BIOQUIMICA MOLECULAR, 53

Autor: TIZON IGLESIAS M. BELEN.
Año: 1997.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOXIA CELULAR E MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOXIA AMBIENTAL.

Resumen: En la presente Tesis se ha secuenciado un fragmento de 16.710 pb de la región 28 del cromosoma VII de Saccharomyces cerevisiae. El análisis de la secuencia obtenida reveló la existencia de cinco ORFs que habían sido previamente asignadas a genes de función conocida (CEG1, SOH1, SCS3, SUP44 y NAB2) y otras cinco ORFs de función desconocida. Se llevó a cabo el análisis funcional de las cinco ORFs de función desconocida así como de una sexta ORF de la región 29 del mismo cromosoma. Para ello se procedió a la interrupción de dichas ORFs en las cepas diploides FY1679 y CEN.PK2, esporulación, análisis de tétradas, determinación de la esencialidad del gen y estudio fenotípico de los haploides derivados y diploides homozigotos obtenidos a partir de ellos. La ORF YGL131c presenta un motivo característico de peptidasas señal tipo I. La ORF129c podría relacionarse con la función mitocondrial. La ORF125w es muy homóloga a metilentetrahidrofolato reductasas y la ORF YGL128c a proteínas DnaJ. Los resultados de los análisis fenotípicos realizados son concordantes con estos altos grados de homología. Los análisis de las ORFs YGL124c e YGL121c no han revelado un fenotipo característico.

Autor: TOBEÑA SANTAMARIA RAFAEL .
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: La regulación de la expresión del gen de la MAT II fue estudiada en el ciclo celular de linfocitos T, tanto en la transición G0/G1 como en G1/S. El tratamiento de linfocitos quiescentes con Con A o PDBu/ionóforo de Ca elevado a 2+ induce el mRNA de la MAT II. La IL-2 incrementa los niveles de mensajero en linfoblasto T en G1 así como la actividad de la MAT II, en parte aumentando la transcripción del gen. El PDBu, también capaz de inducir la proliferación de linfoblastos, muestra una cinética similar de inducción de mensajero y actividad. Ambos estímulos no modifican los niveles de mRNA de la AdoHcy hidrolasa, otro enzima del ciclo de la metionina. La DEX y el 8Br-cAMP, inhibidores de la proliferación linfocitaria, son capaces de bloquear la acumulación de mRNA de la MAT II e inhibir la actividad MAT, inducida por IL-2 o PDBu. Todos estos resultados sugieren que la expresión del gen de la MAT II está sujeta a una regulación estrechamente relacionada con el ciclo celular de las células T. También hemos investigado la regulación de la expresión del gen de la AdoMetDC, aunque centrándonos en la transición G1/S de linfoblastos T. La IL-2 y el PDBu inducen el mensajero de la AdoMetDC, probablemente aumentando la transcripción del gen. La IL-2 no afecta a la eficiencia de traducción del mRNA. Los niveles de transcrito son también regulados por la concentración intracelular de poliaminas. La CHX superinduce la acumulación de mRNA de la AdoMetDC inducida por IL-2 o PDBu. El OA también provoca la inducción del mRNA de la AdoMetDC, indicando que las serina/treonina proteína fosfatasas juegan un papel en su regulación. Dependiendo de la señal extracelular usada el transcrito de la AdoMetDC exhibe diferente estabilidad. Todos estos datos sugieren que los linfoblastos T pueden utilizar múltiples vías de transducción de señales para regular los niveles de mRNA de la AdoMetDC.

Autor: TORREBLANCA PACIOS M. ANGELES .
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Resumen: Dada la importancia del metabolismo de la glucosa en el mantenimiento de la actividad neuronal, hemos estudiado el consumo de glucosa de neuronas de cerebelo en cultivo primario y su modulación. Observamos la existencia de dos fases en el consumo neurona de glucosa: una inicial de 1 a 11-12 días en cultivo (DEC), caracterizada por un consumo diario de aproximadamente 1'1 mimol de glucosa/10 6 cel. y una segunda fase de los 12 DEC en adelante, en la que el consumo diario se incrementó hasta 2'6 mimol glucosa/10 6 cel. La caracterización farmacológica del consumo indicó que este aumento es debido a la actividad glutamatérgica neuronal mediada por los receptores ionotrópicos tipo NMDA del ácido glutámico, y que el flujo al interior neuronal a través de los canales de calcio sensibles a voltaje contribuye significativamente al consumo de glucosa. Mediante microscopía láser confocal hemos estudiado las variaciones de la concentración de calcio intracelular durante el desarrollo neuronal en cultivo, y el papel de este ion en el proceso excitotóxico inducido tras la exposición de los cultivos a aminoácidos excitadores. Nuestros resultados indican que el calcio es un factor trófico para las neuronas, que disminuye significativamente su sensibilidad a las excitotoxinas mediante un mecanismo que depende de la síntesis de novo de proteínas.

Autor: TORRES NICOLAU JOSEP.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA I BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA CLINICA I PATOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: Las redes neuronales son técnicas especializadas de inteligencia artificial que mimetizan la estructura neurológica imitando la capacidad de aprender del cerebro humano. Han sido utilizadas satisfactoriamente en un gran número de aplicaciones en medicina, pero hasta ahora nunca para la predicción de la pérdida de masa ósea en la osteoporosis postmenopausica. Se han estudiado 59 mujeres menopausicas. La densitometría ósea en el triángulo de Ward y en la columna vertebral ha sido utilizada como criterio de clasificación de perdedoras rápidas y lentas de masa ósea. Diversas redes neuronales han sido entrenadas usando combinaciones de magnitudes bioquímicas, utilizadas como marcadores del metabolismo óseo, como variables de entrada, y las medidas densitométricas como patrón. Los mejores resultados se han conseguido con una red formada por seis variables de entrada: estrona, estradiol, osteocalcina y paratirina en suero, y calcio/creatinina y hidróxiprolina/creatinina en orina, entrenada por retropropagación. Las redes neuronales desarrolladas son capaces de clasificar las perdedoras de masa ósea rápidas y lentas con una eficacia del 75%. El análisis discriminante lineal muestra una eficacia inferior: 66% en el triangulo de Ward y 58% en la columna vertebral.

Autor: VALES GOMEZ M. MAR.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: Se han expresado de forma soluble y caracterizado varios miembros de la familia de receptores de NK (p58/p50), así como ciertos alelos de HLA. Se ha analizado in vitro el patrón de reconocimiento entre estos receptores y sus ligandos, estudiando los parámetros cinéticos, usando la tecnología de BIAcore. NKAT1 reconoce HLA-Cw6 con velocidades de asociación y disociación extremadamente rápidas. HLA-Cw7 reconoce a NKAT2 de manera similar. El péptido presentado por la molécula de HLA-Cw7 afecta el reconocimiento por NKAT2. Las moléculas p50 analizadas no reaccionan con HLA. En el caso de clon 49 la mutación en posición 45 restablece la unión. La reacción cruzada de ciertos anticuerpos dirigidos frente a NKAT pone de manifiesto que los ensayos celulares son de dificil interpretación debido a la presencia de múltiples receptores y ligandos tanto en la célula NK como en la posible diana, respectivamente. Por lo tanto, se ha desarrollado un sistema in vitro que reproduce la especificidad de interacción observada a nivel celular.

Autor: VALLE RODRIGUEZ MIKEL.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El conector del bacteriofago phi 29 es una estructura macroproteínica que se sitúa en uno de los vértices de la cabeza del virus. Su función está relacionada con la translocación del DNA durante los procesos de empaquetamiento e inyección del DNA viral, y por tanto presenta dominios de unión con dicho ácido nucleico. Además también presenta regiones de interacción con un RNA (pRNA) que resulta necesario para la unión posterior con el DNA. En este trabajo se estudia la interacción con ambos tipos de ácidos nucleicos y también se localizan los dominios de unión en la estructura tridimensional del conector. Para situar estas regiones en la estructura cuaternaria de la proteína, se emplean anticuerpos obtenidos siguiendo tres estrategias diferentes. Por un lado se utilizaron anticuerpos policlonales obtenidos mediante inmunización con péptidos, y también anticuerpos monoclonales. Por otro, se desarrolló una nueva metodología que permite la purificación de anticuerpos policlonales monoespecíficos de secuencia a partir de un policlonal general frente al conector completo. Con los diferentes anticuerpos se procedió a la obtención de complejos que se analizaron mediante microscopía electrónica de transmisión, y tras procesar diferentes cantidades de las imágenes obtenidas resultaron medias finales en las que se pudo definir la zona de reconocimiento estableciendo la relación secuencia-estructura que se perseguía.

Autor: VALLEJO FERNANDEZ DE LA REGUERA INMACULADA.
Año: 1997.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR, MICROBIOLOGIA. PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA MEDICA Y APLICADA.

Resumen: B. cinerea, como hongo fitopatógeno, produce innumerables pérdidas a los agricultores de todo el mundo mediante el desarrollo de enfermedades que tienen diferentes consecuencias dependiendo del tipo de cultivo y del área geográfica en que éste se encuentre. En la provincia de Cádiz, donde se desarrolla el trabajo de investigación que se describe en la presente memoria, el hongo ha ido adquiriendo en los últimos años un interés especial por ser el causante de la Podredumbre gris, manifestación del hongo sobre la vid, cuyo producto directo, el vino, constituye una parte importante de la economía de la provincia, sobre todo de su zona norte. La utilización de fungicidas tradicionales y de nueva síntesis no prometen resultados fructíferos, y las cepas resistentes van colonizando los viñedos a medida que se utilizan nuevos productos. La facilidad con que "eclosionan" dichas resistencias radica principalmente en la plasticidad de las poblaciones fúngicas en general, y en la alta variabilidad que muestra B. cinerea, en concreto. Aunque el hongo se ha estudiado bajo múltiples aspectos, aún no se conocen exactamente los mecanismos moleculares a través de los cuáles actúa. El gran vacío existente en torno a estos interrogantes obedece a la propia naturaleza del fitopatógeno, que ha impedido avanzar en el conocimiento de la especie a la misma velocidad con la que se ha podido profundizar en el de otros hongos. Sin embargo, dicho conocimiento es esencial para el desarrollo de estrategias actualmente en vías de desarrollo para la eliminación de la plaga. Por todo ello, se han caracterizado 10 cepas de Botrytis cinerea a nivel morfológico, molecular, bioquímico y genético. Los resultados indican que existen diferencias morfológicas claras entre las 10 cepas debidas, principalmente, a la heterocariosis de las cepas. Algunas de estas características se han relacionado directamente con la patogenicidad del hongo. El tamaño de los conidios, determinado a través de microscopía electrónica de barrido, resultó variable entre las cepas. Las proteínas totales de Botrytis cinerea se encuentran enmarcadas dentro del rango de tamaño entre 30 y 200 Kd. El patrón de proteínas totales es característico y representativo de cada una de las cepas estudiadas. El cariotipo electroforético determinado mediante electroforesis en campo pulsante muestra un acusado polimorfismo entre las diez cepas estudiadas. El número de bandas resueltas osciló entre 4 y 8 y los tamaños de las mismas entre 1.88 y 3.86 Mb. Se ha identificado la banda más pequeña resuelta mediante electroforesis en campo pulsante como ADN mitocondrial, con un tamaño de 25.8 Kb. El número de núcleos en los conidios, determinado por microscopía de fluorescencia, es un carácter muy variable, tanto en una misma cepa como entre cepas diferentes. Todas las cepas son capaces de producir microconidios, por lo que todas pueden utilizarse, al menos, como parental masculino para realizar cruzamientos. La patogenicidad de las cepas depende directamente del tipo de vegetal sobre el que se realice el bioensayo, resultando muy variables en cuanto a patogenicidad. Esta no se pudo relacionar con el tamaño de los conidios, pero en las cepas menos infectivas se pudieron establecer relaciones claras con otros caracteres. La respuesta de las diferentes cepas a fungiestáticos parece estar relacionada con una interacción sinérgica entre numerosas células del hongo. Esta respuesta es variable dependiendo de la cepa de la que se trate. El fungicida benomilo inhibió la germinación de los conidios de todas las cepas. El origen de las cepas (área geográfica u hospedante del que se aisló) no influye significativamente en la similitud o disparidad de los rasgos morfológicos en medio sintético, las características moleculares y bioquímicas analizadas o su grado de patogenicidad.

Autor: VAZQUEZ CALLEJA M. ISABEL.
Año: 1997.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: FARMACIA Y TECNOLOGIA FARMACEUTICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOFARMACIA Y TECNOLOGIA FARMACEUTICA.

Resumen: El virus vaccinia (VV) es el nombre que se asignó al agente utilizado para la vacunación contra el virus de la viruela humana, uno de los agentes infecciosos más devastadores de la humanidad. Desde la erradicación de la viruela, este virus está siendo considerado como alternativa para el desarrollo de vacunas contra una gran variedad de agentes infecciosos, gracias a su capacidad para integrar y expresar hasta 25.000 pares de bases de información heteróloga. También constituye un modelo para el estudio de mecanismos de replicación virales y de la biología celular. Sin embargo, se hace necesario un mayor conocimiento de los genes implicados en la entrada del virus, ciclo replicativo, virulencia y respuesta inmune, entre otros. De las aproximadamente 100 proteínas que están implicadas en el ensamblaje del VV, la proteína de 14kDa producto del gen a27L (p14) se ha considerado de gran importancia ya que está implicada en procesos de entrada y de salida del virus de la célula hospedadora, además de ser altamente inmunogénica e inducir la formación de anticuerpos neutralizantes. Por todo ello realizamos una caracterización estructural y funcional de esta proteína de 110 aminoácidos. De los estudios llevados a cabo hemos podido concluir: 1.- La proteína forma trímeros de idénticas subunidades mantenida por interacciones hidrófobas y electrostáticas, formando una estructura tipo coiled-coil (o de alfa-hélices enrolladas sobre sí mismas formando una superhélice). La viabilidad de esta estructura ha sido corroborada mediante la obtención de un modelo tridimensional y dinámica molecular. 2.- En las partículas víricas, el extremo carboxilo de la p14 está implicado en la interacción con la proteína de 21kDa. Esta última es una proteína transmembrana que se localiza en la membrana vírica y que sirve de anclaje de la p14 a la superficie del virus maduro intracelular. 3.- En el extremo amino de la p14 se localizan los dominios responsables de la interacción con proteínas o lípidos del aparato de Golgi y que permiten la salida del virus en forma infecciosa extracelular, así como los dominios responsables de la fusión virus-célula, y de la interacción de esta proteína con el sulfato de heparina presente en la superficie celular como un primer paso para la entrada del virus. Este tipo de estructura definida, así como la localización de los distintos dominios que confieren a la proteína la funcionalidad, se sitúan en la misma secuencia en otras proteínas con un importante papel en entrada de los distintos virus en la célula. Entre ellas destacar la gp41 del virus de la inmunodeficiencia humana, la región transmembrana del virus de la leucemia de Moloney, o la subunidad HA2 del virus de la gripe. Todas ellas forman un triple coiled-coil que precede al dominio de fusión y que es seguido por la región transmembrana, sustituida en la p14 por el dominio de anclaje.

Autor: VAZQUEZ MARTINEZ ELENA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El glutamato es el neurotransmisor excitatorio más utilizado por las neuronas del sistema nervioso central de los mamíferos. Las sinapsis glutamatérgicas están implicadas en la transmisión sináptica rápida, en procesos de aprendizaje y memoria, en fenómenos de plasticidad sináptica, así como en situaciones degenerativas asociadas a determinadas patologías tanto de aparición aguda, como las derivadas de hipoglucemia, hipoxia e isquemia cerebrales, como crónica, como las enfermedades de Alzheimer, Parkinson y Huntington. A nivel presináptico, la complejidad de las sinapsis glutamatérgicas se manifiesta por la existencia de múltiples mecanismos de control de la exocitosis de glutamato a través de auto y heterorreceptores. En esta tesis doctoral se ha utilizado la preparación de terminaciones sinápticas aisladas, sinaptosomas, para investigar las vías de transducción de señales que se ponen en marcha tras la activación de receptores metabotrópicos presinápticos sensibles a glutamato y adenosina. Así mismo, se han estudiado los cambios en la concentración de segundos mensajeros y los mecanismos responsables de la facilitación o inhibición de la liberación de glutamato que se observa en cada caso. Hemos encontrado que estos receptores coexisten en la misma terminación sináptica, dando lugar a una compleja interacción que determina finalmente un tono modulador en la presinapsis, de facilitación o inhibición que podría tener relevancia fisiológica en los fenómenos de plasticidad sináptica y en el mantenimiento de una concentración extracelular de glutamato por debajo de los límites neurotóxicos.

Autor: VAZQUEZ ROJO JULIO.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MORFOLOGIA Y BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR (BIENIO 1990-92).

Resumen: Se analiza la expresión de apolipoproteína D, pepsinógeno C y colagenasa 3 en 58 tumores de endometrio, 72 carcinomas epiteliales de ovario y 8 carcinomas escamosos de cérvix mediante análisis inmunohistoquímico. Este análisis localizó a las 3 proteínas en el citoplasma de las células tumorales excepto la apolipoproteína D que también se situó en los fibroblastos del estroma. En los tumores de endometrio, el 34% fueron positivos para la apolipoproteína D y no se asoció a ninguna característica de las pacientes ni de los tumores. El 36% fueron positivos para el pepsinógeno C y el 51% para la colagenasa 3 y se asociaron significativamente con la infiltración miometrial de forma que a mayor infiltración miometrial, menor expresión de pepsinógeno C y mayor de colagenasa 3. En los carcinomas epiteliales de ovario, el 27% fueron positivos para la apolipoproteína D y las pacientes con tumor residual mayor de 1 cm. tenían una menor supervivencia cuando sus tumores eran negativos para la proteína, de forma significativa. El 26% fueron positivos para el pepsinógeno C y las pacientes con niveles séricos preoperatorios de CA 125 negativos tenían un menor tiempo libre de enfermedad y una menor supervivencia cuando los tumores eran negativos para el pepsinógeno C. El 22% de los tumores de ovario fueron positivos para la colagenasa 3 y se asoció significativamente con el tamaño del tumor inicial pero no con el pronóstico de las pacientes. La totalidad de los carcinomas escamosos de cérvix fueron negativos para la apolipoproteína D y el pepsinógeno C y el 37% fueron positivos para la colagenasa 3. Conclusión: la expresión de apolipoproteína D y pepsinógeno C en los tumores ginecológicos parece asociarse a un comportamiento tumoral menos agresivo y la expresión de colagenasa 3 a un comportamiento tumoral más agresivo.

Autor: VELASCO CARDENAL MARTA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El óxido nítrico (NO) es un segundo mensajero clave en la señalización de diversos procesos fisiológicos. Sin embargo, una producción excesiva y desregulada de este radical puede causar daño tisular. El NO es sintetizado a partir de L-arginina por la óxido nítrico sintasa. En mamíferos, se han identificado tres isoformas diferentes de esta enzima, dos de ellas constitutivas y una inducible. La óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) es expresada en una gran variedad de tipos celulares en respuesta a diferentes estímulos inmunes e inflamatorios. Numerosos trabajos han implicado al NO y a la iNOS en la fisiopatología hepática. Ya que la expresión de iNOS es regulada principalmente a nivel transcripcional, el estudio realizado trata de establecer los mecanismos moleculares que controlan su expresión. Los resultados mostrados en este trabajo permiten concluir que procesos infeccioso-inflamatorios conducen a la expresión de iNOS en el hígado tras la activación transitoria de diferentes factores de transcripción tales como NF-kB; AP-1, IRF y GAS, siendo NF-kB el elemento esencial de esta inducción. Dado el importante papel que juega NF-kB se ha estudiado también el mecanismo que regula la activación de este factor de transcripción.

Autor: VENTOSO BANDE IVAN JOSE.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El trabajo presentado aporta nueva información acerca de la estructura y función de la proteasa 2A de poliovirus. Hemos descrito que la proteasa 2A se comporta como una citotoxina viral, inhibiendo tanto la traducción como la transcripción de la célula hospedadora. Hemos diseñado un sistema genético para la búsqueda de péptidos inhibidores de la actividad proteolítica de la proteasa 2A. Así mismo hemos caracterizado la función natural de la proteasa 2A en el ciclo de replicación del virus. Dicho enzima se comporta como un activador específico de la traducción de los ARNm del virus. Creemos que nuestro trabajo aporta una valiosa información al conocimiento de la acción de las proteasas de los virus animales e introduce una nueva perspectiva en las estrategias para poder inhibir su función, y en definitiva, para poder inhibir la propagación del virus.

Autor: VILLENA GARCIA JOAN.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y PXICOGIA MOLECULAR.

Resumen: El factor de transformación Beta (TGF-Beta) desempeña un papel importante en la regulación de la matriz extracelular y como modulador de la proliferación y diferenciación de muchos tipos celulares. En este trabajo, hemos estudiado los efectos del TGF-Beta1 sobre la proliferación, la formación de colonias en agar blando y la síntesis de proteoglicanos en tres líneas celulares de melanoma humano (SK-mel-1.36-1-5, SK-mel-3.44 y SK-mel-23), una de astrocitoma (U-251) y una de neuroblastoma (SK-NSH). El TGF-Beta1 inhibe la proliferación y el crecimiento en agar blando en todas las líneas estudiadas con la excepción de la línea celular de melanoma SK-mel-23, en la que en general el TGF-Beta1 no presenta efectos. El TGF-Beta1 incrementa la liberación de proteoglicanos al medio extracelular, entre ellos el proteoglicano específico de melanoma mel-CSPG y un nuevo proteoglicano denominado por nosotros PG-L ("large proteoglycan"). Este factor modifica la composición de disacáridos y la sulfatación de las cadenas de glicosaminoglicanos. El efecto más importante es el incremento del "shedding" de mel-CSPG al medio tal y como hemos observado mediante experimentos de "pulse-chase", sin verse afectados los niveles de proteoglicano unido a membrana ni el balance entre la forma de proteoglicano y la forma glicoproteica del mel-CSPG. La caracterización del proteoglicano mel-CSPG purificado de células control y tratadas con TGF-Beta1 indica que el factor incrementa ligeramente la longitud y el número de cadenas de GAGs presentes en este proteoglicano. Obtuvimos resultados similares con el nuevo proteoglicano PG-L. En todos los casos el efecto del TGF-Beta1 es más pronunciado en la línea celular menos diferenciada SK-mel-1.36-1-5 que en la línea celular SK-mel-3.44, mientras que no tiene efecto alguno sobre la línea celular más diferenciada SK-mel-23. El TGF-Beta1 también inhibe la proliferación en las líneas celulares de astrocitmoa U-251 y de neuroblastoma SK-NSH. Estas líneas no expresan el proteoglucano específico de melanoma mel-CSPG pero si PG-L. EL TGF-Beta1 incrementa la producción de PG-L en ambas líneas celulares. El nuevo proteoglicano, PG-L, presenta una masa molecular aparente de más de 1000 kDa. Este proteoglicano presenta cadenas de glicosaminoglicanos de tipo condroitín sulfato que al digerirse con condroitinasa ABC dejan dos proteínas núcleo con una masa molecular aparente de más de 400 kDa. Estas caracterísiticas indican que PG-L es un nuevo proteoglicano descrito en células de melanoma, astrocitoma y neuroblastoma.

Autor: VILLUENDAS GIMENEZ GEMMA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA ANIMAL II (FISIOLOGIA ANIMAL) PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA ANIMAL COMPARADA.

Resumen: La somatostatina es un neuropéptido que esta presente en regiones concretas del SNC durante el desarrollo, lo que sugiere que participe en el proceso de diferenciación neuronal. El desarrollo del sistema nervioso esta regulado por factores neurotróficos que actuan en las distintas etapas desde la fase inicial deproliferación y diferenciación hasta etapas mas tardías donde se establecen las conexiones axónicas. La compleja expresión de neuropéptidos y factores neurotróficos está regulada de forma precisa tanto en el tiempo como en el espacio durante el desarrollo. Estudios previos realizados en el SNP han demostrado que la producción de neuropéptidos esta influenciada por factores proteicos que se sintetizan en diferentes tipos celulares. La acción del BDNF se identificó inicialmente en neuronas perifericas. Este factor y sureceptor, se expresan abundantemente en cerebro indicando una importante función fisiológica en diferentes regiones cerebrales. En nuestro estudio demostramos que la acción del BDNF interfiere en la regulación de somatostatina por despolarización de la membrana con altas concentraciones de potasio. La actividad neuronal inducida por despolarización, provoca la activación de canales de sodio y calcio, incrementando la acumulación del ARNm de somatostatina.

Autor: WERE EDUARDO FELIPE.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En este trabajo hemos investigado en ratones transgénicos una actividad LCR en el locus del gen de la queratina 8 humana (HK8), que se expresa de forma específica en epitelios sencillos. Los LCR son elementos de control en cis responsables del establecimiento y mantenimiento del estado transcripcionalmente activo de dominios cromosómicos. Nuestro análisis ha permitido identificar un fragmento genómico del locus HK8, de 34 kb, que contiene una actividad LCR. Hemos determinado además que las secuencias responsables para esta actividad LCR se localizan en secuencias intragénicas. La organización de esta actividad LCR se asemeja a la del LCR asociado al locus del gen de la lisozima de pollo, ya que requiere la participación de diversos elementos en cis distribuidos en el locus. También hemos determinado que el primer intrón contiene elementos de control necesarios para la expresión específica de tejido de HK8, de forma que la deleción de esta región resulta en pérdidas importantes de expresión en tejidos como plexos coroideos, hipófisis, intestino o membranas extraembrionarias.

Autor: YUSTE HERRANZ ELOISA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: INMUNOLOGIA.

Resumen: La tesís estudia los cambios de eficacia biológica en poblaciones clonales del VIH-1 tras pases seriados en cuello de botella. La variabilidad genética del VIH-1 es una de sus propiedades más características. Esto produce la existencia de genomas con mutaciones distintas en cualquier población viral. Estas mutaciones se acumulan cuando las poblaciones viales se someten a pases seriados de poblaciones obtenidas de placas de cultivo en ausencia de selección. Despues de poner a punto un método rápido de cuantificación de distintas poblaciones virales en competición, el VIH-1 ha mostrado una capacidad muy limitada de adquirir nuevas mutaciones, en comparación con otros sistemas virales de RNA. Estos datos implicarían que en ciertas condiciones experimentales el VIH-1 estaría cerca de la catastrofe de error replicativo.

Autor: DIAZ FLORES ESTEVEZ FELICITAS.
Año: 1997.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: La inestabilidad de microsatélites refleja una malfunción en los mecanismos responsables de la reparación durante la replicación. Nos referimos a ella como Fenotipo RER o Mutador. Por lo menos 4 genes humanos; hMSH2, hMLH1, hPMS1 y hPMS2, participan en esta vía. Mutaciones en ellos dan como resultado proteínas defectivas que fallan al corregir los errores de replicación. Estos defectos pueden llevar a una cascada secundaria de mutaciones algunas de las cuales pueden alterar a los oncogenes y a los genes supresores y con ello promover la aparición de cáncer. Ante las numerosas alteraciones presentes en los distintos tipos de tumores especialmente, colon y vejiga y ya que el análisis de las alteraciones en el patrón de microsatélites ha demostrado ser una herramienta útil en el estudio de la Pérdida de Heterocigosidad (LOH) y de la Inestabilidad de Microsatélites decidimos estudiar ambos fenómenos en 18 pacientes afectos de cáncer de colon y 11 de vejiga, utilizando 3 marcadores, D2S123, Mfd27 y TP53, con el fin de poner a punto una técnica de diagnóstico para el análisis de las repeticiones de dinucleótidos y comparar los resultados moleculares obtenidos con las diferentes variables clínico-anatomopatológicas, determinando las posibles correlaciones cara al pronóstico. Se estableció como criterio de Fenotipo RER, la alteración del patrón de microsatélites en al menos un 60% o 2 de los tres marcadores empleados, entendiendo por tal alteración la adición de una o dos bandas extra en tumor que las correspondientes en mucosa sana. El criterio de LOH fue la ausencia o reducción de al menos un 50% de un alelo en tejido tumoral con respecto a su homónimo en mucosa sana. En cáncer de vejiga se encontró una asociación estadísticamente significativa entre el fenotipo RER y las variables, edad de aparición temprana, existencia de antecedentes personales de la enfermedad, estudio citológico positivo y estadio anatomo-patológico de mejor pronóstico, al analizarlos en su conjunto. La asociación estadísticamente significativa de RER+, estadios anatomopatológicos precoces y ausencia de recidivas tras el tratamiento apuntan al fenotipo RER+ como factor de mejor pronóstico en el cáncer de vejiga. Existe una tendencia en los pacientes con cáncer de vejiga y pérdida de Heterocigosidad, a la aparición en edades tempranas, antecedentes personales positivos, estadios anatomopatológicos más precoces y citología positiva. La frecuencia de LOH para el microsatélite TP53 en cáncer de vejiga es bastante elevada indicando a una importante asociación entre ambos fenómenos. Existe una asociación altamente significativa entre la localización del tumor en el colon derecho y la pérdida de heterocigosidad.

Autor: PEREZ RODRIGUEZ M. DOLORES.
Año: 1997.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La secuenciación del fago JA13 aislado de una genoteca genómica de H. polymorpha en el fago EMBL3 y que contiene los genes que codifican la nitrato reductasa (YNR1) y la nitrato reductasa (YNI1), reveló la presencia de una pauta abierta de lectura de 1524 pb que presenta gran homología con los genes de los transportadores de nitrato de Aspergillus nidulans (crnA) y Chlamydomonas reinhardtii (Nrt1;1). Esta pauta abierta de lectura se denominó YNT1 (gen del transportador de nitrato de H. polymorpha. La interrupción de este gen resulta en una disminución importante en la tasa de toma de nitrato. La secuencia aminoacídica deducida de YNT1 presenta una gran similitud con las correspondientes deducidas de los genes aislados en el hongo A, nidulans, el alga C. reinhardtii y las plantas H. vulgare y N. plumbaginifolia. Esta similitud es más patente en el extremo amino terminal. La expresión del gen del transportador de nitrato es estrictamente dependiente de la presencia de nitrato en el medio. Las secuencias promotoras implicadas en esta expresión se encuentran localizadas en una amplia zona. Se ha obtenido un antisuero anti-Ynt1p usando como antígeno la zona central hidrofílica de la proteína. El antisuero reconoce la proteína Ynt1p en fracciones de membranas totales de células silvestres para el gen YNT1 inducidas con nitrato.

Autor: PEREZ PEREZ JOSE ANTONIO.
Año: 1997.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: El presente trabajo describe el clonaje del gen INV1 de Pichia anomala que codifica para una proteína con actividad invertasa, así como el estudio y caracterización de la expresión de este gen en la levadura Saccharomyces cerevisiae. El gen INV1 clonado presenta una fase de lectura abierta de 1650 pb que codifica para una proteína de 550 aa con gran homología a nivel de secuencia de aminoácidos con proteínas con actividad invertasas caracterizadas en otra levaduras. Esta secuencia va precedida por una región 5' que presenta los elementos consensos mínimos para promover la transcripción del gen. Cuando este gen es introducido en un mutante de S. cerevisiae carente de actividad invertasa mediante un vector adecuado, se puede detectar el producto del gen INV1 en dos formas de diferente peso molecular aparente. Este trabajo demuestra que esa diferencia de masa corresponde a un distinto grado de glicosilación y que presentan una localización celular diferente: una interna y otra externa a la célula. En ambos casos puede detectarse actividad invertasa, por lo que se concluye que la forma citosólica representa la proteína en tránsito antes de ser secretada por la célula.

Autor: MARTORELL BONET LOURDES.
Año: 1997.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA DE TARRAGONA.

Resumen: La esquizofrenia es una enfermedad compleja en la que parecen estar involucrados factores genéticos y ambientales. Aunque hay evidencias de una base genética, no se conoce todavía su pauta de transmisión. El descubrimiento de mecanismos peculiares de transmisión génica de las características de la enfermedad, como las expansiones de trinucleótidos repetidos, abre nuevas posibilidades par explicar el modelo hereditario en efermedades complejas. Se ha demostrado que las expansiones de trinucleótidos repetidos, también llamadas mutaciones dinámicas, son el mecanismo suybyacentes que causa muchas enfermedades que presentan anticipación, un fenómeno definido como un progresivo descenso de la edad de inicio de la enfermedad y/o un aumento de la severidad de los síntomas en sucesivas generaciones. Algunos estudios han demostrado que existe anticipación en la esquizofrenia qunque la posibilidad que este fenómeno pueda ser debido a sesgos en la verificación de las muestras no puede ser descartada. La técnica de detección de trinucleótidos repetidos (RED, repeat expansión detection) es un metodo que permite detectar expansiones de repetición presentes en el genoma de un individuo. Normalmente el número de repeticiones asociadas con fenotipos patológicos, en efermedades causadas por expansiones de repetición, es alrededor de 40. Algunos estudios han encontrado expansiones de CAG en pacientes con esquizofrenia que son más largas que en los sujetos control. El objetivo de este trabajo ha sido evaluar si la expansión del triplete CAG está presente en las mafilias con esquizofrenia que presentan anticipación. Además se ha analizado la región de trinucleótidos repetidos CAG del gen de las ataxia es penocerebelar tipo 1 (SCA1) para determinar si existe asociación de esta región con la esquizofrenia. Se han estudiado con el método RED 27 parejas (padres-hijos) de pacientes esquizofrénicos y 78 sujetos control, y por otro lado se ha explorado la región codificante del gen SCA1 en 64 enfermos y 100 sujetos control. Se ha observado una aparente anticipación en la edad de aparición de la esquizofrenia en 21 de 27 parejas (padres-hijos), pero la longitud del producto RED no era estadísticamente diferente en los pacientes respecto a los controles y en los progenitores respecto a los descendientes. Han sido identificadas dos nuevas variantes del gen SCA1, que representan sustituciones de aminoácidos en los codones 186 y 754. En conclusión, en la muestra estudiada hay algunas evidencias de anticipación, pero no pueden ser explicadas por la presencia de expansiones de repetición de CAG. Las nuevas variantes identificacas en el gen SCA1 podrían contribuir al fenotipo de la esquizofrenia.