ENZIMOLOGIA, 3

Autor: DIAZ ARRIBAS JUAN CARLOS.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE QUIMICA ORGANICA (CSIC).

Resumen: La lactasa intestinal (también denominada complejo Lactasa-Florizín Hidrolasa o LPH) es una glicosidasa localizada en la membrana de los enterocitos del intestino delgado de mamíferos proyectándose hacia el lúmen del mismo. Esta enzima posee dos centros activos diferentes localizados en dos regiones homólogas de la misma cadena polipeptídica: uno de ellos encargado de la hidrólisis de la lactosa (el azúcar más de la leche) y el otro, aunque actualmente se desconoce su sustrato natural, viene siendo tradicionalmente ensayado con el glicósido denominado florizina. En esta tesis, mediante el empleo de inhibidores irreversibles de glicosidasas del tipo 2-desoxi-2-fluoroglicósidos y el concurso de la espectroscopía de masas con ionización asistida por electrospray (ESI-MS), ha sido posible asignar inequívocamente cada una de las dos actividades catalíticas de la lactasa intestinal de cordero lechal, lactasa y florizín-hidrolasa, a cada uno de los dos centros activos de la enzima: la actividad lactasa el centro localizado en la región IV de la enzima y la actividad florizín-hidrolasa al centro presente en la región III. Asímismo, mediante experimentos de RMN de "Efecto Nuclear Overhauser Transferido" (tr-NOE), se ha realizado el estudio de la conformación que en disolución adopta un análogo no hidrolizable de la glucosidasa blgA de Paenibacillus polymyxa dentro del centro activo de la misma. La información obtenida de estos estudios es útil para conocer el mecanismo catalítico de estas enzimas y para el diseño de inhibidores y análogos de sustrato con diferentes objetivos terapéuticos.

Autor: ATENCIA FERNANDEZ EVA ANA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD MEDICINA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA MADRID.

Resumen: En este trabajo se describe la reacción de síntesis de (di) nucleósid polifosfatos catalizada por la T4 RNA ligasa ( EC6,5.1.3). La RNA ligasa del bacteriófago T4 cartaliza reacciones inter- o intramolecular con formación de enlaces fosfodiéster en el RNA o DNA. La formación de este enlace requiere ATP como cofactor y tiene lugar a través de un complejo intermediario E-AMP. ( E=enzima), con liberación de pirofosfato. La síntesis de (di) nucléosido polifosfatos ocurre como consecuencia del desplanzamiento del AMP del complejo E-AMP por polifosfatos y por nucléosidos di- y trifosfatos. La síntesis de (Di) nucleotidos requiere un catión divalnete (Mg o Mn), tiene lugar a un Ph optimo de 7,4;es inhibida por Na, K y NH4,por le polifosfato p15 y por nucelósido 5', 3' (2') biosfosfatos reaccionan con el complejo E-AMP para formar los derivados 5'-adenililados del nucleósido 5', 3' (2')-biosdosdato correspondiente (APpN(3'(2'))p). El derivado 5'-adenililado de la citidina-5', 3'-bisfosfato ( Ap2Cp) ( que se forma en presencia de ATP y pCP) es utilizado por la T4 RNA ligasa como substrato para transferir el residuo PcP a los grupos 3' -oh del diguanosintetrafosfato ( Gp4g) dando lugar a Gp4GpCp y a pCpGp4GCp en una relación de 10:1 la caracterización del Gp4GpCp se llevo a cabo por tratamiento con fosfodiesterada y fosfatasa alcalina y por análisis ( cromatografico y espectrofotometrico) de los productos de reacción, por HPLC.Los valores de Km aparentes calculados para el Gp4G y el Ap2Cp en esta reacción. Fueron alrededor de 4 y 0,4mM, respectivamente, La eficiencia relativa de los siguientes dinucleósido polifosfatos como aceptores del pCp del Ap2Cp fue lasiguiente: Gp4G ( 100); Gp5G ( 101);Ap4G (47), Ap4A(39). Gp2G y GpsG no fueron sustratos de la reacción.Los dinuvleótidos con dos guaninas y al menos 4 fosfatos internos fueron los sustratos preferidos para aceptar pcp en la posición 3'-OH.

Autor: TORRECILLA ROJAS M. AMPARO.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Este trabajo fue una consecuencia del estudio de la posible regulación de la CTP sintetasa por dinuceósidos polifosfatos. Aunque no se pudo detectar dicha actividad en extractos de hígado de rata, indirectamente y como resultado de ello se observó síntesis de ácido úrico a partir de ATP, lo que condujo a hacer un estudio sistemático en el que se determinó la velocidad de síntesis de ácido úrico a partir de derivados de adenina, guanina, hipoxantina y xantina. Para ello se utilizaron dos métodos: espectrofotométrico y cromatográfico. Mediante este último se estudió el destino metabólico del AMP, IMP, GMP y XMP en el citosol de hígado de rata y se determinaron los valores de velocidad máxima (Vmax) de las enzimas implicadas en su metabolismo. En ausencia de ATP, el AMP se degrada vía IMP. Para determinar la contribución de cada enzima en la degradación de los NMPs los valores de Vmax y los datos de Km y Ki tomados de la bibliografía, se introdujeron en un sistema de ecuaciones diferenciales que describían la concentración de sustrato y de sus productos a lo largo del tiempo. Para las enzimas 5' -nucleotidasa y AMP deamonasa se introdujeron factores que afectaban algunos parámetros cinéticos de la ecuación de velocidad en función de la concentración de ATP. Las ecuaciones diferenciales se resolvieron con ayuda del Programa Mathematica 3.0 utilizando un computador Power Macintosh G3. Con este método teórico se obtuvieron resultados que concordaron con los resultados experimentales, lo que permitió simular situaciones no factibles de ser estudiadas IN VITRO, tales como la participación de las enzimas presentes en el citosol en el metabolismo de AMP, IMP y adenosina, o la influencia de concentraciones nM-uM de ATP sobre el metabolismo del AMP. Se hizo un estudio teórico similar utilizando datos cinéticos de las enzimas presentes en el citosol de cerebro de rata.

Autor: RUIZ PEREZ JOSE LUIS.
Año: 1999.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALICANTE.

Resumen: Se ha purificado la NAD+ -glutamato deshidrogenasa de la bacteria termófila Thermus termophilus HB8. La estructura de la proteína es un hexámero de 280 Kda. Presenta un óptimo de actividad enximática en el tampón Tris/HC1 50mM, EDTA 2mM a pH8. La enzima es estable entre 65 y 75º C con un óptimo a 72º C, presentado un tiempo de vida media de 0,32 horas a 85º C. sE han realizxado estudios de fluorescencia que demuestran la naturaleza compacta de la proteína. La urea no actúa como agente desnaturalizante para la GDH de T. Thermophilus. La proteína presenta un mecanismo de velocidades iniciales secuencial donse el coenzima NAD+ es el primero en unirse ala enzima y el producto NADH el último en liberarse. Empleando un producto de PCR de 300 pb. Se ha clonado y secuenciado un gen que codifica para glutamato dehidrogenasa de t. Thermophilus HB8. De forma continuay corriente abajo a este gen, aparece otro que codifica para otra glutamato deshidrogenasa. sE ha construido un modelo estructural para la glutamajto deshodrogenosa secuenciada. Se ha expresado el gen en células de E. Coli BL21 (DE3) utilizando los vectores de expresión citoplasmáticos pET-3a y pET-14 b.

Autor: GERNASINI RODRIGUEZ GUILLERMO.
Año: 1999.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Dado que está demostrada la presencia de varias formas del citrocromo P450 en el sistema nervioso central, y teniendo en cuenta que la existencia de sustratos endógenos para el CYP450 no está suficientemente esclarecida se estableción como objetivo de este trabajo al estudiar la relación existente entre la actividad de tres isoenzimas de este citocromo (CUP2C9, CYP3A y CYP1A2) y el metabolismo de amina cerebrales. Se estudió la modulación de la actividad de las tres enzimas estudiadas por parte de diversos neurotransmisores y sustancias relacionadas, se identificarón las sustacias capaces de inhibir la actividad enzimática y se determinó el tipo de inhibición producida. Una vez identificados los poternciales candidatos a sustrato de la enzima en cuestión se estudió su posible biotransformación por la enzima ihibida. De las sustacias endógenas ensayadas triptamina, depamina, tirosina, triptofol y adrenalina inhibieron la actividad CYP1A2 en microsomas hepáticos humanos, serotonina y triptamina de forma competitiva. Asimismo, adrenalina y serotonina inhibieron la actividad CYP2C9 y por último, serotonina, 5-hidroxitriptofol y adrenalian inhibieron la actividad CYP3A, haciéndolo serotonina de forma competitiva. La inhibición de estos neurotransmisores y sus precursores y metabolitos sobre diferentes isoenzimas CYP450 no es un artefacto producido por la ihibición de la actividad NADPH reductasa aparejad al citocrmo P450,

Autor: VERGELES BLANCA JOSE M..
Año: 1999.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las nucleótido-pirofosfatasas hidrolizan derivados fosfoanhídrido y fosfodiéster de 5' nucleótidos, dando NMP como producto. En una mezcla de agua y alcohol, el alcohol compite con el agua como agente de rotura, de forma que se produce una mezcla de NMP y NMP-O-alquilo como productos de hidrólisis y alcoholisis, respectivamente. Se han estudiadjo varios aspectos de las actividades aloholíticas de las nucleótido-pirofosfatasas de veneno de serpiente y de hígado de rata. (1) se desarrolló un modelo teórico para dar cuenta de la cinética de la alcoholisis y la hidrólisis a concentraciones de alcohol crecientes. El modelo consiste en una pareja de ecuaciones de velocidad en la que las velocidades de alcoholisis (va) e hidrólisis (Vww) en relación a la concentración de alcohol, bajo la suposición de que el alcohol y el agua son sustratos competitivos con coopertividad negativa y cinética hiperbólica, respectivamente. Los resultados cinéticos experimentales, de esta tesis y de otros trabajos, se ajustaron bien a las predicciones del modelo. (2) Se demostró la participación de alcoholes R-CH2OH, con grupos R eléctricamente cargados, en las reacciones alcoholíticas de ATP catalizadas por nucleótidopirofosfatasas, incluyendo reacciones con glicerol 2-fosfato, sn-glicerol 3-fosfato y serina. También se demostró la participación de los grupos OH secundarios de glicerol y sn-glicerol 3-fosfato. En todos los casos se demostró la formación del correspondiente AMP-O alquilo. (3) Se estudiarjon las respuestas cinétics de las reacciones alcoholíticas de glicerofosfatos y serina frente a su propa concentración y a la adición de fosfato o cloruro sódico. Se obtuvo evidencia a favor de un subsitio activo que interacciona con el grupo fosforilo de los glicerofosfatos, de manera que se favore la reacción del alcoholisis. Esto es parte de una evidencia más amplia que demuestra de los alcoholes puden establecer varia interaciones favorables en el centro activo de la snucleótido-pirofostasas, particularmente la de hígado de rata, que de esta forma parece estar bien dotada para actuar como adnilil-transferasa a alcoholes específicos. Se plantea la hipótesis de que las nucleótido-pirofosfatasas de mamífero podrían ser agentes adenililantes de proteínas en su localización natural en las membranas. (4) Se puso a prueba con buenos resultados el uso de un sistema regenerador de ATP para aumentar el grado de conversión de ATP a AMP-O glicerilos en mezclas de reacción con nucleótido-pirofosfatasa de veneno de serpiente.

Autor: CAÑO AGUILAR AFRICA.
Año: 1999.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: GRANADA.

Resumen: La detección precoz de la lesión renal en los trastornos hipetensivos del embarzo, es un reto importante de cara al pronóstico de la enfermedad. En la precclampsia se producen una serie de cambios estructurales renales, tanto a nivel glomerular como tubular, siendo la endoteliosis glomerular la lesión más caracteristica. Se han venido usando diveros marcadores de lesión renal como el ácido úrico,la microalbuminuria y la excreciónurinaria de N-acetil-beta-glucosaminidasa (NAG), esta es un enzima lisosomico que degrada la glucosaminoglicanos (GAG) que son parte fundamental de la membrana basal glomerualr. En situaciones de HTA en la gestación este enzima está aumentado. Determinados los GAG enorina de 24h. Según el método descrito por Pennock (j. Clin. Path 1976; 29;111-123) en 148 mujeres de las cuales 70 eran gestantes sanas distribuidas según el trimestres y gestación, 21 casos eran pacientes con HTA transitoria y 31 pacientes con preeclamsia y 28 eran mujeres sanas. Hemos comprobado que al ser la excreciónurinaria de GAG fiel reflejo de la degradación de la MBG en diferentes situaciones, demostramos que su exreción está aumentada en la preeclampsia de forma estadisticamente significativa en relación a la excreción de GAG en los diferentes trimestres, en la HTA transitoria de la gestación y en las mujeres sanas. Asimismo hemos correlacionado estos resultados con otros parámetros de lesiónrenal como son la uricemia, el NAG, el aclaramiento de cratinina y la cr atinina s erica; Encontramos correlación con significaciónestadistica en el caso de la preeclampsia con el NAG, y el ácido úrico. Conluimos que los GAG sufren un aumento progresivo durante la gestación que llega el máximo en el momento del parto. Los GAG se comportan de forma similar en el tercer trimestre y en la HTA transitoria lo que indica que no existe lesion renal y que su pronostico es bueno. Los GAG se alteran de forma precoz en aquellas mujeres con preeclampsia por lo que es posible que puedan utilizarse como marcadores de lesión renal. El NAG traduce un daño turbular y es probable que sean responsables del aumento en la exreción de GAG.

Autor: VILLEN SALAN M. INMACULADA.
Año: 1999.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: SERVICIO DE MEDICINA INTERNA. HOSP. CLINICO GRANADA.

Resumen: Para la realización de nuestro trabajo con un total de 169 individuos distribuidos en dos grupos: Un grupo control constituído por 52 sujetos sanos, y un grupo de 117 individuos todos ellos portadores de litiasis renal cálcica, que a su vez dividimos según tuvieran o no la función renal conservada. Dada la improtancia que tanto los glucosaminoglicanos como el enzima encargadode su degradación, la n-acetil-b-glucosaminidasa poseen en numerosos sprocesos tanto renales como sistémicos, con este trabajo hemos querido: - Estudiar el comportamientod e la excreción urinaria de GAGs en sujetos conurolitiasis, según el grado de disfunción renal que estos presenten. - Detectar el daño parenquimatoso renal en sujetos con nefropatía obstructiva por urolitiasis, mediante la cuantificación de la actividad enzimática del enxima N-Acetil-b-Glucosaminidasa. - Correlacionar cada uno de estos parámetros entre sí, en cada uno de los grupos formados para el estudio.

Autor: CARNICAS CONEJO M. ESTRELLA.
Año: 1999.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Se ha estudiado la actividad peroxidasa de un agarófito, Gracilaria tenuistipitata, en diferentes condiciones lumínicas, empleando desde técnicas moleculares a técnicas histológicas. En plantas aclimatas a baja y a alta irradiancia, la función de las peroxidasas se relaciona con los procesos de crecimiento: a menor tasa de creciiento (baja irradiancia), mayor actividad peroxidasa. La actividad que controla el crecimiento se localiza en la pared celular y en los espacios intercelulares subcorticales y es de dos tipos. En primer lugar, las peroxidasas inespecíficas son las responsables de formar puentes dtirosina y diferúlicos entre las proteínas y los polisacáridos de la pared a baja irradiancia y, en segundo lugar, la ascorbato peroxidasa produce monodehidroascorbato y dehidroascorbato que interaccionan con las proteínas estructurales de pared, impidiendo el entrecruzamiento entre las mismas. Cuando se somenten las algas a un aumento de irradiancia, aumenta la actividad delas peroxidasas citosólicas que eliminan el peróxido de hidrógeno tóxico producido en condiciones de alta irradiancia y desapararece la actividad de la pared celular y de los espacios intercelulares. La pared es más flexible y la tasa de crecimiento aumenta.

Autor: LOPEZ DELGADO M. EUGENIA.
Año: 1999.
Universidad: CANTABRIA .
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En 1973 Rotruck y colaboradores descubren que el selenio (Se) es un componente integral de la glutationperoxidasa, un enzima clave en la inactivación de peróxidos en el organismo humano, y por tanto del sistema antioxidante. Desde entonces se ha descubierto la participación esencial del Se en diversos enzimas y se ha realcionado su deficiencia conun aumento del riesgo de padecer distintas enfemedades. En España, los estudios realizados hasta la fecha indican que existe deficiencia de Se en la población. Este trabajo se ha justificado en la necesidad de conocer el estado acutal de los niveles de Se en la población de Cantabria. Con este fin se ha propuesto los siguientes objetivos principales: determinar los niveles de selenio enla pobalciónde Cantabria y analizar las posibles diferencias en los niveles de selenio entre diferentes comarcas de Cantabria. Y como objetivos secundarios: relacionar los niveles de selenio obtenidos con variables socio-demográficas, hábitos tóxicos y enfermedades crónicas de la población un estudio y evaluar si los niveles encontrados de este elemento son adecuados. Se ha utilizado un diseño de tipo transversal o diseño de prevalencia. La muestra la formaron 446 sujetos. El muestreo fue estratificado y por conglemerados. Además fue aleatorio para cada conglomerado. Se dividió Cantabria en 7 comarcas. Los conglomerados estaban compuestos por los municipios incluidos en cada comarca. En cada una de éstas se estratificaron por edad y sexo, y elegidos al azar del padrón municipal de los ayuntamientos seleccionados. El selenio fue analizado en los trozos sobrantes de las diez uñas de los pies de cada sujeto, mediante el análisis de activación de neutrones instrumental. Este análisis se realizó en el Interfaculty Ractor Institute, de la Techical University de Delft (Holanda). El nivel medio de Se hallado en Cantabria es uno de los más bajos de Europa, (0,480 ug/g). Todas las comarcas se encuentran en una situación de deficiencia de este elemento, aunque hemos encontrado un nivel de Se significativamente más elevado en la población residente en la comarca Costera (0,487 ug/g), que en la comarca de Liébana, (0,449 ug/g). Los habitantes de las zonas rurales tienen unos niveles signficativamente menores que los de las zonas urbanas, 0,455 ug/g y 0,490 ug/g respectivamente. Esta diferencia puede tener relación con el mayor grado de autoabastecimiento alimentario de las poblaciones rurales. La edad, el sexo y el hábito de fumar también han infludio de una forma independiente sobre el nivel de Se. En este sentido, tiene un nivel significativamente más elevado los más jóvenes, las mujeres y los que no fuman. Teniendo en cuenta todo lo expuesto y considerando los datos bilbiográficos al respecto, habría que evaluar los posibles beneficios de alguna fomra de intervención para incrementar los niveles de Se en la población de Cantabria.

Autor: MARTI SEVES RAMON.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSITAT AUTONOMA DE BARCELONA.

Resumen: En este trabajo se ha puesto el metodo para la determinación de las formas de la xantina oxidoreductasa(XOR), es decir, xantina deshidrogenasa(XD) y xantina oxidasa(XO), en sus formas reversible e irreversible(XO rev y XO irr respectivamente),en sangre y en tejido hepático. También se ha estudiado la implicación de la enzima en la lesión de preservación del trasplante hepático, en relación con la lesión hepatocelular, lesión y función endotelial del injerto, activación neutrofilica y la administración intraportal de prostaglandina E1(PGE1). Hemos establecido la necesidad de eliminar del medio de reacción analítica los productos peróxido y superóxido, así como NADH, para evitar infravaloraciones debidas a inhibición por productos, cuando la enzima se determina por seguimiento, o a punto final, de la aparición de ácido urico. También hemos observado la necesidad de utilizar periodos cortos de incubación. Es trasplante hepático experimental porcino no hemos observado conversión de la forma XD en XO en el tejido debida a la preservación solución de preservación de la Universidad de Wisconsin(UW), y descendente para solución Euro-Collins(EC), durante el periodo pos-reperfusión del injerto. La lesión hepatocular es superior para períodos largos de preservación y para la preservación con EC, comparada con UW. La función endotelial, en cambio, muestra una tendencia a recuperarse más rapidamente para EC que con UW. El estudio de 20 transplantes hepáticos humanos puso de manifiesto que la XOR circulante es de origen exclusivamente hepático, y los resultados sugieren que la enzima se libera mayoritariamente de los hepatocitos. Existe una conversión de la forma XD,mayoritariamente en XO rev, despues de su liberación. La XOR, y su forma Xoirr, determinadas en la sangre procedente del lavado del injerto en el momento de la reperfusión portal, muestran diferencias significativas entre dos grupos de pacientes con disfunción leve o moderada del injerto. La determinación de la elastasa polomorfonuclear revela la existencia de activación neutrofílica en el receptor debida al proceso quirurgico y fase anhepática, y tambien en el higado despues de la reperfusión. La administración intraportal de PGE1, por ultimo, no mostró ningun efecto sobre la función del injerto ni sobre los marcadores determinados.

Autor: SERVITJA DUQUE JOAN-MARC.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD MEDICINA-U. AUTONOMA BARCELONA.

Resumen: La fosfolipasa D (PLD) hidroliza los fosfolípidos generando ácido fosfatídico y el grupo polar. Esta enzima es activable por estímulos extracelulares y se ha sugerido que podría desempeñar un papel clave en la transducción de señales y en procesos importantes como la proliferación y la secreción. En el cerebro, varios neurotransmisores y neuropéptidos activan la PLD. En este trabajo se ha estudiado la activación de la PLD por varios estímulos en cultivos primarios de celulas del sistema nervioso, concretamente de neuronas y astrocitos de la corteza y el cerebro de rata. En los cultivos neuronales, la activación de la PLD por los agonistas probados es muy bajo o inexistente, incluso ante algunos estímulos que inducen una fuerte estimulación de la hidrólisis de fofoinosítidos por la fosfolipasa C(PLC) como el carbacol, agonista de receptores muscarínicos de la acetilcolina. En cambio, en cultivos de astrocitos,la PLD es activada fuertemente por neurotransmisores y otros agentes, entre los que se encuentran las endotelinas, el glutamato y noradrenalina. Los experimentos posteriores se realizaron en cultivos primarios de astrocitos, los cuales han sido establecidos por el grupo como un sistema celular modelo para el estudio de la PLD en células del sistema nervioso. En cultivos de astrocitos, las endotelinas son los agonistas más eficaces y activan la PLD a través de los receptores ETA y ETB, ambos acoplados a proteinas G heterotrimericas. El glutamato activa la PLD a través de receptores metabotrópicos del grupo I,concretamente el mGluR5. Además de estos receptores, la PLD es activada por estrés oxidativo provocado por la adición exógena de peróxido de hidrogeno (H2O2), un fenomeno que se repite en miniprismas de corteza cerebral. La activación de la PLD por receptores metabotrópicos parece ser un fenómeno secundario a la activación de la PLC. Esto se sustenta por una buena corelación en la magnitud de ambas respuestas y por un papel determinante del Ca2+ y de la PKC en la activación de la PLD. Sólo en el caso de la activación por H2O2, las tirosinas quinasas juegan un papel importante, además del Ca2+ y de la PKC. La respuesta a les endolelinas es parcialmente sensible a la inhibición de las proteinas Gi/o por la toxina pertussis, perno no al glutamato, indicando que los distintos receptores metabotrópicos activan la PLD através de diferentes proteinas G heterotrimericas. Respecto a las proteinas G monoméricas, nuestros resultados indican que las de la familia ARF, pero no de la Rho, participan en la activación de la PDL. Trabajo realizado con el apoyo de una beca predoctoral de la Generalitat de Catalunya y financiado por las ayudas PB-94/0664 y PB-97/0168 de la DGCYT.

Autor: ROBLES GÓMEZ ANA M..
Año: 1999.
Universidad: JAEN.
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.

Autor: HARMOUCH AHMED.
Año: 1998.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Autor: PIÑEIRO AVILA GERARDO.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: QUIMICA.

Resumen: El objetivo de este trabajo es el desarrollar alternativas analíticas usando biosensores en medios no acuosos, basados en enzimas inmovilizadas no covalentemente a un soporte, se realizaron estudios sobre la aplicabilidad de la metodología propuesta en la determinación enzimática mediante FIA de peróxidos en aceites, de colesterol libre y total en grasas animales y de esteroles fecales en sedimentos. Los peróxidos se determinaron mediante un reactor de peroxidasa (HRP) inmovilizada no covalentemente sobre esferas de vidrio poroso de tamaño controlado de poro. El reactor estaba acoplado a un montaje FIA y conectado a un espectrofotómetro. Este resultó ser útil para la determinación de peróxidos en muestras de aceite de oliva, y mediante el uso de ecuaciones proporcionales se pudo determinar concentraciones de mezclas sintéticas de peróxido de hidrógeno y peróxido de terbutilo, y de peróxido de hidrógeno y peróxido de benzoilo, basandose en las diferencias de sensibilidad frente a la enzima. Los resultados de experimentos de recuperación de estas mezclas presentaron una precisión y una exactitud satisfactoria. EL COLESTEROL, libre se determinó en muestras de grasa animal (cerdo) y de aceite de hígado de bacalao, mediante un reactor bienzimático preparado con 1 mg de colesterol oxidasa (COD) y 1 mg de peroxidasa. El colesterol total se pudo determinar en extractos de grasa o aceite sometidos a un proceso de saponificación asistida por microondas. El método enzimático propuesto, así como el método de saponificación por microondas proporcionaron resultados precisos y comparables en exactitud al método de saponificación descrito por la A.O.A.C. El colestanol y el coprostanol fueron determinados experimentalmente, en tolueno, lo que indica el potencial empleo del reactor bienzimático de COD y HRP en el análisis de contaminación fecal de sedimentos y aguas. Mezclas sintéticas de colestanol y colesterol pudieron determinarse cuantitativamente en tolueno y en muestras reales. Los reactores enzimaticos mostraron una estabilidad satisfactoria durante un periodo de uso de más de 100 sesiones de análisis continuo con solo 1 mg de enzima.

Autor: MARCOS DE PRADO JESUS ANGEL.
Año: 1998.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Se ha detectado el complejo piruvato deshidrogenasa en extractos grupos de Phycomyces blakesleeanus NRRL 1555(-). La actividad específica con glucosa más serina fue 4 veces mayor que con glucosa o piruvato y 8 veces mayor que con acetato como fuentes de carbono, sugiriendo que el piruvato o metabolito relacionado sea el causante del incremento de actividad. Purificado el complejo éste consta de las subunidades alpha y beta del componente piruvato deshidrogenasa, el componenete dihidrolipoil transacetilasa, el componente dihidrolipoil deshidrogenasa y la proteína de unión al componente dihidrolipoil deshidrogenasa. Presenta un pH óptimo de 8,1 con valores de pK de 6,9 y 9,3 siendo regulado eficazmente por el producto HADN. Se ha caracterizado un sistema de transporte de piruvato en micelio de phycomyces blakesleeanus saturable y acumulativo, inhibido por lactato y acetato a la vez que éstos son transportados. Los resultados obtenidos confirman la existencia de un CO- transporte piruvato (monocarboxilato de cadena corta). Protón que requiere energía y dirigido por un gradiente de protones creado por una atpasa de membrana plasmática.

Autor: FEO MANGA JOSE CRUZ.
Año: 1998.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: VETERINARIA.

Resumen: Los ácidos siálicos son un grupo importante de moléculas implicadas en los procesos de reconocimiento y diferenciación celular derivados del acido neuraminico cuyo metabolismo está regulado por medio de la CMP-Neu5Ac sintetasa. El aislamiento y purificación de esta enzima en rata nos ha permitido establecer que en su estado nativo se comporta como un dinero formado por dos protómeros idénticos de 58 kDa. Muestra unas condiciones óptimas de ensayo para una temperatura de incubación de OM.C y un pH de 9. Los parámetros cinéticos de la reacción (Km) para cada uno de los sutratos son de 1,1 mM (para el Neu5Ac) y de 0,45 mM (para el CTP). Concentraciones superiores a 5 mM del sustrato CTP inhiben la actividad de la enzima con una Ki de 17,2 mM. La enzima puede utilizar como sustratos, con la misma eficacia, tanto el Neu5Ac como el Neu5Gc. En ambos casos muestra un rquerimiento absoluto de cationes Mg++ para llevar a cabo su función catalítica. Concentraciones crecientes de CMP-Neu5Ac, producto de la reacción, producen una progresiva inhibición de la actividad enzimática, regulando de este modo la actividad de la CMP-Neu5Ac sintetasa y a su vez el metabolismo de los ácidos siálicos. El análisis proteolítico de la CMP-Neu5Ac sintetasa de rata ha revelado la existencia de diferentes dominios estructurales con pesos moleculares de 56, 53, 51, 42, 41, 39 y 31 kDa flanqueados por zonas desestructuradas accesibles a la acción de las distintas proteasas. La presencia de los distintos sustratos modifica sustancialmente esta distribución estructural.

Autor: RUIZ RODRIGUEZ FELIX.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La metionina adenosil transferasa (mat) cataliza la reacción inicial del metabolismo de la metionina y resulta además un buen modelo para estudiar la s-nitrosilación de las enzimas. Se han determinado en este trabajo las características de la inactivación por el óxido nítrico (NO) de las isoformas de Mat hepatica Mat I y Mat II. La incorporación de un grupo sano en el residuo de cys 121 produce la principal inactivación de la enzima y la incubación con concentraciones fisiológicas de glutación induce la desnitrosilación. En este trabajo se demuestra que la Mat Hepática está nitrosivada in vivo y que la inactivación de la enzima en condiciones en las que aumenta en NO está mediada pos s-nitrosilación. Se demuestra también que el estado de s-nitrosilación in vivo como in vitro por los niveles intracelulares de NO y GSH.

Autor: SABUQUILLO CASTRILLO M. PILAR.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .

Resumen: Las lipasas siguen un mecanismo de adsorción interfacial sobre soportes sólidos hidrofóbicos debido a que: - Se adsorben de forma selectiva a baja fuerza iónica. - Se hiperactivan al adsorberse sobre otras superficies. Así el posible mecanismo de adosrción que siguen las lipasas al adosrberse sobre soportes hidrofóbicos sería la unión por la tapadera y por las zonas cercanas al centro activo de las mismas sin que éste estuviera implicado en la unión. - Mediante la utilización de la adsorción interfacial de lipasas se ha purificado, concentrado e inmovilizado trazas de lipasas de origen marino. - Mediante la cromatografía de adosrción interfacial se han obtenido tres fracciones lipásicas del extracto comercial de Rhizopus niveus. - Se ha modulado el comportamiento hidrolítico de los derivados lipásicos variando el medio de reacción, de forma que se ha podido dirigir la catálisis en la resolución de mezclas recémicas de interés industrial..

Autor: RUIZ GALEA M. MAR.
Año: 1998.
Universidad: CASTILLA-LA MANCHA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: En esta tesis presentamos la obtención de las ecuaciones de la fase de transición de las reacciones enzimáticas en condiciones estrictas, así como con la suposición frecuente de que una o más de las etapas reversibles involucradas en el mecanismo de las reacciones enzimáticas se supongan en equilibrio rápido, en este último caso, las ecuaciones pueden expresarse como funciones de las constantes individuales de velocidad de las etapas reversibles supuestas en equilibrio rápido, o bien en función de las correspondientes constantes de equilibrio, a su vez, las ecuaciones del estado estacionario, se obtienen fácilmente a partir de las ecuaciones de la fse de transición, haciendo que en éstas el tiempo tienda a infinito. Se ha implementado un programa de ordenador fácil de usar. Con un cómodo formato de entrada de datos, rápido y que permite al usuario obtener de la forma más simplificada, los coeficientes de las ecuaciones anteriores. El programa anterior se ha aplicado al estudio teórico y experimental de distintos sistemas enzimáticos, entre otros resultados, se propone un sistema de discriminación entre los mecanismos ordenado ter ter y ordenado ter ter theorell chance y se realiza un análisis completo de la reacción de oxidación de los sustratos: 4-ter-butilcatecol y dopamina respectivamente, en presencia de peróxido de hidrógeno y catalizada por la enzima peroxidasa.