BIOQUIMICA MOLECULAR, 60

Autor: MARTINEZ MAS JOAN VICENC.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA I BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: NOS PLANTEAMOS ESTUDIAR LA ACTIVIDAD DE DIFERENTES SISTEMAS DE TRANSPORTE DE AMINOACIDOS EN LA PROLIFERACION HEPATICA. POR ESTO LO PRIMERO QUE HICIMOS FUE PONER A PUNTO UN METODO DE AISLAMIENTO DE CELULAS HEPATICAS DE RATA Y ADAPTAR UN METODO PARA MEDIR LA CAPTACION DE ALANINA EN ESTAS CELULAS. SEGUIDAMENTE ESTUDIAMOS LA ACTIVIDAD DE ESTE Y TAMBIEN DE OTROS TRANSPORTADORES EN DIFERENTES MODELOS DE PROLIFERACION. INICIALMENTE ESTUDIAMOS LA ACTIVIDAD A EN EL DESARROLLO FETAL NEONATAL, OBSERVANDO UNA INDUCCION DE UNA COMPONENTE DE ALTA AFINIDAD EN EL TRANSPORTE NA. DEPENDIENTE DE ALANINA EN HEPATOCITOS DE FETO DE 21 DIAS QUE PERDIA IMPORTANCIA EN RECIEN NACIDOS Y MAS EN ADULTOS. SEGUIDAMENTE Y TRABAJANDO EN VESICULAS DE MEMBRANA PLASMATICA ESTUDIAMOS EL MODELO DE REGENERACION HEPATICA, DONDE SE ENCONTRO UNA INDUCCION TANTO EN EL TRANSPORTE DEL SISTEMA A, COMO TAMBIEN EN EL TRANSPORTADOR NA-DEPENDIENTE DE NUCLEOSIDOS. ESTA INDUCCION DE ACTIVIDAD SE CORRELACIONABA CON UN INCREMENTO PARALELO TANTO DE LA EXPRESION DE SU PROTEINA COMO DEL ARN MENSAJERO.

Autor: MARTINEZ MORALES JUAN RAMON.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LOS NUMEROSOS ESTUDIOS QUE ANALIZAN EL LINAJE DE LAS CELULAS NEUROEPITELIALES DEL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL (SNC) DE LOS VERTEBRADOS DEMUESTRAN QUE, EN LA MAYOR PARTE DE LOS CASOS, DICHOS PRECURSORES NEURALES SON PLURIPOTENTES HASTA POCO TIEMPO ANTES DE QUE EL NACIMIENTO NEURONAL SE PRODUZCA. LA DETERMINACION FENOTIPICA DE ESTOS PRECURSORES DEBE ESTAR INFLUENCIADA POR TANTO POR LA ACTIVIDAD DE FACTORES PRESENTES EN EL MICROAMBIENTE QUE LOS RODEA. EN EL PRESENTE TRABAJO SE IDENTIFICA UNO DE ESTOS INDUCTORES SELECTIVOS DE LA DIFERENCIACION NEURONAL: LA VITRONECTINA, UNA GLICOPROTEINA DE LA MATRIZ EXTRACELULAR. SE EMPLEAN COMO MODELOS DE ESTUDIO DEL SNC LA RETINA Y LA MEDULA ESPINAL DEL EMBRION DE POLLO, DONDE SE DETECTA LA PRESENCIA TANTO DE LA VITRONECTINA COMO DE SUS RECEPTORES INTEGRINICOS DURANTE ESTADIOS DEL DESARROLLO COINCIDENTES CON LA DIFERENCIACION NEURONAL. ASI MISMO, EL ESTUDIO DE LA DISTRIBUCION DEL MENSAJERO DE LA GLICOPROTEINA MEDIANTE HIBRIDACION IN SITU DEMUESTRA QUE SON LAS PROPIAS CELULAS NEUROEPITELIALES LAS RESPONSABLES DE SINTETIZAR LA VITRONECTINA PRESENTE EN SU MICROAMBIENTE. LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN EL PRESENTE TRABAJO INDICAN QUE LA VITRONECTINA PRESENTE EN EL SNC INDUCE SELECTIVAMENTE LA DIFERENCIACION DE CIERTOS FENOTIPOS NEURONALES. ASI, LA NEUTRALIZACION DE LA VITRONECTINA ENDOGENA MEDIANTE ANTICUERPOS BLOQUEANTES DE SU ACTIVIDAD INHIBE TANTO EN EXPLANTES TISULARES COMO IN VIVO LA GENERACION DE CELULAS GANGLIONARES EN LA RETINA Y MOTONEURONAS EN EL TUBO NEURAL, SIN AFECTAR APARENTEMENTE LA GENERACION DE OTROS TIPOS NEURONALES. CONSECUENTEMENTE, LA ADICION DE VITRONECTINA SOLUBLE A EXPLANTES DE RETINA O TUBO NEURAL INDUCE LA GENERACION DE CELULAS GANGLIONARES Y MOTONEURONAS RESPECTIVAMENTE. FINALMENTE, SE DEMUESTRA EN EXPLANTES DE TUBO NEURAL QUE EL MORFOGENO SONIC HEDGEHOG, CUYA ACTIVIDAD INDUCTORA DE LA DIFERENCIACION DE LAS NEURONAS MOTORAS HA SIDO DESCRITA EN OTROS TRABAJOS, REQUIERE DE LA ACTIVIDAD DE LA VITRONECTINA PARA EJERCER SU ACCION. TOMADOS EN CONJUNTO LOS DATOS PRESENTADOS EN ESTE TRABAJO SUGIEREN QUE LA VITRONECTINA PODRIA ACTUAR COMO INDUCTOR SELECTIVO DE LA DIFERENCIACION DE LAS NEURONAS DE LARGA PROYECCION DEL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL.

Autor: MARTINEZ MURILLO FRANCISCO.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR..

Resumen: EL TRABAJO REALIZADO HA COMPRENDIDO ESTUDIOS SOBRE LA PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE LA NITRATO REDUCTASA DESASIMILATIVA DE LA BACTERIA GEOBACTER METALLIREDUCENS. ESTA BACTERIA SE HA CONVERTIDO EN UN ORGANISMO MODELO PARA EL ESTUDIO DE LA REDUCCION MICROBIANA DE HIERRO ACOPLADA A LA OXIDACION DE MATERIA ORGANICA EN SEDIMENTOS ANAEROBIOS, PROCESO DE IMPORTANTE PAPEL ECOLOGICO Y GRAN INTERES BIOTECNOLOGICO EN ASPECTOS DE BIORREMEDIACION. SIN EMBARGO, MUY POCO ES LO QUE SE CONOCE EN ESTOS MOMENTOS DE ESTOS MICROORGANISMOS DESDE EL PUNTO DE VISTA BIOQUIMICO Y MOLECULAR, SIENDO TRABAJOS COMO EL QUE AQUI SE RESUME, PIONEROS EN ESTE TIPO DE ESTUDIO. EL DESARROLLO DE ESTE TRABAJO HA PERMITIDO PURIFICAR LA ENZIMA NITRATO REDUCTASA Y CARACTERIZAR SUS PROPIEDADES. LA CONCLUSION DEL MISMO ES QUE LA NITRATO REDUCTASA DE G. METALLIREDUCENS PARECE SER LA UNICA ACTIVIDAD DE ESTE TIPO PRESENTE EN ESTE MICROORGANISMO. ES UNA PROTEINA LIGADA A MEMBRANA. PARA SU PURIFICACION SE HA DISEÑADO UN METODO QUE HA PROBADO SER EFICAZ TAMBIEN EN LA PURIFICACION DE PROTEINAS SIMILARES DE OTRAS BACTERIAS; EN PARTICULAR, PROTEINAS FUERTEMENTE LIGADAS A MEMBRANA, DE GRAN HIDROFOBICIDAD Y TAMAÑO. LA NITRATO REDUCTASA DE G. METALLIREDUCENS CORRESPONDE A UN TIPO NOVEL DE NITRATO REDUCTASA CON CARACTERISTICAS DISTINTAS A LAS CONOCIDAS HASTA EL MOMENTO. PRESENTA ACTIVIDAD DE NITRATO REDUCTASA Y DE NITRITO REDUCTASA, SE HAN CARACTERIZADO SUS CONSTANTES CINETICAS, LOS VALORES DE PH Y TEMPERATURA OPTIMOS, LA ESPECIFICIDAD POR SUBSTRATO Y EL EFECTO DE INHIBIDORES EN AMBAS ACTIVIDADES. ES UN COMPLEJO QUE CONSTA DE TRES SUBUNIDADES, CUYO ESTUDIO HA PERMITIDO GENERAR DATOS DE SECUENCIA QUE HAN SERVIDO PARA DEMOSTRAR SU ESCASA RELACION CON OTRAS PROTEINAS Y PARA DISEÑAR LA ESTRATEGIA DE IDENTIFICACION Y CLONACION DE LOS GENES RESPONSABLES DE SU EXPRESION. APARENTEMENTE ESTA NITRATO REDUCTASA ESTA ASOCIADA A UNA BACTERIOFERRITINA.

Autor: MATEO DE CASTRO JESUS.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA MEDULA ADRENAL ES UN TEJIDO NEUROSECRETOR FORMADO PRINCIPALMENTE POR CELULAS CROMAFINES, DE ORIGEN NEURAL, Y POR CELULAS ENDOTELIALES, QUE FORMAN UNA DENSA RED CAPILAR INVOLUCRADA EN LA REGULACION VASCULAR QUE FAVORECE EL TRANSPORTE DE LAS SUSTANCIAS SECRETADAS POR LAS CELULAS CROMAFINES, HACIA LA CIRCULACION GENERAL. TRAS LA ESTIMULACION NERVIOSA DE LAS CELULAS CROMAFINES, ESTAS LIBERAN GRANDES CANTIDADES DE NUCLEOTIDOS, PRINCIPALMENTE ATP, JUNTO CON CATECOLAMINAS Y PROTEINAS. AMBOS TIPOS CELULARES DISPONEN DE RECEPTORES PURINERGICOS PARA ATP (P2), SIN EMBARGO, EXISTE UNA HETEROGENEIDAD MARCADA EN CUANTO A LA NATURALEZA DE LOS RECEPTORES PURINERGICOS QUE EXPRESAN Y EN LAS PROPIEDADES DE LOS SISTEMAS ENZIMATICOS ENCARGADOS DE LA DEGRADACION EXTRACELULAR DE LOS COMPUESTOS DE NATURALEZA NUCLEOTIDICA. ASI, MIENTRAS TODAS LAS CELULAS ENDOTELIALES EXPRESAN RECEPTORES PURINERGICOS P2Y Y P2U CAPACES DE INDUCIR VASODILATACION, EXISTEN CELULAS CROMAFINES INSENSIBLES A ATP, CELULAS CROMAFINES QUE EXPRESAN UN RECEPTOR PURINERGICO IONOTROPICO P2X ACOPLADO A SECRECION MAYORITARIA DE NORADRENALINA, Y CELULAS CROMAFINES QUE EXPRESAN UN RECEPTOR P2U METABOTROPICO NO ACOPLADO A SECRECION DE CATECOLAMINAS. POR OTRO LADO, LA ACTIVACION DE LOS RECEPTORES DE ADENOSINA EN LAS CELULAS CROMAFINES CONDUCE A LA ACTIVACION DE UNA ACTIVIDAD FOSFATASA CITOSOLICA Y COMO CONSECUENCIA A LA INHIBICION DE LA SECRECION DE CATECOLAMINAS TRAS ESTIMULACION NICOTINICA.

Autor: MEDINA ESCOBAR M. NIEVES.
Año: 1996.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: TECNICAS DE INVESTIGACION EN BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HA CONSTRUIDO UNA GENOTECA SUSTRACTIVA DE EXPRESION ENTRE LOS ESTADIOS INMADUROS Y MADUROS DEL FRUTO DE FRESA. DICHA GENOTECA SE HA EXPLORADO MEDIANTE ESCRUTINIOS DIFERENCIALES UTILIZANDO UN METODO DENOMINADO PCR-SBDS, AISLANDOSE UN GRAN NUMERO DE CLONES CORRESPONDIENTES A ARNM PRESENTES PREFERENTEMENTE EN EL ESTADIO MADURO. DICHOS CLONES HAN SIDO SECUENCIADOS Y CARACTERIZADOS, Y CUATRO DE ELLO SE HAN SELECCIONADO PARA UN ESTUDIO MAS DETALLADO. LOS CLONES ESTUDIADOS PRESENTAN SIMILITUDES CON OTRAS SECUENCIAS DE PLANTAS SUPERIORES. ASI, EL CLON NJJS 25 PRESENTA HOMOLOGIA CON LAS PECTATO LIASAS, EL CLON NJJS 56 CON PROTEINAS HIBRIDAS RICAS EN PROLINA, EL NJJS 4 CON PROTEINAS DE CHOQUE TERMICO DE BAJO PESO MOLECULAR Y EL NJJS 18 CON ALCOHOL DESHIDROGENASAS DEPENDIENTES DE ZINC. LOS ANALISIS DE EXPRESION ESPACIO-TEMPORALES MEDIANTE NORTHERN BLOT, MOSTRARON MODELOS DE EXPRESION MUY DIFERENTES EN LOS 4 CLONES SELECCIONADOS, SIENDO TRES DE ELLOS ESPECIFICOS DE FRUTOS MIENTRAS QUE EL CLON NJJS 18 PRESENTO EXPRESION TANTO EN FRUTOS COMO EN HOJAS, FLORES Y ESTOLONES. ADEMAS, LA EXPRESION DE ESTOS GENES RESULTO ESTAR BAJO EL CONTROL DE LOS AQUENIOS, YA QUE SU EXPRESION AUMENTO CUANDO ESTOS FUERON RETIRADOS. SIN EMBARGO, NO TODOS ELLOS APARECIERON REGULADOS POR LAS AUXINAS, HORMONAS SECRETADAS POR LOS AQUENIOS. TRES DE LOS CLONES MOSTRARON UNA EXPRESION ESPECIFICA DE CELULAS DEL RECEPTACULO, MIENTRAS QUE EL CUARTO (NJJS 4) MOSTRO UN MODELO DE EXPRESION DIFERENTE EN LOS DOS COMPONENTES DEL FRUTO DE FRESA. TRAS EL ANALISIS DEL ADN GENOMICO MEDIANTE SOUTHERN BLOT SE OBSERVO QUE LOS CUATRO GENES ERAN, POSIBLEMENTE, MIEMBROS DE PEQUEÑAS FAMILIAS MULTIGENICAS.

Autor: MENDEZ ALVAREZ SEBASTIAN.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA I MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA BASICA .

Resumen: EN EL PRESENTE TRABAJO SE DESCRIBE UN PROTOCOLO DE TRANSFORMACION GENETICA DE LA ESPECIE CHLOROBIUM LIMICOLA. PARA LLEVAR A CABO TAL PROCESO SE UTILIZO COMO VECTOR UN PLASMIDO NATURAL, AISLADO DE ESTA ESPECIE, QUE CONFIERE LA CAPACIDAD DE UTILIZAR EL TIOSULFATO COMO DADOR DE ELECTRONES EN LA FOTOSINTESIS. ASIMISMO, SE HAN APLICADO TECNICAS MOLECULARES Y BIOQUIMICAS DE TIPIFICACION BACTERIANA CON EL FIN DE APORTAR NUEVOS DATOS A LA TAXONOMIA DE ESTAS BACTERIAS. UNA DE DICHAS METODOLOGIAS SE BASA EN EL USO COMBINADO DE LA ELECTROFORESIS DE CAMPO PULSADO (PFGE) CON ENZIMAS DE RESTRICCION DE DIANAS POCO FRECUENTES. TAL METODOLOGIA PERMITIO OBTENER PATRONES DE RESTRICCION GENOMICOS A PARTIR DE LOS CUALES SE PUDO DETERMINAR EL TAMAÑO CROMOSOMICO DE DIECISIETE CEPAS DEL GENERO CHLOROBIUM Y ESTABLECER COMPARACIONES DE VALOR TAXONOMICO. ADEMAS, EL PFGE PERMITIO INICIAR EL ESTUDIO DE LA ORGANIZACION GENOMICA DE LAS BACTERIAS ESTUDIADAS, PUDIENDOSE DETERMINAR QUE CADA CEPA PRESENTA UN UNICO CROMOSOMA DE TIPOLOGIA CIRCULAR Y QUE ALGUNAS DE ELLAS PRESENTAN ELEMENTOS EXTRACROMOSOMICOS DE ALTO PESO MOLECULAR. LOS RESULTADOS OBTENIDOS MEDIANTE PFGE FUERON COMPLEMENTADOS MEDIANTE OTRAS TECNICAS DE TIPIFICACION, CONCRETAMENTE ANALISIS COMPARATIVO DE PATRONES DE HIBRIDACION CON SONDAS DE RRNA (RIBOTIPIFICACION), DE PATRONES DE DNA POLIMORFICO AMPLIFICADO AL AZAR (RAPD) Y DE PATRONES DE PROTEINAS RESISTENTES A PROTEINASA K. LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON TODAS LAS TECNICAS MOLECULARES DEMUESTRAN QUE LAS BACTERIAS INCLUIDAS EN EL GENERO CHLOROBIUM PRESENTAN UNA GRAN HETEROGENEIDAD GENETICA Y PROTEICA. POR ULTIMO, SE DESARROLLO UN MODELO MATEMATICO QUE PERMITE CALCULAR LA PROBABILIDAD DE REPETICION AL AZAR DE LOS PATRONES DE MACRORRESTRICCION. ESTE MODELO PERMITE CONOCER EL NUMERO OPTIMO DE FRAGMENTOS PARA REALIZAR COMPARACIONES DE PATRONES CON LA SEGURIDAD DE QUE LAS COINCIDENCIAS OBSERVADAS SON EL REFLEJO DE UNA RELACION GENETICA REAL Y NO EL RESULTADO DE PROCESOS ALEATORIOS.

Autor: MERCADAL PUJIULA MARGARITA.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA. BIENIO 93-95 .

Resumen: Se prepararon inmunoliposomas convencionales (IL), por el método de unión del SPDP y utilizando el anticuerpo monoclonal My10 dirigido contra el antígeno CD34, el cual se expresa en células hematopoyéticas progenitoras. Variando la relación anticuerpo/lípido se obtubieron IL con diferentes densidades de anticuerpo. Estos reconocían específicamente las células CD34+. La eficiencia de unión se incrementaba aumentando la concentración lipídica o la densidad de anticuerpo de trabajo. La estabilización estérica de los IL se llevó a cabo incluyendo en la composición lipídica PEG(2000) PE y PDP-PEG(3400)PE hasta un 5% final de PEG. La diferente longitud de las cadenas de polímero no alteraba la estabilidad estérica de los liposomas y permitía obtener eficiencias de unión del anticuerpo mejores que las obtenidas hasta el momento. Los inmunoliposomas estabilizados estéricamente (SIL) preparados mediante el reactivo SMPB (enlace tioéter, eficiencia=100%) son útiles para aplicaciones in vivo, mientras que el reactivo SPDP (puente disulfuro, eficiencia del 70%) es adecuado para la preparación de SIL para la selección ex vivo de células CD34+. Los SIL se unen especificamente a células CD34+ presentes en bajos porcentajes, sin afectar a la viabilidad celular. Para la selección celular magnética, se encapsuló en liposomas dos tipos de ferrofluidos, uno estabilizado con dextrano (FF- DT) y otro con citrato (FF-CT). Los inmunomagnetoliposomas se unían a las células KG-la, pero tenían una elevada unión inespecífica, la cual aumentaba al incrementarse la concentración lipídica de trabajo. La eficiencia de captura de los inmunomagnetoliposomas con FF-CT (90%) fue superior a la de los que contenían FF-DT (19%). La pureza obtenida era dependiente del porcentaje inicial de células CD34+ y de la línea celular utilizada como CD34-. Por ello, este sistema tiene limitada su aplicación.

Autor: MESA BECERRIL M. LUISA.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HA PROFUNDIZADO EN EL MECANISMO DE HEPATOXICIDAD INDUCIDA POR TIOACETAMIDA EN HIGADO DE RATA, ESTUDIANDO EL PROCESO DE REGENERACION HEPATICA COMPENSADA, QUE SE PRODUCE COMO CONSECUENCIA DE LA ADMINISTRACION DE UNA UNICA DOSIS DEL CITADO HEPATOTOXICO, TANTO A NIVEL MORFOLOGICO COMO SOBRE LA EXPRESION DE GENES RELACIONADOS CON LOS PROCESOS DE PROLIFERACION Y/O DIFERENCIACION CELULAR.ASIMISMO, SE HA ABORDADO EL POSIBLE EFECTO DE LA S-ADENOSIL-L-METIONINA Y DE OTROS AGENTES, COMO SUSTANCIAS CAPACES DE CONTRARRESTAR LAS ALTERACIONES PRODUCIDAS TRAS LA ADMINISTRACION DE SUCESIVAS DOSIS DE TIOACETAMIDA, INTENTANDO DETERMINAR LOS MECANISMOS POR LOS CUALES ESTOS SUJETOS EJERCEN SU ACCION.

Autor: MINGORANCE CRUZ JESUS.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: LA REGION CODIFICANTE DE LA S-ADENOSIL-L-METIONINA SINTETASA DE HIGADO DE RATA FUE SUBCIONADA EN UN VECTOR DE EXPRESION EN E.COLI. ESTE SISTEMA PRODUJO GRAN CANTIDAD DE ENZIMA RECOMBINANTE, LA MAYOR PARTE EN FORMA DE CUERPOS DE INCLUSION, AUNQUE TAMBIEN SE OBTUVO UNA FRACCION EN FORMA SOLUBLE. LA ENZIMA SOLUBLE ERA ACTIVA, Y FORMABA TETRAMEROS Y DIMEROS. SE DESARROLLO UN PROTOCOLO PARA PURIFICARLA, Y SE CARACTERIZO LA ENZIMA OBTENIDA. ESTA CONTENIA UNA MEZCLA EN EQUILIBRIO DE DOS ISOFORMAS, TETRAMEROS Y DIMEROS, CON UNA CONSTANTE DE EQUILIBRIO APARENTE DE APROXIMADAMENTE 5X10 5 M-1; EL TETRAMERO SE DISOCIABA SIGUIENDO UNA CINETICA DE PRIMER ORDEN, CON UNA VELOCIDAD DE K-1= (8.1 +-0.4) X10 -4 S -1 Y UNA VIDA MEDIA DE UNOS 14 MINUTOS A 4 GRADOS C. LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA RECOMBINANTE ERA INHIBIDA DE FORMA DEPENDIENTE DE DOSIS POR NO, H2O2 Y GSSG, CON CONSTANTES DE INHIBICION DE 0.08, 0.25 Y 2 MM RESPECTIVAMENTE. PARA ESTUDIAR EL PAPEL ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE LOS GRUPOS SULFHIDRILO DE LA ENZIMA SE CONSTRUYERON DIEZ MUTANTES, EN CADA UNO DE LOS CUALES SE CAMBIO UNO DE LOS CODONES DE CISTEINA POR UNO DE SERINA. TODOS LOS MUTANTES PRODUJERON PROTEINA SOLUBLE CUANDO SE EXPRESARON EN E. COLI. TODOS TENIAN ACTIVIDAD S-ADENOSIL-L-METIONINA SINTETASA, Y TODOS PRODUCIAN DOS ISOFORMAS, SIN EMBARGO, LA CANTIDAD RELATIVA DE CADA UNA VARIO EN ALGUNOS CASOS: LAS MUTACIONES C35S, C57S, C61S Y C105S PRODUJERON UN AUMENTO DE LA CANTIDAD RELATIVA DE TETRAMERO, MIENTRAS QUE POR EL CONTRARIO LA MUTACION C69S PRODUJO UN AUMENTO DE LA CANTIDAD DE DIMERO. LA SENSIBILIDAD DE LOS MUTANTES A LOS AGENTES OXIDANTES NO, H2O2 Y GSSG VARIO EN CADA CASO, SIENDO EL MAS NOTABLE EL MUTANTE C121S, QUE ERA INSENSIBLE AL NO Y AL H2O2, Y POCO SENSIBLE AL GSSG.

Autor: MIRALLES ACOSTA AGUSTI.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CEL.LULAR I ANATOMIA PATOLOGICA. F. DE MEDICINA PROGRAMA DE DOCTORADO: PROGRAMA DE GENETICA. FACULTAT DE BIOLOGIA..

Autor: MIRALLES ARENAS FRANCISCO.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA.

Resumen: La urokinasa (uPA) es un enzima proteolitico que participa en numerosos procesos fisiopatológicos que requieren la degradación de proteinas de la matriz extracelular. En este trabajo se describe la participación de la uPA en uno de estos procesos: la formación del músculo esquelético o miogénesis. La inhibición de la uPA con anticuerpos neutralizantes es capaz de inhibir tanto la fusión como la diferenciación muscular in vitro. Asímismo, el FGF-2 y el suero, que modulan la miogénesis i la regeneración muscular, inducen la expresión de la uPA en células musculares, a través de un elemento PEA3/AP1 del promotor de la uPA i de la cascada de transducción de señales Ras/ERK2. El análisis de los elementos en cis que regulan la expressión de la uPA en mioblastos ha demostrado también que, ademas del elemento PEA3/AP1, una secuencia CRE/CCAAT/CArG es asímismo necesaria para la actividad transcripcional de este promotor. Finalmente, se demuestra que la luz ultravioleta (UV) induce la expresión de uPA en fibroblastos, a través de dos elementos AP1 del promotor del gen de la uPA y de la cascada citoplasmática de transducciones de señales de la JNK/SAPK.

Autor: MIRANDA GUARDIOLA MERCE.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: HEPATOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOPATOLOGIA EN MEDICINA.

Resumen: El glutation, principal tiol no proteico celular, es una de las defensas celulares más importantes y participa en multitud de procesos de detoxificación que permiten eliminar los radicales libres (ROS) y otras sustancias letales. Se han analizado diferentes aspectos de su papel protector en la respuesta celular al estrés oxidativo inducido por múltiples estímulos como TNF, radiación o alcohol. Se ha demostrado el efecto dual, según concentración, de la citoquina TNF en hepatocitos, induciendo, a dosis moderadas, la transcripción de la gamma-GCS-HS de manera que los niveles de GSH son elevados para contrarrestar el estrés oxidativo producido por la citoquina. Se ha estudiado la regulación del GSH y su papel como protector frente a la radiación al neutralizar los efectos de ROS y al proteger de este modo al DNA y permitir la supervivencia celular. Asimismo, se han estudiado los niveles de las citoquinas IL-8 y CINC en diferentes procesos oxidativos como el alcohol y la EII, como respuesta transactivadora a los efectos del estrés oxidativo producido en estas patologías.

Autor: MORALES GARCIA VICTORIA AIXA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA TESIS SE CENTRA EN EL ESTUDIO DEL PAPEL DE LA INSULINA/PROINSULINA, ACTUANDO POR LA VIA DE SU PROPIO RECEPTOR, EN PROCESOS COMO LA PROLIFERACION Y SUPERVIVENCIA CELULAR DURANTE LA NEURULACION DEL EMBRION DE POLLO. SE DEMUESTRA QUE EL GEN DE LA PREPROINSULINA SE EXPRESA, TANTO A NIVEL DE MRNA COMO DE PROTEINA, EN EL EMBRION EN NEURULACION (E1,5). PARA CARACTERIZAR EL PAPEL DE LA INSULINA EN ESA ETAPA EMBRIONARIA SE HA UTILIZADO UN SISTEMA DE CULTIVO DE DEPRIVACION DE FACTORES DE CRECIMIENTO. EN ESTE SISTEMA LA INSULINA EXOGENA PROMUEVE EL CRECIMIENTO GENERAL. SIN EMBARGO, BAJO ESE EFECTO SUBYACE EL RESCATE DE LA MUERTE CELULAR POR APOPTOSIS PROMOVIDO POR LA INSULINA. EN EMBRIONES CULTIVADOS CON MEDIO BASAL EL PORCENTAJE DE CELULAS APOPTOTICAS FUE DE UN 15% SOBRE EL TOTAL. SIN EMBARGO, LA ADICION DE INSULINA, COMO UNICO FACTOR DE CRECIMIENTO AÑADIDO AL CULTIVO, SUPUSO EL RESCATE DEL 50% DE LAS CELULAS. ASIMISMO, OLIGONUCLEOTIDOS ANTISENTIDO DEL MRNA DE LA PROINSULINA Y DE SU RECEPTOR INDUCEN EN LOS EMBRIONES EN CULTIVO HASTA UN 50% DE INCREMENTO EN LA PROPORCION DE CELULAS APOPTOTICAS. ESTOS DATOS TAMBIEN HAN SIDO CONFIRMADOS EN EXPERIMENTOS IN VIVO (APLICANDO LOS OLIGONUCLEOTIDOS DENTRO DEL HUEVO), CON LO QUE CONFIRMAMOS LA RELEVANCIA FISIOLOGICA DE LA INSULINA COMO FACTOR DE SUPERVIVENCIA DURANTE LA NEURULACION. HEMOS DEMOSTRADO, ADEMAS QUE UNA DE LAS POSIBLES VIAS DE APOPTOSIS IMPLICADA EN LA SEÑAL DE SUPERVIVENCIA DE LA INSULINA ES LA DE LAS PROTEASAS DE LA FAMILIA DE LA "INTERLEUKIN-1B-CONVERTING ENZYME". FINALMENTE, PARA CARACTERIZAR SI ESTE EFECTO DE SUPERVIVENCIA AFECTA A TODAS LAS CELULAS O SOLO A ALGUNAS DE ELLAS, SE HA ESTUDIADO LA SUBPOBLACION DE CELULAS PM1+. DEFINIDA EN RETINA COMO UNA SUBPOBLACION DE PRECURSORES NEURALES EN PROLIFERACION. SE HA DETERMINADO QUE LA PROINSULINA ENDOGENA SINTETIZADA POR EL EMBRION DE E1,5 ESTIMULA PREFERENCIALMENTE LA SUPERVIVENCIA/PROLIFERACION DE LAS CELULAS PM1+, ACTUANDO DE UN MODO AUTOCRINO/PARACRINO.

Autor: MORENO MARTINEZ ALBERTO J..
Año: 1996.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA. PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA MOLECULAR.

Resumen: EN ESTE TRABAJO SE DESCRIBE LA CLONACION Y CARACTERIZACION DE UN NUEVO GEN DE LA BACTERIA MYXOCOCCUS XANTHUS IMPLICADO EN LA REGULACION DE LA CAROTENOGENESIS INDUCIDA POR LA LUZ. EL GEN, DENOMINADO CARE, SE IDENTIFICO A PARTIR DE UNA INSERCION DE TRANSPOSON QUE BLOQUEABA LA SINTESIS DE CAROTENOIDES. LA PRESENCIA DE UN TRANSPOSON EN EL LOCUS CARE HA PERMITIDO SU CLONACION. ASI SE HA PODIDO DETERMINAR LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS DE CARE Y DEDUCIR SU SECUENCIA DE AMINOACIDOS. LA PROTEINA CARE PRESENTA GRAN PARECIDO CON UNA FAMILIA DE PEQUEÑAS PROTEINAS DE UNION A DNA DENOMINADAS "PARECIDAS A HISTONAS". LOS ANALISIS REALIZADOS A LOS MUTANTES CARE REVELAN QUE EL GEN CARE INTERVIENE EN LA ACTIVACION POR LA LUZ DE GENES CAROTENOGENICOS Y EN OTROS PROCESOS COMO EL CRECIMIENTO O LA MOTILIDAD CELULAR. FINALMENTE, LA PROTEINA CARE SE EXPRESO EN ESCHERICHIA COLI Y SE PURIFICO, PUDIENDOSE COMPROBAR ASI SU CAPACIDAD DE UNION A DNA DE LOS PROMOTORES REGULADOS POR CARE. NUESTROS DATOS INDICAN QUE LAS DOS MUTACIONES CARE CONOCIDAS NO ANULAN POR COMPLETO LA FUNCION DEL GEN, YA QUE EL GEN CARE PARECE INTERVENIR EN PROCESOS ESENCIALES PARA LA VIABILIDAD DE LAS CELULAS.

Autor: MORTE MOLINA BEATRIZ.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LAS HORMONAS TIROIDEAS (HT) SON ESENCIALES PARA EL CORRECTO DESARROLLO Y FUNCION DEL CEREBRO. LA FALTA DE UNOS NIVELES ADECUADOS DURANTE PERIODOS CRITICOS DEL DESARROLLO PRODUCE GRAVES DAÑOS NEUROLOGICOS. LAS ACCIONES BIOLOGICAS DE LAS HORMONAS TIROIDEAS SE DEBEN A UN CONTROL DE LA EXPRESION DE CIERTOS GENES; ENTRE ELLOS RC3/NEUROGRANINA. RC3/N ES UNA PROTEINA NEURONAL QUE PUEDE ESTAR IMPLICADA EN FENOMENOS DE MEMORIA Y PLASTICIDAD SINAPTICA. EN ESTA TESIS HEMOS ANALIZADO EL MECANISMO DE ACCION DE LA HT EN LA EXPRESION DE RC3. EL CONTROL SE EJERCE A NIVEL DE TRANSCRIPCION SOBRE UN ELEMENTO DE RESPUESTA QUE HEMOS LOCALIZADO EN EL INTRON I DEL GEN. EL ANALISIS MOLECULAR DEL PROMOTOR PUSO DE MANIFIESTO LA EXISTENCIA DE UN INICIADOR ACTIVO, Y DE ELEMENTOS DE RESPUESTA A ACIDO RETINOICO Y GLUCOCORTICOIDES DE DUDOSO PAPEL.

Autor: MUÑOZ PELAEZ M. CARMEN.
Año: 1996.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: PLAN ANTIGUO .

Resumen: EN EL PRESENTE TRABAJO HEMOS INVESTIGADO LOS EFECTOS DE DOS DETERGENTES TRITON X-100 Y DEOXICOLATO SODICO SOBRE LA ACTIVIDAD DE AMINOPEPTIDASAS DE LA FRACCION SOLUBLE Y UNIDA A MEMBRANA DE OCHO DIFERENTES TEJIDOS DE RATA. LA ACTIVIDAD ENZIMATICA SE MIDIO UTILIZANDO CINCO SUSTRATOS ARTIFICIALES DERIVADOS DE LA BETA-NAFTILAMINA. LOS RESULTADOS DEMUESTRAN QUE PARA LA MAYORIA DE LOS SUSTRATOS LA ACTIVIDAD DE AMINOPEPTIDASAS RESULTA INHIBIDA EN PRESENCIA DE AMBOS DETERGENTES, Y QUE DICHA INHIBICION ES TOTAL O PARCIALMENTE REVERSIBLE CUANDO EXTRAEMOS LOS DETERGENTES DEL MEDIO MEDIANTE MICROESFERAS ABSORBENTES. DADO QUE EL TRITON X-100 Y EL DEOXICOLATO SODICO MUESTRAN PROPIEDADES FISICAS SIMILARES A LOS COMPONENTES LIPIDICOS DE LAS MEMBRANAS CELULARES, NUESTROS RESULTADOS SUGIEREN, COMO SUCEDE CON OTROS ENZIMAS, QUE ESTAS ACTIVIDADES ENZIMATICAS PODRIAN ESTAR MODULADAS POR EL MICROAMBIENTE CELULAR QUE RODEA DICHAS PROTEINAS.

Autor: MURCIANO FERNANDEZ JUAN CARLOS.
Año: 1996.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL SISTEMA BIOTINA-ESTREPTAVIDINA ES EL PROPUESTO EN EL PRESENTE TRABAJO PARA LA MODIFICACION DE LA SUPERFICIE ERITROCITARIA, CON EL FIN DE ELABORAR ERITROCITOS PORTADORES DE PROTEINAS (ERITROCITO BIOTINILADO-ESTREPTAVIDINA-PROTEINA BIOTINILADA). DEPENDIENDO DE LAS PROTEINAS ANCLADAS A LA SUPERFICIE ERITROCITARIA, SE CONSIGUEN DOS MODELOS CON DISTINTAS APLICACIONES TERAPEUTICAS. POR UN LADO, LA UNION DE UN ANTICUERPO (IGG) CONDUCE A LA ELABORACION DE LOS LLAMADOS INMUNOERITROCITOS, CON CAPACIDAD PARA RECONOCER EL ANTIGENO ESPECIFICO, EL CUAL SE EXPRESARIA EN LUGARES DETERMINADOS DEL ORGANISMO. POR OTRO LADO, LA UNION DE UNA PROTEINA CON ACCION FARMACOLOGICA DETREMINADA (EN ESTE CASO UN FIBRINOLITICO) PRESENTA AL ERITROCITO PORTADOR COMO UN SISTEMA CAPAZ DE AUMENTAR DE FORMA CONSIDERABLE LA PRESENCIA EN CIRCULACION DEL AGENTE FARMACOLOGICO. EL TRABAJO COMPRUEBA LA VIABILIDAD DE LAS CELULAS PORTADORAS DESARROLLADAS, NO SOLO IN VITRO SINO TAMBIEN IN VIVO. A SU VEZ, ESTUDIA LA FUNCIONALIDAD DE LA PROTEINA ANCLADA AL ERITROCITO. LA PRESENTE TESIS DOCTORAL DEMUESTRA LA CAPACIDAD DE FORMAR DERIVADOS CELULARES ESTABLES EN CIRCULACION CON POTENCIALES FINES TERAPEUTICOS IMPORTANTES.

Autor: MURILLAS ANGOITI RODOLFO.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: B. MOLECULAR.

Resumen: EL OBJETO DEL TRABAJO LLEVADO A CABO EN ESTA TESIS DOCTORAL ES EL ESTUDIO DEL PAPEL DESEMPEÑADO POR EL RECEPTOR DEL FACTOR DEL CRECIMIENTO EPIDERMICO EN LA REGULACION DEL PROCESO DE DIFERENCIACION EPIDERMICA MEDIANTE LA UTILIZACION DE RATONES TRANSGENICOS. SE LLEVO A CABO LA GENERACION DE RATONES TRANSGENICOS QUE EXPRESAN EN LA EPIDERMIS UNA FORMA TRUNCADA DEL RECEPTOR QUE ACTUA COMO UN MUTANTE DOMINANTE NEGATIVO SUPRIMIENDO SU FUNCION Y DE RATONES QUE SOBREXPRESAN EL RECEPTOR DE EGF COMPLETO, PARA CONSEGUIR UN AUMENTO DE FUNCION. LOS RATONES QUE EXPRESAN EL RECEPTOR TRUNCADO EXPERIMENTAN SEVERAS ALTERACIONES EN VARIOS TEJIDOS EPITELIALES, MOSTRANDO SIGNOS DE ALTERACION EN EL DESARROLLO DE LOS PARPADOS Y DE LOS FOLICULOS PILOSOS, CUYO CRECIMIENTO CICLICO ESTA ALTERADO, LO QUE LLEVA FINALMENTE A SU DESTRUCCION. POR EL CONTRARIO LOS RATONES QUE SOBREEXPRESAN EL RECEPTOR COMPLETO NO EXPERIMENTAN ALTERACIONES EN LA ESTRUCTURA DE LA EPIDERMIS NI OTROS EPITELIOS EN LOS QUE SE EXPRESA ESTA PROTEINA TRANSGENICA. LA EXPRESION DEL RECEPTOR TRUNCADO ES CAPAZ DE INHIBIR EL DESARROLLO DE TUMORES EPIDERMICOS EN LOS RATONES TRANSGENICOS SOMETIDOS A PROTOCOLOS DE CARCINOGENESIS QUIMICA. EN CONJUNTO ESTOS RESULTADOS DEMUESTRAN EL PAPEL FUNDAMENTAL DEL RECEPTOR DE EGF EN LA REGULACION DE LA DIFERENCIACION EPIDERMICA.

Autor: MURILLO CABEZA ISABEL .
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA.

Resumen: En el presente trabajo se han realizado estudios dirigidos a caracterizar la expresión del gen PRms de maíz, tanto en lo referente a los agentes capaces de inducir su expresión como a esta en tejidos de semilla de maíz infectados. Para ello se han realizado experimentos de hibridación in situ para la localización del ARNm del gen PRms, y experimentos de inmunolocalización celular y subcelular de la proteína PRms. Se ha observado como el gen PRms presenta un patrón de expresión sumamente específico, ya que su expresión solo se detecta en determinados tipos celulares, y en procesos concretos del desarrollo de la plántula. Es particularmente interesante el hecho de que la proteína PRms se localice en plasmodesmos. Se presenta también los resultados obtenidos en la identificación y caracterización de la secuencia completa de un clon de ADNc de maíz que codifica para una proteína quinasa dependiente de calcio (ZmCDPK, Zea mays Calcium-dependent Protein Kinase). Mediante el uso de sondas de hibridación específica, se ha detectado la expresión del gen ZmCDPK en respuesta a la infección fúngica y al tratamiento con elicitores fúngicos, durante la germinación de la semilla de maíz. Los análisis por hibridación in situ revelan que este gen se expresa en los mismos tipos celulares y en los mismos estadios de desarrollo en que le hace el gen PRms. El conjunto de los resultados obtenidos no demuestran pero si sugieren que esta CDPK podría participar en la vía de transducción de la señal de respuesta a el citores, que culmina en la activación del gen PRms. La participación de una proteína quinasa de estas características estaría de acuerdo con la idea repetidamente propuesta, de la implicación de procesos de fosforilación dependientes de calcio en la respuesta a infección fúngica.

Autor: NABAU MORETO NURIA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BQ. I BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.