BIOQUIMICA MOLECULAR, 54

Autor: NAVARRO GOCHICOA M. TERESA.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este trabajo se han desarrollado diferentes estrategias moleculares para el estudio de la ruta de asimilación de nitrato utilizando como organismo modelo el alga verde Chlamydomonas reinhardtii. Conocer los elementos estructurales y reguladores de la ruta de asimilación de nitrato es el primer paso para una correcta manipulación de plantas transgénicas, aumentar el rendimiento agrícola, y evitar el impacto ecológico/salud pública que esta ocasionando el abuso de fertilizantes nitrogenados. Los objetivos de este trabajo eran: 1,- La obtención y caracterización de mutantes afectados en la NiR con el objeto de examinar si un defecto en la NiR daba lugar a una alteración en la regulación de los demás componentes de la ruta. 2,- La construcción de vectores que permitan la expresión de genes heterólogos de plantas, para de esa forma tratar de identificar la funcionalidad de esos genes en Chlamydomonas. 3,- El estudio de estirpes que expresen constitutivamente la nitrato reductasa, para estudiar el posible papel regulador de la NR así como examinar de que modo afecta en la regulación de la ruta la expresión constitutiva de la NR. Como resultado de nuestro trabajo podemos concluir que: * La ausencia de NiR en C. Reinhardtii no desregula la expresión de la NR y de los sistemas de transporte de alta afinidad de nitrato. Proponiéndose que el nitrito, producto directo de la actividad NR, es un metabolito regulador negativo sobre la expresión de los genes Nial, Nrt2;1 y Nar2. * En los mutantes de NiR se demuestra la existencia de sistemas de transporte de baja afinidad de nitrato, así como sistemas eficientes para exportar nitrito de la célula, independientes de Nrt2; l/Nar2. * En los mutantes de los sistemas de transporte de nitrato de alta afinidad (S10 y M4), se demuestra que existen al menos dos señales de nitrato para la expresión/actividad de la NR. Una que es sentida extracelularmente y que da cuenta de la expresión del transcrito de NR y otra intracelular que actúa postrascripcionalmente. * La expresión constitutiva de la NR en medios con amonio permite la expresión/actividad de los sistemas de alta/baja afinidad para el transporte de nitrateoy de un posible transportador de cloruro. * La estirpe 23c está afectada en un gen cuya expresión es esencial para el crecimiento mantenido en nitrato en condiciones de luz continua y que posiblemente está relacionado con el transporte de cloruro. En la bibliografía se han descrito numerosos mecanismos que tratan de explicar la dificultad en la obtención de transformantes con DNA exógeno, que pudieran ser aplicables a la falta de resultados positivos en este trabajo en la complementación con genes heterólogos. Sin embargo los estudios realizados pueden servir de base para posteriores estudios en este aspecto, dada la importancia de la utilización de Clhamydomonas como un organismo modelo, por sus características fisiológicas y genéticas frente a la dificil obtención de mutantes en plantas que demuestran la funcionalidad de determinados genes.

Autor: REDONDO NEVADO JOSÉ.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS .

Resumen: Los ureidos alantoína y alantoato son una clase de compuestos orgánicos que proceden de la oxidación enzimática de las purinas. En algunas plantas, los ureidos juegan un papel esencial en la asimilación, transporte y almacenamiento de nitrógeno. En particular, las leguminosas se pueden clasificar en amidas y ureidas dependiendo de la forma en la que transportan el nitrógeno fijado simbióticamente desde los nódulos a las partes aéreas de la planta. La uricasa (urato: oxígeno oxido reductasa, EC 1.7.3.3) es la enzima que cataliza la ruptura del anillo purínico del urato para dar alantoína. Se trata de una enzima de gran interés para comprender el proceso de asimilación de los compuestos nitrogenados fijados mediante simbiosis en leguminosas. Esta enzima y el gen que la codifica han sido objeto de intensas investigaciones en leguminosas del tipo ureido. Por el contrario, en plantas leguminosas que transportan el nitrógeno en forma de amidas, el estudio de este gen ha recibido, hasta ahora, escasa atención. El garbanzo (Cicer arietinum L.) ha sido descrito como una leguminosa cuyo exudado xilemático contenía tanto asparragina como alantoína y ácido alantoico, comportándose por tanto de una forma intermedia entre las leguminosas de comportamiento ureido y las de comportamiento amida. El objetivo de esta tesis ha sido profundizar en el conocimiento de la estructura y el comportamiento de los genes y enzimas de la biosíntesis de ureidos, en particular la urato oxidasa. Para ello se ha caracterizado y purificado la enzima de hojas de garbanzo y se ha comparado con la de otras plantas alejadas filogenéticamente (capítulo I) y se ha clonado el gen que la codifica (capítulo II). Así mismo, se ha clonado su cDNA y se ha estudiado el patrón de expresión del gen a lo largo del tiempo en diferentes partes de la planta (Capítulo III). Finalmente, el cDNA se ha expresado en E.coli., y se ha caracterizado la proteína resultante (Capítulo IV).

Autor: HUMANES MARTIN M. LOURDES.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: VETERINARIA.

Resumen: Se ha purificado hasta homogeneidad la limonoato deshidrogenasa (Ldasa) de R. Fascians, organismo que expresa dicha enzima de forma constitutiva, a diferencia de las restantes especies bacterianas en las que esta ha sido detectada. La enzima pura ha sido caracterizada físico-química y cineticamente y se han obtenido anticuerpos específicos frente a ella en conejo. Sehan estudiado las variaciones de actividad Ldasa en cultivos de Rhodoc ccus en presencia de distintas fuentes de carbono, con especial énfasis en la inducción de la actividad LDasa por limonoato. Las preparaciones de enzima pura han permitido la secuenciación de su extremo amino terminal. El conocimiento de esta secuencia de aminoácidos ha hecho posible, mediante la técnica de PCR inversa, la obtención de una sonda específica para el gen de la LDasa. Esta sonda se ha utilizado para rastrear los clones de la genoteca de R. Fascians que hemos construido en cosmidos. A partir de uno de los clones que ha dado señal positiva, se ha secuenciado un fragmento de 6 kb en el que parece encontrarse la secuencia de nucleotidos correspondiente al extremo amino de la proteina.

Autor: ALBERDI SOLA ALEXANDER.
Año: 1996.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: HISTOLOGIA Y ANATOMIA PATOLOGICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR.

Resumen: LOS FACTORES REGULADORES DEL INTERFERON, IRF-1 E IRF-2, SON PROTEINAS NUCLEARES QUE SE UNEN A LOS GENES DEL INTERFERON (IFN) Y A LOS GENES INDUCIBLES POR IFN, CON UN EFECTO TRANSCRIPCIONAL POSITIVO Y NEGATIVO, RESPECTIVAMENTE. EL OBJETIVO ES DETERMINAR LOS NIVELES DE RNAM DE IRF-1 E IRF-2 EN PACIENTES CON HEPATITIS CRONICA C (HC-C) Y OBSERVAR ESTOS NIVELES TRAS ESTIMULACION CON VIRUS SENDAI O IFN-ALFA. SE INCLUYERON 20 CONTROLES SANOS (C) Y 53 PACIENTES CON HC-C. DE ELLOS, 38 ERAN VIRUS DE LA HEPATITIS C (VHC)+ EN SUERO Y EN CELULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERIFERICA (CMSP) POR LA TECNICA RT-PCR. LOS 15 RESTANTES ERAN PACIENTES CON RESPUESTA SOSTENIDA (VHC-) TRAS 12 MESES DE TRATAMIENTO CON IFN Y CON UN SEGUIMIENTO MAYOR DE 1 AÑO. LOS NIVELES DE RNAM DE IRFS FUERON DETERMINADOS EN CMSP NO CULTIVADAS, ASI COMO EN CMSP CULTIVADAS CON VIRUS SENDAI O IFN-ALFA. POSTERIORMENTE, SE REALIZO RT-PCR SEMICUANTITATIVA A PARTIR DEL RNA EXTRAIDO DE ESAS CELULAS. SE AMPLIFICO EL GEN DE LA BETA-ACTINA COMO CONTROL INTERNO. LOS RESULTADOS INDICAN QUE EL NIVEL DE RNAM DE IRF-1 ES SIGNIFICATIVAMENTE MAYOR EN PACIENTES VHC+ QUE EN CONTROLES SANOS (0.076+-0.007 VS. 0.045+-0.005; P

Autor: ALCANTARA FELIPE ANA ISABEL.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN EL MUSCULO ESQUELETICO DE LA RATA, EL GLP-1T ESTIMULA LA SINTESIS DE GLUCOGENO, LA ACTIVIDAD GLUCOGENO SINTASA Y LA OXIDACION Y LA UTILIZACION DE GLUCOSA, ASI COMO LA PRODUCCION DE LACTATO. ESTOS EFECTOS SE OBSERVAN EN AUSENCIA Y EN PRESENCIA DE DISTINTAS CONCENTRACIONES DE GLUCOSA EN EL MEDIO, SI BIEN A ALTAS CONCENTRACIONES DEL AZUCAR EL AUMENTO DE LA GLUCOLISIS ES MARCADAMENTE MAYOR QUE EL DE LA GLUCOGENESIS. EL CALCIO JUEGA UN PAPEL IMPORTANTE EN LA ACCION DEL GLP-1T EN EL MUSCULO, YA QUE EN AUSENCIA DE CALCIO Y PRESENCIA DE EGTA EN EL MEDIO, SE ANULA EL EFECTO DEL GLP-1T SOBRE LA SINTESIS DE GLUCOGENO Y SOBRE LA ACTIVIDAD GLUCOGENO SINTASA. EL RECEPTOR DEL GLP-1T EN EL MUSCULO ES FUNCIONALMENTE DISTINTO DEL DESCRITO EN EL PANCREAS, YA QUE SU UNION AL GLP-1T NO INDUCE UN AUMENTO DE AMPC. EN CELULAS BC3H-1, LINEA DE MIOCITOS DE RATON, EN LA QUE EL GLP-1T TAMBIEN ESTIMULA LA SINTESIS DE GLUCOGENO, EL PEPTIDO PRODUCE UNA DISMINUCION PRONTA Y REVERSIBLE DE GLICOSILFOSFATIDILINOSITOLES, INDICANDO LA LIBERACION DE INOSITOLFOSFOGLICANOS, QUE PODRIAN ACTUAR DE MEDIADORES EN LA ACCION DEL GLP-1T.

Autor: ALCAZAR RUIZ OSCAR.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE ESTUDIAN ASPECTOS SECRETORES, METABOLICOS Y DE SEÑALIZACION EN LA INTERACCION GLUCOSA/PALMITATO EN ISLOTES PANCREATICOS. EL PALMITATO POTENCIA LA SECRECION DE INSULINA INDUCIDA POR GLUCOSA, EFECTO QUE ES SUPRIMIDO POR 8-BROMO-CGMP, QUE ADEMAS BLOQUEA EL METABOLISMO DEL PALMITATO. EL PALMITATO NO MODIFICA LA UTILIZACION DE GLUCOSA PERO REDUCE LIGERAMENTE LA OXIDACION DE GLUCOSA E INCREMENTA LA PRODUCCION DE LACTATO. LA BAJA VELOCIDAD DE LA OXIDACION DE PALMITATO PODRIA EXPLICAR SU FALTA DE EFECTO SOBRE LA GLICOLISIS. LA GLUCOSA DETERMINA EL DESTINO METABOLICO DEL PALMITATO, QUE ES DIRIGIDO HACIA LA SINTESIS DE LIPIDOS A ELEVADAS CONCENTRACIONES DE LA HEXOSA, PUDIENDO GENERAR MENSAJEROS PARA LA SEÑALIZACION CELULAR. EL PALMITATO NO INCREMENTA LA PRODUCCION DE INOSITOL-1,4,5-TRISFOSFATO PERO ESTIMULA LA TRANSLOCACION DE LA PROTEINA QUINASA C A 20 MM DE GLUCOSA Y NO A 3MM. ESTA TRANSLOCACION ES BLOQUEADA POR AGENTES QUE INTERFIEREN EL METABOLISMO DEL PALMITATO, TALES COMO EL HIDROXICITRATO O EL 8-BROMO-CGMP.

Autor: ALMAZAN ARJONA JUAN ANTONIO.
Año: 1996.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: NEUROCIENCIAS.

Resumen: PREVIAS INVESTIGACIONES DE NUESTRO GRUPO, SUGERIAN QUE LA CARBENOXOLONA TENIA EFECTO ANTILIPOLITICO EN TEJIDO ADIPOSO A TRAVES DE LA MODIFICACION DE LAS CONCENTRACIONES ENDOGENAS DE PROSTAGLANDINAS. EN ESTE TRABAJO HEMOS COMPROBADO ESTA HIPOTESIS ESTUDIANDO EL EFECTO QUE SOBRE LA ACCION ANTILIPOLITICA DE LA CARBENOXOLONA TIENEN DOS DROGAS COMO EL ACIDO ACETILSALICILICO Y LA ENDOMETACINA QUE INHIBEN LA SINTESIS DE PROSTAGLANDINAS. NUESTROS RESULTADOS MOSTRARON QUE ESTAS DROGAS EN EXPERIMENTOS "IN VIVO" E "IN VITRO" ANULABAN EL EFECTO ANTILIPOLITICO DE LA CARBENOXOLONA EN CELULAS AISLADAS DE TEJIDO ADIPOSO DE RATA. ESTOS RESULTADOS CONFIRMAN LA HIPOTESIS DE PARTIDA, SUGIRIENDO QUE EL EFECTO ANTILIPOLITICO DE LA CARBENOXOLONA SE PRODUCE A TRAVES DE LA MODIFICACION DE LAS CONCENTRACIONES ENDOGENAS DE PROSTAGLANDINAS.

Autor: ALMENDRO MOTOS NURIA.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: PECAM-1 ES UNA MOLECULA DE ADHESION IMPLICADA EN LA MIGRACION TRANSENDOTELIAL QUE SE EXPRESA EN CELULAS HEMATOPOYETICAS Y ENDOTELIALES. PARA COMPRENDER LOS MECANISMOS QUE REGULAN SU EXPRESION SE HA AISLADO UN CLON GENOMICO CONTENIENDO 1555PB DE LA REGION 5' FLANQUEANTE DE PECAM-1 Y EL PRIMER EXON DEL GEN PECAM-1. ESTA REGION CARECE DE CAJA TATA Y CONTIENE SECUENCIAS CONSENSO PARA SP1, EGR-1, ETS, HLH, GATA Y AP-2, C/EBP, YY1, CCACC, LYF-1, HEPTAMERO, OCTAMERO, HMG, ELEMENTOS NFKB, SSRE, ARRE, GLUCOCORTICOIDES Y UNA SECUENCIA ALU. DELECCIONES EN DIRECCION 5' Y 3' HAN DEMOSTRADO ACTIVIDAD PROMOTORA ESPECIFICA DE TEJIDO DENTRO DE DOS FRAGMENTOS CONTIGUOS: 0,22 KB NHEI/BG1II Y 0.44 KB BG1II/PSTI SIENDO LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DEL FRAGMENTO DE 0,22 KB ESPECIFICA DE LINAJE MIELOIDE Y LA DE 0,44 KB BG1II/PST1 ESPECIFICA DE CELULAS ENDOTELIALES. EL MINIMO FRAGMENTO CON MAYOR RESPUESTA A LOS ESTERES DE FORBOL SE HA IDENTIFICADO EN EL FRAGMENTO DE 0,22 KB NHEI/BG1II Y LOS FACTORES DE TRANSCRIPCION IMPLICADOS SON SP1 Y EGR1.

Autor: ALONSO SAMPEDRO MANUELA.
Año: 1996.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: FISIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: ENDOCRINOLOGIA.

Resumen: SE HA DEMOSTRADO LA EXPRESION DEL RECEPTOR DE LA VITAMINA D EN HIPOFISIS HUMANA, TANTO A NIVEL DEL ARNM COMO A NIVEL DE LA PROTEINA.SE HAN IDENTIFICADO DOS ZONAS DE UNION PARA EL RECEPTOR DE LA VITAMINA D (VDR) EN LA REGION PROMOTORA DEL GEN DE LA GH HUMANA: GH1, FORMADA POR UNA REPETICION DIRECTA, SOBRE LA QUE SE PODRIAN FORMAR DIMEROS DEL VDR O HETERODIMEROS CON OTROS FACTORES DE TRANSCRIPCION, QUE PODRIAN COOPERAR CON EL GHF-1 EN LA ACTIVACION DE LA TRANSCRIPCION; Y GH2, FORMADA POR UNA SOLA MITAD, A LA QUE SE UNIRIAN EL VDR COMO MONMERO Y QUE TENDRIA UN EFECTO INHIBIDOR DE LA TRANSCRIPCION. DE ESTA FORMA EL EFECTO GLOBAL DE LA VITAMINA D SOBRE LA EXPRESION DEL GEN DE LA GH DEPENDERIA DE LA PRESENCIA Y CONCENTRACION DEL VDR Y DE OTROS FACTORES COMO POR EJEMPLO RXR, TR, GHF-1 U OTROS FACTORES ACCESORIOS ESPECIFICOS DE TEJIDO, QUE PODRIAN EXPRESARSE EN DISTINTAS ETAPAS DEL DESARROLLO.

Autor: ALVAREZ ECHEVESTE IÑAKI.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA.

Resumen: La gamma-zeina como el resto de las proteínas de reserva del endospermo de maíz no contiene lísina, aminoácido esencial en la dieta de los animales monogástricos. La gamma-zeina es una proteína de 28 KD, presenta una clara estructura en forma de dominios, y representa el 15% de la proteína total del endospermo. Teniendo en cuenta estudios previos acerca de la función de los diferentes dominios de la gamma-zeina en su transporte y acumulación, se construyeron genes quiméricos de la gamma-zeina mediante la inserción de oligonucleótidos sintéticos, que codifican para la secuencia (Pro-Lys)n, en diferentes lugares del gen de la gamma-zeina. Dichos genes quiméricos fueron expresados bajo el control del promotor 35S (CaMV) en plantas transgénicas de Arabidopsis. Análisis subcelulares e inmunocitoquímicos realizados a partir de hojas de las plantas transgénicas indican que las gamma-zeinas ricas en lisina son glicosiladas y secretadas a la pared celular.

Autor: ALVAREZ FERNANDEZ LEONCIO.
Año: 1996.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA PROTIMOSINA ALFA ES UNA PROTEINA DE CARACTER ACIDICO ASOCIADA AL PROCESO DE LA PROLIFERACION CELULAR. EN EL PRESENTE TRABAJO HEMOS ESTUDIADO LA RELACION ENTRE EL GRADO DE EXPRESION GENICA Y EL PROCESO DE DIFERENCIACION CELULAR. PARA ELLO UTILIZAMOS VARIAS LINEAS CELULARES CAPACES DE SER INDUCIDAS A DIFERENCIARSE. EL ANALISIS DE LOS NIVELES DE MRNA DE PROT ALFA EN TODAS LAS CELULAS ESTUDIADAS PERMITIO OBSERVAR UN FUERTE DESCENSO EN SU EXPRESION GENICA, INDEPENDIENTEMENTE DEL TIPO CELULAR Y DE LA VIA POR LA QUE LAS CELULAS SE DIFERENCIARON. TRAS ANALIZAR LOS MULTIPLES MECANISMOS QUE PODRIAN REGULAR ESTA VARIACION, COMPROBAMOS QUE CON TODA PROBABILIDAD ERA DEBIDO A UN DESCENSO EN LA TASA DE TRANSCRIPCION. PUESTO QUE TODAS LAS CELULAS AL DIFERENCIARSE SUFRIAN UNA FUERTE DISMINUCION EN LA EXPRESION GENICA DE PROT ALFA, ESTUDIAMOS SI LA DEPLECCION DE LA PROT ALFA INTRACELULAR PODRIA INDUCIR SU DIFERENCIACION. PARA ELLO TRATAMOS CELULAS HL60 CON OLIGONUCLEOTIDOS ANTISENTIDO DE PROT ALFA, NO SIENDO OBSERVADO NINGUN EFECTO SOBRE SU ESTADO DE DIFERENCIACION MORFOLOGICO. NO OBSTANTE ESTE TRATAMIENTO INDUJO LA MUERTE DE LAS CELULAS HL60 POR UN MECANISMO DE APOPTOSIS. POR TANTO, LA PROT ALFA RESULTA IMPRESCINDIBLE PARA LA VIABILIDAD CELULAR, PERO SU ELIMINACION NO AFECTA AL GRADO DE DIFERENCIACION CELULAR. OTRO ASPECTO ANALIZADO EN ESTE TRABAJO FUE LA TASA DE METILACION DE LAS SECUENCIAS GENICAS DE PROT ALFA EN DIFERENTES MODELOS CELULARES. ASI SE ESTUDIO SU GRADO DE METILACION EN LINEAS CELULARES DE ORIGEN HUMANO Y MURINO, COMPROBANDOSE QUE EN TODAS ELLAS EXISTIA UN ALTO GRADO DE METILACION, CARACTERISTICO DE CADA TIPO CELULAR, QUE NO VARIABA CON LA DIFERENCIACION. DE MANERA ANALOGA, EL ANALISIS DE METILACION DE TUMORES HUMANOS DE APARATO DIGESTIVO PERMITIO COMPROBAR QUE LOS TEJIDOS TUMORALES PRESENTABAN EN GENERAL UN MENOR GRADO DE METILACION QUE LOS MISMOS TEJIDOS EN SU ESTADO NORMAL. EL ESTUDIO DE LA EXPRESION GENICA DE PROT ALFA EN ESTOS TUMORES DEMOSTRO QUE EN TODOS ELLOS EXISTIA UN FUERTE INCREMENTO EN SU EXPRESION AL COMPARARLA CON LA DE LOS TEJIDOS NORMALES. FINALMENTE SE ESTUDIO EL PATRON DE METILACION DE PROT ALFA EN DISTINTOS TEJIDOS DE RATA, OBSERVANDO QUE CADA UNO TENIA UN PATRON DE METILACION CARACTERISTICO E IDENTICO EN TODOS LOS INDIVIDUOS. ESTE PATRON DE METILACION PERMANECIO ESTABLE A LO LARGO DEL DESARROLLO EMBRIONARIO.

Autor: AMAT FABREGAT MERCE.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR. FACULTAD BIOLOGIA. UNIV. PROGRAMA DE DOCTORADO: DE BIOQUIMICA 1992-1994.

Resumen: La sindrome de la respuesta inflamatoria sistematica (sris) engloba un conjunto de manifestaciones como la sepsi o la sindrome del distress respiratorio del adulto (sdra). Actualmente no hay una terapeutica adecuada para estos pacientes. En la memoria se estudian un total de 40 pacientes con sris. También se caracterizan un nuevo farmaco antiflamatori, BOBEL-24. RESULTADOS.: Los niveles de leucotrieno Bu estan elevados en los pacientes con sdra o los septicos que mueren, siendo en leucotrieno Bu estan se sdra. los niveles de Il-8 Se encuentran elevados en los pacientes con sdra. Los sdra. los niveles de Il-8 y leucotrienos Se encuentran elevados en los pacientes con sdra. Los niveles de LL-8 y leucotrieno b4 analizados conjuntamente son marcadores pronostico de sdra, sensibilidad del 95% y una especificidad del 68%. El BOBEL-24 es inhibidor de la 5-lirxigenasa, invitro, ex-vivo y in vivo, potencia del mismo orden que el zileuton. En un modelo de sris inducido por "platelet activaling factor" en rata, la inhibicion de la sintesis de los leucotrienos provoca un incremento del tiempo de super vivencia, del porcentaje de mortalidad y una mejora macroscopica y microscopica del pumon. Dicho efecto va acompañado de una inhibición de la sintesi de leucotrienos en el tejido pulmonar. Estos resultados confirman la implicacion de los leucotrienos en la sris la vitilidad del bobel-24.

Autor: AOS SCHERPENSEEL ISABEL ELENA DE.
Año: 1996.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BASES MOLECULARES Y CELULARES DE LA PATOLOGIA DEL SISTEMA INMUNE..

Resumen: Las conclusiones del trabajo a modo de resumen son las siguientes: 1. La fosfotidilinositol 3-quinasa (PI 3-quinasa) se asocia a la subunidad CD3-epsilon del receptor para el antígeno de linfocitos T (complejo TCR/CD3). Esta asociación no depende de la presencia de otros miembros del complejo. 2. La estimulación del complejo TCR/CD3 induce un incremento de la actividad PI 3-quinasa asociada a CD3-epsilon. Este incremento de actividad se correlaciona con el incremento de la asociación de la subunidad p85alfa de la PI 3-quinasa a CD3-epsilon. La asociación de las subunidades p85/p110 es absolútamente necesaria para la correcta actividad enzimática de la subunidad catalítica p110 por lo que sugerimos que la asociación CD3-epsilon/PI 3-quinasa se produce a través de la subunidad p85alfa. 3. La asociación CD3-epsilon/p85 PI 3-quinasa parece depender de la actividad tirosina quinasa y de la fosforilación de las dos tirosinas del ITAM de CD3-epsilon. Los datos con las células JCaM 1.6 sugieren que Lck no es absolutamente necesario para que se produzca la interacción. 4. Los requerimientos para que se produzca la interacción del ITAM de CD3-epsilon con la subunidad p85 de la PI 3-quinasa y otras moléculas con dominios SH2 parecen ser diferentes. Así, moléculas con dos dominios SH2 en tandem como ZAP-70 y p85 parecen asociarse preferéntemente al ITAM de CD3-epsilon dóblemente fosforilado mientras que moléculas con un solo dominio SH2 como fyn (y posiblemente Lck) se unen eficientemente al ITAM de CD3-epsilon con una sola tirosina fosforilada. 5. La subunidad CD3-epsilon y las moléculas efectoras asociadas no parecen asociarse con proteínas del citoesqueleto en estado basal ni tras la activación del receptor. 6. Péptidos que representan el ITAM de la subunidad CD3-epsilon del TCR/CD3 se asocian con pequeñas proteínas de unión a GTP. La proteína Rab-8 se asocia preferentemente al ITAM de CD3-epsilon cuando las tirosinas comprendidas dentro de este motivo se encuentran fosforiladas.

Autor: ARANDA FERNANDEZ AGUSTIN.
Año: 1996.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA I BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: 030A.

Resumen: EN EL FLANCO 3' DEL GEN FBP1 DE LA LEVADURA SACCHAROMYCES CEREVISIAE SE ENCUENTRA UNA REPETICION CASI PERFECTA DE 14 PARES TA QUE HEMOS DENOMINADO LA REPETICION (TA)14.DICHO MOTIVO ESTRUCTURAL ES CAPAZ DE ADOPTAR IN VITRO EN DETERMINADAS CONDICIONES UNA ESTRUCTURA TIPO CRUCIFORME. ALTERNATIVAMENTE, EN PLASMIDOS SUPERENROLLADOS SE HA DETERMINADO QUE ES CAPAZ DE ADOPTAR TAMBIEN UNA ESTRUCTURA DESAPAERADA. IN VIVO LA ESTRUCTURA PRESENTE ES UNA REGION MAYORITARIAMENTE DESAPAREADA. DICHO COMPORTAMIENTO SE REPITE TEORICAMENTE EN LA MAYORIA DE LOS GENES DE LEVADURA ANALIZADOS. DICHA REPETICION (TA)14 ACTUA COMO EL ELEMENTO DE EFICIENCIA DE LA SEÑAL DE POLIADENILACION BIDIRECCIONAL DEL GEN FBP1. DICHA DEPENDENCIA HA SIDO OBSERVADA IN VIVO E IN VITRO. EN LA POLIADENILACION INFLUYEN ADEMAS EL PROPIO SITIO POLI(A) Y ELEMENTOS POSICIONADORES. LA TERMINACION DE LA TRANSCRIPCION OCURRE MUY PROXIMA AL SITIO DE PROCESAMIENTO, Y ES INDEPENDIENTE DEL PROCESADO, HECHO QUE ES LA PRIMERA VEZ QUE SE OBSERVA IN VIVO. ESTOS DATOS APUNTAN A QUE LOS FENOMENOS DE POLIADENILACION Y TERMINACION DE LA TRANSCRIPCION ACTUAN A NIVEL DE RNA Y NO A NIVEL DEL DNA.

Autor: ARELLANO OLLOQUI JOSE MANUEL.
Año: 1996.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA BIOQUIMICA Y GENETICA MICROBIANAS.

Resumen: LA PARED CELULAR ES LA ESTRUCTURA MAS EXTERNA PRESENTE EN LAS CELULAS FUNGICAS. LES PROPORCIONA SU FORMA Y LAS PROTEGE DE LA DIFERENCIA DE PRESION OSMOTICA. LA BIOSINTESIS DEL BETA (1-3) GLUCANO ESTA REGULADA POR UNA PROTEINA QUE UNE GTP. LOS RESULTADOS RECOGIDOS EN ESTA MEMORIA INDICAN QUE DICHA PROTEINA ES EL PRODUCTO DEL GEN RHO1+ . ESTA PROTEINA TAMBIEN CONTROLA LOS CAMBIOS EN EL CITOESQUELETO DE ACTINA, DETECTANDOSE UNA PERDIDA TOTAL DE DICHA ESTRUCTURA COMO CONSECUENCIA DE LA PERDIDA DE FUNCION DE RHOL. LA PROTEINA SE LOCALIZA EN LOS PUNTOS DE CRECIMIENTO ACTIVO DE LA CELULA, DEPENDIENDO DE LA FASE DEL CICLO CELULAR EN LA QUE SE ENCUENTREN LAS CELULAS. RHO1+ ES UN GEN ESENCIAL Y NECESARIO PARA LA GERMINACION DE LAS ESPORAS, LA PERDIDA DE SU FUNCION ORIGINA LA PERDIDA DE LA VIABILIDAD CELULAR SIN PERDIDA DE POLARIDAD. EL GEN PCK2+ TAMBIEN ESTA IMPLICADO EN LA BIOSINTESIS DE GLUCANO REGULANDO LA ACTIVIDAD DE LA FRACCION INSOLUBLE DE LA ENZIMA DE MEMBRANA BETA(1-3) GLUCAN SINTASA POR UN MECANISMO DESCONOCIDO HASTA LA FECHA. QUEDA POR DETERMINAR SI ESTA PROTEINA ES UN EFECTOR DIRECTO DE LA GTPASA RHO1 O SI EJERCE SU ACCION POR UN MECANISMO INDEPENDIENTE.

Autor: ARRIBAS PRAT ROSA.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DE FISIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: DE INMUNOLOGIA.

Resumen: Los tumores colorrectales se caracterizan por la acumulación de un gran número de aberraciones cromosómicas y estructurales. Dado que la AP-PCR permite la detección de desequilibrios genómicos, nuestro primer interés se ha centrado en la cuantificación del daño genómico acumulado en forma de de ganancias y pérdidas. A continuación hemos relacionado el daño genómico con los parámetros clínico-patológicos y moleculares y se ha analizado su utilidad pronóstica. Tras el diseño de un método sencillo de localización cromosómica simultánea de los fragmentos de AP-PCR mediante la utilización de un panel de híbridos humano/roedor, se demostró que la AP-PCR era útil para llevar a cabo un cariotipo molecular. De manera que un segundo interés ha sido la localización cromosómica de las bandas de AP-PCR y la identificación de cromosomas que pudieran tener importancia en la tumorigénesis del cáncer colorrectal, ya sea porque se presentan peor pronóstico. Tras considerar el cromosoma 4 de interés se llevó a cabo un estudio más detallado en el que se precisaron regiones cromosómicas potencialmente ligadas a genes supresores tumores (4p14-15; 4q25)9

Autor: AYALA JOU SONIA.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA PROGRAMA DE DOCTORADO: HEMATOLOGIA (HEMATOLOGIA CLINICA Y BIOLOGICA).

Resumen: El objetivo principal de esta Tesis ha sido el estudio genotípico, mediante técnicas de biologia molecular, de 475 pacientes diagnosticados fenotípicamente como portadores de alfa tal, en base a los parámetros hematológicos y al analisis electroforético de Hbs. En primer lugar, se realizó un escrutinio molecular de las formas delecionales de alfa tal más frecuentes, mediante Southern Blot y/o PCR. Las muestras que resultaron negativas se analizaron mediante PCR-ER para detectar las formas más comunes de alfa tal no delecional. A continuación, las muestras que también resultaron negativas para este estudio, fueron analizadas mediante la técnica del polimorfismo conformacional de cadena sencilla (SSCP) y posterior secuenciación génica. De los 475 pacientes estudiados, 425 presentaron formas delecionales de alfa tal: -alfa 3.7 (415 casos), --MED (6 casos) y --SEA (4 casos). En 15 pacientes identificamos dos formas de alfa tal no delecional que afectan al gen alfa-2 globina: la deleción de 5 pb en el IVS 1 (14 casos) y la mutación ATG- ACG en el codón de iniciación (1 caso). Finalmente, detectamos y caracterizamos tres nuevas mutaciones en los genes alfa globina, en tres pacientes españoles no emparentados. Dos de estas mutaciones corresponden a variantes inestables de la Hb que se asocian al fenotipo de hemoglobinopatías talasémicas: Hb LLeida (deleción de 12 pb en el exón 3 del gen alfa2) y Hb Clínic (deleción de 3 pb en el exón 2 del gen alfa1). La tercera nueva mutación identificada corresponde a una deleción de 13 pb en el exón 2 del gen alfa1 que provoca un cambio en la pauta de lectura del ARNm y la aparición de un codón de determinación prematuro en posición 62 de la nueva cadena aminoacídica. En los 22 casos restantes no pudo identificarse ninguna alteración molecular.

Autor: BALADRON GARCIA VICTORIANO.
Año: 1996.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: APROXIMACION MOLECULAR AL ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS Y PLANTAS Y SUS INTERRELACIONES..

Resumen: LOS GENES ENG1 Y ENG2 DE S. CEREVISIAE CODIFICAN PROTEINAS CON ACTIVIDAD ENDO-1,3-B-GLUCANASICA DENOMINADAS ENG1P Y ENG2P, RESPECTIVAMENTE. ENG1P ES UNA GLICOPROTEINA DE ELEVADA MASA MOLECULAR CON ALTO CONTENIDO EN CARBOHIDRATO QUE SE SECRETA MAYORITARIAMENTE AL MEDIO DE CULTIVO. SIN EMBARGO, ENG2P PERMANECE ASOCIADA A LA PARED CELULAR. LA UNICA HOMOLOGIA DETECTADA ENTRE ESTAS DOS PROTEINAS Y LAS EXOGLUCANASAS CARACTERIZADAS EN LEVADURAS ES EL MOTIVO DHHFHY, POSIBLE CENTRO ACTIVO Y/O DE UNION O SUSTRATO. SIN EMBARGO, ENG1P Y ENG2P PRESENTAN UNA HOMOLOGIA SIGNIFICATIVA ENTRE SI Y CON LA PROTEINA SPENG1P DE S. POMBE, LO QUE APUNTA A LA EXISTENCIA EN LEVADURAS DE UNA FAMILIA DE PROTEINAS CON ACTIVIDAD ENDOHIDROLITICA SOBRE EL GLUCANO SIMILAR A LA QUE FORMAN LAS EXOGLUCANASAS. LOS GENES ENG1 Y ENG2 SE EXPRESAN EN EL CRECIMIENTO VEGETATIVO, PERO LA EXPRESION DE ENG1 SE INHIBE DURANTE LA ESPORULACION, MIENTRAS QUE LA DEL GEN ENG2 SE INDUCE FUERTEMENTE EN ESTE PROCESO. DURANTE LA GERMINACION, LOS NIVELES DE EXPRESION DE AMBOS GENES RETORNAN A LOS QUE PRESENTAN EN EL CICLO VEGETATIVO. LA ELIMINACION DE AMBOS GENES O SU SOBREEXPRESION NO TIENE EFECTOS APARENTES SOBRE LOS PROCESOS MORFOGENETICOS DEL CICLO BIOLOGICO DE LA LEVADURA.

Autor: BALLESTAR TARIN ESTEBAN.
Año: 1996.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN ESTE TRABAJO SE HA ENSAYADO LA INTRODUCCION DE LA SONDA FLUORESCENTE MONODANSILCADAVERINA (DNC) MEDIANTE LA REACCION CATALIZADA POR TRANSGLUTAMINASA (TGASA) EN HISTONAS. LA COMPROBACION DE UNA EFECTIVA INCORPORACION DE DNC A LAS HISTONAS, Y LA SUBSIGUIENTE DETERMINACION DE LAS POSICIONES DE MODIFICACION HA PERMITIDO EVALUAR LA UTILIDAD DE LOS DIFERENTES DERIVADOS. UNA VEZ DETERMINADA LA CAPACIDAD DE LAS HISTONAS COMO SUSTRATOS DE TGASA, DOS ESTRATEGIAS SE HAN SEGUIDO: EL EMPLEO DE LOS DERIVADOS FLUORESCENTES EN EXPERIMENTOS DE RECONSTITUCION, CON EL OBJETO DE ANALIZAR CAMBIOS EN LOS PARAMETROS FLUORESCENTES DE LA SONDA A FIN DE ESTUDIAR CAMBIOS CONFORMACIONALES EN EL NUCLEOSOMA. LA SEGUNDA ESTRATEGIA ES EL ANALISIS DE CAMBIOS EN LA REACTIVIDAD DE LAS GLUTAMINAS DE LAS HISTONAS COMO UNA MANERA DE SEGUIR CAMBIOS EN LA ESTRUCTURA DEL NUCLEOSOMA. ESTA SEGUNDA VIA CONSTITUYE UNA NOVEDOSA ESTRATEGIA, NO SOLO DENTRO DEL CAMPO DE LA CROMATINA, SINO DENTRO DEL CAMPO DE LA TRANSGLUTAMINASA. EL ESTUDIO HA PERMITIDO DETECTAR NUMEROSAS TRANSICIONES ESTRUCTURALES DEL NUCLEOSOMA.

Autor: BALSALOBRE PARRA CARLOS.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Y BIOTECNOLOGIA .

Resumen: La proteína Hha es un modulador descrito inicialmente como un factor regulador de la expresión de factores de virulencia. Se ha demostrado que las cepas mutantes hha presentan características que han permitido relacionar a la proteína Hha con el grupo de proteínas asociadas al nucleoide. Así, la mutación hha a la topología del ADN, tiene un claro fenotipo pleiotrópico y la capacidad moduladora de la proteína Hha es dependiente de un parámetro ambiental como es osmolaridad del medio de cultivo. Además la sobreexpresión del gen hha provoca un incremento en la frecuencia de movilización de secuencias de inserción. La proteína Hha sufre modificaciones postraduccionales, como se evidencia al detectar la existencia de tres isoformas de la proteína en el interior de la célula. Se ha podido demostrar que la osmolaridad del medio de cultivo es un factor determinante en la modificación postraduccional de la proteína y, por tanto, en la determinación de su bioactividad. Las modificaciones postraduccionales detectadas son el procesamiento de la metionina aminoterminal y la fosforilación de la fosforilación de la proteína. La fosforilacion es un paso determinante de la bioactividad de la proteína que, como se ha podido demostrar, es la unión al ADN.