FARMACOLOGIA MOLECULAR

Autor: DEVESA GINER ISABEL.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA (UNIVERSIDAD DE VALENCIA).

Resumen: En la presente Tesis Doctoral se pueden diferenciar dos objetivos fundamentales. El primero de ellos es el estudio de nuevos compuestos antiinflamatorios, inhibidores selectivos de las enzimas ciclooxigenasa-2 (COX-2) y oxido nítrico sintasa inducible (iNOS), y el segundo objetivo es el profundizar en la posible implicación de la hemo-oxigenasa-1 (HO-1) en el desarrollo y resolución de la artritis reumatoide y su relación con otras enzimas involucradas en dicha patología. Dentro del primer objetivo, se realiza un estudio farmacológico con una serie de 16 derivados 6-dimetilamino 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina para evaluar su influencia sobre la generación de eicosanoides, especies oxigenadas y óxido nítrico, enzimas lisosomales, en leucocitos y monocitos humanos y en macrófagos de ratón. En vista de los interesantes resultados obtenidos se seleccionó uno de los derivados (DPP) por su potencia y selectividad como inhibidor de la actividad COX-2, y se realizaron distintos estudios in vivo para evaluar su actividad antiinflamatoria, analgésica y anti-angiogénica. Por otra parte y dentro de la búsqueda de nuevas moléculas con actividad antiinflamatoria, estudiamos en profundidad el mecanismo de acción y los efectos antiinflamatorios de una chalcona (3,4,5-trimetoxi-4'-fluorochalcona, CH 17) en un modelo de inflamación crónica, la artritis por adyuvante en rata. CH 17 mostró un perfil farmacológico muy interesante con una elevada eficacia en el control de la artritis, inhibiendo de forma muy potente la expresión de la iNOS y la producción de NO y de PGE2. Para llevar a cabo el segundo objetivo, evaluamos la implicación de la HO-1 en dos modelos de artritis experimental: la artritis por adyuvante en rata y la artritis por colágeno en ratón. Además, también estudiamos los efectos que sobre esta patología tiene la modulación farmacológica de la HO-1 trabajando con diversa protoporfirinas inhibidoras o inductoras de dicha actividad enzimática. Analizamos asimismo la relación de la HO-1 con otras enzimas implicadas en el desarrollo de la artritis reumatoide. Los resultados obtenidos han dado lugar a la publicación de 5 artículos en revistas internacionales.

Autor: GARCÍA GARCÍA ÁNGELES.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAT DE FARMACIA.

Resumen: En esta investigación utilizamos la topología molecular como instrumento para el diseño y selección de nuevos compuestos potencialmente activos frente a Mycobacterium tuberculosis (MTBC) y frente al complejo Mycobacterium avium (MAC). La topología molecular sirve para encontrar relaciones cuantitativas entre una propiedad física, química o biológica, y estructuras moleculares, basándose en la caracterización numérica de las mismas a través de unos índices o descriptores topológicos (IT), es decir, obtener las funciones topológicas: P(IT) = A0 + SAi (IT), donde P representa la propiedad, A0 y el conjunto de términos Ai los coeficientes de regresión. Con objeto de mejorar la eficacia de las funciones, fueron introducidas 4 nuevas familias de descriptores, particularmente derivados de índices de conectividad de Kier y Hall, así como de índices de carga. Una vez calculados los IT de 45 compuestos con actividad antituberculosa contrastada, fueron obtenidas las funciones de predicción y las de clasificación que nos permitieron discriminar entre compuestos activos e inactivos frente a estos dos grupos de patógenos. A continuación se diseñaron los modelos de actividad antituberculosa, haciendo uso de las funciones seleccionadas, y fueron aplicados a bases de datos de estructuras químicas para la selección de sustancias potencialmente activas. Finalmente, realizamos los ensayos microbiológicos in vitro encaminados a determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) para detectar la posible actividad antituberculosa de los compuestos seleccionados. Las conclusiones obtenidas fueron las siguientes: 1. Los nuevos IT aportan una mejora de más de un 30% en las funciones de predicción sobre los ya descritos, y una gran eficacia para discriminar entre compuestos activos e inactivos frente a MTBC y frente al MAC. 2. Las funciones obtenidas utilizando IT, han demostrado que es posible predecir eficazmente la CMI y otras propiedades farmacológicas de los compuestos activos. 3. Se han obtenido modelos útiles para la selección de compuestos activos frente a MTBC y frente al MAC. 4. Entre los nuevos compuestos seleccionados, a través de los modelos discriminantes de actividad: · 10 son activos frente a MTBC: cloruro de benzalconio (BAK), dinitrocresol, DOCA, linezolid, paromomicina, pentamidina, reserpina, ribavirina, TPEN y trifluoperazina; siendo los más activos linezolid y pentamidina con una CMI menor que mg/ml. . 6 son activos frente a MAC: BAK. linezolid, paromomicina, TPEN, trifluoperazina y pentamidina; siendo los más activos BAK, paromomicina, TPEN y trifluoperazina (4 menor que CMI menor que 8 mg/ml.). S e han seleccionado 6 nuevas pirimidinas sustituidas sintetizadas en la Universidad de Gerona. Sus ensayos in vitro ponen de manifiesto que la CMI frente a MTBC está comprendida entre 32 y 64 mg/ml. Los resultados obtenidos informan que teóricamente presentan un buen perfil farmacológico, lo que nos induce a considerar estas moéculas como posibles cabezas de serie para el diseño de nuevos antituberculosos.

Autor: CORTÉS SELVA FERNANDO .
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: INS. DE PARASITOLOGÍA Y BIOMEDICINA LÓPEZ-NEYRA.
Centro de realización: INSTITUTO DE PARASITOLOGÍA Y BIOMEDICINA "LÓPEZ-NEYRA" .

Resumen: Con 350 millones de personas en riesgo, 12 millones de afectados y 1.2-2 millones de casos nuevos al año, la leishmaniasis se ha convertido en los últimos años en la segunda causa de muerte entre las enfermedades parasitarias, después de la malaria. Entre las razones de este preocupante aumento, encontramos el desarrollo, por parte del parásito, de resistencias frente los tratamientos convencionales, que además provocan unos efectos secundarios muy severos. Actualmente la esperanza está puesta en los alquil-lisofofolípidos (ALP), como la miltefosina, que aunque en un principio fueron desarrollados como antitumorales, se comprobó que asimismo poseen actividad antiproliferativa contra Leishmania spp., Trypanosoma cruzi y Trypanosoma brucei. Las proteínas tipo glicoproteína-P (Pgp), son bombas activas de membrana que pertenecen a la superfamilia ABC (ATP-binding-cassette), y están constituidas por dos mitades homólogas, cada una de las cuales consta de un dominio transmembrana (TMD), involucrado en la unión y eflujo de los fármacos sustrato, y un dominio citosólico de unión a nucleótidos (NBD), responsable de la unión e hidrólisis del ATP, necesaria para el funcionamiento del transportador. Estas proteínas son responsables del fenotipo de multirresistencia a fármacos (MDR) en organismos procariotas y eucariotas, desde células tumorales a protozoos parásitos como Plasmodium y Leishmania. Actúan exportando un amplio espectro de fármacos fuera de la célula, provocando una disminución de su concentración intracelular, e impidiendo así su acción farmacológica. Es por esta razón por la que existe un gran interés clínico en desarrollar inhibidores de estos transportadores, que reviertan el fenotipo MDR y permitan el éxito de la quimioterapia. La mayoría de los revertidores que se conocen interaccionan con los TMDs de la Pgp, además suelen ser simultáneamente sustratos, lo que hace que se requieran concentraciones más elevadas para una inhibición efectiva, concentraciones que provocan efectos colaterales negativos que imposibilitan su uso clínico. Algunos de los agentes terapeúticos de segunda generación contra la leishmaniasis y los mismos ALP son sustratos de la Pgp y por tanto potencialmente pueden inducir un fenotipo MDR. De hecho, recientemente en nuestro laboratorio, se ha descrito que la sobreexpresión este transportador confiere resistencia a los ALP en Leishmania. En trabajos previos en nuestro laboratorio, se comenzó una búsqueda racional de productos naturales y semisintéticos capaces de inhibir el fenotipo MDR tanto en células de mamífero como en Leishmania. Entre dichos compuestos, se han estudiado en profundidad los flavonoides y flavanolignanos y también se inició el estudio de sesquiterpenos de esqueleto dihidro-b-agarofurano. En la presente Tesis se analiza con mayor profundidad el efecto revertidor de una serie de 58 sesquiterpenos dihidro-b-agarofuranos extraídos de plantas de la Familia Celastraceae, que han sido estudiados a través de ensayos de inhibición del crecimiento y de acumulación intracelular de droga, sobre una línea MDR de L. tropica que sobrexpresa la Pgp. A partir de los resultados de reversión se han realizado estudios de estructura actividad 3D, empleándose la metodología CoMSIA (comparative molecular similarity indices análisis) con los que se han analizado los rasgos determinantes para su actividad revertidora, caracterizándose los requerimientos estéricos, electrostáticos, lipofílicos y dadores/donadores de puentes de hidrógeno. Asimismo, hemos purificado, tras expresarlo en E. coli, el NBD1 de la Pgp de L. tropica, como una continuación a proyectos anteriores de nuestro laboratorio en los que se propuso los NBDs como una nueva diana farmacológica, con el fin de inhibir específicamente la unión y/o la hidrólisis del ATP, indispensable para el funcionamiento del transportador. Este dominio servirá como herramienta complementaria al NBD2 previamente purificado, para el estudio de la posible interacción de nuevos inhibidores con el NBD1. Nosotros en este trabajo hemos demostrado que una selección los sesquiterpenos estudiados no interaccionan con el NBD1. Por último, hemos desarrollado un sistema baculoviral de expresión para la Pgp de L. tropica, en células de insecto Sf9. Hemos mostrado que preparaciones de membranas de dichas células que espresan la Pgp de L. tropica presentan un transporte de Hoechst 33342, un sustrato fluorescente de la Pgp, y que la inhibición de dicho transporte por sesquiterpenos se correlaciona con la capacidad revertidora mostrada por dichos compuestos en los ensayos de inhibición del crecimiento y modulación de la acumulación intracelular de fármaco.:

Autor: LUCENA AGUILAR GEMA.
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las aminopeptidasas son enzimas proteolíticos que catalizan la hidrólisis de residuos aminoacídicos localizados en el extremo amino terminal. Enzimas que parecen desempeñar un gran número de funciones entre las que se encuentran, la actuación en el proceso inflamatorio mediante la degradación de ciertos neuropétpidos que intervienen en dicho fenómeno. En relación con la participación de las aminopepetidasas en el fenómeno inflamatorio, hemos de señalar que entre los fármacos usados para combatir tanto sus signos y síntomas se encuentran los antiinflamatorios no esteroideso o AINEs. Grupo que presenta claras diferencias con respecto al otro gran grupo de analgésicos como son los opioides. Puesto que se conoce la participación de las aminopeptidasas en los fenómenos álgidos e inflamatorios, dos de los principales efectos terapéuticos que producen los AINEs, nos preguntamos si este tipo de fármacos con conocida capacidad para inhibir la síntesis de prostaglandinas, ejercían algún efecto sobre la actividad aminopeptidásica. Por tanto los objetivos de la presente tesis fueron: 1,- Determinar el perfil de actividad de aminopeptidasa en dos poblaciones celulares diferentes: osteoblastos humanos y células JEG. 2,- Estudiar el efecto que algunos antiinflamatorios no esteroideos ejercían sobre dicha actividad enzimática. En nuestros resultados observamos que los AINEs ejercían un efecto inhibidor sobre la actividad aminopeptidásica, por lo que a la vista de ello, pudimos concluir que los AINEs pueden ejercer algunos de sus efectos farmacológicos o adversos a través de la inhibición de dichan actividad aminopeptidásica.

Autor: CEREZO INIESTA MANUELA.
Año: 2003.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Actualmente existen numerosos estudios acerca de los mecanismos implicados en la tolerancia dependencia de opioides. Sin embargo, los mecanismos celulares y moleculares involucrados en estos fenómenos a nivel periférico y concretamente a nivel cardiaco son menos conocidos. Esto se debe a diferentes motivos, entre otros, la compleja regulación nerviosa que recibe el corazón, la existencia de diferentes tipos de receptores opioides y ligandos endógenos, así como a las distintas interacciones que se producen entre los opioides y otros neurotransmisores. En cuanto a la inervación cardiaca, la regulación nerviosa extrínseca del corazón ha sido extensamente estudiada, conociéndose el importante control autónomo que recibe el corazón, a través del sistema nervioso simpático (SNS), sistema nervioso parasimpático(SNPS) y fibras no colinérgicas no adrenérgicas(NCNA). Junto a esta inervación extrínseca, se ha descrito la existencia de un plexo cardiaco intrínseco.Este plexo,está constituido por neuronas cuyos somas están localizadas intracardiacamente.Estas neuronas pueden liberar distintos neurotransmisores tales como moradrenalina(NA), acetilcolina y diferentes neuropéptidos.Diversos estudios electrofisiológicos y bioquímicos han demostrado que la activación de diferentes neuronas que constituyen este plexo cardiaco intrínseco desencadenan efectos cardiacos tanto inhibitorios como excitatorios.Lo que demuestra que este plexo tiene capacidad integradora suficiente como par apoder funcionar con independencia del sistema nervioso central (SNC). Este plexo también, recibe aferencias del SNS, SNPS, así como, de fibras NCNA que regulan la respuesta de las neuronas intracardiacas a través de mecanismos todavía no bien establecidos. La administración aguda de opioides produce una inhibición de la adenilato ciclasa y de la guanilato ciclasa provocando un descenso en los niveles de AMPc y GMPc, que a su vez reducirá el porcentaje de PKA y PKG activas. Durante el tratamiento crónico con opioides y durante el síndrome de abstinencia, se produce el efecto contrario, un aumento del contenido de AMPc y GMPc, estos resultados han sido evidenciados en diferentes áreas del SNC y en tejido cardiaco. También se ha observado que durante la dependencia de opioides se produce un aumento en el turnonver de NA junto con una evaluación de los niveles y actividad de la enzima tirosina hidroxilasa (TH). Recientemente, se ha propuesto, que no sólo la PKA sino también otras rutas intracelulares (PKC,MAPK,calcio intracelular) podrían jugar un papel importante en la instauración y desarrollo de tolerancia/dependencia de opioides. Estos efectores intracelulares, a su vez, regularían gran variedad de procesos mediante la fosforilación de proteínas incluyendo, los factores de transcripción genética. Recientemente se han realizado distintos estudios en SNC con la finalidad de averiguar qué cascadas estarían implicadas en la génesis de la dependencia. En relación conestas cascadas, se ha demostrado la existencia de distintas protin kinasas, entre otras la PKA, se han encontrado hasta el momento tres familias de PKC, las PKC convencionales (a,b,g) son activadas por los iones calcio junto con el diacílglicerol y la fosfatidilserina, las formas nuevas (d,e,q,m,h) son activadas por diacilglicerol y fosfatidilserina, y las formas atípicas (zy 1) son activadas fosfatidilserina.En miocardio, concretamente, se han encontrado las isoformas (a,b,d,e,z). Otra de las rutas implicadas en la tolerancia/dependencia de morfina es la ruta de las MAP kinasas, que incluye diferentes cascadas.Por ejemplo, ERK1/ERK2,JNK/SAPK y P38. Sin embargo, a pesar de estos estudios no se conoce con exactitud qué tipo de señales intracelulares están implicados en los fenómenos adaptativos que se producen durante la tolerancia/dependencia de morfina a nivel cardiaco.Por tanto, en base a estos antecedentes nos planteamos los siguientes objetivos: 1. Evaluar los cambios en la expresión de Fos y los niveles de la proteína TH. 2. Estudiar la implicación de diferentes cascadas de transducción de señales (PKA,PKC) en la expresión de Fos y TH. Para ello se administraron inhibidores de PKA (HA-1004) y PKC (Calfostin C). 3. Valorar de forma directa los posibles cambios en los niveles de la PKA y de diferentes isoformas de PKC (a d z) durante el síndrome de abstinencia a morfina. 4. Determinar la vía de las MAP kinasas.Ya que estas proteínas se comportan como puente de unión de las señales extracelulares y los factores de transcripción nuclear. Para ello, valoramos las ERK tanto totales como fosforiladas. Para la realización de estos objetivos he utilizado ratas macho de la cepa Sprague-dawley. Los experimentos se realizaron a la misma hora de la mañana para evitar la influencia del ritmo circadiano en los resultados, y los animales fueron manipulados, cogidos y pesados, antes de los experimentos, para minimizar los efectos del estrés. La inducción de tolerancia/dependencia se realizó mediante la implantación subcutánea de pellets de morfina base de 75 miligramos durante 8 días. Los grupos control recibieron pellets de placebo y vehículo (agua de Milli-Q o DMSO) en lugar de los inhibidores de la PKA y PKC. Tanto el inhibidor de PKA y el de PKC eran administrados mediante minibombas osmóticas de liberación constante. Los animales se sacrificaron a distintos tiempos dependiento del parámetro a cuantificar. Se cuantificaron los siguientes parámetros: Fos 90 min después de la administración de salino o naloxona.TH 30 o 90 min tras la administración del antagonista. PKA, las distintas isoformas de PKC y las ERKs 30,60 o 90 min tras la administración del antagonista.Todas las determinaciones se realizaron mediante Western-blott utilizando AC selectivos frente a cada uno de esas proteínas. En primer lugar valoramos la ganancia de peso de los animales a lo largo del tratamiento crónico con placebo o morfina.Observando una disminución significativa en el grupo de ratas pretratadas con vehículo, HA-1004 o Calfostin C. También valoramos la pérdida de peso corporal tras la administración de naloxona a ratas dependientes, observando un aumento significativo en las ratas pretratadas con vehículo, HA-1004 y Calfostin C, junto a una serie de signos de comportamiento típicos del síndrome de abstinencia a morfina(castañeo,escape,cromodacriorrea,ptosis..). Valoramos la expresión de Fos como marcador de la actividad neuronal en VD y VI. Observando un aumento significativo en dicha expresión en el grupo pretratado con vehículo, HA-1004. Al contrario en las ratas pretratadas con el inhibidor de PKC, conjuntamente con pellets de morfina se bloqueó el aumento en la expresión de Fos tras la administración de naloxona, tanto en VD como en VI.Estos resultados indican que el aumento en la expresión de Fos durante el síndrome de abstinencia a morfina dependería de procesos regulados por PKC, pero sería independiente de la cascada de la PKA. Por otra parte, estudios previos han demostrado que durante el síndrome de abstinencia a morfina se observa una hiperactividad noradrenérgica en tejido cardiaco, por tanto otro objetivo fue el estudio de los niveles de TH durante el síndrome de abstinencia en VD y VI. Observamos un aumento significativo en el contenido de TH a los 30 min del síndrome de abstinencia. Idénticos resultados obtuvimos a los 90 min de la administración de naloxona en ratas pretratadas con vehículo, HA-1004 y Calfostin C. Por tanto, estos resultados indican que ninguna de las dos vías de señalización mediadas por PKA o PKC serían responsables del aumento en los níveles del enzima. Otro objetivo fue evaluar, de forma directa, los posibles cambios que se producirían en PKA y PKC durante la dependencia de morfina. Se observó un aumento significativo en los niveles de PKA 30,60 y 90 min tras la administración de naloxona en ratas dependientes de morfina en VD y VI. A continuación valoramos los cambios en los diferentes isoformas de PKC.Observamos que no se prooducirían modificaciones en PKCa a los 30 min, sin embargo, en contraposición con los resultados anteriores se observó una disminución significativa 60 y 90 min después de la administración de naloxona en DV y VI. En relación con estos resultados, es conocido que las isoformas clásicas cuando son activadas, y por tanto, cuando aumentan sus niveles, migran a la membrana y son rápidamente degradadas. Estos resultados podrían indicar un incremento previo, en los niveles de la misma,durante el síndrome de abstinencia. No se produjeron modificaciones en la expresión de PKCd a los 30 min de la administración de naloxona, sin embargo observamos un aumento significativo a los 60 y 90 min en VD y VI. Al cuantificar PKCd, no se observaron cambios a los 30 min, sin embargo,sí se produjo un aumento significativo a los 60 y 90 min después de la administración de naloxona en ratas dependientes de morfina en VD y VI. En base a estos datos, podemos sugerir que las isoformas ligadas al calcio, como la a, son rápidamente degradadas tras su activación, mientras que las isoformas d y z no activadas por el calcio, al no sufrir esta rápida regulación sus niveles permanecen elevados durante más tiempo, lo que explicaría los resultados expuestos anteriormente. Al cuantificar las ERK totales y fosforiladas durante el síndrome de abstinencia, no observamos modificaciones 30 min después de la administración de naloxona a ratas dependientes de morfina en ERKT ni en ERK fosforiladas en VD y VI. Sin embargo, a los 60 min se produjo un aumento significativo tanto de las ERKT como delas ERK fosforiladas, tanto en VD como VI. Al cuantificar ERK totales y fosforiladas a los 90 min observamos un aumento de las ERK totales y las ERK1,mientras que se produce una disminución significativa en las ERK2 en VD y VI. Los cambios observados tanto en los niveles como en la actividad en ERK, sugieren que dicha cascada estaría implicada en los cambios adaptativos que se producen durante el síndrome de abstinencia a morfina. En resumen, los resultados muestran un aumento de la expresión de Fos y TH durante el síndrome de abstinencia a morfina. Este aumento podría ser debido a la activación de las cascadas PKC y/o MAPKs. Por tanto, los cambios adaptativos cardiacos que observamos durante el síndrome de abstinencia a morfina, serían el resultado de las acciones coordinadas de múltiples mensajeros celulares que podrían intervenir, a su vez, en múltiples vías moleculares. En base, de este estudio se llegó a las siguientes conclusiones: 1. Durante la dependencia de morfina se produce un aumento de la expresión de Fos en tejidos cardiacos, lo que indica un incremento en la actividad celular. 2. El aumento de la expresión de TH en DV y VI, durante el síndrome de abstinencia a morfina, podría indicar, la puesta en marcha de mecanismos transcripcionales que regularían la actividad de la enzima y que podrían ser los responsables de la hiperactividad noradrenérgica cardiaca durante dicho síndrome. 3. EL tratamiento crónico con Calfostin C(inhibidor de la PKC)bloqueó el incremento en la expresión de Fos, observado durante el síndrome de abstinencia a morfina, lo que sugiere, que la cascada de la PKC mediaría las modificaciones adaptativas genéticas que se observan en corazón durante dicho síndrome.Los resultados del presente estudio descartan la implicación de la cascada de la PKA. 4. Los resultados obtenidos con HA-1004 y Calfostin C administrados, concomitantemente con morfina, demuestran que el aumento en la expresión de TH observado en corazón durante el síndrome de abstinencia a morfina, no está mediado por las cascadas de la PKA o de la PKC. 5. Nuestros resultados demuestran que durante el síndrome de abstinencia a morfina se produce un aumento de la actividad de PKA, y de las isoformas de PKC no dependientes de calcio. Éstas últimas podrían ser las responsables del aumento en la expresión de Fos que observamos en nuestro estudio. 6. Durante el síndrome de abstinencia a morfina se produce un aumento de los niveles de las ERK totales y fosforiladas, lo que sugiere que dicha cascada, podría ser la responsable del aumento de la expresión de Fos y/o TH que observamos en tejido cardiaco durante el síndrome de abstinencia a morfina.

Autor: RUIZ LLORENTE LIDIA.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALCALA.

Resumen: La realización de esta Tesis Doctoral ha permitido ampliar los conocimientos existentes en cuanto a los efectos de los cannabinoides en el tejido prostático. En concreto, se pueden enunciar las siguientes conclusiones: 1.- Existencia de un sistema endocannabinoide en células tumorales prostáticas y próstata humana. Este sistema está constituido no solo por los receptores de cannabinoides CB1 y CB2 sino también por el receptor de vanilloides VR1. Por otro lado, nuestros datos apuntan hacia la existencia de un sistema de degradación del endocannabinoide anandamida en células PC-3. Este sistema de degradación estaría formado por un mecanismo específico de captación celular del endocannabinoide seguido de un proceso de hidrólisis enzimática por la enzima aminohidrolasa de ácidos grasos cuya expresión y actividad en las células PC-3 ha sido confirmada en este trabajo. 2.- El receptor CB1 prostático está acoplado a la inhibición de la enzima adenilil ciclasa. El receptor de cannabinoides CB1 expresado en la glándula prostática es funcionalmente activo pues los cannabinoides inducen la inhibición de la actividad adenilil ciclasa en membranas prostáticas humanas estimuladas con forskolina a través de la activación de este receptor y de manera dependiente de proteínas G. 3.- Los receptores de cannabinoides inducen un incremento de los niveles intracelulares del ión calcio. En células tumorales prostáticas PC-3, el agonista cannabinoide D9-THC induce un incremento de los niveles intracelulares de este ión. Este efecto es revertido por los antagonistas de los receptores de cannabinoides lo cual viene a reforzar la conclusión enunciada anteriormente que hace referencia a la idea de que los receptores de cannabinoides expresados en próstata son funcionalmente activos. 4.- Los cannabinoides, en concentraciones del orden de micromolar, inducen disminución de la viabilidad de células prostáticas PC-3. Nuestro trabajo ha demostrado que los cannabinoides, en concentraciones del orden de mM, provocan una reducción de la viabilidad de las células PC-3. Puesto que este efecto no es revertido por los antagonistas de los receptores de cannabinoides en ninguna de las condiciones experimentales utilizadas, podemos afirmar que este efecto es independiente de la activación de esos receptores. Sin embargo, esa reducción de la viabilidad celular si depende de los niveles de AMPc intracelulares. 5.- D9-THC induce muerte celular por apoptosis en las células PC-3. La reducción de la viabilidad de células PC-3 tratadas con D9-THC responde a cambios morfológicos y bioquímicos característicos de un proceso de muerte por apoptosis a través de la activación de caspasa-3 y de la degradación mitocondrial.

Autor: CID SÁNCHEZ CRISTINA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: HOSPITAL RAMÓN Y CAJAL.

Resumen: La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad autoinmune inflamatoria del sistema nervioso central (SNC) y una de las causas más comunes de incapacidad neurológica en adultos jóvenes. La enfermedad se caracteriza por la activación del sistema inmunológico por causa desconocida con daño inflamatorio de neuronas y oligodendroglía, segudios por una recuperación de la función y reparación estructural, gliosis postinflamatoria y neurodegeneración. Esta secuencia de procesos implica un curso clínico caracterizado por episodios de recuperación o remisiones, seguidos por el tiempo por nuevos episodios inflamatorios que suelen dejar secuelas persistentes, y con un progreso de la enfermedad. En el estudio de la EM se pueden considerar tres aspectos fundamentales. En primer lugar, la desmielinización de los axones neuronales causada por la inflamación del SNC, en segundo lugar, la falta de remielinización que conduce a más largo plazo a la degeneración de los axones desmielinizados, y por último, el daño axonal en las neuronas. Tradicionalmente se han estudiado la inflamación y desmielinización como causas primarias de la enfermedad. En este trabajo se ha abordado el estudio de los mecanismos de neurodegeneración causada por la ausencia de remielinización y/o por un daño directo a las células neuronales, dos aspectos de la enfermedad poco conocidos y que han adquirido una gran importancia en los últimos años. El estudio del daño axonal primario se ha llevado a cabo con un modelo de cultivos neuronales embrionarios de rata tratados con líquido cefalorraquídeo (LCR) de pacientes con EM remitente-recurrente (RR). Nuestros datos demuestran que la neurotoxicidad inducida por el LCR de pacientes con EM en cultivos neuronales está estrechamente correlacionada con la patología de los pacientes valorada mediatne su EDDS y sus lesiones en imágenes de resonancia magnética. Así, pacientes cuyo LCR induce una mayor apoptosis y daño neuronales en cultivo, se corresponden con aquellos que presentan peor recuperación después del brote y mayores lesiones hipointensas en secuencias ponderadas en T1. La inducción de apoptosis neuronal por el LCR de los pacientes con EM RR se debe a la activación de la caspasa 3, pero no dela caspasa 1, y los inhibidores de caspasa 3 previenen esta poptosis neuronal. Es posible interferir en la ruta apoptótica y proteger a las células de la muerte neuronal inducida por LCR. La capacidad de bloquear la apoptosis neuronal en los pacientes sería de gran interés en el tratamiento de la enfermedad. Por otra parte, se ha estudiado la falta de remielinización en la EM. Los resultados obtenidos utilizando células precursoras de oligodendroctios (OPC) en cultivo, demuestran que la proteína Hsp90beta se expresa en al superficie de estas células y que los LCR de pacientes con EM contienen anticuerpos que reconocen específicamente esta proteína en la superficie de las OPC. La activación del sistema de complemento por anticuerpos anti-Hsp90 de LCR de pacientes con EM, causa la extinción de las OPC en cultivo. Este mismo proceso podría limitar la remielinización en los pacientes con EM.

Autor: FERNÁNDEZ DUEÑAS VÍCTOR.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCOLA DE POSTGRAU -UAB.

Resumen: Los opioides se utilizan en el tratamiento del dolor osteoarticular crónico, pero se desconocen las características de aparición de tolerancia a sus efectos durante estos procesos. Postulamos que la inflamación puede alterar la aparición/desarrollo de tolerancia opioide ya que se inducen cambios en la transmisión nocicpetiva y en la expresión de receptores opioides. METODOLOGÍA En un modelo de monoartritis producida por adyuvante de Freud (CFA) en ratones control y tolerantes (con la implantación de un comprimido s.c., de morfina), se evaluaron: peso corporal, diámetro de la articulación, respuesta nociceptiva a estímulos térmicos (plantar test) y mecánicos (Randall y Selitto, Von Frey), extravasación de plasma y tránsito intestinal. También se estudiaron los efectos de la administración sistémica de morfina y la reversión por naloxona y naloxona metiodada. Finalmente se estudió la expresión de receptores opioides u en tejidos periféricos (plantar, ganglios de la raíz dorsal y médula espinal) mediante Western Blot. RESULTADOS El CFA indujo una inflamación localizada, cuantificable entre las 4 horas y los 14 días. El efecto anti-nociceptivo y anti-inflamatorio de la morfina fue significativamente mayor en presencia de inflamación (x2), sin modificar el efecto anti-alodínico. La implantación de un comprimido de morfina produjo una disminución de la sensibilidad nociceptiva a los estímulos térmicos y mecánicos. Induciendo tolerancia opioide a los efectos anti-nociceptivos y anti-inflamatorios de la morfina. Asimismo en presencia de inflamación el desarrollo de tolerancia fue mayor. Los resultados de conducta obtenidos se relacionaron con los obtenidos a nivel molecular. La inflamación periférica aumentó la expresión de receptores opioides, y en presencia de tolerancia a la morfina los resultados sugieron la no-funcionalidad de estos receptores.

Autor: CORCHO SANCHEZ FRANCESC.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE CATALUÑA.
Centro de lectura: ETSEIB.
Centro de realización: ENGINYERIA QUÍMICA.

Resumen: The present work focuses on the exploration of the conformational space of biological active peptides in different conditions with the aim of characterizing their conformational profile. Different techniques have been used within the molecular mechanics framework. Determining the bioactive conformation is a requirement for the design of peptidomimetics in computer-aided drug design. In chapter 2, the conformational profile of 4-residue long farnesyltransferase inhibitors is studied by means of the iterative simulated annealing procedure yielding as a result the bioactive conformation. This bioactive conformation can be simplified by the moieties that are known to interact with the receptor and the relative distances between these moieties, and this schematic entity is termed pharmacophore. The pharmacophore can be used to screen three-dimensional databases of molecules for the search of peptidomimetics. The compounds obtained in the search can be subsequently tested for activity and a new group of lead compounds can be thus identified. In chapter 3 an example of this procedure is described with the aim of obtaining a new group of bradykinin antagonists based on Hoe 140. The pharmacophore obtained was tested on a group of 5-residue long bradykinin analogs containing 1-amino-2-phenylclyclopropanecarboxylic acid, a conformationally restricted residue. Recently, it has been reported several instances were the folding of peptides has been simulated by means of long molecular dynamics trajectories. A problem arises when the wealth of conformations obtained has to be classified in terms of their respective degree of folding. In chapter 4 a novel methodology is described for the classification and grouping of the peptide structures based on the presence of structural motifs and the similarities among them. This methodology can prove very useful as it is almost automated and it does not present any limitation regarding the size of the peptide or protein of study. Chapters 4 and 5 are dedicated to an 11-residue neuropeptide: substance P. The conformational profile of the peptide has been studied by means of iterative simulated annealing and extensive molecular dynamics trajectories and the results have been compared with nuclear magnetic resonance studies.

Autor: PERIS GIMENO EVA.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FARMACIA.

Resumen: Las acetogeninas (ACG) y las estiril-lactonas destacan por su actividad citotóxica, actuando principalmente como inhibidoreas de la respiración celular. Es por ello, que hemos elegido el estudio de estos inhibidores para profundizar en el conocimiento del enzima NADH: ubiquinona oxidorreductasa, también denominado complejo I mitocondrial. En el Capítulo I de la presente tesis doctoral describimos el aislamiento y semisíntesis de una serie de análogos estructurales de altholactona, así como la REA para estas moléculas como inhibidoras del complejo 1 mitocondrial. Las reacciones y correlaciones químicas efectuadas mediante metoximetilación y 7-hidroxilación de altholactona, así como el análisis espectroscópico de los derivados obtenidos, nos ha permitido rectificar las estructuras de las estiril-lactonas con esqueleto heptólido, estableciendo para ellas un esqueleto THF-alquil-éster. Todos los derivados ensayados inhibieron selectivamente el complejo I de la cadena respiratoria mitocondrial con valores de CI50 del orden nM lo que puede justificar, al menos en parte, la actividad citotóxica de todos estos compuestos. En el Capítulo II se aborda el estudio de diversos derivados semisintéticos de ACG mono- THF (annonacin y annonacinone) y de ACG bis-THF (squamocin), estableciendo los factores estructurales responsables de la potencia inhibitoria, y profundizando en el conocimiento del complejo 1 mitocondrial. Todas las ACG ensayadas inhibieron el complejo 1 en el orden nM. También estudiamos diversos derivados naturales y semisintéticos de la especie de hongo Penicillium brevicompactum, poseedores de actividades insecticidas y pesticidas, estableciendo que algunos de los derivados pirrólicos pueden justificar su mecanismo de acción a través de la inhibición de la cadena respiratoria mitocondrial, ya que existe mucha similitud entre el complejo 1 de mamíferos y el de hongos.

Autor: RODRIGO NICOLÁS REGINA.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES CITOLÓGICAS.

Resumen: La encefalopatía hepática (EH) es un complejo síndrome neuropsiquiátrico que se presenta en pacientes con fallo hepático agudo o crónico y conduce a alteraciones en la personalidad, la función intelectual, la coordinación neuromotora y en el nivel de consciencia. La hiperamonemia se considera el principal factor responsable de algunas de las alteraciones neurológicas presentes en la EH. Tanto la hiperamonemia como la EH alteran la neurotransmisión glutamatérgica. La vía glutamato-óxido nítrico-GMP cíclico, una de las vías transducción de señales asociada al receptor NMDA (un tipo de receptor ionotrópico de glutamato) está alterada en cerebelo de ratas con hiperamonemia crónica in vivo. La hiperamonemia altera esta vía de transducción de señales glutamato-óxido nítrico-GMP cíclico a nivel de la activación de la guanilato ciclasa soluble (CGS) por óxido nítrico (NO) en cerebelo. Esta tesis se ha centrado en el estudio de las posibles alteraciones en el contenido y en la modulación de la GCs por NO en situaciones de hiperamonemia y fallo hepático crónicos en pacientes y en modelos animales de hiperamonemia crónica sin o con fallo hepático. La CGs es un terodímero formado por dos subunidades (alfa y beta) con un grupo hemo en la subunidad beta. Cada subunidad presenta dos isoformas (alfa1, alfa2, beta1, beta2). La unión del óxido nítrico al grupo hemo activa la enzima hasta 200 veces. Hemos comprobado que la activación de la GCs por NO está alterada in vitro tanto en cerebelo como en corteza frontal de pacientes cirróticos fallecidos en como hepático. La activación de la GCs por NO está disminuida en cerebelo y aumentada en corteza frontal de pacientes cirróticos respecto a sujetos sanos. Analizando el contenido de las isoformas de GCs observamos que el contenido de las isoformas alfa de GCs está aumentando en cerebelo y corteza frontal en estos pacientes. Por tanto, los cambios encontrados a nivel de proteína no se correlaciona con los observadores en la modulación de la GCs por NO. Para estudiar los posibles mecanismos responsables de estas alteraciones es importante disponer de modelos animales que reproduzcan lo que ocurre en el paciente. Se estudió la modulación y el contenido de GCs en cerebelo y corteza en dos modelos de rata con hiperamonemia crónica sin o hepático (anastomosis porta-cava). El modelo de anastomosis porta-cava reproduce las alteraciones encontradas en el contenido de la GCs y en su modulación por NO en cerebelo y corteza. Las anastomosis porta-cava es, por tanto, un buen modelo para este estudio. El modelo puro de hiperamonemia crónica reproduce las alteraciones encontradas en el contenido y modulación GCs en cerebelo pero no en corteza. Estos resultados indican que la hiperamonemia es reponsable de las alteraciones presentes en cerebelo en pacientes con fallo hepático. Estudios realizados en cultivos primarios de neuronas o astrocitos de corteza o cerebelo expuestos crónicamente a amonio indican que el amonio es responsable de la alteración de la activación de la GCs por NO, tanto en corteza como en cerebelo y que el efecto es en neuronas y no en astrocitos.

Autor: CONDE FERNÁNDEZ MANUEL.
Año: 2003.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Las plaquetas juegan un papel importante en las enfermedades cardiovasculares. De hecho, una activación plaquetaría inadecuada puede llevar a una excesiva formación de trombos y conducir a graves patologías. Por lo tanto, un mejor entendimeinto de los mecanismos de inhibición de la actividad plaquetaria proporcionaría bases importantes para el desarrollo de nuevos fármacos capaces de interferir en dichas patologías. En este trabajo se han estudiado los mecanismos moleculares que median en la inhibición causada por óxido nítrico (NO) y ATP sobre la actividad plaquetaria en respuesta a la trombina. El SNP (un donador de NO) incrementa los niveles de cGMP siendo este nucleótido el responsable de la inhibición causada por el donador sobre la actividad inducida por trombina. La inhibición sobre la agregación está mediada principalmente por la proteína quinasa dependiente de Camp (PKA), gracias al incremento de cCAMP que se produce al inhibir de cGMP a la fosfodiesterasa 3 (PDE3). Sin embargo, el papel de la proteína quinasa dependiente de Cgmp (PKG) no es importante en dicha inhibición, al menos a bajas concentraciones de SNP. En la inhibición causada por el donador de NO sobre el incremento en la [Ca2+]¡ inducido por trombina no están implicadas ni la PKA ni la PKG, lo que indica la acción del cGMP y/o cAMP sobre proteínas diferentes a las quinasas. Por otro lado los nucleótidos cíclicos inhiben la entrada de Ca2+ mediada por los depósitos intracelulares (SMCE) independientemente del grado de vaciamiento de dichos depósitos. Sin embargo, los nucleótidos no inhiben el mantenimiento de la SMCE una vez iniciada. Además, se ha mostrado un papel de la fosforilación de tirosina en la activación de la SMCE. La inhibición causada por ATP sobre la actividad plaquetaria inducida por trombina es rápida, reversible, dependiente de ATP4- y no dependiente de la generación de adenosina. Se conoce que el ATP inhibe la activación plaquetaria en respuesta al ADP compoitiendo con los receptores P2Y1 y P2Y12 de este agonista. Sin embargo, nosostros hemos mostrado que en la inhibición por ATP de la actividad plaquetaria inducida por trombina está también implicados otros receptores propios del ATP. De hecho, hemos mostrado que dicha inhibición se explica en parte por el incremento en los niveles de cAMP y posterior activación de la PKA que produce el ATP en plaquetas. Dicho incremento parece deberse a la estimulación por ATP del receptor acoplado a la adenilato ciclasa P2Y11, que hemos detectado por RT-PCR en plaquetas humanas.

Autor: IBARRETXE BILBAO GASKON.
Año: 2003.
Universidad: PAIS VASCO .
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.

Resumen: La activación elevada de receptores ionotrópicos de glutamato conduce a la muerte de neuronas y oligodendrocitos. Es lo que se conoce como excitotoxicidad. En el presente trabajo demostramos que la muerte excitotóxica cursa con importantes alteraciones a nivel mitocondrial. Estas organelas en dichas condiciones producen especies reactivas de oxígeno, lo que desencadena un estrés oxidativo. Se investigan y discuten las causas y consecuencias de dicho estrés oxidativo en procesos excitotóxicos. El abordaje experimental consiste en un repertorio variado de técnicas de biología celular y molecular.

Autor: MOYANO DOMÍNGUEZ SONIA.
Año: 2003.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En las fases tempranas del aprendizaje, es imprescindible una adecuada transmisión glutamatérgica, mientras que el sistema serotonérgico parece ejercer una acción moduladora sobre otros sistemas de neurotransmisión. En este trabajo, se encontró un déficit de aprendizaje de evitación pasiva en ratas como consecuencia de la administración aguda del agonista de receptores 5-Ht1A, 8-OH-DPAT, así como de la administración aguda de las neurotoxinas serotonérgicas metilendioximetanfetamina (MDMA, "extasis") y p-cloroanfetamina (PCA). Se estudiaron los posibles mecanismos moleculares implicados en el déficit cognitivo inducido por estos agentes. Una hora después de la inducción del aprendizaje, se encontró en el hipocampo de los animales control, un aumento de los niveles en membrana y de la actividad enzimática de Ca2+/calmodulin-kinasa II (CaMKII), de la actividad de la proteín-kinasa A (PKA) y de los niveles en membrana de la subunidad NR1 y su forma fosforilada en Ser-897, así como de la forma fosforilada en Ser de la subunidad NR2B del receptor glutamatérgico NMDA. La administración previa al aprendizaje de 8-OH-DPAT, evitó el aumento de la actividad de CaMKII así como de su translocación a la membrana y unión a la subunidad NR2B, eventos fundamentales para la consolidación de la memoria en el hipocampo. El agonista serotonérgico indujo también un aumento en la actividad de la proteín-fosfata 1 (PP1), que podría ser la causa de la disminución en la actividad de CaMKII, y que podría ser causado por el descenso encontrado en la actividad de PKA. La administración de 8-OH-DPAT también evitó los efectos asociados al aprendizaje de la subunidades del receptor NMDA, efectos que podrían estar asociados con las modificaciones enzimáticas y que, en su conjunto, conducen a una menor actividad sináptica. A su vez, la administración aguda previa a la inducción del aprendizaje de MDMA y PCA previno el aumento asociado al aprendizaje de la funcionalidad de CaMKII, y ambas toxinas indujeron un aumento de los niveles en membrana de PP1. Sin embargo, tan sólo MDMA previno el aumento asociado al aprendizaje de la subunidad NR1 y su forma fosforilada, por lo que parece, que MDMA y PCA inducen un déficit en la retención del aprendizaje de evitación pasiva en rata a través de mecanismos moleculares que no son idénticos para las dos toxinas. Además, el deterioro cognitivo inducido por MDMA no parece depender de los niveles endógenos de serotonina, ya que en animales con una depleción previa de serotonina, MDMA indujo el mismo déficit de retención y previno de la misma manera, los cambios moleculares en hipocampo asociados al proceso de aprendizaje.

Autor: LEÓN NAVARRO DAVID AGUSTÍN .
Año: 2003.
Universidad: CASTILLA-LA MANCHA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Resumen: 1,- La gestación modulada los receptores A1 de adenosina en cerebro de rata gestante, produciendo su down-regulación asociada a un incremento en la funcionalidad del sistema, justificado por un aumento de la afinidad del receptor por su ligando y por los niveles de proteína alfaGi3. Dicha modulación parece ser producida por el incremento de la liberación de adenosina endógena producido durante la gestación. 2,- La gestación up-regula los receptores metabotrópicos de glutamato en cerebro de rata sin provocar variaciones significativas en la funcionalidad del sistema. Tal modulación puede ser causada por la disminución de la liberación de glutamato endógeno producido por los receptores A1 de adenosina estimulados por la adenosina liberada durante la gestación. 3,- La administración de cafeína o teofilina a ratas durante todo el período gestacional produce una down-regulación de los receptores A1 de adenosina y las proteínas alfaGi1,2 tanto en cerebro materno como fetal. Dicha down-regulación va asociada a una pérdida significativa de la respuesta del sistema en madres, sin afectar a dicha funcionalidad de los fetos. La pérdida de receptores en las ratas consumidoras de cafeína podría ser la responsable del aumento de actividad locomotora de dichos animales durante la gestación. 4,- La administración de cafeína o teofilina durante la gestación produce un down-regulación de los receptores metabotrópicos de glutamato y su sistema efector la fosfolipasa C, tanto en cerebro materno como fetal. La pérdida de receptores afecta fundamentalmente al tipo mGlu1 en las madres y puede afectar a otros tipos en los fetos, y en general, está asociada a una disminución de la respuesta de los receptores, tnato en madres como en fetos. 5,- La administración crónica de R-PIA durante la gestación produce una down-regulación de los receptores A1 de adenosina y metabotrópicos de glutamato, tanto en cerebro materno como fetal. 6,- La administración de L-Glutamato durante la gestación produce una down-regulación de los receptores A1 de adenosina en cerebro fetal, sin afectar dichos receptores en cerebro materno, y una dow-regulación de los receptores metabotrópicos de glutamato, fundamentalmente del tipo mGlul, y de la proteína alfaGq/11 en el cerebro de las ratas gestantes, sin afectar a los receptores ni las proteínas alfaGq/11 del cerebro fetal. Dicha modulación en las ratas gestantes no altera la capacidad de aprendizaje y memoria. 7,- Por último, los resultados muestran que existen procesos de regulación y transmodulación entre receptores A1 de adenosina y metabotrópicos de glutamato durante la gestación que pueden afectar tanto a madres como a fetos y que reflejan el importante papel que ligandos como la adeneosina y el glutamato desempeñan durante la gestación.

Autor: SALGUEIRO BAGUES M. AZANZADU.
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: La ciclofosfamida es agente citoestático ampliamente utilizado en oncología por su probada eficacia frente a tumores sólidos de mama, pulmón, etc. La quimioterapia antitumoral constituye un tratamiento de elección en estadios finales de la enfermedad neoplásica y metaestásica, siendo el resultado el balance entre la potencia citotóxica de un fármaco frente a un determinado tipo de tumor y los efectos secundarios que produce en otros órganos sanos. El principal objetivo de este trabajo ha sido el diseño y caracterización de una nueva forma de administración de ciclofosfamida. Para ello, se ha llevado a cabo la asociación de la ciclofosfamida a matrices poliméricas biodegradables de polialquilcianoacrilatos formando nanopartículas. En la primera fase del trabajo se desarrolló y optimizó la asociación del fármaco a sistemas coloidales de polialquilcianoacrilatos de estructura matricial (nanoesferas) determinando su morfometría (tamaño promedio de partícula y polidispersión) por espectroscopia de correlación de fotones y microscopía electrónica de transmisión, en diferentes condiciones experimentales. Se ha diseñado y validado un método analítico de espectroscopia de emisión de plasma por acoplamiento inductivo para la determinación del principio activo en el sistema coloidal, basado en el análisis de fósforo presente en la muestra. En la segunda fase del trabajo se ha estudiado las interacciones fármaco-polímero en los sistemas coloidales de naturaleza matricial desarrollados por métodos espectroscópicos y térmicos, analizando asimismo el perfil de liberación del fármaco en diferentes formulaciones. Finalmente, se hane fectuado ensayos de degradación química y enzimática y de estabilidad acelerada de las formulaciones en diferentes condiciones experimentales analizando su tolerancia ocular "in vivo". En base a los resultados obtenidos por las diferentes técnicas, se ha seleccionado la formulación idónea para la administración ocular en función de las características morfométricas (tamaño y polidispersión), la eficacia de asociación de principio activo y su perfil de liberación del sistema polimérico que, una vez optimizadas, puedan permitir en un futuro próximo su desarrollo galénico y su utilización clínica.

Autor: RUEDA FERNÁNDEZ DANIEL.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR I, CC. QUÍMICAS.

Resumen: Los cannabinoides, compuestos activos de la marihuana (Cannabis sativa) y sus derivados, son considerados en la actualidad sustancias con un posible potencial terapéutico. Durante los últimos años se ha descrito la existencia en el organismo del sistema endocannabionoide, constituido por lignados endógenos, receptores específicos, así como mecanismos de terminación de la señal. A nivel molecular, se ha descrito estos compuestos modulan ciertos canales iónicos y la actividad adenilil ciclasa. Sin embargo, a pesar de que se ha demostrado que los cannabinoides poseen efectos inhibidores de la proliferación y apoptóticos, se sabe poco sobre los mecanismos mediante los cuales la activación los receptores para cannabinoides conduce a la regulación del destino celular. Las cascadas MAP quinasa, y en concreto la ruta ERK, se sbe desempeñan un papel crucial en la regulación de este tipo de respuestas, de manera que se ha abordado el estudio de a través de qué cascadas de transducción de señales los cannabinoides controlan la actividad de esta vía, y de dómo ello redunda en la decisión supervivencia/muerte celular, habiéndose demostrado que la cascada ERK es modulada por cannabinoides a través de un mecanismo dependiente de sus receptores específicos, las subunidades betagamma de proteínas G heterotriméricas y PI3K. Por otro lado, se ha demostrado por primera vez que los cannabinoides tienen efectos inhibitorios sobre la diferenciación neuronal, dependiendo este efecto también de la modulación de la actividad ERK.

Autor: GÓMEZ DEL PULGAR GARROTE M. TERESA.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Resumen: Los cannabinoides son los componentes activos de la planta Cannabis sativa, popularmente conocida como marihuana. El descubrimiento de receptores específicos para cannabinoides y de una familia de ligandos endógenos de los mismos ha estimulado extraordinariamente la investigación acerca de estos compuestos en los últimos años. Una de estas áreas de investigación ha estudiado la capacidad de los cannabinoides para controlar el destino celular. Acorde con ello, los resultados de la presente Tesis Doctoral indican que los cannabinoides desempeñan un papel dual en el control del destino de células gliales: por un lado, inducen la muerte de células transformadas (glioma), y por otro, protegen a las células no transformadas (astrocitos). El efecto apoptótico de los cannabinoides es selectivo de células gliales transformadas y depende de la generación de ceramida, mediante la activación de la principal enzima reguladora de la síntesis de novo de esfingolípidos, la serina palmitoitransferasa. La acumulación de ceramida lleva a la activación sostenida de la quinasa activada por señales extracelulares (ERK) y a la inhibición de la proteína quinasa B (PKB). Debido a la falta de éxito de las terapias actuales en el tratamiento de gliomas es necesario desarrollar nuevas estrategias terapéuticas. Así, nuestros datos indican que una de estas aproximaciones terapéuticas podría ser el tratamiento con cannabionoides no psicoactivos, que inhiben el crecimiento del tumor in vivo sin efectos colaterales significativos. Además, el tratamiento con cannabinoides no sólo no afecta a la viabilidad de células gliales no transformadas, sino que en determinadas circunstancias las protege de la muerte. Así, estos compuestos son capaces de evitar la muerte de los astrocitos inducida por ceramida tanto in vitro como in vivo. El mecanismo de esta acción protectora implica la estimulación coordinada de las rutas fosfoinosítido 3-quinasa (PI3K)/PKB y ERK mediada por el receptor CB1. De esta forma, el sistema endocannabionoide podría proteger a los astrocitos junto con las neuronas del daño producido durante el desarrollo de diferentes enfermedades neurodegenerativas.

Autor: TROYANO DÍAZ ALFONSO.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS.

Resumen: La muerte celular es un proceso necesario para el mantenimiento del equilibrio tisular conocido con el nombre de homeostasis. Dentro de los diversos tipos de muerte observados en los organismos eucariotas superiores los dos modos de muerte más importantes son la apoptosis y la necrosis. Las características fenotípicas de estos dos tipos de muerte son fácilmente distinguibles, al igual que las consecuencias que dichos modos de muerte tienen en el tejido celular. En esta Tesis Doctoral se ha investigado la relación existente entre la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) y el desarrollo de ambos tipos de muerte en el daño citotóxico inducido por diversos agentes antitumorales. Por otro lado, se ha analizado comparativamente los mecanismos reguladores de ambos tipos de muerte inducida por agentes alquilantes y por un tratamiento pro-oxidante, como es el aporte exógeno de peróxido de hidrógeno. Además, se ha analizado la implicación de las rutas de señalización por MAP quinasas en el desarrollo de la muerte apoptótica y necrótica inducida por agentes antitumorales. Todos los datos obtenidos han permitido concluir que: A,- La inducción de apoptosis por agentes antitumorales específicos del DNA en células promonocíticas humanas está mediada por oxidación celular. B,- La reducción de los niveles de glutation intracelular generan un ambiente pro-oxidante capaz de incrementar específicamente la toxicidad de agentes alquilantes. Esto se manifiesta como un cambio del tipo de muerte de apoptosis a necrosis, aparentemente debido a una alteración severa de la funcionalidad mitocondrial. C,- Los mecanismos de selección del modo de muerte celular (apoptosis o necrosis) por supresión de glutation difieren sustancialmente de los observados tras el tratamiento con oxidantes exógenos. D,- Contrariamente a lo descrito en otros modelos celulares, la generación de apoptosis por el agente cisplatino es positivamente regulada por la subfamilia de las MAP quinasas ERK 1/2.

Autor: MASOCHA WILLIAS.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: INTRODUCCIÓN Se ha demostrado que la morfina estimula la actividad de la Na+, K+ -ATPasa cerebral. Sin embargo, los mecanismos moleculares implicados en estos efectos (tales como el papel de los receptores opioides y las proteínas G) no se conocen bien. Por otro lado, algunos investigadores no han detectado el efecto estimulante de la morfina en la Na+, K+ -ATPasa in vitro, lo que podría ser debido al uso de condiciones experimentales diferentes. OBJETIVOS El primer objetivo fue caracterizar las condiciones optimas de trabajo para valorar la actividad de la Na+, K+ -ATPasa en sinaptosomas cerebrales in vitro y valorar los efectos de la morfina en ella. El segundo objetivo fue comparar los efectos de la morfina sobre la actividad de la Na+, K+ -ATPasa con los de otros agonistas opioides u. El tercer objetivo fue evaluar la modulación producida por la naloxona, antagonistas selectivos de los receptores opioides u y bloqueantes de las proteínas G i/o sobre los efectos inducidos por los agonistas opioides u en la Na+, K+ -ATPasa. El Cuarto objetivo fue estudiar in vivo la modulación producida por los bloqueantes de la Na+, K+, -ATPasa (ouabaína, digoxina y digitoxina) de un antinocicepción inducida por los agonistas opioides u. MÉTODOS Todos los experimentos se realizaron con ratones hembras CD-1 Swiss (Charles River) de peso comprendido entre 25 y 30 g. Los animales fueron tratados de acuerdo con las directrices de la Unión Europea para el cuidado de los animales de laboratorio (Directiva 86/609) y las normas éticas para la investigación del dolor en animales conscientes. La actividad de la NA+, K+ -ATPasa sensible a la ouabaína fue medida en sinaptosomas del cerebro anterior de ratón y fue calculada como la diferencia entre la actividad total y la insensible a ouabaína (1mM). Para hallar la actividad de la Na+, K+ -ATPasa, se recurre indirectamente a la concentración del fosfato inorgánico liberado por la actividad catalítica de la enzima sobre el ATP durante la incubación que fue medida espectrofotométricamente. El grado de aninocicepción inducido por los fármacos fue elevado usando el test de la retirada de la cola de un foco calorífico del modo previamente descrito. El análisis estadístico de los datos fue realizado mediante un análisis de la varianza de una vía (ANOVA) seguido del test de Newman-Keuls, un ANOVA de dos vías seguido del test de Bonferroni, o mediante un test de Student para datos no apareados, según el tipo de experimento.