZ GARCIA TREVIJANO ELENA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El TGF-BETA es una de las principales citoquinas fibrogénicas en el hígado. Esta citoquina induce la producción de H2O en otros tipos celulares, sugiriendo la posible participación de este agente como mediador de su mecanismo de acción sobre la expresión del gen de procolágeno alfa1 (I) murino (collal). El TGF-BETA indujo la expresión de RNAm de collal en un cultivo de células estelares hepáticas procedentes de rata cirrótica (CFSC-2G). El agente antioxidante PDTC y la catalasa bloquearon el efecto de la citoquina sobre la expresión del collal y por otra parte el H2O2 reprodujo el efecto del TGF-BETA sobre la expresión del collal. Se determinó la posible participación de los factores nucleares NFkB y C/EBPBETA en la regulación de la expresión del collal en respuesta al TGF-BETA. El análisis de las proteínas nucleares mediante geles de retardo mostró la activación del C/EBPBETA inducida por el TGF-BETA, pero no del NFkB. Entre todos los miembros que componen la familia de factores C/EBP se identificó a C/EBP-BETA como el factor activado por TGF-BETA. El tratamiento con H2O2 indujo igualmente la activación del C/EBP-BETA; el NFkB, en cambio no resultó activado. Por otra parte el PDTC y la catalasa bloquearon la activación del C/EBP-BETA inducida tanto por el TGF-BETA como por el H2O2. Para determinar el elemento de respuesta al TGF-BETA en el promotor del collal, se realizaron estudios de transactivación mediante ensayos CAT utilizando distintos fragmentos del promotor de COL-1 murino obtenidos por PCR, clonados en el vector pCAT-basic. Dichos vectores contenían el promotor mínimo de -220 a + 110 pb (PCR1CAT), un fragmento de -220 a -407 pb (PCR2CAT) y un tercer vector con ambas secuencias de -407 a + 110 pb (PCR3CAT). Se observó transactivación del gen inducida por TGF-BETA o por H2O2 tan sólo cuando se utilizó el vector que contenía el fragmento de promotor de collal de -407 a +110 pb, revelando con ello un posible elemento de respuesta a TGF-BETA dentro de este fragmento. Se realizaron experimentos de "squelching" por transfección celular con este vector y oligonucleótidos correspondientes a la secuencia consenso de unión al C/EBP, la secuencia mutada y la secuencia de -370 a -340 pb, correspondiente al posible sitio de unión de C/EBPBETA en el promotor del collal. Estos experimentos confirmaron la especificidad de la transactivación del promotor a través la región de -370 a -340 pb del promotor del collal. Por último, se hicieron cotransfecciones con el vector PCR3CAT y un vector de expresión para el C/EBPBETA. La sobreexpresión del C/EBPBETA indujo la transactivación del PCR3-CAT confirmándose la implicación del C/EBPBETA en la regulación de la expresión del collal en respuesta al TGF-BETA. Se valoró igualmente el efecto del TNF-ALFA sobre la respuesta al TGF-BETA de las CEH, observándose que esta citoquina bloquea la respuesta al TGF-BETA tanto sobre la expresión del gen como sobre la transactivación del PCR3-CAT. El TNF-ALFA además activa el factor C/EBPBETA aunque en este caso dicha activación no fue bloqueada por el PDTC o por la catalasa. Como conclusión, este trabajo demuestra que el TGF-BETA induce la expresión del collal a través de un mecanismo dependiente de la generación y/o acumulación de H2O2 y de la activación y unión del factor C/EBPBETA al elemento contenido entre -407 y -220 pb del promotor de dicho gen. Además el TNF-ALFA y el TGF-BETA presentan efectos antagónicos sobre la expresión del collal afectando a la misma región del promotor de este gen. El TNF-ALFA activa igualmente el factor C/EBPBETA pero en su mecanismo de activación no interviene el H2O2.

Autor: SABATER RAMOS M. JOSE.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Listeria monocytogenes es un bacilo corto intracelular. En este trabajo se ha purificado una proteína tipo histona. Esta proteína se ha caracterizado funcionalmente. FlaR, es una proteína que se une al ADN, se comporta como una proteína tipo histona, es exclusiva de la especie monocytogenes del género Listeria. Se ha demostrado que FlaR realiza un efecto pleiotrópico tanto en Listeria monocytogenes como en Escherichia coli. El gen FlaR es exclusivo de la especie analizada, lo que nos permite relacionar este gen con la patogenesis que este microorganismo produce en la especie humana. Se ha complementado un mutante hns-de E. coli con el gen FlaR, con esto se confirma la función de FlaR. Mediante análisis transcripcional se vió que el gen FlaR se expresa a máximo nivel en fase exponencial temprana y en una situación de estrés (42 C). Hemos comprobado que FlaR se regula por factores ambientales como el cloruro sódico, la presencia de beta-glucosídos (celobiosa) ó monosacaridos como la glucosa. Posteriores análisis transcripcionales nos han permitido comprobar un efecto de FlaR sobre el conjunto de genes implicados en virulencia, así como otros genes implicados en situaciones de estrés. FlaR regula positivamente o negativamente pero realizando un efecto indirecto, probablemente por modulación del ADN.

Autor: SALAZAR FONTANA LAURA INES.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: CD28 es una molécula coestimuladora expresada de forma constitutiva por la mayoría de los linfocitos T CD4. CDI52 (CTLA-4) es su molécula antagonista, detectándose sólo tras activación a través del complejo TCRCD3. En este trabajo hemos estudiado los niveles de expresión en superficie de ambas moléculas y su relevancia funcional en individuos sanos y en enfermos con Artritis Reumatoide (AR). Los linfocitos T CD4 de sangre periférica se pueden dividir en tres grupos en base a la intensidad de expresión de CD28 que hemos denominado: CD281ow, CD28int y CD28high. Estas tres subpoblaciones expresan diferencias cuantitativas en el número relativo de sitios de unión de anticuerpos dirigidos frente a CD28. Cuando se analizó el fenotipo en pacientes con AR tanto inactivos como activos, encontramos que: (i) la subpoblación CD28high CD4 está duplicada en detrimento de aquella de intensidad baja o CD28low (p