BIOQUIMICA MOLECULAR, 52

Autor: SALAZAR TORRES OSCAR.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El objetivo del trabajo es la identificación de cepas del grupo de anastomosis 2 (AG-2) del hongo patógeno de plantas Rhizoctonia solani en base a diferentes criterios moleculares, tales como secuenciación de regiones intergénicas ribosómicas y existencia o no de elementos extracromosómicos, tales como plásmidos lineales y virus dsRNA. Con los datos aportados a partir de estas técnicas, y en relación con los datos de patogenicidad en campo de estas cepas, se pretende establecer las relaciones evolutivas y ecológicas de las diferentes cepas en un entorno dado, agrupando cepas virulentas e hipovirulentas. Así se pretende establecer la existencia de diferentes subgrupos dentro del AG-2 en base a su patogenicidad. Hasta el momento, y con estas técnicas, se han identificado 4 subgrupos diferentes dentro del AG-2 que correlacionan con los datos de campo y patogenicidad de los aislados. Los datos de secuencia de todas las cepas han permitido el diseño de cebadores específicos de cada subgrupo para permitir una identificación y tipado rápido por PCR. Así, y por la técnica de PCR, se podrá hacer una detección rápida de nuevos aislados al conocer el subgrupo de anastomosis al cual pertenece el aislado, evitando asi el uso de técnicas clásicas de taxonomía, las cuales en hongos filamentosos no aportan tanta información como las técnicas moleculares.

Autor: SALVADOR CABOS NIEVES.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR IV PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: La línea R 110 fué obtenida a partir de un tumor celular de corteza cerebral humana. Su origen oligodendrocítico ha sido demostrado por su inmunopositividad a proteína básica de mielina (MBP) y vimentina (Matute y cols, 1992). Mediante técnicas electrofisiológicas se demostró la expresión de receptores funcionales de glutámico del tipo kainato. Estas células presentaron respuestas rápidamente desensibilizantes ante la aplicación de glutamato, kainato y quiscualato y parcialmente desensibilizantes ante domoato. No se observaron respuestas a otros agonistas glutamatérgicos (AMPA y NMDA), ni a otros agentes neurotransmisores (Gly, GABA y Ach). El receptor de glutámico expresado por la línea celular R 110 fué activado por glutamato y kainato de forma dosis dependiente con EC50 de 335 muM y 15 muM, respectivamente. En presencia de agonista, el receptor sufrió una rápida y completa desensibilización siguiendo un curso temporal monoexponencial (taud = 20ms). La recuperación desde el estado desensibilizado de la respuesta de este receptor siguió igualmente un curso monoexponencial cuya velocidad varió según el agonista utilizado (taurec=3.6 s y taurec=13.7 s para glutamato y kainato, respectivamente). Las respuestas a kainato presentaron una relación corriente-voltaje (I/V) con una marcada rectificación de entrada. En algunos casos se observó una curva I/V con doble rectificación. Los estudios de permeabilidad a calcio indicaron escasa pero nula permeabilidad de los receptores de kainato expresados en esta línea celular a este ión. AMPA actuó como un antagonista poco potente al coaplicarlo con kainato. Los antagonistas de receptor de AMPA, CNQX y GYKI 52466 inhibieron las respuestas de kainato aunque con poca potencia (IC sub50 de 38.5 muM y 281 muM para CNQX y GYKI 52466, respectivamente). Ciclotiazida (CTZ), un modulador alostérico de los receptores de AMPA, no modificó las respuestas a kainato. Por el contrario, Concanavalina A (ConA) redujo la desensibilización del receptor potenciando la respuesta al pico aproximadamente un 70%. El colorante Azul de Evans (EB) presentó un efecto diferente según se perfundieran altas o bajas concentraciones de kainato. En presencia de concentraciones saturantes de kainato, este colorante siempre bloqueó las respuestas. Sin embargo, concentraciones menores de kainato causaron potenciación o inhibición de la respuesta según la concentración de EB perfundida. Independientemente del efecto causado en la célula, este compuesto siempre disminuyó el grado de desensibilización del receptor de kainato. En muestras de la línea R 110 y mediante la técnica de RT-PCR, únicamente se pudo amplificar la subunidad GluR6. El estudio molecular indicó que el grado de edición del RNA de la subunidad GluR6 fué múltiple, observándose que el dominio M2 únicamente existe en su forma no editada (Q), mientras que ambas posibilidades (formas editadas y no editadas) son posibles en el dominio M1. Aunque el papel de estos receptores es oscuro, en la línea R 110 se observó mortalidad celular tiempo dependiente asociada a la exposición al agonista. El aumento del tiempo de exposición al agonista produjo un incremento del porcentaje de mortalidad celular. Estos resultados implicarían al receptor de kainato en fenómenos excitotóxicos, anteriormente ligados exclusivamente a la activación de otros receptores ionotrópicos de glutámico.

Autor: SAN JOSE MARTINEZ ESTER.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se han llevado a cabo distintos métodos para poder inhibir la replicación del virus de inmunodeficiencia humana. El primero está basado en terapia génica y consiste en la modificación por transducción con vectores retrovirales de linfocitos de sangre periférica de pacientes infectados con hiv-1 con una quimera de CD4 que se retiene en el retículo endoplásmico. Se demuestra su efecto anti-hiv así como su mecanismo de acción. El segundo método antiviral que se ha abordado consiste en el uso de una droga antiviral que inhibe el transporte de proteinas en el aparato de Golgi: Se ha demostrado su efecto anti-hiv en linea celulares así como en linfocitos de pacientes seropositivos y se ha demostrado su mecanismo de acción.

Autor: SANCHEZ BALLESTA M. TERESA.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: M. PREV. I SALUD PUB. BROMAT. TOXIC. I PROGRAMA DE DOCTORADO: 265B TECNOLOGIA DE ALIMENTOS.

Resumen: Los frutos de mandarina 'Fortune' son muy susceptibles a las bajas temperaturas. El almacenamiento a temperaturas inferiores a 10 grados C da lugar a la aparición de daños por frío (DF) que se manifiestan en forma de picado en el flavedo. Se ha realizado el estudio de los cambios en la expresión génica que ocurren en los frutos de 'Fortune' durante la conservación a bajas temperaturas. El almacenamiento en frío produce alteraciones en los niveles de algunos mensajeros, detectados mediante el estudio de los productos de traducción 'in vitro' de poly(A+)RNA del flavedo de los frutos. Se han aislado 5 cDNAs, mediante el escrutinio diferencial de una genoteca de cDNA, que corresponden a mRNAs cuyos niveles incrementan (3cl, 4al, 11c3 y fpal) o disminuyen (7ba) durante el almacenamiento de los frutos en frío. Los cambios en los niveles del mRNA 4a1 están relacionados con las bajas temperaturas, independientemente de la susceptibilidad de los frutos al frío. Los cambios en los niveles del mRNA 7ba parecen estar relacionados con la susceptibilidad de los frutos al estrés térmico por las altas y bajas temperaturas. La expresión de los mRNAs 3cl, 11c3 y fpal está relacionada con situaciones adversas que derivan en necrosis en la piel y donde tienen lugar los cambios más importantes en la producción de etileno.

Autor: SANCHEZ BEATO GOMEZ MARGARITA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En esta Tesis Doctoral se plantea la hipótesis de que alteraciones en la regulación de la fase G1 del ciclo celular ejercida por p53, Rb y los CDKIs p21, p27 y p16, podría participar en linfomagénesis. Se pretende establecer la existencia de alteraciones en los genes o/y proteínas de los CDKIs, así como determinar cuales son las más frecuentes y su relación con la transformación agresiva de los linfomas. Las conclusiones más importantes son: La expresión de p21 y MDM2 en LNH depende de mutaciones en p53. Estas proteínas se expresan en EH, por lo que p53 se supone transcripcionalmente activa.- La expresión de p27 es inversamente proporcional a la proliferación en linfomas. Existe un grupo de LNH de alto grado con expresión anómala de p27; se caracterizan por la inactivación de p53.- La existencia de anomalías en p16 es crítica en LNH, siendo una alteración frecuente en alto grado y muy frecuente en transformación agresiva. La ausencia de expresión se debe preferentemente a metilación del promotor o pérdida alélica. Existen alteraciones en la expresión de Rb en casos de EH que, posteriormente, han demostrado ser clínicamente relevantes.

Autor: SANCHEZ DIAZ JESUS.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DE PEDIATRIA.

Resumen: Presentamos un estudio en 1081 muestras procedentes de la sangre del cordón umbilical, donde se ha realizado: estudio hemocitométrico, electroforesis de Hbs, dosificación de Hb Bart, contaje de reticulocitos y estudios de biología molecular. La prevalencia de la alfa talasemia obtenida por técnicas de biología molecular es del 4,79% y la prevalencia del genotipo es del 0,726%. De los 31 casos diagnosticados de alfa+ talasemia heterocigota, 28 pertenecen al haplotipo (-alfa 3.7/) y 3 al haplotipo (-alfa 4.2/). Dentro de los parámetros hemocitométricos el VCM y HCM son útiles para el diagnóstico de la alfa talasemia, pero no lo son la Hb, Hcto, VHCM, PF eritrocitaria, y reticulocitos. La dosificación de la Hb. Bart por cromatografía en columna, es válida como test de "Screening" para el diagnóstico de la alfa talasemia, siempre que se realicen curvas de rendimiento diagnóstico (ROC) para disminuir los casos falsos positivos y posterior confirmación por técnicas de biología molecular.

Autor: SANCHEZ MUÑOZ ARANZAZU.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II.

Resumen: El objetivo de este trabajo ha sido estudiar el papel del TGF-beta durante el desarrollo fetal del hígado, en los procesos de proliferación, diferenciación y muerte celular, utilizando para ello cultivos primarios de hepatocitos fetales de rata. En estas células el TGF-beta (0,5 ng/ml) inhibe la proliferación inducida por mitógenos (EGF o HGF), deteniendo a las células en las fases GO-G1 del ciclo celular e inhibiendo la expresión del protooncogén c-myc inducida por los mitógenos. A estas mismas dosis, el TGF-beta coopera con otros factores (como EGF) para promover la diferenciación de los hepatocitos, induciendo cambios morfológicos y funcionales, manteniendo la expresión de genes específicos e induciendo la actividad de factores de transcripción relacionados con la diferenciación hepática. La fibronectina mimetiza los efectos del TGF-beta sobre la diferenciación de los hepatocitos fetales. Por otra parte, el TGF-beta (5 ng/ml) induce apoptosis en estas células, asociada a un proceso de estrés oxidativo, revelando la existencia de dos vías independientes en los efectos de este factor: una que bloquea el ciclo celular y conduce a la inhibición del crecimiento y otra que induce estrés oxidativo y conduce a la apoptosis. Esta apoptosis requiere ademas la síntesis de proteínas previa a la inducción del estrés. La presencia de EGF protege frente a la apoptosis inducida por TGF-beta, mientras que el HGF no tiene ningún efecto. Todos estos resultados sugieren que el TGF-beta podría ser un factor importante durante la última etapa del desarrollo fetal del hígado, modulando los procesos de proliferación, diferenciación y muerte celular. Sus diferentes efectos parecen deberse a la activación de rutas de señalización independientes, así como a la cooperación con otros factores.

Autor: SANCHEZ RODRIGUEZ PEDRO MANUEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El inhibidor de proteinasas II (pin2) se acumula constitutivamente en tubérculos y flores, y es inducido en hojas heridas o tratadas con las fitohormonas ABA y JA. La expresión de pin2 en flores de patata es específica de pétalos en estadíos jóvenes del desarrollo. Por RT/PCR y aislamiento de un ADNc se ha comprobado que el gen expresado en pétalos es otro gen de la familia génica pin2, denominado pin2-F, distinto al encontrado en tubérculos y hojas heridas (pin2-H). Hemos estudiado los mecanismos implicados en la expresión de pin2-H y F estando el JA involucrado en la expresión de ambos genes. No ocurre esto para el ABA que sólo es necesario para la inducción de pin2-H en hojas heridas. Tanto pin2-H como F se acumulan en hojas tratadas con JA, y se inhiben en tubérculos, hojas heridas y flores de patatas con una lipoxigenasa (enzima clave en la biosíntesis de JA) bloqueada por expresión de un ARN antisentido de ésta. Tras aislar un clon genómico de pin2-F hemos analizado su expresión en tabacos transgénicos y en patata previa fusión con GUS.

Autor: SANCHEZ SABATE ELENA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: INMUNOLOGIA MEDICA.

Resumen: Las pruebas que informan sobre el grado de progresión de la infección por el VIH se denominan marcadores sustitutivos: el marcador inmunológico más ampliamente utilizado ha sido el número absoluto de linfocitos T CD4+. Antes de la aparición de las técnicas de amplificación de ácidos nucléicos para cuantificar la carga viral, el marcador virológico indirecto habitual ha sido el antígeno p24 (Ag p24). Sin embargo, este marcador no se detecta en un gran número de pacientes; la sensibilidad de las distintas técnicas de detección/cuantificación de Ag p24 se puede aumentar mediante distintos métodos como el tratamiento ácido de las muestras para la disociación de los inmunocomplejos específicos (IC). En el año 1996 se confirmó la necesidad de introducir la técnica de cuantificación de partículas virales (ARN VIH-1) como potente marcador pronóstico de la progresión de la infección, así como marcador para la monitorización de los tratamientos anti-VIH. OBJETIVOS: 1.- Analizar la eficacia de una técnica modificada de cuantificación de antígeno p24 mediante la disociación de inmunocomplejos. 2.- Analizar la presencia de antígeno p24 del VIH-1 como parte integrante de complejos inmunes circulantes en pacientes VIH+. 3.- Analizar la influencia del tratamiento anti-VIH sobre las técnicas de cuantificación de Ag p24. 4.- Desarrollar y evaluar distintos métodos de PCR para cuantificar ARN del VIH-1 en suero/plasma. Valorar las variaciones biológicas del ARN VIH-1 con distintos métodos de procesamiento y almacenamiento de ls muestras. 5.- Analizar la influencia del tratamiento anti-VIH sobre las técnicas de cuantificación de ARN VIH-1 en suero. 6.- Estudiar las correlaciones entre los niveles de ARN VIH-1, de Ag p24 disociado y sin disociar, de anticuerpo anti-p24 y número absoluto de linfocitos T CD4+. Para ello se han utilizado diversas técnicas: cuantificación de Ag p24 por ELISA antes y después de la disociación de los IC, cuantificación de anticuerpo anti-p24 por ELISA, cuantificación de ARN VIH por doble PCR, y dos métodos diferentes de RT-PCR, uno de ellos comercial. RESULTADOS: 1.- La sensibilidad de la técnica de cuantificación de antígeno p24 después de la disociación ácida de inmunocomplejos resultó un 33% mayor que la del método convencional de cuantificación de antígeno p24 cuando el anticuerpo anti-p24 fue positivo. En ausencia de anticuerpo anti-p24, la sensibilidad de ambos métodos de cuantificación de antígeno p24 fue similar. 2.- En la técnica de disociación de los inmunocomplejos, los niveles altos de anticuerpo anti-p24 protegieron al antígeno p24 de la inactivación por el efecto del tratamiento ácido de las muestras, conservándose mejor su inmunocreatividad. 3.- Las muestras de suero de pacientes VIH positivos, se pudieron clasificar en potencialmente disociables o no en función del nivel de anticuerpo anti-p24 cuantificado en el suero de los pacientes estudiados. 4.- Un nuevo método de doble PCR desarrollado en nuestro laboratorio mostró una precisión muy buena para la cuantificación de ARN de VIH-1, siendo especialmente útil para la cuantificación de bajos niveles de partículas víricas. 5.- La RT-PCR por método colorimétrico fue un buen método de cuantificación de altos niveles de ARN de VIH-1. 6.- La RT-PCR comercial demostró una mayor sensibilidad que el antígeno p24 para la cuantificación de la viremia en la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana. 7.- Utilizando la RT-PCR por método colorimétrico para la cuantificación del ARN del VIH-1, se observó que no es necesario almacenar el plasma a -70 grados con isotiocianato de guanidina para mayor estabilidad del mismo, durante un periodo de al menos nueve meses. 8.- No se encontraron diferencias significativas en la cuantificación de la carga viral mediante la técnica de RT-PCR por método colorimétrico cuando la segunda centrifugación para el aclaramiento de los plasmas se realizó a diferentes tiempos. 9.- El tratamiento anti-VIH, y la duración del mismo, no fueron factores de interacción ni supusieron confusión en las técnicas de cuantificación de antígeno p24 y ARN VIH-1.

Autor: SANCHEZ SANCHEZ CARLOS.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se ha estudiado la evolución antigénica y genética de una colección de virus relacionados con el virus de la gastroenteritis porcina transmisible (VGPT), con distintos orígenes, que presentan diferencias en tropismo y grado de virulencia. Los estudios de homología antigénica han permitido definir epítopos específicos de tipo, de grupo e interespecie, que permiten distinguir entre virus antigénicamente relacionados con el VGPT mediante el uso de anticuerpos monoclonales. Como consecuencia de estos experimentos se ha propuesto la inclusión del coronavirus humano HCV 229E en un grupo serológico distinto del grupo del VGPT. Se ha propuesto un árbol evolutivo según el cual todos los aislados estudiados derivan de un antecesor común reciente que circulaba en el año 1941. En su evolución el VGPT se comporta como un reloj molecular bien definido. La velocidad de fijación de mutaciones fue de 7+-2 x 10 elevado a -4 sustituciones por nucleótido y año. Los aislados PRCV europeos derivan del VGPT por la aparición de una delección de 672 nt en el extremo 5' del gen S, que implica la pérdida de la zona del gen que codifica los sitios antigénicos C y B. Se ha propuesto la hipótesis de la existencia de un dominio en el extremo amino terminal de la proteína S, distinto del de unión al receptor celular específico para el virus, que está implicado en el tropismo entérico del VGPT. Esta hipótesis se ha confirmado mediante la caracterización de recombinantes entre aislados entéricos y respiratorios del VGPT que demostraron que cambios en el aminoácido 219 de la proteína S eran los causantes de la pérdida del tropismo entérico. Mediante el empleo de un vector viral basado en el VGPT se han expresado genes heterólogos que se rescatan con un virus complementador. Se han obtenido virus pseudorecombinantes derivados de un virus atenuado con una replicación limitada en intestino, que incorporaron la proteína S de un aislado con alto grado de replicación en el intestino. El pseudorecombinante aumentó mil veces su tropismo entérico en relación con el aislado atenuado, lo que nos permitió concluir que son suficientes alteraciones en el gen S para inducir un cambio de tropismo.

Autor: SANGRADOR VEGAS AMAYA.
Año: 1997.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Ante la imposibilidad de conseguir la expresión de proteín fosfatasas tipo 1 (PP1) en vectores de expresión en células de mamífero, se ha utilizado la levadura S. pombe para expresar los isotipos dis2ml, dis2m2 y dis2m3de PP1 de ratón bajo el control del promotor regulable nmt1. son capaces de complementar el mututante de un gende fostasa tipo 1 de S. pombe dis2-11. En ausencia de tiamina se produce la sobrexpresión de los tres isotipos, puesta de manifiesto por Western blot, con un incremento de actividad fosfatasa de entre 10-20 veces respecto a la cepa salvaje. La sobreexpresión de los tres isotipos produce el mismo efecto letal, las células se alargan y se observan alteraciones en la distribución del DNA y formación del septo, indicativas de una mitosis y citoquinesis anómala. La sobre expresión de una versión truncada del isotipo dis2m2, al que le faltan 50 aa del extremo carboxilo terminal y que carece de actividad fosfatasa, reproduce el mismo fenotipo letal, indicando que este no se produce por un incremento de la actividad fosfatasa en la célula, sino que es debido a interacciones con otras proteínas de S. pombe. Para identificar proteínasesenciales de S. pombe capaces de revestir el efecto letal de las PP1 de mamífero, el integrante del isotipo dis2m3 se transformó con una libreria de S. pombe También se estudióla localización subcelular de la PP1 fusionada a una proteína fluorescente, y la fluorescencia se localiza en una estructura citoplásmica polar que podría tratarse del centrosoma.

Autor: SANTON ROLDAN ALMUDENA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El virus de Epstein-Barr (VEB) parece estar implicado en la patogénesis de la enfermedad de Hodgkin (EH) ya que se detecta específicamente en las células neoplásicas donde permanece en fase latente expresando, entre otros genes, el oncogén LMP-1. Los objetivos del presente estudio consistían en tipar el VEB y analizar los polimorfismos del extremo 3' del oncogén LMP-1 en tres grupos de EH (infantil, ordinaria y asociada al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y en una población de controles sanos. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que: 1) el VEB de tipo 1 predomina en la EH y en los controles, asociándose el tipo 2 de forma significativa con la EH pediátrica y la VIH+,2) la EH infantil y la EH VIH+ se asocian con cepas del VEB portadoras de una deleción de 30 pares de bases (pb) en el extremo 3' del oncogén LMP-1;3) los especímenes del VEB de tipo 2 tienen una probabilidad significativamente mayor de presentar la deleción de 30 pb; 4) las cepas delecionadas se asocian con los casos de EH morfológicamente más agresivos; 5) la expresión de la oncoproteína LMP-1es mayor en los casos delecionados; 6) la deleción de 30 pb es idéntica en todas las muestras y abarca los residuos 343-352;7) la región repetida del oncogén LMP- 1 es un buen marcador de clonalidad para la EH y 8) las infecciones dobles por cepas distintas del VEB son muy frecuentes tanto en la EH como en los controles.

Autor: SANZ HERRERO ANA .
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL.

Resumen: Con objeto de profundizar en el estudio de la reacción de defensa vegetal, hemos procedido a la caracterización de un nuevo ADNc, A5.2, identificado, en plantas de tabaco, en base a la activación de su expresión en respuesta a la inoculación con la proteína bacteriana Harpin. La secuencia proteica codificada por el ADNc A5.2, reveló homología con el enzima prostaglandina endoperóxido sintetasa, enzima clave en la síntesis de prostaglandinas en vertebrados. Igualmente, mediante ensayos de actividad enzimática, demostramos que la proteína de tabaco identificada posee, al igual que las enzimas prostaglandina sintetasas, actividad oxigenasa, aunque carece, aparentemente, de la actividad peroxidasa de estos enzimas. En base a estos resultados, el nuevo gen de tabaco se denominó pgsl de "prostaglandin synthase like". El estudio del patrón de expresión del ADNc pgsl reveló la ausencia de transcritos en hojas sanas de plantas jóvenes, mientras que los niveles de ARNm aumentan en respuesta al tratamiento con la proteína inductora harpin o con bacterias fitopatógenas. La proteína PGSL podría intervenir en la generación de moléculas señal reguladoras de la respuesta a la infección por microorganismos patógenos.

Autor: SARRION PELOUS M. DOLORES .
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: La destrucción selectiva de los hepatocitos centrilobulares producida por una dosis subletal de tioacetamida y la regeneración post-necrótica de las células hepáticas, se ha utilizado para estudiar la respuesta hepática frente a la agresión de un agente tóxico, en ratas pretratadas con fenobarbital. La respuesta celular se ha estudiado viendo las alteraciones en las actividades séricas marcadoras de necrosis y colestasis, mediante el estudio histopatológico del hígado y el comportamiento de parámetros utilizados en clínica (glucosa, creatinina, colesterol, calcio, hierro, y otros metabolitos). Asimismo, se ha estudiado y descrito el comportamiento de parámetros relacionados con el ciclo redox del glutation y el estrés oxidativo en el hígado de rata. Por último se ha estudiado la proliferación celular hepática compensatoria en fase post-necrótica, evaluando la poidía y distribución del DNA en las distintas fases del ciclo celular.

Autor: SCHIAFFINO CANO SANTIAGO.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA PROGRAMA DE DOCTORADO: PLAN ANTIGUO.

Resumen: La antitrombina III es una proteína que interviene en la fibrinolisis y cuyo déficit condiciona la aparición de fenómenos trombóticos. Se estudia la AT-III en 50 pacientes con infarto agudo de miocardio determinando la AT-III en primer día, segundo día y octavo día; la concentración de AT-III estaba elevada en fases iniciales, intermedias y tardías, se correlaciona con el fibrinógeno, comportándose como reactante biológico-protéico. La AT-III en pacientes tratados con heparina sódica desciende, con heparina de bajo peso molecular no se modifica y con cumarinas se eleva la concentración plasmática. En el infarto agudo de miocardio la AT-III al elevarse actúa como fenómeno biológico protector frente a la aparición de nuevos focos trombóticos, a diferencia del aumento del fibrinógeno que favorece la trombosis.

Autor: SELGAS LOPEZ LAURA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Existen variaciones circadianas en la función inmunitaria de la rata macho adulta de la cepa Wistar cuyas acrofases varían en función del tejido y parámetro inmunitario analizado, como consecuencia de una regulación nerviosa de la propia función inmunitaria. La administración de Ciclosporina A, fármaco inmunosupresor utilizado en clínica para prevenir el rechazo en el trasplante de órganos, en diferentes momentos del ciclo circadiano induce un efecto tiempo de administración dependiente sobre la proliferación linfocitaria siendo la mayor respuesta inmunosupresora durante el período de descanso de los animales, que además coincide con un incremento de la actividad simpática. La denervación simpática de los ganglios linfáticos submaxilares, mediante una ganglionectomía cervical unilateral, no consigue alterar el patrón circadiano de respuesta proliferativa linfocitaria, sin embargo, potencia el efecto inmunosupresor del fármaco. Los resultados obtenidos sugieren que, al menos en parte, los efectos de la Ciclosporina A sobre el tejido linfoide están mediados por cambios en la actividad simpática en este tejido.

Autor: SOLA GURPEGUI M. ISABEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se ha construido un anticuerpo recombinante quimérico con isotipo alfa porcino específico para el VGPT. El anticuerpo se ha expresado de forma transitoria en células epiteliales COS y de forma estable en células Sp2/0 y neutraliza al VGPT con una eficiencia comparable a la del anticuerpo 6A.C3 original. El anticuerpo recombinante de isotipo alfa tiene estructura dimérica y es 50 veces más eficiente en la neutralización del VGPT que otro anticuerpo recombinante con idéntica especificidad e isotipo gamma. Se ha demostrado la protección de cultivos celulares frente a infecciones virales mediante la expresión de anticuerpos recombinantes neutralizantes. La producción de virus en estas líneas celulares se redujo cien mil veces. Este trabajo establece las bases para el desarrollo de sistemas de terapia génica somática por expresión de anticuerpos específica de tejido. Se ha desarrollado un sistema que permite la expresión inducible de genes de inmunoglobulina en cultivos celulares de glándula mamaria de ratón, para ensayar la funcionalidad de módulos de expresión antes de utilizarlos en la obtención de animales transgénicos. Se han obtenido animales transgénicos que secretan entre 0.01 y 12 mg/ml de un anticuerpo monoclonal recombinante en la leche durante la lactancia. Los títulos de anticuerpo obtenidos redujeron la infectividad del VGPT en un factor superior a 10 elevado a 6, lo que proporciona una estrategia que permitirá proteger a la descendencia frente a la infección por coronavirus. Se han obtenido vectores basados en minigenomas defectivos sintéticos derivados del VGPT, que expresan anticuerpos neutralizantes del VGPT en cultivos celulares con títulos bajos. Se está optimizando la expresión específica de tejido de estos anticuerpos recombinantes neutralizantes intercambiando los elementos que regulan la transcripción en el vector utilizado.

Autor: SOTILLOS MARTIN M. SOL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La proteína transmembrana Notch es el receptor de una vía de comunicación intercelular que interviene en la especificación de diferentes tipos celulares durante el desarrollo de Drosophila melanogaster. En esta Memoria se presenta el análisis genético y molecular del gen kuzbanian, que codifica un nuevo componente de la vía Notch. Se demuestra la base celular del fenotipo neurogénico de las mutaciones kuzbanian y que la metaloproteasa-desintegrina codificada por kuzbanian interviene en la generación de un receptor Notch funcional, capaz de interaccionar con su ligando Delta, y/o en su activación posterior, pero no en la señalización a partir de un receptor Notch constitutivamente activado.

Autor: SUAREZ PUENTE XOSE ANTON.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Resumen: En este trabajo se aborda la identificación y caracterización de la Bph-rp y la MT4-MMP, dos enzimas hidrolíticos producidos por carcinomas mamarios. La Bph-rp humana (biphenyl hydrolase-related protein) es una nueva serín-hidrolasa identificada a partir de un carcinoma de mama, que muestra un alto grado de similitud con hidrolasas bacterianas implicadas en la degradación de compuestos aromáticos. Los ensayos de actividad llevados a cabo han demostrado que la Bph-rp tiene actividad serín-hidrolasa y es inhibida específicamente por inhibidores de serín-hidrolasas. Se ha llevado a cabo el estudio de la distribución subcelular de la Bph-rp y de los mecanismos implicados en su localización peroxisomal. Así mismo, se ha identificado y caracterizado el gen de la Bph-rp (BPHL), que está constituido por ocho exones y siete intrones, comprende alrededor de 30 kb de secuencia genómica, y se localiza en el cromosoma 6p25. Basándonos en estos resultados, se ha propuesto que la Bph-rp puede desempeñar una función en los procesos de destoxificación de compuestos nocivos para el organismo. En este trabajó se examinó la posibilidad de identificar nuevos miembros de la familia de metaloproteasas de matriz extracelular (MMP) producidos por carcinomas mamarios humanos. El análisis de biopsias de carcinomas de mama permitió identificar una nueva MMP, que presentaba las características extructurales de las MMPs asociadas a membrana, por lo que se denominó MT4-MMP. El gen de la MT4-MMP (MMP-17) se expresa preferentemente en cerebro, lecucocitos y órganos reproductores, así como en todos los carcinomas y líneas celulares de cáncer de mama estudiados. Un estudio preliminar del gen MMP-17 ha permitido establecer su localización cromosómica en 12q24.3.

Autor: TENORIO RODRIGUEZ CARMEN.
Año: 1997.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En esta tesis se ha estudiado la diseminación de los genes de resistencia a glicopéptidos en cepas de Enterococcus de diferente origen (clínico, ambiental y animal) y en grupos taxonómicos relacionados. Asimismo se ha determinado los métodos de detección fenotípica y genotípica de la resistencia a glicopéptidos y aminoglucósidos en dichas cepas y se ha valorado la actividad bactericida sinérgica de diferentes combinaciones de antibióticos en cepas de Enterococcus con diferentes mecanismos de resistencia. Se ha detectado resistencia de alto nivel (RAN) a glicopéptidos en cepas de Enterococcus de diferentes orígenes: aguas residuales (29%), intestinos de pollo (298%), heces de pacientes hospitalizados (15%) y alimentos. La RAN a glicopéptidos en estas cepas fue inducible por concentraciones subinhibitorias de vancomicina y teicoplanina, evidenciándose la presencia de la proteína VanA de 39 kDa en los extractos proteícos inducidos. En todos los casos se transfirió la resistencia a vancomicina por conjugación cuando se utilizó E. faecalis JH22 como receptor y en casi todos los casos se cotransfirió la resistencia a eritromicina. La transferencia coincidió con la adquisición de un plásmido de elevado peso molecular aunque la hibridación se produjo a nivel del cromosoma. Todas las cepas fueron caracterizadas en el genotipo vanA y en todas ellas se detectó por PCR la presencia de los genes del operón vanA (vanA, vanR, vanS, vanH, vanX, vanZ, vanY). Estos genes no fueron detectados en bacterias lácticas con resistencia a glicopeptidos a excepción del gen vanR en 2 cepas de Pediococcus pentosaceus (97% homología con vanR de Enterococcus). Se detectaron las enzimas modificantes de aminoglucósidos en las cepas de Enterococcus del estudio por PCR, hibridación y ensayo radioenzimático. Cabe destacar la detección de una nueva actividad enzimática AAC(6') en E. durans (especie específica ?), similar a la cromosómica de E. faecium, pero que no hibrida con una sonda específica de la misma. Se ha determinado el efecto bactericida sinérgico de la combinación ampicilina-ceftriaxona en cepas de E. faecalis con la enzima AAC(6')-APH(2''). Asimismo, se ha demostrado la obtención de un efecto sinérgico con la combinación penicilina-gentamicina en cepas de E. faecium con diferentes niveles de resistencia a penicilina, cuando se utilizan concentraciones de penicilina de 1/2 de la CMI. Ambas combinaciones pueden representar alternativas terapéuticas en el tratamiento de cepas con estos mecanismos de resistencia.