BIOQUIMICA MOLECULAR, 58

Autor: GARCIA GONZALEZ M. DOLORES.
Año: 1996.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y FISIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR Y FISIOLOGIA.

Resumen: LA PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE LA ALFA-AMILASA DE S. GRISEUS IMRU 3570 DIO COMO RESULTADO LA APARICION DE DOS PROTEINAS CON ACTIVIDAD AMILASA UNA DE 60 KDA Y OTRA DE 49 KDA, DEMOSTRANDOSE LA EXISTENCIA DE UN PROCESAMIENTO POST-TRADUCCIONAL. LOS ESTUDIOS DE OPTIMIZACION SE REALIZARON MODIFICANDO LA FUENTE DE CARBONO, SIENDO EL MEDIO MAS PRODUCTIVO LECHEVALIER CON 1% DE MALTOSA. OTRA TECNICA PARA INCREMENTAR LA PRODUCCION FUE LA SUSTITUCION DEL PROMOTOR AMY POR EL PROMOTOR SAF, LO CUAL PRODUJO UN INCREMENTO DE 15,6 VECES EN ACTIVIDAD Y DE 10,4 VECES EN CANTIDAD DE PROTEINAS. SE REALIZARON ESTUDIOS QUE DEMOSTRARON QUE NO SE PRODUCIA ACUMULACION DE ARNM INTRACELULARMENTE, POR LO TANTO ESTA NO ES UNA ETAPA LIMITANTE PARA LA SECRECION. EL ESTUDIO DE LAS FUSIONES TRADUCCIONALES ALFA-AMILASA Y EL GEN HCRF PUSO DE MANIFIESTO VARIOS HECHOS: I) AL RECORTAR LA PROTEINA PORTADORA DISMINUYE LA PRODUCCION DE PROTEINAS SECRETADA; II) AL FUSIONAR EL GEN HCRF A LA PROTEINA PORTADORA AUN DISMINUYE MAS LA PRODUCCION; III) EL CAMBIO DE PAMY POR PSAF INCREMENTA LA PRODUCCION. LA PRODUCCION DE HCRF ES DEL ORDEN DE MICROGRAMOS.

Autor: GARCIA PATIÑO M. ELENA .
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL CANCER DE MAMA ES LA NEOPLASIA MAS FRECUENTE EN LA MUJER, PUDIENDO ESTAR RELACIONADA CON GENES DE SUSCEPTIBILIDAD COMO EL GEN BRCAI. EN NUESTRO ESTUDIO, HEMOS DETESTADO UN 11%,2% DE LAS FAMILIAS ANALIZADAS, CON MUTACIONES EN LINEA GERMINAL EN EL GEN BRCAI, Y UN 15% DE LOS MIEMBROS SANOS DE ESTAS FAMILIAS FUERON IDENTIFICADOS COMO POSIBLES PORTADORES DE MUTACIONES, ESTE GRUPO FORMA UNA POBLACION SELECCIONADA PARA EL DISEÑO DE ESTUDIOS PROSPECTIVOS DIRIGIDOS A LA PREVENCION DEL CANCER DE MAMA. EN EL ESTUDIO DE CANCER DE MAMA ESPORADICO HEMOS ENCONTRADO UNA TASA DEL 5,7% DE MUTACIONES GERMINALES EN DICHO GEN; PRESENTANDO ESTE GRUPO UNA SUPERVIVENCIA MAS PROLONGADA QUE LAS PACIENTES SIN MUTACIONES EN LINEA GERMINAL. LA TASA DE PERDIDA ALELICA EN LA REGION 17Q21 EN PACIENTES CON CANCER DE MAMA ESPORADICO FUE DEL 21%, PRESENTANDO ESTE GRUPO MENOR TASA DE RECAIDAS TRAS RECIBIR CIRUGIA Y QUIMIOTERAPIA COADYUVANTE, QUE LAS PACIENTES QUE NO PRESENTARON DICHA PERDIDA ALELICA. ASI PUES CONCLUIMOS QUE, LA TASA DE MUTACIONES GERMINALES EN FAMILIAS CON CANCER DE MAMA ES BAJA, MIENTRAS QUE EN LOS CASOS ESPORADICOS LA INCIDENCIA ES IMPORTANTE; ADEMAS LA PRESENCIA DE MUTACIONES GERMINALES Y DE PERDIDA ALELICA PUEDEN SERVIR COMO FACTORES PRONOSTICOS.

Autor: GASA ARNALDICH ROSA.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA AMILINA ES UN PEPTIDO SINTETIZADO Y SECRETADO POR LA CELULA BETA PANCREATICA. ES EL COMPONENTE MAYORITARIO DEL AMILOIDE DEL ISLOTE PANCREATICO EN LA DIABETES TIPO 2. EN ESTA MEMORIA DE TESIS SE ESTUDIAN LOS MECANISMOS IMPLICADOS EN LA REGULACION POR GLUCOSA DE LA EXPRESION (MRNA Y PROTEINA) Y DE LA SECRECION EN UN MODELO "IN VITRO" DE ISLOTES, DE RATA Y HUMANOS, EN CULTIVO. SE ANALIZA LA IMPLICACION DEL METABOLISMO DE LA GLUCOSA, DE LA SINTESIS DE GLICOPROTEINAS, DEL CALCIO, DEL AMPC Y DE LA PROTEINA QUINASA C. SE ANALIZA EN PARALELO LA REGULACION DE LA INSULINA. FINALMENTE, SE ESTUDIAN LOS EFECTOS DE LA EXPOSICION CRONICA A CONCENTRACIONES ELEVADAS DE GLUCOSA SOBRE EL PATRON DE SECRECION Y LA EXPRESION DE AMILINA EN ISLOTES DE ORIGEN HUMANO. DE MANERA SIMULTANEA SE ESTUDIA TAMBIEN LA INSULINA. SE CONCLUYE QUE EL METABOLISMO DE LA GLUCOSA ES NECESARIO PARA QUE ESTA HEXOSA ESTIMULE LA EXPRESION Y SECRECION DE AMILINA Y QUE EL CALCIO TIENE UN PAPEL RELEVANTE. HAY DIFERENCIAS EN LA RESPUESTA DE LOS ISLOTES HUMANOS Y DE RATA A CIERTOS AGENTES.

Autor: GIL PEREZ BEATRIZ.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: SE HA ANALIZADO LA REGULACION POR GLUCOCORTICOIDES DE LA EXPRESION DE LA S-ADENOSILMEMETIONINA SINTETASA HEPATICA TANTO "IN VIVO" COMO EN CULTIVOS CELULARES. "IN VIVO", SE COMPROBO QUE LA ADRENALECTOMIA PRODUCE UN DESCENSO DE APROXIMADAMENTE 3 VECES EN LOS NIVELES DE MRNA, PROTEINA Y ACTIVIDAD QUE SE REVERTIA POR EL TRATAMIENTO CON TRIAMCINOLONA, UN GLUCOCORTICOIDE SINTETICO. LA FUERTE CORRELACION ENTRE ESTOS PARAMETROS SUGERIA QUE LA REGULACION SE PRODUCIA A NIVEL DE LA EXPRESION GENICA. EN LAS CELULAS DE HEPATOMA H35 Y EN CULTIVOS PRIMARIOS DE HEPATOCITOS SE COMPROBO QUE EL EFECTO ERA DEPENDIENTE DEL TIEMPO Y DE LAS DOSIS Y QUE SE PRODUCIA FUNDAMENTALMENTE A NIVEL TRANSCRIPCIONAL. EXPERIMENTOS DE TRANSFECCION TRANSITORIA CON DELECCIONES SUCESIVAS DE LA REGION 5 DEL PROMOTOR PERMITIERON LOCALIZAR LA REGION RESPONSABLE DE LA INDUCCION ENTRE LOS NUCLEOTIDOS -727/-527. TAMBIEN SE ESTUDIARON LOS PATRONES DE EXPRESION DE LAS ISOENZIMAS HEPATICAS Y EXTRAHEPATICA DE LA S-ADENOSILMETIONINA SINTETASA DURANTE EL DESARROLLO. LOS CAMBIOS MAS IMPORTANTES SE PRODUCEN EN LA ETAPA PERINATAL EN LA QUE SE OBSERVO UN AUMENTO IMPORTANTE EN LOS NIVELES DE MRNA DE LA ISOENZIMA HEPATICA Y UNA DISMINUCION DE LOS CORRESPONDIENTES A LA ISOENZIMA EXTRAHEPATICA, QUE PARECEN ESTAR RELACIONADOS CON VARIACIONES EN GLUCAGON.

Autor: GOMEZ GARCIA JAVIER.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: EN ESTE TRABAJO SE HAN ANALIZADO LOS PROCESOS DE TRANSDUCCION DE SEÑALES MEDIADOS POR EL RECEPTOR DE INTERLEUQUINA 2 (IL-2) EN UNA LINEA CELULAR DEPENDIENTE DE LA ESTIMULACION CON LINFOQUINAS. SE HAN ESTUDIADO LOS MECANISMOS DE SEÑALIZACION ACTIVADOS POR EL RECEPTOR DE IL-2 DE ALTA AFINIDAD. Y LAS DIFERENCIAS EXISTENTES CON LOS MECANISMOS DE SEÑALIZACION ESTIMULADOS POR EL RECEPTOR DE IL-2 DE AFINIDAD INTERMEDIA. EN CONCRETO, SE HA ESTUDIADO LA IMPLICACION DE MOLECULAS SEÑALIZADORAS TALES COMO PKC. PI3K. RHO. YB C1-2. LOS PROCESOS DE SEÑALIZACION INDUCIDOS POR OTRAS LINFOQUINAS HAN SERVIDO EN OCASIONES COMO SISTEMAS DE COMPARACION. POR ULTIMO, LAS VIAS DE SEÑALIZACION DESCRITAS HAN SIDO INTEGRADAS EN UN MODELO DE SEÑALIZACION A TRAVES DEL RECEPTOR DE IL-2. EN EL QUE LA CONTRIBUCION DE CADA UNA DE LAS VIAS DE SEÑALIZACION AL CONTROL DE LAS RESPUESTAS CELULARES HA SIDO ANALIZADA.

Autor: GONZALEZ ASEGUINOLAZA GLORIA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: SE HAN CLONADO A PARTIR DE UNA LIBRERIA GENOMICA DE LEISHMANIA INFANTUM DOS GENES, GP63 Y P36, CON POSIBLE VALOR PROTECTOR. ASI MISMO HEMOS ANALIZADO LA EXPRESION DE AMBAS PROTEINAS DURANTE EL CICLO DE VIDA DEL PARASITO. LA PRIMERA, GP63, ES LA PROTEINA MAYORITARIA DE LA SUPERFICIE DEL PARASITO Y SE ENCUENTRA CODIFICADA POR UNA FAMILIA MULTIGENICA. EL GEN CLONADO POR NOSOTROS PRESENTA UN TAMAÑO DE 3047 NUCLEOTIDOS Y SE ENCUENTRA REPETIDO EN TANDEM UN MINIMO DE 10 VECES. LA GP63 DE LEISHMANIA INFANTUM PRESENTA UNA EXPRESION DIFERENCIAL A LO LARGO DEL CICLO DE VIDA DEL PARASITO, CON DOS FORMAS DE DISTINTO PESO MOLECULAR, 58 Y 60 KDA. AMBAS AUMENTAN SU EXPRESION A MEDIDA QUE EL PARASITO SE TRANSFORMA EN SU FASE INFECTIVA SIENDO MAS ACENTUADO EN EL CASO DE LA DE MENOR PESO MOLECULAR, LO CUAL SUGIERE UN PAPEL IMPORTANTE DE ESTA PROTEINA EN LA INFECCION. COMO HEMOS PODIDO COMPROBAR LA DIFERENCIA ENTRE AMBAS FORMAS RESIDE EN EL PORCENTAJE GLICOSILACION. LA PROTEINA P36, TAMBIEN DENOMINADA LACK POR SU HOMOLOGIA CON EL RECEPTOR DE PROTEINA QUINASA C ACTIVA DE MAMIFEROS RACK, TIENE UN PESO MOLECULAR DE ALREDEDOR DE 36 KDA Y SU EXPRESION ES UNIFORME A LO LARGO DEL CICLO DEL PARASITO. SE ENCUENTRA CODIFICADA POR DOS GENES LOCALIZADOS EN UN UNICO FRAGMENTO CROMOSOMICO, QUE SE DIFERENCIAN EN LA REGION 3' NO CODIFICANTE. LA ESTRUCTURA DE LA PROTEINA CONSISTE EN LA REPETICION DE 8 SEGMENTOS HOMOLOGOS DE ALREDEDOR DE 48 AMINOACIDOS CON EL DOMINIO COMUN WD PROPIO DE PROTEINAS QUE INTERVIENEN EN REGULACION CELULAR. AMBOS GENES VAN A SER UTILIZADOS PARA EL DESARROLLO DE VACUNAS RECOMBINANTES CAPACES DE INDUCIR PROTECCION FRENTE A LA INFECCION POR LEISHMANIA INFANTUM.

Autor: GONZALEZ NAVARRO CARLOS JAVIER .
Año: 1996.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: HISTOLOGIA Y ANATOMIA PATOLOGICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR.

Resumen: EL VIRUS C DE LA HEPATITIS (HCV) ES LA PRINCIPAL CAUSA DE HEPATITIS POSTRANSFUSIONAL. LA PROTEASA CPRO2. CODIFICADA POR LA REGION NS3 DEL GENOMA VIRAL, JUEGA UN PAPEL PRIMORDIAL EN LA REPLICACION DE ESTE VIRUS. EN ESTE TRABAJO SE HA OBTENIDO PROTEASA CPRO2 PURA POR MEDIO DE LA EXPRESION EN ESCHERICHIA COLI DE UN CLON OBTENIDO MEDIANTE LA RETRANSCRIPCION Y AMPLIFICACION DEL RNA VIRAL CONTENIDO EN EL SUERO DE UN PACIENTE CON HEPATITIS C CRONICA. ESTA PROTEASA HA DEMOSTRADO SER ACTIVA SOBRE UN SUSTRATO PROTEICO DERIVADO DE LA REGION DE CORTE NS5A/B DE LA POLIPROTEINA VIRAL. ESTE SUSTRATO HA SIDO EXPRESADO EN UN SISTEMA DE TRANSCRIPCION-TRADUCCION IN VITRO A PARTIR DE UN CLON OBTENIDO MEDIANTE RETROTRANSCRIPCION, AMPLIFICACION Y CLONADO DEL RNA VIRAL CONTENIDO EN EL MISMO SUERO. EL MODELO DESARROLLADO HA PERMITIDO ESTUDIAR LA ACTIVIDAD DE LA PROTEASA IN VITRO Y ESTUDIAR LA INFLUENCIA DE UN PEPTIDO SINTETICO DERIVADO DE LA REGION NS4A SOBRE DICHA ACTIVIDAD, ASI COMO ESTABLECER EL CARACTER INHIBIDOR DE CIERTOS PEPTIDOS SINTETICOS SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA PROTEASA. ESTOS RESULTADOS HAN PERMITIDO DISEÑAR DIVERSOS PEPTIDOS SINTETICOS CON CAPACIDAD INHIBIDORA DE LA ACTIVIDAD PROTEASICA DE CPRO2. TAMBIEN SE HA OBTENIDO LA PROTEINA NS3 DEL HCV PURA MEDIANTE EL MISMO SISTEMA QUE LA PROTEASA CPRO2. AMBAS PROTEINAS HAN SIDO UTILIZADAS PARA INDUCIR ANTICUERPOS EN RATONES BALBC, OBTENIENDOSE MEJOR RESPUESTA CON LA PROTEASA CPRO2 QUE CON LA PROTEINA NS3.

Autor: GRADO SANZ MYRIAM DE.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: PLU1 ES UN PLASMIDO BIFUNCIONAL QUE CONSTA DE UN FRAGMENTO DE 3.3 KPB DE UN PLASMIDO NATURAL DE THERMUS ACUATICUS. PLU1 Y SUS FORMAS REDUCIDAS SE INTEGRAN EN UN SITIO ESPECIFICO DEL CROMOSOMA DE T. THERMOPHILUS HB27 EN MULTICOPIAS. EL REPLICON MINIMO DE 1.39 KPB CODIFICA UNA PROTEINA DE 43 KDA ESENCIAL PARA SU REPLICACION. PMY1 PORTA UN FRAGMENTO DE 4.7 KPB DE UN PLASMIDO NATURAL DE 16 KPB DE THERMUS SP. EN THERMUS THERMOPHILUS HB27 FORMO MULTIMEROS. EL REPLICON MINIMO CONSTA DE 1.8 KPB Y CODIFICA UNA PROTEINA ESENCIAL PARA SU REPLICACION Y CUYO PROMOTOR ES ACTIVO EN E. COLI. SE HA PURIFICADO UNA PROTEINA DE 35 KDA QUE CONTIENE LA MAYOR PARTE DE LA REGION N-TERMINAL DE REP-PMY1. ESTA PROTEINA SE UNE A UNA REGION DE 500 PARES DE BASES INTERNA A SU SECUENCIA CODIFICANTE QUE CONTIENE UNA ZONA RICA EN AT. MEDIANTE ANTICUERPOS SE HA DEMOSTRADO QUE REP-PMY1 SE EXPRESA EN THERMUS DANDO LUGAR A UNA PROTEINA DE 46 KDA.

Autor: GRANDA ALONSO CARMEN M..
Año: 1996.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIENCIAS MEDICAS Y QUIRURGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: CIENCIAS MEDICAS Y QUIRURGICAS.

Resumen: DADA LA PREVALENCIA Y MORBIMORTALIDAD DE LA DEFICIENCIA DE ALFA-1 ANTITRIPSINA, SE HAN LLEVADO EN LOS ULTIMOS AÑOS DIVERSOS PROGRAMAS DE SCREENING DE LA MISMA. LA POSIBILIDAD DE EMPLEAR LAS GOTAS DE SANGRE DESECADA PARA DICHOS PROGRAMAS, ES UN ENFOQUE ATRACTIVO, QUE ADOLECE DE UN NUMERO EXCESIVO DE FALSOS POSITIVOS. POR ELLO, NOS PLANTEAMOS APROVECHAR LAS MODERNAS TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CONCRETAMENTE LA PCR (REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA) PARA DESARROLLAR UN SCREENING DE LA DEFICIENCIA BASADO EN 2 TESTS, UNO DE ELLOS MUY SENSIBLE (INMUNOELECTRODIFUSION) Y EL OTRO MUY ESPECIFICO (DIAGNOSTICO GENETICO), QUE APROVECHARA LAS MISMAS GOTAS DE SANGRE DESECADA, POSIBILITANDO LA UNIVERSALIDAD Y ACCESIBILIDAD DE METODO DE SCREENING DE LA DEFICIENCIA. FUIMOS CAPACES DE DESARROLLAR UNA TECNICA ADECUADA DE EXTRACCION DEL ADN A PARTIR DE SANGRE DESECADA, Y PARA EL ESTUDIO DE LAS MUTACIONES PUNTUALES DEL GEN DE LA ALFA-1 ANTITRIPSINA RESPONSABLES DE SU DEFICIENCIA, COMPARAMOS LOS 3 METODOS DE AMPLIFICACION (PCR-ASO, ARMS, MUTAGENESIS) DEL GEN, EMPLEADOS HASTA AHORA, OPTIMIZANDO CADA PROCEDIMIENTO, Y ANALIZANDO SU APLICABILIDAD A GRANDES POBLACIONES. SOLO EL METODO DE MUTAGENESIS DIRIGIDA MEDIADA POR PCR MOSTRO SU EFICIENCIA EN ESTE SENTIDO MOSTRANDO EN TODOS LOS CASOS RESULTADOS IDENTICOS A LOS DEL ISOELECTROENFOQUE EN SUERO.

Autor: GUTIERREZ SAGAL RUBEN.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN ESTE ESTUDIO, HEMOS CLONADO Y SECUENCIADO EL CDNA DE LA UTEROGLOBINA (UG/CC10) DE HAMSTER Y 1.5 KB DE LA REGION PROMOTORA DE ESTE GEN. TAMBIEN ANALIZAMOS LA EXPRESION ESPECIFICA DE TEJIDO DEL MRNA DE LA UG/CC10 DE HAMSTER Y SU REGULACION HORMONAL. LOS DATOS OBTENIDOS DE ESTOS ANALISIS SE COMPARARON CON LOS DATOS DE LA UG/CC10 DE OTRAS ESPECIES, LO CUAL PERMITIO DISTINGUIR LAS DIFERENCIAS Y SIMILITUDES QUE EXISTEN ENTRE LA UG/CC10 DE HAMSTER Y LA DE OTROS MAMIFEROS. EL MRNA DE ESTA PROTEINA SOLO SE EXPRESA EN EL PULMON DEL HAMSTER Y SU EXPRESION ESTA REGULADA FUERTEMENTE POR HORMONAS GLUCOCORTICOIDES. SE ANALIZO LA EXPRESION DE ESTE GEN DURANTE SU DESARROLLO POSTNATAL Y ENCONTRAMOS QUE SU EXPRESION MAS BAJA COINCIDE CON EL SEXTO DIA DESPUES DEL NACIMIENTO. SE ANALIZO LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DEL PROMOTOR DE LA UG/CC10 DE HAMSTER, MEDIANTE ENSAYOS DE EXPRESION TRANSITORIA EN LAS LINEAS CELULARES HEC-1-A (CON CARACTERISTICAS DE CELULA ENDOMETRIAL) Y H441 (CON CARACTERISTICAS DE CELULA PULMONAR). EL PROMOTOR DE LA UG/CC10 FUE MUY ACTIVO EN LAS CELULAS PULMONARES, PERO COMPLETAMENTE INACTIVO EN LAS CELULAS ENDOMETRIALES, SUGIRIENDO QUE EN ESTAS ULTIMAS CELULAS NO EXISTEN LOS FACTORES DE TRANSCRIPCION QUE ESTAN PRESENTES EN LAS CELULAS PULMONARES.

Autor: GUZMAN MALUENDA LEDA.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: EL PLASMIDO ESTREPTOCOCICO NO CONJUGATIVO PMV158 (5.536 KB) HA SIDO EFICIENTEMENTE MOVILIZADO POR OTROS PLASMIDOS AUTOTRANSFERIBLES COMO PIP501 Y PAMBETA1. EL PLASMIDO PMV158 CONTIENE UN GEN MOBM CUYO PRODUCTO GENICO (MOBM) ESTA INVOLUCRADO EN SU MOVILIZACION A UN NUEVO HUESPED. EL PRODUCTO DEL GEN MOBM FUE CLONADO EN UN VECTOR DE EXPRESION Y LA PROTEINA MOBM FUE SOBREEXPRESADA Y PURIFICADA. ESTA PROTEINA PRESENTO TENER ACTIVIDAD DE CORTE ESPECIFICO DE SITIO Y HEBRA SOBRE ADN SUPERENROLLADO DE PMV158 Y FUE CAPAZ DE CONVERTIRLO EN FORMAS CIRCULARES ABIERTAS. SE DETERMINARON UNA SERIE DE PARAMETROS NECESARIOS PARA SU ACTIVIDAD NUCLEOFILICA COMO: PRESENCIA DE MG2+, TEMPERATURA Y TIEMPO DE REACCION. ADEMAS MOSTRO UNIRSE ESPECIFICAMENTE AL EXTREMO 5' DE LA HEBRA CORTADA, SUGIRIENDO QUE PODRIA CONDUCIR LA HEBRA-T A LA CELULA RECIPIENTE.

Autor: HARO CASTUERA M. AMPARO.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: MEJORA GENETICA DE CEPAS DE PSEUDOMONAS PARA LA DEGRADACION DE COMPUESTOS CLOROAROMATICOS. SE HA INCIDIDO EN EL ESTUDIO DE LA REGULACION Y LAS POSIBILIDADES DE EVOLUCION EN EL LABORATORIO DE LA RUTA DE DEGRADACION DE BIFENILO Y PCBS DE LA BACTERIA PSEUDOMONAS SP. LB400, EN EL DESARROLLO DE RUTAS HIBRIDAS PARA METABOLIZAR COMPUESTOS CLOROAROMATICOS COMO EL 2-CLOROTOLUENO Y EL 3-CLOROBENZOATO, COMBINANDO ELEMENTOS ESTRUCTURALES Y REGULADORES DE OTRAS RUTAS DE METABOLISMO DE AROMATICOS, Y EN LA PUESTA A PUNTO DE UN SISTEMA DE SELECCION IN VIVO DE VARIANTES DE ENZIMAS CATECOL 2,3-DIOXIGENASAS RESISTENTES A INHIBICION POR 3-CLOROCATECOL.

Autor: HERRERO VALLEJO M. TERESA.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL PRIMER OBJETIVO DE LA TESIS FUE EL ANALISIS INMUNOHISTOQUIMICO DE LOS CULTIVOS PRIMARIOS DE NEURONAS CORTICALES, OBSERVANDOSE UN BAJO PORCENTAJE DE CONTAMINACION GLIAL, Y SE DETECTARON A SU VEZ CELULAS GABAERGICAS, AMINERGICAS Y CELULAS QUE CONTENIAN OXIDO NITRICO SINTASA. POSTERIORMENTE, SE COMPROBO QUE TANTO EL KC1, COMO VERATRIDINA Y 4-AMINOPIRIDINA (AGENTES DESPOLARIZANTES) INCREMENTAN EL POTENCIAL DE MEMBRANA, LOS NIVELES DE CALCIO INTRACELULAR Y LA LIBERACION DE ASPARTATO, GLUTAMATO, GLICINA Y GABA, EN NEURONAS CORTICALES EN CULTIVO. LA LIBERACION DE ESTOS NEUROTRANSMISORES SE REALIZO A TRAVES DE DOS PROCESOS, UNO DEPENDIENTE DE CALCIO (EXOCITOSIS) Y OTRO INDEPENDIENTE DE CALCIO, PROBABLEMENTE DEBIDO A LA INVERSION DEL TRANSPORTADOR DE ESTOS AMINOACIDOS. EL ULTIMO PUNTO ESTUDIADO EN ESTA TESIS FUE LA MODULACION DE LA LIBERACION DE ESTOS NEUROTRANSMISORES A TRAVES DE 3 TIPOS DE RECEPTORES: EL RECEPTOR NICOTINICO, RECEPTOR GABA-A Y RECEPTORES GLUTAMATERGICOS. DE LOS TRES RECEPTORES, DESTACAMOS EL RECEPTOR GABA-A QUE TUVO UNA ACCION BIFASICA (EXCITATORIA-INHIBITORIA) DEPENDIENDO DE LAS CONDICIONES.

Autor: HOLGUIN FERNANDEZ AFRICA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: B. MOLECULAR.

Resumen: ESTA TESIS DOCTORAL HA APORTADO DATOS CUANTITATIVOS SOBRE LA VARIABILIDAD GENETICA Y FENOTIPICA DE DOS VIRUS DE GRAN INCIDENCIA SANITARIA, COMO SON EL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA Y EL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA. LAS CONCLUSIONES ALCANZADAS TIENEN EN COMUN LA CONTRIBUCION DE LA ESTRUCTURA EN CUASIESPECIES COMO ORIGEN DE VARIANTES FENOTIPICAMENTE RELEVANTES, LAS DIFICULTADES QUE ESTO PLANTEA EL CONTROL DE LAS ENFERMEDADES VIRICAS COMO EL SIDA, Y LAS BASES MOLECULARES SOBRE LAS QUE SE SUSCITAN DICHAS DIFICULTADES. HEMOS DEMOSTRADO DE MODO ESTADISTICAMENTE SIGNIFICATIVO, LA PREEXISTENCIA EN POBLACIONES DE VIH-I DE MUTACIONES RELACIONADAS CON RESISTENCIA A INHIBIDORES DE LA RETROTANSCRIPTASA DEL VIRUS. OTRA OBSERVACION HA SIDO QUE LA TOLERANCIA A ADMITIR CAMBIOS DE AMINOACIDO PODRIA SER CONSIDERADA UN FACTOR IMPORTANTE EN LA DIVERSIFICACION ANTIGENICA DE LOS VIRUS ARN, TANTO EN PRESENCIA COMO EN AUSENCIA DE SELECCION INMUNE.

Autor: HUSSIEN ABOU DEIF MAHMOUD.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA.

Resumen: Hasta el momento, en el maíz se han descrito seis cDNAs de genes de alfa-tubulina. Solo tres clones genómicos han sido caracterizados correspondientes a los genes tua1, tua2 y tua3. Usando como sonda la parte conservada del gen tua1, se realizó un cribado sobre un banco de cDNA de maiz. De este banco se obtuvieron además de los tres genes ya conocidos otros dos que correspondían al tua4 y tua6. Para aislar los clones genómicos, se usaron las secuencias de la parte 3' no codificante de los dos genes como sondas para cribar un banco genómico. Después de varias purificaciones, se pudo aislar un clon que correspondía al gen tua6 pero que solo contenía la región 3' del gen. El mapa de restricción y su secuencia mostraron los dos últimos exones del gen, dos intrones (uno no completo) y la secuencia 3' no codificante del mismo. Para obtener el resto de la secuencia de este gen, se usó una sonda que representaba la parte 5' de la secuencia incompleta del gen tua6 para cribar un nuevo banco genómico. De este cribado se aislaron tres clones que contenían insertos solapantes del gen tua5 entero (3674 pb) pero ninguno del tua6. El mapa de restricción del gen tua5 mostraba 5 exones y 4 intrones. La secuencia del gen tua5 codifica para una alfa-tubulina que contiene 450 aminoácidos con alta similaridad al resto de las alfa-tubulinas conocidas. En esto trabajo, mediante análisis por "Southern" con una sonda no especifica del gen tua5 se han podido observar seis fragmentos que podrían corresponder a los seis genes expresados de la alfa-tubulina presentes en el genoma del maíz. Usando sondas específicas para los genes tua5 y tua6, para cuantificar los niveles de transcritos de estos genes en diferentes tejidos, se observó que ambos genes son preferencialmente expresados en polen. Los resultados de comparar de las secuencias aminoacídicas de los genes de alfa-tubulina descritos hasta ahora en plantas y algas sugieren que los genes de las alfa-tubulina pueden clasificarse en dos grandes subfamilias. La subfamilia I contendría los genes tua1 y tua2 en Z. mays; tua2, tua4 y tua6 en A.thaliana y tua1 en P.sativum. Esta subfamilia también incluye los genes de alfa-tubulina de algas; C.reinhardtii (tua1 y tua2), C. vulgaris (tua1) y V. carteri (tua1 y tua2). La subfamilia II consistiría en los genes tua5 y tua6 en, Z.mays y tua1, tua3 y tua5 en A. thaliana. El gen tua3 del maíz esta más relacionado con los de la subfamilia I.

Autor: ILLANA CALERO BELEN .
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN ESTE TRABAJO SE HA SECUENCIADO Y CARACTERIZADO LA PROTEINA TERMINAL (PT) Y LA DNA POLIMERASA DEL BACTERIOFAGO GA-1, ASI COMO SE HA DEMOSTRADO QUE EL MECANISMO DE REPLICACION DE SU DNA SE INICIA CON LA FORMACION DE UN COMPLEJO COVALENTE PT-DAMP, EN UNA REACCION CATALIZADA POR LA DNA POLIMERASA VIRAL. ADEMAS, LA INICIACION DE LA REPLICACION NO OCURRE EN EL NUCLEOTIDO TERMINAL DE LA MOLECULA LINEAL, SINO EN EL SEGUNDO NUCLEOTIDO 3' DESDE AMBOS EXTREMOS. EL MANTENIMIENTO DEL NUCLEOTIDO 3'-TERMINAL SE LLEVA A CABO MEDIANTE UN MECANISMO DE "SLIDING-BACK" SIMILAR AL DESCRITO PARA EL BACTERIOFAGO 029. POR OTRA PARTE, SE HA ESTUDIADO LA RELACION ESTRUCTURA/FUNCION DE LA PT DEL BACTERIOFAGO 029. MEDIANTE LA OBTENCION, PURIFICACION Y ANALISIS BIOQUIMICO DE DERIVADOS MUTANTES DE ESTA PROTEINA, SE HA PODIDO CONCLUIR QUE LA REGION N-TERMINAL ESTA IMPLICADA EN LA INTERACCION CON LA DNA POLIMERASA. TAMBIEN SE HA IDENTIFICADO RESIDUOS CONCRETOS QUE PARECEN ESTAR IMPLICADOS EN LA FUNCION DE LA PT PATERNA, ES DECIR, UNA VEZ QUE SE ENCUENTRA UNIDA AL DNA.

Autor: JIMENEZ DIAZ ANTONIO.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN EL PRESENTE TRABAJO SE DESCRIBE LA OBTENCION, CARACTERIZACION Y OPTIMIZACION DE UN EXTRACTO DE DIFERENTES CEPAS DE S. CEREVISIAE QUE TRADUCE EFICAZMENTE MENSAJEROS EXOGENOS NATURALES Y ARTIFICIALES. CON ESTE EXTRACTO DE TRADUCCION "IN VITRO" SE HA ESTUDIADO LA FUNCION DE LAS PROTEINAS P1 Y P2 DEL TALLO DE LA SUBUNIDAD MAYOR DEL RIBOSOMA. ESTAS PROTEINAS TIENEN UNAS CARACTERISTICAS EXCEPCIONALES ENTRE LAS PROTEINAS RIBOSOMICAS: SON MUY ACIDAS TIENEN ALGUNOS RASGOS CONSERVADOS ENTRE TODOS LOS ORGANISMOS EUCARIOTAS. LA INTERRUPCION DE LOS GENES QUE LAS CODIFICAN INDICA QUE NO SON ESENCIALES, PERO MODIFICAN EL FENOTIPO DE LAS CELULAS. ESTAS CARACTERISTICAS PARECEN IMPLICAR UNA FUNCION ADICIONAL A LA YA DESCRITA DE INTERACCION CON LOS FACTORES DE ELONGACION. PARA ELLO, USANDO EXTRACTOS DE CEPAS SILVESTRES SE HA ESTUDIADO EL INTERCAMBIO DE LAS PROTEINAS ACIDAS EN PRESENCIA O AUSENCIA DE INHIBIDORES DE LA SINTESIS PROTEICA, ENCONTRANDOSE QUE ESTE INTERCAMBIO SE PRODUCE DE UNA MANERA ESPECIFICA DURANTE LA INICIACION. CON EXTRACTOS DE CEPAS MUTANTES EN LAS PROTEINAS ACIDAS SE HA DEMOSTRADO QUE LA PRESENCIA DE LAS MISMAS EN EL RIBOSOMA HACE MAS EFICIENTE EL PROCESO DE LA TRADUCCION, Y QUE SU PRESENCIA O AUSENCIA MODIFICA EL PATRON DE EXPRESION PROTEICA SIENDO POR TANTO, MODULADORES DE LA ACTIVIDAD RIBOSOMICA.

Autor: JIMENEZ MATEO OSCAR.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HAN CLONADO 1805 PARES DE BASES CORRESPONDIENTES AL ADN COMPLEMENTARIO DE UN NUEVO FACTOR DE TRANSCRIPCION POU HUMANO. ESTE FACTOR, HPLA-1, ES HOMOLOGO DEL FACTOR SKN-1/EPOC-1/OCT-11, CLONADO INICIALMENTE EN RATA Y RATON, Y NO HABIA SIDO IDENTIFICADO PREVIAMENTE, EN HUMANOS. EL GEN DE HPLA-1 SE EXPRESA ESPECIFICAMENTE, EN PLACENTA, TIROIDES, E HIPOFISIS HUMANA. EL PRE-ARN MENSAJERO DE HPLA-1 PRESENTA MULTIPLES OPCIONES DE PROCESAMIENTO, GENERANDO DISTINTAS POBLACIONES DE ARN MENSAJEROS MADUROS (HPLA-1, HPLA-1AR, Y HPLA-1TT). EL ARN MENSAJERO DE HPLA-1 CODIFICA PARA UNA PROTEINA DE 436 AA Y 47.4 KDA. LOS ARN MENSAJEROS DE HP1A-1AR Y HP1A-1TT GENERAN ISOFORMAS DE LA PROTEINA TRUNCADAS EN EL EXTREMO N-TERMINAL. LA PROTEINA HPLA-1, PERO NO SU ISOFORMA HPLA-1 AR, ES CAPAZ DE TRANSACTIVAR, IN VITRO, EL PROMOTOR MINIMO DEL GEN HP1-3. LA ISOFORMA HPLA-1AR CARECE DE LA REGION RICA EN AMINOACIDOS CARGADOS PRESENTE EN HPLA-1. ES LA PRIMERA VEZ QUE UNA REGION DE ESTAS CARACTERISTICAS SE IMPLICA EN TRANSACTIVACION EN LA FAMILIA POU.

Autor: JUVANY ROIG ROSER.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOPATOLOGIA Y PATOLOGIA MOLECULAR (UB).

Resumen: LOS RESULTADOS OBTENIDOS PERMITEN CONCLUIR QUE: I) ESTA TESIS APORTA UN PROTOCOLO DE ESTUDIO DE CONMUTABILIDAD, II) LOS MATERIALES CONMUTABLES PUEDEN GENERAR INFORMACION INCORRECTA SOBRE EL ERROR SISTEMATICO Y LA INEXACTITUD DE LOS PROCEDIMIENTOS ANALITICOS, SIENDO ESTA POSIBILIDAD MAYOR EN EL ESTUDIO DEL ERROR SISTEMATICO PORQUE EL LIMITE DE ACEPTABILIDAD ES MAS ESTRECHO; ADEMAS, EN EL ESTUDIO DEL ERROR SISTEMATICO EXISTE OTRO CONDICIONANTE QUE ES LA TECNICA DE CUANTIFICACION, III) LA IMPRECISION DE LOS PROCEDIMIENTOS DE QUIMICA SECA ES EQUIVALENTE A LA DE LOS CONVENCIONALES; AHORA BIEN, EXISTEN DIFERENCIAS SISTEMATICAS ENTRE LOS PROCEDIMIENTOS COMPARADOS (TANTO QUIMICA SECA COMO CONVENCIONAL) QUE IMPIDEN COMPARTIR VALORES DE REFERENCIA, IV) ANTE LA IMPOSIBILIDAD DE IDENTIFICAR UN MULTICALIBRADOR CONMUTABLE, LOS FABRICANTES DEBERIAN ASIGNAR VALORES A LOS CALIBRADORES CORRIGIENDO EL EFECTO MATRIZ DE LOS MISMOS SOBRE LOS PROCEDIMIENTOS DE RUTINA, V) LOS MATERIALES UTILIZADOS EN LOS PROGRAMAS DE CONTROL DE CALIDAD INTERNO-EXTERNO DIARIO (AQUELLOS DE LOS CUALES SE DESCONOCE SU CONMUTABILIDAD) SON APROPIADOS PARA CONTROLAR LA IMPRECISION, EL ERROR SISTEMATICO RESPECTO AL GRUPO HOMOGENEO Y LOS INCREMENTOS DE ERROR SISTEMATICO RESPECTO A LA PRESTACION ESTABLE DEL PROCEDIMIENTO ANALITICO Y VI) LOS PROGRAMAS DE EVALUACION EXTERNA DE LA CALIDAD DEBERIAN DISTRIBUIR SUEROS A DIFERENTES CONCENTRACIONES PARA PROMOVER LA TRANSFERIBILIDAD ENTRE DISTINTOS PROCEDIMIENTOS ANALITICOS; PARA POTENCIAR LA TRANSFERIBILIDAD DE LOS RESULTADOS DE UN MISMO PROCEDIMIENTO ANALITICO NO ES NECESARIO UTILIZAR MATERIALES CONMUTABLES.

Autor: KIVES OSTRONOFF LUCIANA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL OBJETIVO DE ESTA TESIS HA SIDO CARACTERIZAR LOS MECANISMOS QUE CONTROLAN LA EXPRESION DEL GENOMA MITOCONDRIAL DURANTE LA DIFERENCIACION DE LA MITOCONDRIA DE HIGADO DE RATA. SE HA DEMOSTRADO QUE LA REGULACION SE EJERCE A NIVEL DE LA ESTABILIDAD DE LOS TRANSCRITOS MITOCONDRIALES Y DE LA EFICIENCIA TRADUCCIONAL DE LOS MISMOS. ADEMAS, SE HA PUESTO DE MANIFIESTO QUE LA ACTIVACION DE LA CAPACIDAD TRADUCCIONAL DE LA MITOCONDRIA DEPENDE DE LA ACTIVACION PREVIA DE LA SINTESIS DE PROTEINAS EN RIBOSOMAS CITOPLASMATICOS Y DE LA DESAPARICION DE UNA ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA TRADUCCION MITOCONDRIAL QUE UNICAMENTE SE EXPRESA EN EL HIGADO FETAL. POR OTRO LADO, SE PRESENTAN RESULTADOS QUE SUGIEREN LA EXISTENCIA DE MECANISMOS LIGADOS A LA FOSFORILACION/ DESFOSFORILACION DE PROTEINAS EN EL CONTROL TRADUCCIONAL DE LA MITOCONDRIA DE HIGADO.