BIOQUIMICA MOLECULAR, 66

Autor: BONNIN BIOSLADA ANA.
Año: 1995.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN EL PRESENTE TRABAJO HEMOS ESTUDIADO LOS EFECTOS DE LA EXPOSICION PERINATAL A THC SOBRE EL DESARROLLO DE LAS NEURONAS CATACOLAMINERGICAS DURANTE EL DESARROLLO FETAL Y NEONATAL EN LA RATA. PARA ELLO SE HA ESTUDIADO LA EXPRESION DE LA TIROSINA HIDROXILASA (TH), PROTEINA CLAVE EN EL DESARROLLO DE LA NEUROTRANSMISION CATACOLAMINERGICA, MEDIANTE "NORTHERN" Y "WESTHERN BLOT", ASI COMO SU FUNCIONALIDAD. EN PARALELO SE ANALIZARON LAS CONCENTRACIONES DE CATECOLAMINAS Y DOPAC, PRINCIPAL METABOLITO INTRANEURONAL DE LA DORAMINA (DA), MEDIDAS POR HPLL. DURANTE LA GESTACION Y LA LACTANCIA SE ESTUDIARON UNA SERIE DE PARAMETROS GESTACIONALES PARA CONTROLAR LA POSIBLE EXISTENCIA DE UN EFECTO INDIRECTO DE LOS CANNABINOIDES. LA EXPOSICION PERINATAL A THC AUMENTO LA EXPRESION DE LA TH EN LOS FETOS DEL DIA GESTACIONAL 14 (TANTO RNAM COMO PROTEINA) Y TAMBIEN SU ACTIVIDAD. ESTE AUMENTO DE LA ACTIVIDAD TAMBIEN SE ENCONTRO "IN VITRO", EN CULTIVOS PRIMARIOS DE MESENCEFALOS DE EMBRIONES DE RATA, Y EN ESTOS CULTIVOS EL AUMENTO DE LA ACTIVIDAD DE TH SE REVERTIO COINCUBANDO CON UN ANTAGONBTA DEL RECEPTOR DE CANNABIONOIDES. ESTOS PARAMETROS SE NORMALIZARON EN EL DIA GESTACIONAL 16, DE TODAS FORMAS, EN EL DIA GESTACIONAL 18 LA EXPRESION DE LA TH SE ALTERO POR EL TRATAMIENTO CON THC (CANNABINOIDE PSICOACTIVO MAS IMPORTANTE) DE UNA FORMA SEXUALMENTE DIMORFICA, ESTO FUE MAS EVIDENTE EN EL DIA GESTACIONAL 21 Y SE PROLONGO HASTA EDADESPOSTNATALES (DIAS 1 Y 5), SE ENCONTRO UN DESCENSO DEL RNAM DE TH EN MACHOS Y UN INCREMENTO EN HEMBRAS. ESTOS CAMBIOS NO SE CORRESPONDIERON CON CAMBIOS EN LA ACTIVIDAD O CANTIDAD TH Y CONTENIDOS DE CATACOLAMINAS, SOLO EN LAS HEMBRAS SE ENCONTRO QUE EL INCREMENTO EN EL RNAM DE TH IBA ACOMPAÑADO DE UN AUMENTO DE LA ACTIVIDAD DE LAS NEURONAS TH POSITIVAS, OSEA UN AUMENTO EN LOS CONTENIDOS DE DOPAC. NUESTROS DATOS DEMUESTRAN QUE EL THC ES CAPAZ DE AFECTAR LA EXPRESION GENICA DE LA TH, PROTEINA CLAVE EN EL DESARROLLO DE LA NEUROTRANSMISION CATACOLAMINERGICA, Y PROBABLEMENTE EJERCIENDO ESTE EFECTO A TRAVES DEL RECEPTOR DE CANNABINOIDES CEREBRAL CBI, Y PUDIERA SER EL ORIGEN DE LAS ALTERACIONES OBSERVADAS EN ANIMALES INMADUROS Y ADULTOS EXPUESTOS PERINATALMENTE A CANNABINOIDES.

Autor: BORRELL AZLOR ANTONIO.
Año: 1995.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PRODUCTOS NATURALES, BIOLOGI VEGETAL SAN Y EDAFOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: PRODUCTOS NATURALS DE ORIGEN VEGETAL.

Resumen: LAS POLIAMINAS SON COMPUESTOS NATURALES POLICATIONICOS IMPLICADOS EN DIFERENTES PROCESOS DE CRECIMIENTO Y DESARROLLO VEGETAL, ENTRE ELLAS DESTACA LA DIAMINA PUTRESCINA, LA TRIAMINA ESPERMIDINA Y LA TETRAMINA ESPERMINA. EN PLANTAS, LA BIOSINTESIS DE PUTRESCINA SE PRODUCE POR VIA ODC (ORNITINA DESCARBOXILASA) O VIA EDC (ARGININA DESCARBOXILASA). EN CONDICIONES DE ESTRES OSMOTICO, SEINDUCE LA SENESCENCIA Y SE ACTIVA LA VIA DE SINTESIS DE PUTRESCINA CATALIZADA POR ADC. EN ESTA TESIS, SE DEMUESTRA, POR UN LADO, QUE LAS POLIAMINAS INHIBEN LA PEROXIDACION DE LIPIDOS EN HOJAS SENESCENTES DE AVENA, LO QUE EXPLICARIA LAS PROPIEDADES ANTISENESCENTES ATRIBUIDAS A ESTOS COMPUESTO. EN EL SEGUNDO CAPITULO, SE PLANTEA UN MODELO DE REGULACION DE LA SINTESIS DE ADC EN CONDICIONES DE ESTRES OSMOTICO Y PRESENCIA DE POLIAMINAS EXOGENAS, Y SE DEMUESTRA QUE LA ESPERMINA REGULA LA SINTESIS DE DICHA ENZIMA A NIVEL POST-TRADUCCIONAL. EN EL ULTIMO CAPITULO, SE ESTUDIA LA LOCALIZACION DE LA ADC EN PLANTAS DE AVENA, POR FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR E INMUNOCITOQUIMICA, Y SE DEMUESTRA QUE LA ENZIMA SE ENCUENTRA EN CLOROPLASTOS ASOCIADA A LA MEMBRANA TILACOIDAL. TAMBIEN SE LOCALIZO EN PLANTAS DE TABACO Y EN PLANTAS TRANSGENICAS QUE SOBREEXPRESAN LA ADC DE AVENA.

Autor: BOTELLA MUÑOZ JOSE ANTONIO.
Año: 1995.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA MOLECULAR .

Resumen: SE HA DETERMINADO LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS DE UN FRAGMENTO DE DNA DE M. XANTHUS DE 12 KB QUE INCLUYE LA REGION CARA-CARB COMPLETA. EL ANALISIS DE LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS IDENTIFICA ONCE TRAMOS DE LECTURA ABIERTA (ORFS). EL ANALISIS DESIMILITUD CON SECUENCIAS DE PROTEINAS CONOCIDAS Y EL ANALISIS DE LOS CAROTENOS ACUMULADOS EN ESTIRPES PORTADORAS DE INSERCIONES EN ESTOS GENES HA PERMITIDO ASIGNAR FUNCIONES A SEIS DE ELLOS EN LA RUTA DE SINTESIS DE CAROTENOIDES. SE HA DETERMINADO LA NATURALEZA MOLECULAR DE LA MUTACION CARAL. DICHA MUTACION AFECTA AL MENOS A LOS ORFS 9 Y 10. EL ORF9 ACTUA COMO REGULADOR POSITIVO DE LA CAROTENOGENESIS. SU DELECION PROVOCA LA DRASTICA REDUCCION DE LA EXPRESION DE LOS GENES CARQRS, CARB Y CARC. LA FUNCION DEL ORF9 ES NECESARIA PARA LA INACTIVACION DE LA PROTEINA CARR INDUCIDA POR LA LUZ. EL ORF10 Y PROBABLEMENTE EL ORF11 ACTUAN COMO REGULADORES NEGATIVOS DE LA EXPRESION DE CARB EN LA OSCURIDAD. LOS ORFS SITUADOS EN EL EXTREMO 3' DE LA REGION CARA-CARB CONSTITUYEN EL OPERON CARA, CUYO PROMOTOR ES ACTIVO EN LA OSCURIDAD. SE HAN IDENTIFICADO LOS INICIOS DE LA TRANSCRIPCION DE LOS OPERONES CARB Y CARA. EN CONDICIONES DE ILUMINACION SE PRODUCE UN SOLAPAMIENTO ENTRE LOS TRANSCRITOS DE AMBOS OPERONES QUE SUGIERE UNA ORGANIZACION EN LA REGION CARA-CARB DEL TIPO SUPER-OPERON.

Autor: BRAVO SICILIA JERONIMO.
Año: 1995.
Universidad: POLITECNICA DE CATALUÑA.
Centro de lectura: INGENIEROS INDUSTRIALES.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE INGENIERIA QUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR ESTRUCTURAL .

Resumen: EN EL PRESENTE ESTUDIO SE HA ABORDADO LA DETERMINACION ESTRUCTURAL, MEDIANTE CRISTALOGRAFIA DE PROTEINAS DE LA CATALASA HPII DE ESCHERICHIA COLI.SE HA DETERMINADO LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA CATALASA NATIVA A 1.9 A DE RESOLUCION. ASIMISMO SE HAN DETERMINADO LAS ESTRUCTURAS DE LAS CATALASAS HPII RECOMBINANTES N201H Y N201A A 2.2A DE RESOLUCION; H12N A 2.1A Y H128N A 1.9A DE RESOLUCION. TAMBIEN SE HA DETERMINADO LA ESTRUCTURA DEL COMPLEJO DE CATALASA HPII CON AZIDA A 2.2A. EL ANALISIS DE TODAS ESTAS ESTRUCTURAS HA PUESTO DE MANIFIESTO QUE LA CATALASA DE HPII ES UN TETRAMERO ORGANIZADO DE ACUERDO CON LA SIMETRIA DEL GRUPO PUNTUAL 222, QUE LA REGION CENTRAL DE LA MOLECUAL PRESENTA UNA ELEVADA HOMOLOGIA ESTRUCTURAL CON OTRAS ESTRUCTURAS DE CATALASAS. LOS RESIDUOS DEL BRAZO AMINOTERMINAL Y UNDOMINIO CARBOXITERMINAL EXTRA SUPONEN LAS MAYORES DIFERENCIAS (UNOS 350 RESIDUOS) ENTRE LAS ESTRUCTURAS DE HPII Y CATALASA DE HIGADO BOVINO QUE ES LA QUE SE UTILIZO EN LA RESOLUCION DE HPII POR REEMPLAZO MOLECULAR. SE HA CARACTERIZADO UN NUEVO GRUPO HEMO EN LA HPII NATIVA Y LOS MUTANTES ACTIVOS.

Autor: BRITO LOPEZ BELEN.
Año: 1995.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL.

Resumen: LAS HIDROGENASAS (NI-FE) DE BACTERIAS ENDOSIMBIOTICAS DE LEGUMINOSAS (RHIZOBIUM Y BRADYHIZOBIUM) SON METALOENZIMAS CONSTITUIDAS POR UNA PROTEINA HETERODIMERICA QUE CONTIENE NIQUEL EN SU CENTRO ACTIVO Y GRUPOS FE-S EN NUMERO VARIABLE. ESTAS HIDROGENASAS FUNCIONAN OXIDANDO EL H2 GENERADO POR LA NITROGENASA DURANTE LA REDUCCION DE N2 EN LOS NODULOS. ESTE SISTEMA DE OXIDACION DE HIDROGENO AUMENTA LA EFICIENCIA ENERGETICA DE LA SIMBIOSIS Y CONSTITUYE UNA FUENTE POTENCIAL DE MEJORA DE LA FIJACION DE NITROGENO Y DE LA PRODUCTIVIDAD DE LAS LEGUMINOSAS. DENTRO DE UN OBJETIVO GENERAL CENTRADO EN EL ANALISIS DEL SISTEMA DE OXIDACION DE HIDROGENO DE R. LEGUMINOSARUM, EN ESTA TESIS SE ABORDAN TRES OBJETIVOS CONCRETOS: I) LA EVALUACION DE LOS REQUERIMIENTOS Y ANALISIS DEL EFECTO DEL NIQUEL EN LA SINTESIS Y ACTIVIDAD HIDROGENASA DE R. LEGUMINOSARUM BV. VICIAE EN SIMBIOSIS CON GUISANTES; II) EL ANALISIS DE LA REGULACION DE LA EXPRESION SIMBIOTICA DE LOS GENES ESTRUCTURALES DE LA HIDROGENASA DE R. LEGUMINOSARUM BV. VICIAE, III) LA BUSQUEDA DE GENES REGULADORES EN LA REGION DE DNA CONTIGUA AL PROMOTOR DE LOS GENES HUPSL. LOS RESULTADOS MAS RELEVANTES HAN SIDO LOS SIGUIENTES: LA ACTIVIDAD HIDROGENASA DE R. LEGUMINOSARUM BV. VICIAE EN NODULOS DE GUISANTES ESTA LIMITADA POR LA DISPONIBILIDAD DE NIQUEL PARA LA PLANTA EN EL SUELO O EN SOLUCIONES NUTRITIVAS. EN CONDICIONES DE DEFICIENCIA DE NIQUEL, LAS PROTEINAS ESTRUCTURALES DE LA HIDROGENASA NO SE PROCESAN Y LA ENZIMA SE ACUMULA EN UNA FORMA INMADURA E INACTIVA. EL PROCESAMIENTO REQUIERE, ADEMAS DE NIQUEL, LOS PRODUCTOS GENETICOS DERIVADOS DE LOS GENES HUP Y HYP ACCESORIOS. EL PROMOTOR DE LOS GENES ESTRUCTURALES DE LA HIDROGENASA (PHUP SL) PRESENTA UNA ESTRUCTURA DEL TIPO DE PROMOTORES -12/-24 CARACTERISTICA DE GENES-NIF. MEDIANTE ENSAYOS DE DELECION SE IDENTIFICO UNA REGION LOCALIZADA ENTRE LAS POSICIONES -173/-88, ESENCIAL PARA LA ACTIVIDAD DE ESTE PROMOTOR EN NODULOS DE GUISANTES. EL PROMOTOR PHUPSL ES ACTIVADO POR LA PROTEINA NIFA DE KLEBSIELLA PNEUMONIAE, UN REGULADOR TRANSCRIPCIONAL DE LOS GENES NIF, MEDIANTE INTERACCION CON UN ELEMENTO CIS NO CANONICO LOCALIZADO EN LA MISMA REGION ESENCIAL PARA ACTIVACION EN R. LEGUMINOSARUM. LA ACTIVACION DEL PROMOTOR PHUPSL POR NIFA REQUIERE LA MEDIACION DEL FACTOR DE INTEGRACION EN EL HUESPED (IHF), IMPLICADO EN LA CURVATURA DEL DNA Y EN LA INTERACCION DE NIFA CON EL COMPLEJO 54/RNA POLIMERASA. SE HA DEMOSTRADO QUE LOS GENES HUP Y NIF DE R. LEGUMINOSARUM SE COEXPRESAN TEMPORAL Y ESPACIALMENTE EN LA INTERZONA II/III Y EN LA ZONA III DE NODULOS DE GUISANTE. LA AGRUPACION DE GENES HUP EN R. LEGUMINOSARUM SE INICIA CON LOS GENES ESTRUCTURALES DE LA HIDROGENASA (HUPSL). DELANTE DE ESTOS GENES SE HAN IDENTIFICADO CUATRO GENES NO IMPLICADOS EN LA OXIDACION DE HIDROGENO. DE ENTRE ELLOS, EL GEN MCPA CODIFICA PARA UNA PROTEINA DE 639 AMINOACIDOS HOMOLOGA A PROTEINAS QUIMIOTACTICAS ACEPTORAS DE METILO Y CONSTITUYE EL PRIMER QUIMIORRECEPTOR IDENTIFICADO EN R. LEGUMINOSARUM. LOS PRODUCTOS GENICOS DE ORF3 Y ORF4 PRESENTAN HOMOLOGIA CON ISOMERASAS Y DESHIDROGENASAS IMPLICADAS EN LA DEGRADACION DE COMPUESTOS AROMATICOS.

Autor: BRUÑA ROMERO OSCAR.
Año: 1995.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA INTERNA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR.

Resumen: SE HAN CONSTRUIDO DOS ADENOVIRUS RECOMBINANTES NO REPLICATIVOS (RADCMV-CE1 Y RADCMV-CE1E2) CONTENIDO LOS GENES ESTRUCTURALES DEL CORE-E1 Y CORE-E1-E2 RESPECTIVAMENTE. RADCMV-CE1 Y RADCMV-CE1E2 SON CAPACES DE INFECTAR CELULAS HUMANAS Y DE RATON, Y DE EXPRESAR DENTRO DE ELLAS LAS CORRESPONDIENTES PROTEINAS PROCESADAS. UNA UNICA INMUNIZACION DE RATONES BALB/C CON LOS RECOMBINANTES ES CAPAZ DE INDUCIR UNA RESPUESTA INMUNE CITOTOXICA CONTRA LAS TRES PROTEINAS DEL VHC. LA IDENTIFICACION DE LOS PRINCIPALES EPITOPOS CITOTOXICOS DENTRO DE ELLAS SE HA REALIZADO EMPLEANDO CIENTOCATORCE PEPTIDOS SINTETICOS SOLAPADOS, QUE RECORREN LA SECUENCIA DE LAS TRES PROTEINAS. LOS MISMOS SIETE PEPTIDOS DEL CORE Y DE LA E1, HAN SIDO RECONOCIDOS CUANDO LOS RATONES SE HAN INMUNIZADO CON RADCMV-CE1 O RADCMV-CE1E2. ADEMAS, RADCMV-CE1E2 HA SIDO CAPAZ DE INDUCIR UNA RESPUESTA INMUNE CITOTOXICA CONTRA SEIS PEPTIDOS DE LA PROTEINA E2. UNA CARACTERIZACION MAS PROFUNDA DE LA RESPUESTA INMUNE INDUCIDA CONTRA EL PEPTIDO 312-326 DE E1, MOSTRO QUE: I) EL EPITOPO MINIMO COMPRENDE LA SECUENCIA AMINOACIDICA GHRMAWDM, II) LOS LTC INDUCIDOS TIENEN EL FENOTIPO CD8+, RESTRICCION H-2D Y LARGA DURACION (AL MENOS 100 DIAS), Y III) ESTOS LINFOCITOS SON CAPACES DE LISAR FIBROBLASTOS QUE EXPRESAN LA PROTEINA E1 DEL VHC. USANDO ESTE PROTOCOLO DE INMUNIZACION, NO SE HA DETECTADO PRODUCCION DE ANTICUERPOS CONTRA LAS PROTEINAS RECOMBINANTES, SIN EMBARGO, DESPUES DE DOS O MAS INMUNIZACIONES CON ESTOS RECOMBINANTES, TAMBIEN SE HA DETECTADO PRODUCCION DE ANTICUERPOS. TODOS ESTOS RESULTADOS NOS PERMITEN CREER QUE SE DEBERIA CONSIDERAR EL USO DE RADCMV-CE1 Y RADCMV-CE1E2 PARA ENSAYOS DE PROTECCION, ASI COMO PARA EL TRATAMIENTO DE PACIENTES CRONICAMENTE INFECTADOS POR EL VHC.

Autor: CABALLERO MARTINEZ MONTSERRAT.
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA VARIANTE DE VIRUS DE SARAMPION MOMP 1/2 1 CAPAZ DE ESTABLECER PERSISTENCIA INMEDIATA EN LA LINEA CELULAR MOLT4 EN AUSENCIA DE FUSION PRESENTA CAMBIOS DE AMINOACIDOS PARA LAS DISTINTAS PROTEINAS VIRALES RESPECTO AL PARENTAL LITICO QUE ORIGINO LA PERSISTENCIA, DETECTANDOSE POSIBLES ALTERACIONES ESTRUCTURALES PARA LAS PROTEINAS F Y H, ASI COMO HETEROGENEIDAD DE GLICOSILACION PARA H. POR CLONADO Y EXPRESION DE LOS GENES F Y H HEMOS COMPROBADO LA CAPACIDAD FUNCIONAL DE DICHAS PROTEINAS INDUCIENDOSE SINCITIOS EN MOLT4 Y EN LA LINEA PERSISTENTE MOMP3. SE DESCRIBE POR PRIMERA VEZ LA ACILACION DE UN MORBILLIVIRUS, DETECTANDOSE PALMITOILACION EN LA SUBUNIDAD F1 DE F. DE EXPERIMENTOS DE MUTAGENESIS SE INFIERE QUE LA CYS 519 PUEDE SER UNO DE LOS PRINCIPALES SITIOS DE PALMITOILACION. ESTA CYS JUNTO A 518 Y 520, PALMITOILADAS O NO DESEMPEÑAN UN PAPEL IMPORTANTE EN FUSION. HEMOS ENCONTRADO QUE EL VIRUS DE SARAMPION ES CAPAZ DE MATAR CELULAS EN CULTIVO MEDIANTE INDUCCION DE APOPTOSIS, TANTO EN AUSENCIA COMO EN PRESENCIA DE SINCITIOS, LA INDUCCION DE APOPTOSIS PUEDE ESTAR MEDIADA POR EL RECEPTOR FAS.

Autor: CABEDO MARTI HUGO.
Año: 1995.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA CLINICA Y MEDICA 030 B .

Resumen: TRABAJOS PREVIOS HABIAN DEMOSTRADO QUE LOS INHIBIDORES DE LA PKC SON CAPACES DE INHIBIR LA PROLIFERACION DE LAS CELULAS DE NEUROBLASTOMA N-2A. Y DE OTRAS LINEAS DE ORIGEN TUMORAL. EN LA TESIS DOCTORAL DEMOSTRAMOS QUE LA INHIBICION DE LA PKC ES CAPAZ ADEMAS DE INHIBIR LA PROLIFERACION DE CULTIVOS PRIMARIOS DE CELULAS NO TUMORALES, DE LINEAS CONTINUAS NO TUMORIGENICAS Y DE CELULAS TRANSFORMADAS. SE ESTUDIA TAMBIEN EL EFECTO DEL H-7 (UN INHIBIDOR DE LA PKC) SOBRE LA PROLIFERACION DEL TUMOR ASCITICO DE EHRLICH IMPLANTADO A RATONES. POR OTRO LADO, ENCONTRAMOS QUE N-2A EXPRESA LAS ISOFORMAS DE PKC ALFA, DELTA, EPSILON Y ZETA Y QUE NI ALFA NI ZETA SON LAS RESPONSABLES DEL CONTROL DE LA PROLIFERACION EN ESTAS LINEAS. OTROS RESULTADOS SUGIEREN QUE LA PKC ACTIVA A LA VIA DE LA MAP-QUINASA A TRAVES DE LA PROTEINA RAF, Y QUE LA INHIBICION DE LA PROLIFERACION INDUCIDA POR EL H-7 PODRIA ESTAR MEDIADA POR INTERFERENCIA CON LA ACTIVACION QUE LOS FACTORES DE CRECIMIENTO DEL SUERO PRODUCEN SOBRE ESTA VIA.

Autor: CAMINO FERNANDEZ MIRANDA DONATO DEL.
Año: 1995.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL RECEPTOR DE TRH PERTENECE A LA FAMILIA DE RECEPTORES ACOPLADOS A PROTEINAS G, MOSTRANDO SIETE GRUPOS DE AMINOACIDOS HIDROFOBICOS QUE PRESUMIBLEMENTE CONSTITUYEN HELICES ALFA QUE ATRAVIESAN LA MEMBRANA. MEDIANTE MUTAGENESIS DIRIGIDA SE HA ESTUDIADO LA IMPORTANCIA QUE PARA LA FUNCIONALIDAD DE ESTE RECEPTOR TIENEN CUATRO RESIDUOS AMINOACIDOS: TRES CYS SITUADAS EN LAS POSICIONES 179, 335 Y 337, Y UNA GLN SITUADA EN LA POSICION 105. EN TODOS LOS CASOS SE TRATA DE POSICIONES ALTAMENTE CONSERVADAS EN LA MAYORIA DE LOS RECEPTORES ACOPLADOS A PROTEINAS G. LA MUTACION DE LA CYS 179 A GLY CAUSA LA PRACTICA ELIMINACION DE LA RESPUESTA A LA TRH EN LOS OOCITOS QUE EXPRESAN ESTE RECEPTOR MUTANTE. ESTE RESULTADO, JUNTO CON LOS OBTENIDOS EN OTROS RECEPTORES COMO EL BETA-ADRENERGICO O LA RODOPSINA, INDICAN QUE LA CYS 179 PARTICIPA EN LA FORMACION DE UN PUENTE DISULFURO IMPORTANTE PARA LA FUNCIONALIDAD DEL RECEPTOR. LAS CYS 335 Y 337 SE ENCUENTRAN EN LA REGION CARBOXILO TERMINAL EN POSICIONES QUE SE HAN IMPLICADO EN PROCESOS DE PALMITOILACION EN OTROS MIEMBROS DE LA FAMILIA. LA SUSTITUCION DE LAS CYS 335 Y/O 337 POR GLY CAUSA UNA REDUCCION DE LA RESPUESTA A LA TRH EN OOCITOS, SIENDO ESTE UN EFECTO ADITIVO Y QUE NO ESTA MOTIVADO POR UNA DISMINUCION EN LA AFINIDAD DE LOS RECEPTORES MUTANTES POR LA HORMONA. PARECE PROBABLE QUE AMBOS RESIDUOS ESTEN PALMITOILADOS GENERANDO ASI UN CUARTO BUCLE CITOPLASMICO IMPORTANTE PARA LA INTERACCION RECEPTOR-PROTEINA G. ASIMISMO, Y CONTRARIAMENTE A LO PROPUESTO RECIENTEMENTE POR OTROS AUTORES, NI EL TRUNCAMIENTO DEL RECEPTOR DE TRH EN LA POSICION 335 NI LA MUTACION DE LAS CYS 335 Y 337 A GLY CAUSAN LA ACTIVACION CONSTITUTIVA DEL MISMO. LA GLN 105 OCUPA UNA POSICION EN LA CUAL LOS RECEPTORES DE LAS AMINAS BIOGENICAS POSEEN UN RESIDUO ACIDICO CONSERVADO QUE HA SIDO IMPLICADO EN LA FUNCION DE CONTRACARGA DEL LIGANDO Y EN LA FORMACION DEL COMPLEJO TERNARIO AGONISTA-RECEPTOR-PROTEINA G. LA SUSTITUCION DE LA GLN 105 POR GLU, ASN, ASP O SER DIO LUGAR A RECEPTORES MUTANTES QUE EXPRESADOS EN OOCITOS PRODUJERON RESPUESTAS MAXIMAS DE LA MISMA MAGNITUD A LAS OBTENIDAS CON EL RECEPTOR NATIVO, AUNQUE EL VALOR DE EC50 FUE, RESPECTIVAMENTE, 560, 170, 15 Y 4 VECES MAYOR QUE EL DEL RECEPTOR NATIVO. TENIENDO EN CUENTA LAS CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES DE LOS AMINOACIDOS A LOS QUE SE HA MUTADO LA GLN 105, ESTOS RESULTADOS SUGIEREN QUE EL GRUPO AMIDA DE DICHA GLN ES DE GRAN IMPORTANCIA PARA LA FUNCIONALIDAD DEL RECEPTOR DE TRH. ASIMISMO, EXISTE UNA CORRELACION ENTRE LA AFINIDAD LIGANDO RECEPTOR Y EL TIEMPO NECESARIO PARA LA RECUPERACION DE LA RESPUESTA ENTRE DOS ADICIONES SUCESIVAS DE HORMONA. EN OOCITOS QUE EXPRESAN EL RECEPTOR NATIVO, EL EFECTO DE LA MUTACION EN EL RESIDUO 105 ES MIMETIZADO MEDIANTE LA REDUCCION DEL TIEMPO DE EXPOSICION A LA HORMONA DESDE 3 S A MENOS DE 1 S, SIN MODIFICAR LOS NIVELES DE RESPUESTA. ESTOS RESULTADOS INDICAN QUE LA GLN 105 ESTA IMPLICADA EN LAS INTERACCIONES LIGANDO-RECEPTOR Y QUE ESTE RESIDUO ES IMPORTANTE PARA LAS TRANSICIONES CONFORMACIONALES ENTRE LOS ESTADOS DEL RECEPTOR CON CINETICAS DE DISOCIACION RAPIDAS Y LENTAS.

Autor: CARRASCO CACERES JORGE ALBERTO.
Año: 1995.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HA DESARROLLADO UN SISTEMA DE PURIFICACION DE ADN DE SANGRE APTO P PARA SU USO EN EL CAMPO YA QUE PERMITE EL MANEJO DE MUCHAS MUESTRAS AL MISMO TIEMPO EN UN PERIODO CORTO DE TIEMPO. ESTE METODO DE PURIFICACION ES EL COMPLEMENTO DE UN ENSAYO DE AMPLIFICACION POR PCR DE SECUENCIAS SATELITE DE TRYPANOSOMA CRUZI DESARROLLADO PARA LA DETECCION DEL PARASITO EN PACIENTES CON LA ENFERMEDAD DE CHAGAS. EL SISTEMA DE DETECCION POR PCR HA SIDO VALIDADO COMPARANDOLO CON OTROS METODOS PARASITOLOGICOS DE REFERENCIA, COMO EL HEMOCULTIVO Y EL XENODIAGNOSTICO, EN CUATRO POBLACIONES NATURALMENTE INFECTADAS CON T. CRUZI PROCEDENTES DE BRASIL, VENEZUELA, HONDURAS Y EL SALVADOR.

Autor: CASADO PINNA MARTA.
Año: 1995.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR II PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN ESTE TRABAJO EXPERIMENTAL INDICAN QUE EL HIGADO FETAL DE RATA EXPRESA UNA FORMA DE PFK-2/FBPASA2 DIFERENTE A LA DEL TEJIDO ADULTO. EL ISOENZIMA FETAL ES PROGRESIVAMENTE REEMPLAZADO DESPUES DEL NACIMIENTO POR LA FORM ADULTA Y SE CARACTERIZA POR UNA REGULACION A AMPC OPUESTA A LA EXHIBIDA POR EL TEJIDO ADULTO. EN EL HIGADO FETAL SE EXPRESAN LOS MENSAJEROS DE LA PFK-2/FBPASA2 CARACTERISTICOS DE HIGADO ADULTO Y MUSCULO ESQUELETICO, ASI COMO UNA FORMA ESPECIFICA QUE SE DIFERENCIA EN 257 BP DEL EXTREMO 5' DEL EXON 1L DE LA SECUENCIA DE LA PFK-2/FBPASA2 DE HIGADO. ESTA TERCERA ESPECIE DE MENSAJERO PODRIA DEBERSE A LA PRESENCIA DE UNA ZONA ADICIONAL DE SPLICING. LA PRESENCIA DE UNA PFK-2/FBPASA2 NO REGULADA POR AMPC PERMITE AL HIGADO FETAL MANTENER UNA ELEVADA CAPACIDAD GLUCOLITICA CARACTERISTICA DE ESTE TEJIDO.

Autor: CASADO RUBIO M. TERESA.
Año: 1995.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA FORMACION DE COMPLEJOS ANTIGENO-ANTICUERPO (AG-AC) CONSTITUYE UN PROCESO GENERAL DE DEFENSA POR EL QUE LOS AG SON ELIMINADOS DEL TORRENTE SANGUINEO EN FORMA DE INMUNOCOMPLEJOS (ICS). EN SITUACIONES PATOLOGICAS, ESTOS ICS PUEDEN ADQUIRIR GRANDES DIMENSIONES, PRECIPITAR Y DEPOSITARSE EN TEJIDOS PRODUCIENDO GRAVES DAÑOS. EN CONDICIONES FISIOLOGICAS, EL SISTEMA DEL COMPLEMENTO ANULA ESTA POSIBILIDAD MEDIANTE LA REALIZACION DE DOS DE SUS PRINCIPALES FUNCIONES: LA INHIBICION DE LA PRECIPITACION INMUNE Y LA SOLUBILIZACION DE ICS DEPOSITADOS. EL TERCER COMPONENTE DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO C3, ES FUNDAMENTAL EN AMBOS PROCESOS. DADA LA IMPORTANCIA DE LA UNION DE C3 SOBRE LOS ICS, SE PLANTEO EL ANALISIS MOLECULAR DE ESTA INTERACCION, CON EL FIN DE DETERMINAR EL MECANISMO MOLECULAR MEDIANTE EL CUAL C3 REALIZA ESTAS FUNCIONES. LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN ESTE TRABAJO, PERMITEN DETERMINAR LAS REGIONES DE INTERACCION DE C3 EN LA IGG DE CONEJO QUE FORMA PARTE DE LOS ICS. PERMITEN, ASI MISMO, DELIMITAR LAS ZONAS DE ESTAS REGIONES IMPLICADAS DIRECTAMENTE EN LA INTERACCION CON C3. SE ESTUDIO SOBRE MODELOS TRIDIMENSIONALES QUE RESIDUOS PERTENECIENTES A LAS ZONAS DELIMITADAS SON LOS ACEPTORES MAS PROBABLES DEL TERCER COMPONENTE DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO. LOS DATOS PRESENTADOS APORTAN UNA BASE MOLECULAR A LOS EFECTOS QUE EL ANCLAJE DE C3 TIENE SOBRE LOS ICS.

Autor: CASAIS GOYOS ROSA.
Año: 1995.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: EL VIRUS DE LA ENFERMEDAD HEMORRAGICA DE LOS CONEJOS (RHDV) ES EL AGENTE CAUSAL DE UNA ENFERMEDAD ALTAMENTE CONTAGIOSA (ENFERMEDAD HEMORRAGICA VIRICA DEL CONEJO), LA CUAL SURGIO POR PRIMERA VEZ EN CHINA DURANTE EL AÑO 1984, DESDE DONDE SE EXTENDIO A LO LARGO DE AMERICA, AFRICA Y EUROPA.LA CARACTERIZACION A NIVEL PROTEICO DEL RHDV AST/89 PERMITIO REALIZAR LA ASIGNACION DEFINITIVA DE ESTE VIRUS A LA FAMILIA CALICIVIRIDAE. LAS PARTICULAS VIRALES ESTAN FORMADAS POR UN UNICO POLIPEPTIDO, CUYA MASA MOLECULAR ES DE APROXIMADAMENTE 60 KDA (VP60). EL MATERIAL GENETICO EXTRAIDO DE LOS VIRIONES ESTA FORMADO POR DOS ESPECIES DE RNA MONOCATENARIO, INFECTIVO, DE POLARIDAD POSITIVA, POLIADENILADO DE 7,5 KB Y 2,2 KB. EL RNA SUBGENOMICO DE 2,2 KB ES COTERMINAL POR SU EXTREMO 3' CON EL RNA GENOMICO Y SU FUNCION BIOLOGICA ES LA CODIFICACION DE LA VP60. LOS EXPERIMENTOS PLANTEADOS EN ESTE TRABAJO VAN DIRIGIDOS AL ESTUDIO DE LA ORGANIZACION GENOMICA Y DE LAS ESTRATEGIAS DE EXPRESION GENICA UTILIZADAS POR ESTE VIRUS PARA COMPLETAR CON EXITO SU CICLO INFECTIVO. EL RNA GENOMICO DEL RHDV AST/89 CONSISTE EN 7437 NT EXCLUYENDO LA COLA DE POLI-A. EN ESTE RNA SE DETECTARON DOS POSIBLES PAUTAS ABIERTAS DE LECTURA (ORFS): LA ORF1 QUE ABARCA EL 94% DE LA LONGITUD GLOBAL DEL GENOMA Y TIENE CAPACIDAD PARA CODIFICAR UN POLIPEPTIDO DE 256 KDA Y LA ORF2 LOCALIZADA CERCA DEL EXTREMO 3' DEL RNA GENOMICO CON CAPACIDAD PARA CODIFICAR UNA HIPOTETICA PROTEINA DE 13 KDA. EL POLIPEPTIDO DERIVADO DE LA ORF1 PRESENTA TRES REGIONES DE HOMOLOGIA SIGNIFICATIVA A LOS PEPTIDOS 2C, 3C Y 3D DE PICORNAVIRUS CON FUNCIONES DE RNA HELICASA, CISTEIN PROTEASA Y RNA POLIMERASA RNA DEPENDIENTE RESPECTIVAMENTE. LA REGION CARBOXILO TERMINAL DE ESTE POLIPEPTIDO CONTIENE LA SECUENCIA CODIFICADORA DE LA VP60. SE HA DEMOSTRADO TANTO IN VITRO COMO EN E. COLI QUE LA REGION GENOMICA QUE PRESENTA HOMOLOGIA CON EL PEPTIDO 3C DE PICORNAVIRUS CODIFICA UNA CISTEIN PROTEASA. ESTA CATALIZA LA ESCISION DE LA POLIPROTEINA DERIVADA DE LA ORF1 AL MENOS EN TRES PUNTOS, DANDO LUGAR A CUATRO PRODUCTOS DE PROCESAMIENTO DENOMINADOS P80, P43, P73 Y P60, ORGANIZADOS POR ESTE ORDEN DESDE SU EXTREMO AMINO AL CARBOXILO. LA ACTIVIDAD PROTEASA RESIDE EN LA P73. ESTA HA SIDO LA PRIMERA CARACTERIZACION DEL PROCESAMIENTO PROTEOLITICO DE LA POLIPROTEINA DE UN MIEMBRO DE LA FAMILIA CALICIVIRIDAE.

Autor: CASARES FERNANDEZ LUIS FERNANDO.
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: TODOS LOS GRUPOS ANIMALES ESTUDIADOS COMPARTEN UN CONJUNTO DE GENES, LOS GENES HOMEOTICOS O HOX, QUE DETERMINAN LA IDENTIDAD DE LAS DISTINTAS PARTES DEL CUERPO. EN EL DIPTERO DROSOPHILA MELANOGASTER ESTOS GENES SE AGRUPAN EN DOS COMPLEJOS GENICOS: ANTENNAPEDIA Y BITHORAX (C-BX). EL TRABAJO PRESENTADO EN LA TESIS HA VERSADO SOBRE LA REGULACION Y FUNCION DE LOS TRES GENES HOMEOTICOS DEL C-BX (UBX, ABD-A Y ABD-B) DURANTE EL DESARROLLO. ESTOS TRES GENES SE ENCUENTRAN ADYACENTES EN EL CROMOSOMA Y SE EXTIENDEN SOBRE REGIONES GENOMICAS MUY EXTENSAS. ASI, EL GEN UBX ABARCA UNAS 125 KB, DE LAS QUE MENOS DEL 2% SON CODIFICANTES. HE MOSTRADO, UTILIZANDO DEFICIENCIAS INDUCIDAS POR MOVILIZACION DE INSERCIONES DE ELEMENTOS P, QUE LAS REGIONES GENOMICAS COMPRENDIDAS ENTRE 61 Y 17 KB DEL MAPA GENOMICO, Y QUE ELIMINAN EL PROMOTOR DEL GEN, NO SON ESTRICTAMENTE NECESARIAS PARA CONFERIR EL PATRON DE EXPRESION DE UBX EN EMBRIONES TARDIOS Y EN DERIVADOS IMAGINALES, ASI COMO TAMPOCO LO SON PARA CIERTOS PROCESOS DE REGULACION DE ESTE GEN. LAS INTERACCIONES EN TRANS EN EL GEN UBX SON MODULADAS POR LA PRESENCIA Y NATURALEZA DE LOS PROMOTORES EN CIS. SE HA DETERMINADO TAMBIEN QUE LOS DOMINIOS DE ACTIVACION DE LAS REGIONES REGULADORAS IAB, QUE CONTROLAN LA EXPRESION DE LOS GENES ABD-A Y ABD-B EN SEGMENTOS ESPECIFICOS, SON FIJADOS ANTERIORMENTE, MEDIANTE REPRESION, POR LOS GENES HB Y KR. EL GENTLL LIMITA POSTERIORMENTE EL DOMINIO DE ABD-A Y ACTIVA LA EXPRESION TEMPRANA DE LOS DOS ELEMENTOS (M Y R) DE ABD-B. ADEMAS SE HA INDUCIDO UNA CLASE DE MUTACIONES QUE DEFINEN LA FUNCION IAB8-9, QUE CONTROLA LA FORMACION DE LOS ULTIMOS SEGMENTOS DE ABDOMEN A TRAVES DE LA REGULACION DEL GEN ABD-B. LA REGION POSTERIOR DEL ABDOMEN, QUE INCLUYE LA REGION GENITAL Y LA ANALIA, PROVIENE DE UN UNICO DISCO IMAGINAL, EL DISCO IMAGINAL GENITAL. PARA ESTUDIAR LOS PROCESOS DE DESARROLLO EN ESTE DISCO, HE LLEVADO A CABO LA CARACTERIZACION GENETICA DEL MISMO. EL DISCO GENITAL ESTA COMPUESTO POR TRES PARASEGMENTOS, CADA UNO DE LOS CUALES CORRESPONDE A UN PRIMORDIO, GENITAL DE HEMBRA, GENITAL DE MACHO Y ANAL, QUE ESTARIAN DETERMINADOS POR LOS GENES ABD-A, ABD-B Y CAD. ASI MISMO, SE HA CARACTERIZADO UNA CLASE DE MUTACIONES QUE PARECEN AFECTAR UN ELEMENTO AISLANTE ENTRE LOS GENES UBX Y ABD-A, Y QUE PERMITIRIA LA INDEPENDENCIA DE LA REGULACION DE AMBOS GENES, ADYACENTES EN EL CROMOSOMA. FINALMENTE, SE HA DEMOSTRADO QUE LOS PRODUCTOS DE LOS GENES UBX, ABD-A Y ABD-B SON FUNCIONALMENTE EQUIVALENTES EN LA ESPECIFICACION DE CIERTOS APENDICES, MIENTRAS QUE CADA UNO DE ELLOS DETERMINA IDENTIDADES SEGMENTALES DISTINTAS EN EL EJE PRINCIPAL DEL CUERPO DE LA MOSCA.

Autor: CASAS HERRANZ CELIA.
Año: 1995.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIENCIAS MEDICAS BASICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: FUNDAMENTOS BIOLOGICOS DE LA SALUD.

Resumen: SE HA CARACTERIZADO EL PAPEL DEL PRODUCTO DEL GEN RCS1 COMO FACTOR TRANSCRIPCIONAL QUE REGULA LA EXPRESION DEL SISTEMA DE ALTA AFINIDAD DE CAPTACION DE HIERRO EN S. CEREVISIAE, DEMOSTRANDOSE EL PAPEL DIFERENCIAL SOBRE LA EXPRESION DE FRE1 Y FRE2 (QUE CODIFICAN PARA FERRO-REDUCTASAS) Y FET3 (QUE CODIFICA PARA UNA OXIDASA DEPENDIENTE DE COBRE ASOCIADA AL TRANSPORTADOR). LOS MUTANTES CARENTES DEL GEN RCS1 POSEEN NIVELES BASALES MUY REDUCIDOS DE HIERRO EN EL CITOPLASMA, LO QUE LES INCAPACITA PARA CRECER SOBRE FUENTES RESPIRABLES DE CARBONO. ESTA INCAPACIDAD ES SUPRIMIDA POR LA ADICION DE HIERRO AL MEDIO. LA PROTEINA RCS1 SUFRE CAMBIOS POST-TRADUCCIONALES (FOSFORILACION) DEPENDIENTES DEL ESTADO NUTRICIONAL DE LA CELULA. LA SOBREEXPRESION DE RCS1 CAUSA LA PARADA HOMOGENEA DE LAS CELULAS EN LA FASE G1 DEL CICLO CELULAR, NO SIENDO ESTE HECHO DEBIDO A TOXICIDAD POR HIERRO NI A CARENCIA DE ESTE METAL.

Autor: CATASUS COLS LLUIS.
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: A PARTIR DE UNA GENOTECA DE CDNA DE PANCREAS HUMANO MEDIANTE LA APLICACION DE ESTRATEGIAS DE RASTREO IMMUNOLOGICAS Y DE RASTREO CON SONDAS DE ACIDOS NUCLEICOS MARCADOS RADIOACTIVAMENTE SE HAN CONSEGUIDO AISLAR LOS CDNAS COMPLETOS CORRESPONDIENTES A LAS PROCARBOXIPEPTIDASA PANCREATICAS HUMANAS A1, A2 Y B1. ESTOS CDNAS SE HAN CLONADO SECUENCIADO COMPLETAMENTE Y SE HAN DETERMINADO LAS SECUENCIAS AMINOACIDICAS DERIVADAS DE LA SECUENCIA NUCLEOTIDICA. COMPLETANDO ESTE TRABAJO DE SECUENCIACION SE HA REALIZADO UN MODELADO TRIDIMENSIONAL DE LA PROCARBOXIPEPTIDASA A2 POR APROXIMACION DE GEOMETRIA DE DISTANCIAS (PROGRAMA DIANA). FINALMENTE A PARTIR DEL CDNA DE LA PROCARBOXIPEPTIDASA A2 SE HA DISEÑADO Y CONSTRUIDO EL GEN CORRESPONDIENTE AL DOMINIO GLOBULAR DEL SEGMENTO DE ACTIVACION DE LA PROCARBOXIPEPTIDASA A2. ESTA CONSTRUCCION SE HA CLONADO EN EL VECTOR DE EXPRESION PIN-III-OMPA3 Y SE HA OBTENIDO Y PURIFICADO LA PROTEINA RECOMBINANTE. ESTA PROTEINA RECOMBINANTE DENOMINADA ADA2 HA SIDO CARACTERIZADA MEDIANTE TECNICAS BIOQUIMICAS (MR, PI, COEFICIENTE DE EXTINCION MOLAR,...) Y MEDIANTE TECNICAS ESTRUCTURALES (RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR RMN DE PROTON MONODIMENSIONAL Y BIDIMENSIONAL).

Autor: CHIQUERO LOZANO M. JESUS.
Año: 1995.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: EL OBJETIVO DE LA PRESENTE TESIS DOCTORAL HA SIDO LA OBTENCION Y CARACTERIZACION DE UN MODELO EXPERIMENTAL DE FENOTIPO DE MULTIRRESISTENCIA A FARMACOS EN EL PROTOZOO PARASITO LEISHMANIA. PARA ELLO SE HA SELECCIONADO IN VITRO UNA LINEA DE LEISHMANIA TROPICA RESISTENTE A ALTAS CONCENTRACIONES DE DAUNOMICINA QUE PRESENTA UN FENOTIPO DE MULTIRRESISTENCIA. ESTE FENOTIPO ES INESTABLE EN AUSENCIA DE FARMACO Y SE CARACTERIZA POR PRESENTAR UNA RESISTENCIA CRUZADA A FARMACOS NO RELACIONADOS ESTRUCTURAL NI FUNCIONALMENTE CON EL FARMACO INDUCTOR. ESTUDIOS MEDIANTE CITOMETRIA DE FLUJO DEMUESTRAN QUE ESTE FENOTIPO DE RESISTENCIA ESTA RELACIONADO CON UN SIGNIFICATIVO DESCENSO EN LA ACUMULACION INTRACELULAR DE FARMACO. LA LINEA RESISTENTE PRESENTA AMPLIFICADO UN GEN MDR EN FORMA DE ELEMENTO EXTRACROMOSOMICO CIRCULAR DE APROXIMADAMENTE 30 KB. EL PRODUCTO DE TRANSCRIPCION DE ESTE GEN POSEE UN TAMAÑO DE 12,5 KB Y CODIFICA PARA UNA GLICOPROTEINA-P DETECTADA MEDIANTE ANTICUERPOS PLICLONALES. EL FENOTIPO DE RESISTENCIA A FARMACOS NO REVIERTE A CONCENTRACIONES SUBINHIBITORIAS DE LOS QUIMIOSENSIBILIZADORES CICLOSPORINA A Y VERAPAMIL, REQUIRIENDOSE CONCENTRACIONES SUPERIORES PARA INCREMENTAR LA ACUMULACION DE DAUNOMICINA EN EL INTERIOR CELULAR. ESTOS QUIMIOSENSIBILIZADORES PRODUCEN A ALTAS CONCENTRACIONES UN INCREMENTO EN LOS NIVELES DE ARNM DEL GEN MDR. ESTE INCREMENTO ESTA REGULADO POSTRANSCRIPCIONALMENTE EN EL NUCLEO Y NO PRESENTA CONSECUENCIAS FUNCIONALES SOBRE LA RESISTENCIA A DAUNOMICINA. LOS ESTUDIOS DE CINETICA RAPIDA MEDIANTE LA TECNICA DE "STOP-FLOW" SOBRE MEMBRANAS DE PARASITOS, INDICAN QUE LA LINEA RESISTENTE ES MENOS PERMEABLE A DAUNOMICINA QUE LAS LINEAS SALVAJES. LA LINEA RESISTENTE PRESENTA ADEMAS RESISTENCIA CRUZADA FRENTE A FARMACOS QUE NO SON SUSTRATOS DE LA GLICOPROTEINA-P TALES COMO GLUCANTIME. DICHA RESISTENCIA REVIERTE POR LA ACCION DE LA BUTIONINA SULFOXIMINA, INHIBIDOR DE LA SINTESIS DE GLUTATION. ESTOS RESULTADOS JUNTO CON LOS ANTERIORMENTE DESCRITOS, CONFIRMAN LA COEXISTENCIA DE VARIOS MECANISMOS INDEPENDIENTES QUE CONTRIBUYEN AL FENOTIPO DE RESISTENCIA.

Autor: CLAUDIO VAZQUEZ ESTEFANIA.
Año: 1995.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL TNF ALFA ES UNA CITOQUINA SINTETIZADA POR UNA GRAN VARIEDAD DE TIPOS CELULARES EN RESPUESTA A DIVERSOS ESTIMULOS EXTERNOS. HA SIDO ORIGINALMENTE CARACTERIZADA POR SU ACTIVIDAD ANTI-TUMORAL AUNQUE POSTERIORMENTE SE HA VISTO IMPLICADA EN NUMEROSAS ACTIVIDADES BIOLOGICAS, COMO POR EJEMPLO LA REACCION INFLAMATORIA Y LA REORGANIZACION DE TEJIDOS. LA ACCION DEL TNF ALFA VARIA MUCHO DEPENDIENDO DEL TIPO CELULAR SOBRE EL QUE ACTUE. EN LA PATOGENESIS DE LA SILICOSIS, SE PIENSA QUE LA FAGOCITOSIS DE LAS PARTICULAS DE SILICE POR LOS MACROFAGOS PRODUCE UNA REACCION INFLAMATORIA QUE CONLLEVA LA PROLIFERACION DE FIBROBLASTOS, LOS CUALES SIMULTANEAMENTE PRODUCEN COMPONENTES DE LA MATRIZ EXTRACELULAR, CARACTERISTICO DEL DESARROLLO DE LA FIBROSIS. HEMOS ESTABLECIDO LAS CONDICIONES DE ACTIVACION DE MACROFAGOS "IN VITRO" POR LA FAGOCITOSIS DE PARTICULAS DE SILICE DESPUES DE 48 H EN UNAS CONDICIONES DONDE EL DAÑO CELULAR ES MINIMO. LA ACTIVACION DE MACROFAGOS SE DETERMINO MEDIANTE EL ANALISIS DE LA PRODUCCION DE NO2 Y DE TNF ALFA. ADEMAS SE HA ESTUDIADO EL EFECTO BIOLOGICO DEL TNF ALFA SOBRE VARIAS LINEAS CELULARES DE FORMA QUE SE PUEDE ESTABLECER UNA RELACCION ENTRE RESPUESTA CITOTOXICA Y ORIGEN TUMORAL DE LAS CELULAS. EL TNF ALFA LLEVA A CABO SU ACCION A TRAVES DE DOS RECEPTORES DE MEMBRANA QUE SE DISTINGUEN POR SU TAMAÑO (60 Y 80 KDA). AUNQUE VARIOS SISTEMAS DE SEGUNDOS MENSAJEROS SE VEN IMPLICADOS EN LA SEÑAL DEL TNF ALFA, EL ACOPLAMIENTO DE LA SEÑAL CON LOS RECEPTORES ES DESCONOCIDO. RECIENTEMENTE SE HAN IDENTIFICADO VARIAS PROTEINAS QUE SE ASOCIAN A LOS RECEPTORES DE TNF ALFA, ALGUNAS DE ELLAS PERTENECEN A LA FAMILIA DE PROTEINAS TRAF. ESTAS PROTEINAS DE ALGUNA FORMA PONDRIAN EN MARCHA LAS DIFERENTES RUTAS DE SEÑALES ACTIVADAS POR EL TNF ALFA, DONDE ESTARAN IMPLICADOS PROCESOS DE FOSFORILACION QUE CONDUCEN A LA ACTIVACION DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION NFK B. HEMOS IDENTIFICADO DOS PROTEINAS QUE PODRIAN PARTICIPAR EN EL MECANISMO DE ACCION DEL TNF ALFA, YA QUE SON PROTEINAS DE LA FAMILIA TRAF. ESTAS PROTEINAS SE CARACTERIZAN POR POSEER UN MOTIVO ESTRUCTURAL DENOMINADO TRAF, RESPONSABLE DE LA UNION A LOS RECEPTORES DE TNF. ADEMAS HEMOS ESTUDIADO LOS EFECTOS DE ESTA CITOQUINA SOBRE LA LINEA CELULAR WEHI 164, UN FIBROSARCOMA SENSIBLE AL TNF ALFA. DESPUES DEL TRATAMIENTO DE LAS CELULAS CON TNF ALFA, NFKB SE TRANSLOCA AL NUCLEO, A LA VEZ QUE OCURRE LA DEGRADACION DE LA PROTEINA INHIBIDORA IKBALFA. LA LOCALIZACION NUCLEAR DE NFKB ES UN PROCESO RAPIDO, SIN EMBARGO ESTE FACTOR DE TRANSCRIPCION PERMANECE EN EL NUCLEO DURANTE LARGO TIEMPO BAJO EFECTO DEL TNF ALFA. HAY QUE DESTACAR EL HECHO DE QUE EL EFECTO CITOTOXICO DEL TNF ALFA EN CELULAS WEHI 164 PARECE SER DEPENDIENTE DE LA LOCALIZACION NUCLEAR DE NFKB. LA ACTIVACION DE ESTE FACTOR DE TRANSCRIPCION ESTA CONTROLADA POR PROCESOS PROTEOLITICOS Y DE FOSFORILACION. ESTE HECHO SE HA PUESTO DE MANIFIESTO UTILIZANDO INHIBIDORES DE AMBOS PROCESOS, ASI CON INHIBIDORES DE LA PROTEOLISIS SE BLOQUEA LA ACTIVACION DE NFKB. LA FOSFORILACION PARECE REGULAR LA ACTIVACION DE ESTE FACTOR DE FORMA POSITIVA Y NEGATIVAMENTE. TRATAMIENTOS CON CALFOSTINA C BLOQUEAN LA ACTIVACION DE NFKB POR TNF ALFA, MIENTRAS QUE LA ESTAUROSPORINA, UN INHIBIDOR MAS INESPECIFICO, AUMENTA EL EFECTO DEL TNF ALFA. ESTOS DATOS PARECEN INDICAR QUE ES NECESARIA UNA FOSFORILACION BASAL PARA QUE LA PROTEINA IKB ALFA PUEDA UNIRSE A NFKB. EL USO DE INHIBIDORES DE FOSFATASAS HA DEMOSTRADO QUE TAMBIEN PARTICIPAN EN EL MECANISMO DE ACTIVACION DE NF KB POR ACCION DEL TNF ALFA. HEMOS ESTUDIADO TAMBIEN EL EFECTO DEL TNF ALFA SOBRE LA LINEA CELULAR NIH 3T3, EN LA CUAL EL TNF ALFA TIENE EFECTOS PROLIFERATIVOS. HEMOS COMPROBADO QUE EL EFECTO DOSIS-RESPUESTA Y LA CINETICA DE ACTIVACION ES LA MISMA EN AMBAS LINEAS CELULARES. SIN EMBARGO SE HAN OBSERVADO DIFERENCIAS A NIVEL DE LA ACTIVACION DE LA PROTEINA MAPK Y A NIVEL DE LA COMPOSICION DE LOS DIMEROS NFKB.

Autor: COCO ALONSO M. JOSE.
Año: 1995.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA BIOLOGIA MOLECULAR. PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN NUESTRO ESTUDIO PRETENDEMOS: 1. DETECTAR DIFERENCIAS EN LOS MECANISMOS SUBYACENTES A LA FATIGA AL EJERCICIO ENTRE ANIMALES JOVENES Y VIEJOS, Y SI ESTOS ESTAN RELACIONADOS CON EL BALANCE REDOX TISULAR; 2. ESTUDIAR SI EL ENTRENAMIENTO MODIFICA ESTOS MECANISMOS DE FATIGA. ES DECIR, SI EL BALANCE OXIDANTES-ANTIOXIDANTES, IMPLICADO EN LOS MECANISMOS DE ENVEJECIMIENTO AFECTA A LOS MECANISMOS DE FATIGA, Y ES SUSCEPTIBLE DE SER MODIFICADO ADAPTATIVAMENTE CON EL ENTRENAMIENTO. PARA ELLO, SOMETEMOS A RATAS WISTAR JOVENES Y VIEJAS A EXTENUACION CON O SIN ENTRENAMIENTO PREVIO. DETERMINAMOS PARAMETROS SERICOS - GLUCEMIA, LACTATO, UREA, ACIDO URICO, TRIGLICERIDOS, COLESTEROL, CALCIO, FOSFORO, TGO Y TGP - Y EN HIGADO Y MUSCULO SOLEO MDA, SOD Y GLUCOGENO, PARA DEFINIR EL STATUS METABOLICO FINAL. LOS RESULTADOS OBTENIDOS CUMPLEN LOS OBJETIVOS PLANTEADOS Y NOS SUGIEREN QUE EL ANIMAL JOVEN POSEE MAS CAPACIDAD DE ADAPTACION AL ESTRES OXIDATIVO QUE EL ANIMAL VIEJO, Y ESTO SE DEBE A QUE EL ENTRENAMIENTO SUSCITA ESTOS MECANISMOS ADAPTATIVOS SOLO EN LOS JOVENES PERO NO EN LOS VIEJOS.

Autor: COLMENAREJO SANCHEZ GONZALO.
Año: 1995.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: SE HA CARACTERIZADO LA INTERACCION Y FOTOQUIMICA CON ACIDOS NUCLEICOS DE CINCO CANDIDATOS DE UN NUEVO GRUPO DE DROGAS QUIRALES, LOS VIOLOGENOS DERIVADOS DE N,N-DIALQUIL 6-(2-PIRIDIL)FENANTRIDINA. SE HAN UTILIZADO MULTIPLES TECNICAS BIOFISICAS, ESPECTROSCOPICAS, FOTOQUIMICAS Y DE MODELADO MOLECULAR. LA INTERACCION CON DNA ES FUERTE Y POR INTERCALACION EN TODOS LOS CASOS. LOS CANDIDATOS SIN GRUPOS AMINO EN LA FENANTRIDINA SON LUMINISCENTES Y FOTOOXIDAN LAS BASES DEL DNA. PRESENTAN RAPIDA DISOCIACION, INTERCALACION PARCIAL Y UNION CONDUCIDA TERMODINAMICAMENTE POR EFECTO DE POLIELECTROLITO. LAS DROGAS CON GRUPOS AMINO NO SON LUMINISCENTES; SU DISOCIACION ES LENTA, LA INTERCALACION CLASICA Y LA KB DOS ORDENES DE MAGNITUD MAYOR. LA UNION ESTA CONDUCIDA POR EFECTO DE POLIELECTROLITO Y OTRAS CONTRIBUCIONES (VAN DER WAALS, EFECTO HIDROFOBICO, ETC). EN TODOS LOS CASOS LA UNION ES ENANTIOESPECIFICA, PUDIENDOSE SEPARAR EN ALGUNOS CASOS LOS DOS ATROPISOMEROS. EN TODOS LOS CASOS LAS DROGAS PRESENTAN ACTIVIDAD FOTONUCLEASICA, PROBABLEMENTE INICIADA POR FOTOOXIDACION DE LAS BASES DEL DNA.