BIOQUIMICA MOLECULAR, 63

Autor: ROSANAS HERNANDO ANNA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA BASICA.

Resumen: EL OBJETIVO DE ESTE TRABAJO HA SIDO EL AISLAMIENTO, SECUENCIACION Y CARACTERIZACION DEL GEN GYRA QUE CODIFICA LA SUBUNIDAD A DE LA DNA GIRASA DE E. CAROTOVORA, P. AERUGINOSA Y R. SPHAEROIDES. CON ESTE PROPOSITO SE HA ANALIZADO EL GRADO DE CONSERVACION DE ESTOS GENES Y SUS SECUENCIAS POLIPEPTIDICAS DEDUCIDAS Y SE HA ESTUDIADO LA REGULACION DE SU EXPRESION GENICA. EL AISLAMIENTO DEL GEN GYRA DE E. CAROTOVORA Y P.AERUGINOSA SE REALIZO POR COMPLEMENTACION HETEROLOGA DE LA MUTACION TERMOSENSIBLE GY-RA43 (TS) DE ESCHERICHIA COLI, POR CONJUGACION DE LAS CORRESPONDIENTES GENOTECAS CONSTRUIDAS. RESPECTO R. SPHAEROIDES, SE UTILIZO UN FRAGMENTO INTERNO DEL GEN GYRA, AMPLIFICADO POR PCR, COMO SONDA PARA AISLAR EL GEN GYRA DE ESTE MICROORGANISMO MEDIANTE HIBRIDACION DE LAS GENOTECAS CONSTRUIDAS. EL ANALISIS DE LAS SECUENCIAS DE LOS GENES AISLADOS HA PUESTO DE MANIFIESTO UN ELEVADO GRADO DE HOMOLOGIA ENTRE ELLOS, TANTO A NIVEL DE SECUENCIA DE DNA COMO DE PROTEINA, SIENDO LA REGION N-TERMINAL MUCHO MAS CONSERVADA QUE LA C-TERMINAL, ESPECIALMENTE LOS RESIDUOS ENTORNO LA TIROSONA RESPONSABLE DE LA ACTIVIDAD CATALITICA DEL ENZIMA. MEDIANTE LA CONSTRUCCION DE FUSIONES CROMOSOMICAS ENTRE EL PROMOTOR DE LOS GENES GYRA DE E. CAROTOVORA, P. AERUGINOSA Y R. SPHAEROIDES CON EL GEN LACZ DE E. COLI SE HA ESTUDIADO LA REGULACION TRANSCRIPCIONAL DE LOS GENES AISLADOS. LAS FUSIONES DE E. CAROTOVORA Y P. AERUGINOSA SON INDUCIBLES POR LOS INHIBIDORES DE GIRASA NOVOBIOCINA Y ACIDO NALIDIXICO, A DIFERENCIA DE LO QUE OCURRE CON R. SPHAEROIDES QUE NO HA PRESENTADO INDUCCION CON NINGUNO DE LOS AGENTES PROBADOS. POR OTRO LADO CON LOS MISMOS "PRIMERS" DE PCR SE HA CONSEGUIDO AMPLIFICAR FRAGMENTOS DEL GEN GYRA DE DIFERENTES BACTERIAS GRAMNEGATIVAS, PUDIENDO TENER UNA APLICACION CLINICA Y FILOGENETICA. FINALMENTE, SE DETERMINO LA LOCALIZACION DEL GEN GYRA DE R.SPHAEROIDES EN EL CROMOSOMA MEDIANTE LA TECNICA DE ELECTROFORESIS DE CAMPO PULSADO, QUEDANDO FIJADA SU POSICION EN LA COORDENADA 2275 DEL CROMOSOMA I.

Autor: RUIZ RIVERO OMAR JOSE.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: UTILIZANDO COMO SONDA UN CLON DE CDNA DE PATATA (SOLANUM TUBEROSUM) QUE CODIFICA UNA LEUCINA-AMINOPEPTIDASA (LAP), INDUCIBLE EN HOJAS EN RESPUESTA A HERIDA MECANICA Y AL TRATAMIENTO CON ACIDO ABSCISICO (ABA) Y METIL JASMONATO (MEJA), FUE POSIBLE AISLAR DOS CLONES GENOMICOS HOMOLOGOS DE TOMATE (LYCOPERSICON ESCULENTUM). EL ANALISIS DE ESTOS CLONES GENOMICOS MEDIANTE DIGESTION CON ENZIMAS DE RESTRICCION Y ENSAYOS DE SOUTHERN, REVELO QUE UNO DE ELLOS CONTENIA UNA SOLA COPIA DEL GEN LAP, MIENTRAS QUE EL OTRO CONTENIA DOS COPIAS GENICAS EN TANDEM DE ESTE GEN. LA SECUENCIACION DE LAS TRES COPIAS GENICAS DEMOSTRO QUE DOS DE ELLAS CORRESPONDIAN A UN MISMO ALELO LAP (LAP 17.2), MIENTRAS QUE LA TERCERA COPIA CORRESPONDIA A UN ALELO DIFERENTE (LAP 17.1). LA EXPRESION DE LA ACTIVIDAD BETA- GLUCURONIDASA EN RESPUESTA A MEJA, EN HOJAS DE PLANTAS TRANSGENICAS DE PATATA QUE PORTABAN UN GEN QUIMERICO QUE SE HABIA CONSTRUIDO FUSIONANDO UNA REGION PROMOTORA DE 1.18 KB (-1187 A -3) DEL GEN LAP 17.1 O UNA DE 2.37 KPB (-2371 A -3) DEL GEN LAP 17.2 AL GEN UIDA, DEMOSTRO QUE AMBOS PROMOTORES LAP ERAN ACTIVOS. UNA DELECION 3' DE UN FRAGMENTO PROMOTOR HASTA LA POSICION 79 PB (-79 A -1), O UNA DELECION 5' DE UN FRAGMENTO DE 880 PB (-1187 A -307) DEL PROMOTOR DEL GEN LAP 17.1, AUN RESPONDIAN A LA ACCION DEL MEJA, EN PLANTAS TRANSGENICAS DE PATATA. ESTE RESULTADO SUGERIA QUE TODOS LOS ELEMENTOS PROMOTORES NECESARIOS PARA LA REGULACION DE LOS GENES LAP POR MEJA, PODRIAN ESTAR CONTENIDOS EN UNA REGION DE DNA DE 230 PB (-308 A -79). EL ANALISIS DE FOOTPRINTING IN VIVO DE ESTA REGION REVELO LA EXISTENCIA DE DOS NUCLEOTIDOS DE GUANINA, EN LAS POSICIONES -96 Y -107/-108 QUE ESTABAN PARCIALMENTE PROTEGIDAS DE LA METILACION POR DMS, EN PLANTAS DE TOMATE QUE HABIAN SIDO TRATADAS CON EL MEJA. EL ANALISIS DE LA SECUENCIA DEL DNA INDICABA QUE AMBOS NUCLEOTIDOS DE GUANINA ESTABAN INCLUIDOS DENTRO DE DOS ELEMENTOS O MOTIVOS GAGTA SEPARADOS POR 6 O 7 PB. LOS ENSAYOS DE RETARDACION EN GELES DE POLIACRILAMIDA UTILIZANDO EXTRACTOS DE PROTEINAS NUCLEARES PREPARADOS A PARTIR DE HOJAS DE PLANTAS DE TOMATE TRATADAS O NO (CONTROLES) CON MEJA, Y UNA SONDA DE DNA DE 59 PB (WT) QUE INCLUIA UN FRAGMENTO DE 41 PB (-125 A -83) DEL PROMOTOR DE LOS GENES LAP CONTENIENDO AMBAS SECUENCIAS GAGTA, DEMOSTRO LA FORMACION DE COMPLEJOS PROTEINA-DNA EN AMBOS TIPOS DE EXTRACTOS. ESTOS RESULTADOS DEMUESTRAN QUE PROTEINAS NUCLEARES DE HOJAS DE PLANTAS DE TOMATE SON CAPACES DE INTERACTUAR ESPECIFICAMENTE CON SECUENCIAS DE ACCION-CIS PRESENTES EN EL PROMOTOR DE LOS GENES LAP 17.1 Y LAP 17.2. POSTERIORES ENSAYOS DE RETARDACION UTILIZANDO LAS FRACCIONES PROTEICAS INDUCIDAS CON MEJA, Y COMO COMPETIDORES ESPECIFICOS EL MISMO FRAGMENTO WT Y UN FRAGMENTO MUTANTE (MUT-1) QUE CONTENIA AMBOS ELEMENTOS GAGTA SUBSTITUIDOS POR DOS SECUENCIAS CACTA, DEMOSTRARON QUE DOS DE LOS FACTORES NUCLEARES DETECTADOS SE UNIAN ESPECIFICAMENTE A LOS MOTIVOS GAGTA, YA QUE SOLO UN EXCESO DEL FRAGMENTO WT, Y NO DEL FRAGMENTO MUT-1, FUE CAPAZ DE COMPETIR CON LA SONDA WT POR LA UNION A ESTAS PROTEINAS NUCLEARES. ESTOS RESULTADOS SUGIEREN QUE EL MEJA ES CAPAZ DE REGULAR LA SINTESIS O ACTIVIDAD DE CIERTAS PROTEINAS NUCLEARES, CAPACES DE INTERACTUAR ESPECIFICAMENTE CON LOS MOTIVOS GAGTA PARA INDUCIR LA ACTIVACION TRANSCRIPCIONAL DE LOS GENES LAP 17.1 Y LAP 17.2. UN FRAGMENTO DE 47 PB (-126 A -79) QUE CONTENIA AMBOS MOTIVOS GAGTA INTACTOS, FUSIONADO AL CASETE -90 35S CAMV::UIDA FUE CAPAZ DE DIRIGIR LA SINTESIS Y ACUMULACION DEL MRNA DEL GEN UIDA EN HOJAS DE PLANTAS TRANSGENICAS DE PATATA, EN RESPUESTA AL TRATAMIENTO CON MEJA. SIN EMBARGO, UN FRAGMENTO PROMOTOR DE 227 PB (-308 A -82) CONTENIENDO AMBOS MOTIVOS GAGTA SUBSTITUIDOS POR DOS SECUENCIAS CACTA, FUE INCAPAZ DE DIRIGIR LA EXPRESION DEL GEN UIDA EN RESPUESTA AL TRATAMIENTO CON MEJA. EN RESUMEN, TODOS LOS RESULTADOS DESCRITOS ANTERIORMENTE INDICAN QUE EL MOTIVO GAGTA ES UN ELEMENTO DE ACCION-CIS, NECESARIO Y SUFICIENTE, DE RESPUESTA A MEJA PRESENTE EN LA REGION PROMOTORA PROXIMAL DE 314 PB (-308 A -3) DEL PROMOTOR DE LOS GENES LAP17.1 Y LAP 17.2 DE TOMATE.

Autor: RUIZ VAZQUEZ PILAR ANA.
Año: 1996.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA, FACULTAT DE CIENCIES BIOLOGIQUES. UNI. DE VALENCIA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA MOLECULAR Y EVOLUTIVA. 194A. UNI. DE VALENCIA.

Resumen: EL ESTUDIO REALIZADO PRESENTA EL ANALISIS BIOQUIMICO Y GENETICO DEL METABOLISMO DE LAS PTERINAS Y DE SU INTERACCION CON EL SISTEMA DE HIDROXILACION DE LOS AMINOACIDOS AROMATICOS EN EL INSECTO DROSOPHILA MELOGASTER. SE PRESENTA EL ESTUDIO CINETICO DEL ENZIMA SEPIAPTERINA REDUCTASA ASI COMO SU ANALISIS EN CEPAS MUTANTES DE COLOR DE OJOS. NINGUNA DE ESTAS RESULTO PORTADORA DE UN DEFECTO EN EL GEN ESTRUCTURAL DE ESTE ENZIMA. ASIMISMO SE PRESENTA LA CARACTERIZACION MOLECULAR DEL GEN DEL ENZIMA FENILALANINA HIDROXILASA. LOS RESULTADOS OBTENIDOS INDICAN QUE DICHO GEN ES OBJETO DE UNA EXPRESION DIFERENCIAL OBSERVANDOSE LA PRODUCCION DE TRES TRANSCRITOS ALTERNATIVOS QUE CODIFICAN PARA POTENCIALES ISOFORMAS PROTEICAS. SE DEMUESTRA QUE EL LOCUS HENNA ES EL GEN ESTRUCTURAL DE DICHO ENZIMA, DEMOSTRACION QUE SUGIERE LA CONCURRENCIA DE TRES FUNCIONES FISIOLOGICAS EN ESTE LOCUS: FENILALANINA Y TRIPTOGANO HIDROXILASA, Y TETRAHIDROPTERINA OXIDASA. EL ANALISIS MOLECULAR EN LA CEPA HENNA- RECESSIVE 3 DEMUESTRA LA PRESENCIA DEL TRANSPOSON B104 EN EL GEN DE LA FENILANINA HIDROXILASA, INSERCION QUE PROVOCA LA PRODUCCION DE TRANSCRITOS ABERRANTES QUE CONTIENEN PARTE DE LA SECUENCIA DEL ELEMENTO. SE DISCUTEN LAS IMPLICACIONES EVOLUTIVAS DE ESTE PROCESADO ABERRANTE.

Autor: SAIZ GUTIERREZ JULIA EVA.
Año: 1996.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA; BIOQUIMICA Y GENETICA MICROBIANAS.

Resumen: ESTE TRABAJO RECOGE LA COLABORACION DEL LABORATORIO DE LOS DOCTORES JOSE L. REVUELTA DOVAL Y FRANCISCO DEL REY IGLESIAS EN LOS PROYECTOS DE SECUENCIACION DEL GENOMA DE LA LEVADURA Y DE SU ANALISIS FUNCIONAL (EUROFAN). SE COMENZO APORTANDO UN TOTAL DE APROXIMADAMENTE 40 KBDE SECUENCIA PERTENECIENTES A LOS CROMOSOMAS XIV Y IV DE S. CEREVISIAE, EN LOS QUE SE CONTIENE TOTAL O PARCIALMENTE LA SECUENCIA DE 30 ORFS, DE LOS CUALES 15 CORRESPONDIAN A GENES DECRITOS CON ANTERIORIDAD, 6 PRESENTABAN HOMOLOGIAS SIGNIFICATIVAS PERO PARCIALES CON ORFS DESCRITOS PREVIAMENTE Y 9 ERAN DE FUNCION TOTALMENTE DESCONOCIDA. SEIS ORFS, LOS DENOMINADOS YNL99C, YNL100W, YNL101W, YNL106C; YNL242W, YOR109W, FUERON SOMETIDOS AL ANALISIS FUNCIONAL BASICO PROPUESTO POR EL PROYECTO EUROFAN. SOLO UNO DE ELLOS, EL YNL242W RESULTO ESTAR ASOCIADO A UNO DE LOS ASPECTOS DEL METABOLISMO CELULAR ESTUDIADO: LA ESPORULACION. DOS DE LOS ORFS, YNL106C Y YOR109W, FUERON SOMETIDOS A UN ANALISIS MAS ESPECIFICO Y RESULTARON SER REDUNDANTES Y ESTAR ASOCIADOS A LOS PROCESOS DE BIOGENESIS Y CONTROL DE LA MORFOLOGIA VACUOLAR.

Autor: SAMPEDRO MARCO MIGUEL ANGEL.
Año: 1996.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: EN ESTE TRABAJO SE EVALUAN LAS PROPIEDADES DE BIOMASA DE LA CIANOBACTERIA PHORMIDIUM LAMINOSUM COMO BIOSORBENTE EN AGUAS MODELO DE LOS IONES METALICOS CR(III), CD(II) Y PB(II) EN DISOLUCION. EN PRIMER LUGAR, SE EXAMINAN LOS ASPECTOS REFERENTES A LA BIOSORCION CON BIOMASA LIBRE, HACIENDO HINCAPIE EN LOS FACTORES QUE AFECTAN AL PROCESO. ASI, SE ESTUDIA LA CINETICA DE BIOSORCION Y EL EFECTO EN LA MISMA DE PH, PRESENCIA DE CA(II), DEFICIENCIA EN NITROGENO DE LA BIOMASA Y/O VARACION EN LA CONCENTACION DE BIOMASA Y METAL. ADEMAS SE ANALIZA EL ACONDICIONAMIENTO Y LA REUTILIZACION DE LA BIOMASA, Y LOS GRUPOS SUPERFICIALES IMPLICADOS EN EL PROCESO. EN UN SEGUNDO BLOQUE, SE ESTUDIA LA BIOSORCION CON LA BIOMASA INMOVILIZADA EN RESINA DE POLISULFONA, COMPARADO SU EFICACIA CON RESINAS QUIMICAS DE INTERCAMBIO IONICO. LOS RESULTADOS OBTENIDOS AVALAN LA POSIBILIDAD DE EMPLEAR BIOMASA DE P. LAMINOSUM, PRETRATADA ALCALINAMENTE E INMOVILIZADA EN POLISULFONA, PARA LA ELIMINACION DE CR(III), CD(II) Y PB(II) DE DISOLUCIONES CONTAMINADAS CON DICHOS IONES Y LA POSTERIOR RECUPERACION DEL METAL MEDIANTE ELUCION CON EL AGENTE ACIDO APROPIADO.

Autor: SAMPER BLASCO SOFIA.
Año: 1996.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA, MEDICINA PREVENTIVA Y SALUD PUBLICA. PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LOS METODOS MAS UTILIZADOS PARA LA IDENTIFICACION DE LAS MICOBACTERIAS SON LOS BASADOS EN SUS CARACTERISTICAS FENOTIPICAS Y BIOQUIMICAS. ESTAS TECNICAS PRESENTAN EL INCONVENIENTE DEL TIEMPO DE ESPERA NECESARIO PARA OBTENER EL RESULTADO PARTIENDO DE UN CULTIVO CRECIDO. A ESTO SE AÑADE QUE EL FENOTIPO NO ES TOTALMENTE ESTABLE. LA IDENTIFICACION MOLECULAR BASADA EN EL GENOTIPO SUPONE MAYOR ESTABILIDAD Y PRECISION EN LA IDENTIFICACION A NIVEL DE ESPECIE Y APORTA RAPIDEZ Y SENCILLEZ AL DIAGNOSTICO. HEMOS UTILIZADO DOS TECNICAS DE IDENTIFICACION MOLECULAR BASADAS EN PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION), UTILIZANDO DIFERENTES DIANAS TALES COMO EL GEN HSP65KD Y 16SRDNA, COMO ALTERNATIVA A LA IDENTIFICACION MEDIANTE PRUEBAS BIOQUIMICAS. POR OTRA PARTE LAS TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR PERMITEN LA DIFERENCIACION INTRAESPECIFICA. EN ESTE TRABAJO SE HAN APLICADO TECNICAS PARA DIFERENCIAR ENTRE M. TUBERCULOSIS. LA DETERMINACION DEL RFLP (RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM) POR HIBRIDACION CON IS6110 HA DEMOSTRADO SER UTIL PARA EL ESTUDIO EPIDEMIOLOGICO DE LA TUBERCULOSIS EN NUESTRO MEDIO. SE HA REALIZADO UN ESTUDIO POBLACIONAL EN ZARAGOZA UTILIZANDO MARCADORES GENETICOS PARA ESTUDIAR LA TRANSMISION Y SE CONCLUYO QUE LOS FACTORES DE SEROPOSITIVIDAD PARA EL VIH Y LA INMIGRACION NO PARECEN ESTAR ASOCIADOS A MAYOR TRANSMISION DE TUBERCULOSIS. LA DETECCION DE UN GRAN NUMERO DE PEQUEÑOS BROTES PODRIA SER DEBIDA A LA FALTA DE UN PROGRAMA DE CONTROL. OTROS METODOS DE RFLP BASADOS EN LAS SECUENCIAS REPETIDAS PGRS Y DR Y EL METODO DE "SPOLIGOTYPING" (BASADO EN PCR) HAN DEMOSTRADO SER LOS MAS ADECUADOS PARA DIFERENCIAR CEPAS CON BAJO NUMERO DE COPIAS. LOS METODOS DE RFLP NECESITAN PARA SU REALIZACION UN CULTIVO CRECIDO POR LO QUE SE IDEO UN METODO BASADO EN PCR. EL METODO DE DIFERENCIACION PCR-IS6110 ES UN METODO SENCILLO, RAPIDO Y UTIL ANTE LA SOSPECHA DE BROTES O CONTAMINACIONES EN LABORATORIO. SE HA COMPROBADO QUE EL METODO DE "SPOLIGOTYPING" ES UN BUEN METODO PARA DIFERENCIAR M. TUBERCULOSIS DE M. BOVIS. SE HA DESCRITO UN GENOTIPO ESPECIFICO PARA M. BOVIS QUE INFECTA A CABRAS, MEDIANTE RFLP-IS6110 Y "SPOLIGOTYPING". SE HA ELABORADO UNA BASE DE DATOS DE CEPAS MULTIRRESISTENTES (MR) A NIVEL NACIONAL EN COORDINACION CON EL CENTRO NACIONAL EPIDEMIOLOGIA QUE HA MOSTRADO SU UTILIDAD PERMITIENDO LA DETECCION DE UN BROTE DE TUBERCULOSIS MR ENTRE DIFERENTES HOSPITALES CAUSADO POR UNA CEPA DE M. BOVIS.

Autor: SANCHEZ ROMERO JUAN MANUEL.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HAN CONSTRUIDO UNA COLECCION DE HERRAMIENTAS QUE PRETENDEN AMPLIAR LAS POSIBILIDADES DE MANIPULACION DE PSEUDOMONAS COMO MICROORGANISMO DE ELECCION PARA TAREAS DE BIOTRATAMIENTO Y BIOTRANSFORMACION EN ENTORNOS NO CONTENIDOS. LAS HERRAMIENTAS SE HAN DISEÑADO DE TAL MANERA QUE POSIBILITAN LA INTEGRACION DE CUALQUIER ADN HETEROLOGO EN EL CROMOSOMA DE MANERA ESTABLE SIN LA INTRODUCCION DE MARCADORES FENOTIPICOS. COMO ELEMENTO ADICIONAL SE CONSTRUYERON UNA COLECCION DE VECTORES CON UN ORIGEN DE REPLICACION NATIVO DE PSEUDOMONAS QUE GRACIAS A UNA MUTACION EN SU PROTEINA DE REPLICACION, AMPLIAN EL RANGO DE HUESPED A OTROS GENEROS DE MICROORGANISMOS GRAM-NEGATIVOS.

Autor: SANTOYO LOPEZ JAVIER.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA FOSFORILACION DE LA SUBUNIDAD ALFA DEL FACTOR DE INICIACION EUCARIOTICO 2 (EIF2ALFA ) ES UNO DE LOS MECANISMOS DE REGULACION NEGATIVA DE LA SINTESIS DE PROTEINAS MEJOR CARACTERIZADO, TANTO EN CELULAS DE MAMIFERO COMO EN LA LEVADURA SACCHAROMYCES CEREVISIAE. SIN EMBARGO ESTE MECANISMO DE CONTROL DE LA SINTESIS DE PROTEINAS NO HA SIDO DESCRITO EN DROSOPHILA. EN ESTA TESIS SE HA LLEVADO A CABO EL CLONAJE Y LA CARACTERIZACION DE DGCN2, UNA EIF2ALFA QUINASA DE DROSOPHILA RELACIONADA CON LA PROTEINA QUINASA GCN2 DE LEVADURAS. EL CDNA CLONADO CODIFICA UNA PROTEINA CON UNA MASA MOLECULAR TEORICA DE 178,7 KDA Y LA TRANSCRIPCION- TRADUCCION IN VITRO DE ESTE CDNA ORIGINA UN POLIPEPTIDO DE APROXIMADAMENTE 175 KDA. DGCN2 ESTA CODIFICADA POR UN UNICO GEN QUE DA LUGAR A UN UNICO TRANSCRITO DE APROXIMADAMENTE 6,5 KB. LA EXPRESION DE ESTE GEN DURANTE EL DESARROLLO DE DROSOPHILA SE ENCUENTRA REGULADA. DURANTE LA EMBRIOGENESIS, EL MRNA DE DGCN2 SE EXPRESA DE MANERA DINAMICA EN DISTINTOS TEJIDOS. EN LOS ULTIMOS ESTADIOS EMBRIONARIOS ESTA EXPRESION SE RESTRINGE A 2 PARES DE CELULAS DEL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL. ANTICUERPOS PURIFICADOS POR AFINIDAD, OBTENIDOS FRENTE A PEPTIDOS SINTETICOS DE LA SECUENCIA DEL DGCN2, ESPECIFICAMENTE INMUNOPRECIPITAN Y RECONOCEN UNA FOSFOPROTEINA DE 175 KDA A PARTIR DE EXTRACTOS DE EMBRIONES DE DROSOPHILA.

Autor: SANZ MORATILLA SILVIA.
Año: 1996.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA INVESTIGACION DE FORMAS ALTERNATIVAS DE ADMINISTRACION DE FARMACOS OCUPA HOY DIA UN OBJETIVO IMPORTANTE A ALCANZAR. EN EL PRESENTE TRABAJO, SE HA UTILIZADO LOS ERITROCITOS COMO PORTADORES DE ENZIMAS CAPACES DE ACTUAR COMO AUTENTICOS SISTEMAS FISIOLOGICOS CON CAPACIDAD TERAPEUTICA. LA ENCAPSULACION DE ESTAS ENZIMAS SE REALIZO MEDIANTE EL METODO DE DIALISIS HIPOTONICA/RESELLADO ISOTONICO. LAS ENZIMAS SELECCIONADAS FUERON: LA ADH, RESPONSABLE PRINCIPAL DE LA OXIDACION DEL ETANOL Y EN CONSECUENCIA ENZIMA CAPAZ DE DEGRADAR CONCENTRACIONES ELEVADAS DE ETANOL EN SANGRE CIRCULANTE. Y LA GDH, UNA DE LAS RUTAS POSIBLES DE UTILIZACION DE AMONIO CUANDO SE ENCUENTRA A CONCENTRACION ELEVADA EN EL ORGANISMO. CON ESTOS ERITROCITOS ENCAPSULADOS SE REALIZARON ESTUDIOS "IN VITRO" PARA CONOCER LOS RENDIMIENTOS DE ENCAPSULACION, PARAMETROS HEMATOLOGICOS Y ESTABILIDAD Y LIBERACION DE LAS ENZIMAS. ESTUDIOS " EX VIVO" E "IN VIVO" PARA COMPROBAR LA CAPACIDAD DE ESTAS ENZIMAS PARA ELIMINAR SUS SUSTRATOS ESPECIFICOS. LA PRESENTE TESIS DOCTORAL DEMUESTRA QUE ESTOS ERITROCITOS PORTADORES SON CAPACES DE ACTUAR COMO AUTENTICOS BIOREACTORES ENZIMATICOS.

Autor: SASTRE CASADO JOSE IGNACIO.
Año: 1996.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HA DETECTADO MEDIANTE ANTICUERPOS ESPECIFICOS LA PRODUCCION DE LAS PROTEINAS TRWF Y TRWJ DEL PLASMIDO CONJUGATIVO R388. LA PRIMERA DE ELLAS HA SIDO LOCALIZADA EN LA MEMBRANA EXTERNA Y LA SEGUNDA EN LA MEMBRANA INTERNA DE ESCHERICHIA COLI. POR OTRA PARTE SE HA DETECTADO LA EXPRESION DE LA PROTEINA TRWG DE R388, CONFIRMANDO LOS DATOS DE LA SECUENCIA DE DNA DE ESTA REGION. SE HAN OBTENIDO MUTANTES EN TRAD DEL PLASMIDO F CAPACES DE COMPLEMENTAR CON MAYOR EFICIENCIA QUE TRAD PARA LA TRANSFERENCIA DE R388TRWB, ASI COMO PARA LA TRANSFERENCIA DEL PLASMIDO MOVILIZABLE RSF1010. LA TRANSFERENCIA DE FTRAD CON ESTOS MUTANTES ES MENOS EFICIENTE QUE LA QUE SE CONSIGUE CON EL GEN TRAD INTACTO. ESTOS RESULTADOS INDICAN QUE EN EL EXTREMO CARBOXILO DE TRAD RESIDE UN DETERMINANTE DE ESPECIFICIDAD, QUE PRODUCE UNA ALTA AFINIDAD POR EL RELAXOSOMA DE F Y BAJA POR LOS DE R388 Y RSF1010.

Autor: SCHWARTZ CLAUDIA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA PROTEINA ACIDA P30 FUE AISLADA POR SU INTERACCION CON EL COMPLEJO MAYOR DE HISTOCOMPATIBILIDAD DE CLASE II HUMANO (HLA-DR). EN ESTE TRABAJO SE MUESTRAN EVIDENCIAS DE QUE ESTA INTERACCION NO ES ESPECIFICA. P30 RESULTO SER UNA PROTEINA NUCLEAR QUE SE ASOCIA AL DNA. PARA ESTA INTERACCION ES NECESARIA OTRA PROTEINA NUCLEAR DE 20 KD QUE TAMBIEN FUE AISLADA.

Autor: SCHWARTZ NAVARRO SIMO.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA CLINICA Y PATOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE CONSTATAN MEDIANTE PCR DIFERENCIAL AMPLIFICACIONES GENICAS DEL RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDERMICO (EGFR) EN UN 68% Y 52% DE ADENOCARCINOMAS PROSTATICOS (ACP) METASTASICOS Y NO METASTASICOS, Y EN UN 10% DE HIPERPLASIAS BENIGNAS (HBP), ASI COMO AMPLIFICACIONES DEL FACTOR DE CRECIMIENTO FIBROBLASTICO 3 (FGF3/INT2) EN TODOS LOS CASOS DE ACP METASTASICOS Y EN UN 47% DE LOS NO METASTASICOS Y AMPLIFICACIONES DEL PROTO-ONCOGEN C-ERBB2(NEU) EN UN 40% DE LOS ACP METASTASICOS ANALIZADOS, CORRELACIONANDOSE CON EL POTENCIAL METASTASICO TUMORAL (P

Autor: SENTANDREU ELORZA MARIA.
Año: 1996.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y ECOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: 275A MICROBIOLOGIA .

Resumen: CANDIDA ALBICANS ES UN PATOGENO OPORTUNISTA DE CRECIENTE IMPORTANCIA SANITARIA. SU PARED CELULAR ES UNA DE LAS PRINCIPALES DIFERENCIAS QUE PRESENTA RESPECTO A LAS CELULAS HUMANAS POR LO QUE ES UNA DIANA EN PRINCIPIO INTERESANTE PARA EL DISEÑO DE NUEVOS ANTIFUNGICOS. LA CLONACION DE GENES QUE CODIFICAN PROTEINAS SITUADAS A NIVEL DE ESTA ESTRUCTURA CELULAR ES EL OBJETIVO DE ESTE TRABAJO, PARA LO CUAL SE LLEVO A CABO UN RASTREO DE GENOTECAS DE EXPRESION CON ANTICUERPOS POLICLONALES OBTENIDOS FRENTE A PAREDES PURIFICADAS DEL MICROORGANISMO. ESTOS ESTUDIOS HAN PERMITIDO EL AISLAMIENTO DE DOS GENES PRA1 Y CSP37 CUYOS PRODUCTOS SE ENCUENTRAN EN LA SUPERFICIE CELULAR DE C. ALBICANS, Y DE OTROS COMO EL GEN QUE CODIFICA ENOLASA, ENZIMA GLICOLITICA QUE TAMBIEN PUEDE APARECER EN EL EXTERIOR CELULAR BAJO DETERMINADAS CIRCUNSTANCIAS. CSP37 CODIFICA UNA PROTEINA NO CARACTERIZADA EN NINGUNA OTRA ESPECIE, AUSENTE EN SACCHAROMYCES CEREVISIAE Y CON UN POSIBLE PAPEL FISIOLOGICO EN LA VIRULENCIA DEL MICROORGANISMO. PRA1 CODIFICA UNA MANOPROTEINA DE LA PARED CELULAR QUE FORMA PARTE DE UNA NUEVA FAMILIA DE ANTIGENOS QUE HAN SIDO DESCRITOS EN LEVADURAS Y HONGOS FILAMENTOSOS.

Autor: SEOANE SUAREZ JOAN.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA .

Resumen: En este trabajo se ha sobreexpresado algunos enzimas clave del metabolismo hepático de glucosa: la glucoquinasa, la hexoquinasa I y la glucosa 6-fosfatasa. La sobreexpresión de la glucoquinasa ha provocado un incremento en la utilización y almacenaje de glucosa en hepatocitos en cultivo de rata Wistar. Sorprendentemente y al contrario de lo que pasaba al sobreexpresar la glucoquinasa, la sobreexpresión de hexoquinasa I no produce un augmento en la síntesi de glucógeno. Se postula que solamente la glucosa 6-fosfato procedente de la glucoquinasa es capaz de inducir la síntesis de glucógeno. La sobreexpresión de glucoquinasa en hepatocitos de rata ZDF (modelo de diabetis tipo 2) produce un augmento en la utilización y almacenaje de glucosa por parte del hepatocito, restaurando de esta manera las alteraciones metabólicas propias del fenotipo diabético. Finalmente, la sobreexpresión de la subunidad catalítica de la glucosa 6-fosfatasa ha producido un incremento en la hidrólisis de glucosa 6- fosfato y en la gluconeogenesis, así como una disminución en la glucólis y la síntesis de glucógeno. La sobreexpresión en un modelo in vivo en el hígado de una rata Wistar ha corroborado los resultados obtenidos en hepatócitos.

Autor: SEPULVEDA VIZCAINO PALOMA.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL OBJETIVO DE UNO DE LOS TRABAJOS RECOGIDOS EN ESTA TESIS FUE EL ESTUDIO COMPARATIVO DE LA PORFIRINURIA MEDIANTE DIVERSOS MICROMETODOS Y UNA RUTINARIO METODO ANALITICO QUE CONSIDERAMOS COMO "GOLD STANDART". EL MICROMETODO DE WESTERLUND RESULTO PLENAMENTE ADECUADO PARA EL ESTUDIO DE LA PORFIRINURIA TOTAL, NO SOLO DESDE EL PUNTO DE VISTA CUANTITATIVO SINO TAMBIEN CUALITATIVAMENTE GRACIAS AL DESARROLLO DE UN PROCEDIMIENTO QUE PERMITIO LA UTILIZACION DE LOS MICROMETODOS PARA EL ANALISIS DE LAS FRACCIONES COPRO Y URO. SE REALIZO UN ESTUDIO QUE PERMITIO DETERMINAR EL PORCENTAJE DE PORFIRINA QUE SON EXCRETADAS COMO PORFIRINOGENOS, HECHO QUE TOMA ESPECIAL IMPORTANCIA EN CASOS EN LOS QUE LA EXCRECION DE COPROPORFIRINA ES PREDOMINANTE. FINALMENTE, SE REALIZO UN ESTUDIO QUE REFLEJA QUE NO EXISTEN VARIACIONES EN LA EXCRECION DE PROFIRINAS URINARIAS DURANTE EL DIA.

Autor: SIMON BUELA LAUREANO.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HA DETERMINADO EL MECANISMO DE INICIO DE LA TRADUCCION DEL RNA GENOMICO DEL VIRUS DE LA SHARKA Y LAS SECUENCIAS NECESARIAS EN EL EXTREMO PARA EL INICIO DEL PROCESO DE REPLICACION DEL GENOMA VIRAL.

Autor: SOLOAGA VILLOCH ANA.
Año: 1996.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: LA HEMOLISINA DE E. COLI ES UNA TOXINA PROTEICA EXTRACELULAR, DE 107 KD DE PESO MOLECULAR, PRODUCIDA POR CEPAS PATOGENICAS DE ESTA BACTERIA. LA HEMOLISINA ES UN FACTOR DE VIRULENCIA Y SU FUNCION ES LISAR ERITROCITOS Y OTRAS CELULAS DEL SISTEMA INMUNE DEL HOSPEDADOR. SE HA ESTUDIADO LA INTERACCION DE LA PROTEINA CON LAS MEMBRANAS, UTILIZANDO LIPOSOMAS COMO MODELO DE MEMBRANAS Y PROTEINA EN DISTINTAS CONDICIONES PARA COMPRENDER LA ESTRUCTURA Y LA FUNCION DE CADA DOMINIO DE LA PROTEINA.

Autor: TALAMILLO CANCELO ANA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: EL TRABAJO PRESENTADO EN LA MEMORIA DESCRIBE LA CARACTERIZACION DEL GEN ALFA ATPASA DE D. MELANOGASTER. EXISTE UN UNICO GEN QUE OCUPA UNA REGION DE 3 KB. POSEE UN INICIO DE TRANSCRIPCION HETEROGENEO Y SE HAN IDENTIFICADO DOS POSIBLES SECUENCIAS INICIADORAS EN LA REGION 5' PROXIMAL MEDIANTE LA COMPARACION CON LOS INICIOS DE TRANSCRIPCION CARACTERIZADOS EN LOS GENES ALFA ATPASA DE MAMIFEROS. SE HA CARACTERIZADO EN CELULAS EN CULTIVO LA ACTIVIDAD PROMOTORA DE 1 KB DE LA REGION 5' DEL GEN, LO QUE HA PERMITIDO DEFINIR DIVERSAS REGIONES A LAS QUE PODRIAN UNIRSE PROTEINAS QUE MODULAN DE UN MODO POSITIVO O NEGATIVO LA TRANSCRIPCION Y UNA REGION INDISPENSABLE PARA LA TRANSCRIPCION BASAL DEL GEN. EL PATRON DE EXPRESION DEL GEN ES SIMILAR AL CARACTERIZADO PARA OTROS MENSAJEROS QUE CODIFICAN SUBUNIDADES DEL MISMO COMPLEJO TANTO A NIVEL TISULAR COMO DURANTE EL DESARROLLO EMBRIONARIO SUGIRIENDO QUE EXISTE UNA FINA COORDINACION EN LA EXPRESION DE LOS GENOMAS MITOCONDRIAL Y NUCLEAR.

Autor: TOJA AGUIRRE MIGUEL.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HA CONSTRUIDO UN CLON INFECCIOSO PARA EL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA C-58CL DE SEROTIPO C. PARA ELLO SE HAN ENSAMBLADO CLONES SUBGENOMICOS PRESENTES EN EL LABORATORIO, SE HA INTRODUCIDO EN TRAMO DE POLI C ANALOGO AL PRESENTE EN EL ARN VIRICO Y SE HA CREADO UNA DIANA DE RESTRICCION N DE I, PRECISA PARA LINEARIZAR EL PLASMIDO PREVIAMENTE A LA TRANSCRIPCION "IN VITRO". ADEMAS SE HA SECUENCIADO EN SU TOTALIDAD EL AISLADO DE REFERENCIA C-58CL JUNTO CON SUS DERIVADOS R99 Y R146; OBTENIDOS EN FASES TEORICAS DE INFECCIONES "IN VITRO" EN CONDICIONES DE PERSISTENCIA. ESTAS SECUENCIAS SE REALIZARON SIN AMPLIFICACION DEL TITULO VIRICO POR INFECCION CITOLITICA NI CLONADO MOLECULAR. ESTA SECUENCIA DEL C-58CL CONSTITUYE LA PRIMERA SECUENCIA COMPLETA PARA UN AFTOVIRUS DE SEROTIPO C.

Autor: VALENZUELA ESTRADA MARIO MARTE.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA .

Resumen: ENTRE LOS METODOS USADO PARA TRANSFERIR GENES SE ENCUENTRAN LOS LIPOSOMAS CATIONICOS, LOS CUALES UNIDOS A LOS GENES DE LA GREEN FLUORESCENT PROTEIN (GFP) Y LA FOSFATASA ALCALINA PLACENTAL SE APLICARON EN EL CONDUCTO DEFERENTE DE RATON. DESPUES DE DIFERENTES PERIODOS (1 SEMANA A 8 MESES) LOS CONDUCTOS DEFERENTES FUERON ANALIZADOS POR METODOS MICROSCOPICOS, INMUNOLOGICOS Y MOLECULARES. EN EL 95% DE LOS CASOS SE OBSERVO QUE UN 15% DE LAS CELULAS EPITELIALES EXPRESABAN LOS GENES INYECTADOS. CORTES REALIZADOS EN CRIOSTATO MOSTRARON QUE LA LOCALIZACION DE LAS CELULAS TRANSFECTADAS ERA VARIABLE. POR OTRA PARTE, POR PROCEDIMIENTOS INMUNOCITOQUIMICOS, UTILIZANDO UN ANTICUERPO ANTI-GFP SE DETECTO LA GFP EN EL CITOPLASMA DE LAS CELULAS TRANSFECTADAS, ASI COMO POR INMUNOBLOTTING UTILIZANDO COMO ANTIGENO UN EXTRACTO PROTEICO DE LAS CELULAS EPITELIALES. EL NUMERO DE CELULAS TRANSFECTADAS PARECE SER ALTO, HECHO QUE SE COMPROBO MEDIANTE HIBRIDACION IN SITU, Y NO TODAS PARECEN EXPRESAR EL TRASGEN. ESTOS RESULTADOS MUESTRAN QUE SE PUEDE INDUCIR LA EXPRESION ESPECIFICA EN UN TEJIDO PARA UN TRASGEN MEDIANTE LA TRANSFECCION IN VIVO. ESTOS RESULTADOS PUEDEN SER IMPORTANTES PARA FUTURAS APLICACIONES BIOTECNOLOGICAS.