FARMACOLOGIA MOLECULAR, 2

Autor: TORRES GARCÍA CRISTINA.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE PARASITOLOGÍA Y BIOMEDICINA LÓPEZ-N..

Resumen: En este trabajo, titulado "Caracterización del transportador ABCA1 de Trypanosoma cruzi", se ha conseguido identificar y caracterizar un transportador de tipo ABC ("ATP binding cassette") denominado TcABCA1 en Trypanosoma cruzi, el cual muestra una gran homología y/o similitud con la subfamilia ABCA previamente descrita en mamíferos. Esta subfamilia recientemente se ha relacionado con el transporte de lípidos. En este trabajo, se ha clonado y secuenciado el gren responsable del mismo, que se ha situado en dos cromosomas homologos de diferente tamaño. Estos resultados aportan una información muy útil en el marco del proyecto genoma de Trypanosoma, y que ayudará en el futuro en el conocimiento y mapeo de otros transportadores de tipo ABC en estos microorganismos. Mediante diversas técnicas, se ha conseguido la sobreexpresión de esta proteína, lo que ha resultado de gran utilidad a la hora de la obtención de anticuerpos policlonales frente a TcABCA1. Estos anticuerpos han sido empleados posteriormente en experimentos de inmunofluorescencia directa e inmunocitoquímica para localizar el citado transportador TcABCA1, en el bolsillo flagelar y en estructuras relacionadas con el tráfico vesicular. TcABCA1, sólo aparece en las formas amastigotas intracelulares, donde presenta altos niveles de expresión, y posteriormente se distribuye de forma diferente cuando el parásito comienza a virar a forma tripomastigota. Tanto los estudios de Northern blot, Western blot e inmuunofluorescencia indirecta, demuestran que las formas tripomastigotas extracelulares no expresan TcABC1. El hecho que la proteína TcABC1 se exprese de forma diferencial en los distintos estadíos del parásito puede llevar asociado un papel importante, en los procesos de crecimiento y diferenciación celular, adaptación a las distintas condiciones ambientales, infectividad, etc. El trabajo se completa finalmente, con un original estudio, donde utilizando diferentes marcadores fluorescentes y enzimáticos se ponde de manifiesto que el transportador TcABCA1 de Trypanosoma, podría participar en algunos procesos de endocitosis y también de exocitosis. Paralelamente, la sobreexpresión de TcABC1 en T.cruzi, provoca un incremento en el número de formas de transición del estadío epimastigote o tripomastigote metacíclico. Estos resultados parecen sugerir de nuevo, que esta proteína podría desempeñar un papel clave en este proceso de diferenciación del parásito, y abre interesantes perspectivas biotecnológicas en el conocimiento de la infección por parte de estos parásitos en las células hospedadoras.

Autor: PANIAGUA PARDO MIGUEL ANGEL.
Año: 2002.
Universidad: LEON .
Centro de lectura: CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.

Resumen: En este trabajo se describe un estudio farmacológico caracterizando los receptores muscarínicos y sus subtipos en el encéfalo de pollo (Gallus gallus, orden galliformas), con algunos estudios comparativos en otras cuatro especies de aves pertenecientes a órdens filogenéticamente distantes (ánade real, Anas platyrhynchos, or.anseriformes: paloma bravía, Columba livia, or.columbiformes; canario.Serinus canaria, or.paseriformes, Melopsittacus aundulatus, or.psitaciformes). En este estudio se han empleado técncias de fijación de radioligandos a membranas y autorradiografía cuantitativa y funcional. Para los estudios de fijación de radioligandos a membranas y autorradiografía cuantitativa se ha utilizado como radioligando [3H]N-metil escopolamina ([3H]NMS), y mediante el uso de ligandos fríos específicos para los diferentes subtipos se han caractizado farmacológicamente los receptores muscarínicos y la distribución anatómica de los mismos a los largo del encéfalo de Gallus gallus. Además, se ha realizado un estudio comparativo mediante autorradiografía cuantitativa de la distribución de los subtipos de receptores muscarínicos en el encéfalo de las cinco especies de aves anteriormente citadas. El estudio de autorradiografía funcional se ha realizado utilizando como marcador GTP-gamma-[35S], y de este modo se ha caracterizado la respuesta funcional de los receptores muscarínicos encefálicos de Gallus gallus cuando estos son estimulados por los agonistas muscarínicos carbamilcolina (Cch) y oxotremorina. En este trabajo se demuestra que el radioligando [3H]NMS es adecuado para el marcado de los receptores muscarínicos en aves, con unas características de saturabilidad, afinidad y especificidad similares a las descritas en mamíferos. El uso de diferentes ligandos fríos indica que los receptores muscarínicos en el encéfalo de Gallus gallus presentan en general unas características farmacológicas similares a los de mamíferos. La distribución de la población total estos recepoteres en estructuras homólogas del córtex cerebral, ganglios basales y colículo superior de mamíferos. La respuesta a los agonistas Cch y oxotremorina en autorradiografía funcional presenta una distribución anatómica similar a la descrita en mamíferos, con las mayores respuestas en áreas homólogas del colículo superior, el estriado y núcleos talámicos de mamíferos. En este trabajo sin embargo se demuestra que existen importantes diferencias en la distribución o la farmacología de algunos subtipos muscarínicos encefálicos entre aves y mamíferos. En este sentido, el subtipo muscarínico M1, tal y como se define mediante criterios farmacológicos en el telencéfalo de mamíferos, no aparece en el encéfalo de aves. En aves predomina el subtipo M3 en el telencéfalo, los subtipos M2 y M4 predominan en estructuras estriatales y en el tallo cerebral, y el subtipo M5 es muy poco importante.

Autor: PÉREZ OLMEDA M. TERESA.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CC BIOLÓGICAS.

Resumen: La hepatitis C es un problema sanitario de gran importancia. La coinfección por VIH/VHC ha cobrado gran relevancia debido al incremento en las expectativas de vida de los pacientes VIH+ desde la introducción de terapia HAART. En los pacientes VIH+ la prevalencia de la infección por VHC es más elevada que en el resto de la población y en ellos la mortalidad por enfermedad hepática de origen vírico está aumentando. El tratamiento de la hepatitis crónica C tiene un amplio espectro de efectos secundarios y puede presentar interacciones entre los fármacos atirretrovirales. La respuesta terapéutica al tratamiento y su duración del mismo puede predecirse antes del inicio del tratamiento en base a la carga viral VHC y el genotipo que presente el paciente. Tras el análisis de un amplio espectro de pacientes observamos que tan sólo el 20% de los pacientes coinfectados por VIH/VHC presenta factores virológicos basales favorables de respuesta. El tratamiento con IFNA o PEG- IFN en combinación con la Ribavirina resultó ser relativamente seguro y bien tolerado. La respuesta a esta terapia combinada es inferior a la observada en pacientes VIH negativos. Por otro lado, el beneficio terapéutico fue ligeramente superior con PEG-IFN+RBV frente al IFN convencional con RBV. Por su parte el factor virológico con mayor valor predictivo de respuesta en pacientes coinfectados es el genotipo del VHC. Un dato reseñable del estudio resultó ser que el genotipo 3 a pesar de alcanzar un mayor índice de respuesta al final del tratamiento (6 meses) fue el que presentó el mayor porcentaje de recidivas. Esto sugiere que a diferencia de lo que ocurre en los pacientes VIH negativos, los pacientes coinfectados por VIH/VHC con genotipo 3 debería tratarse durante más tiempo. La cuantificación del RNA-VHC a las 12 semanas de tratamiento tiene un valor predictivo de respuesta en los pacientes coinfectados, tal y como ocurre en los pacientes VIH negativos. De manera que los pacientes que en la semana 12 de tratamiento no obtengan una reducción de viremia igual o superior a los 2 log con respecto a la basal no cabe esperar beneficio terapéutico y el tratamiento puede suspenderse. Esto reducirá considerablemente el riesgo de efectos adversos.

Autor: RIVAS BOYERO ÁNGEL ANÍBAL.
Año: 2002.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: El dolor es un grave problema que afecta a la humanidad, se considera como una mecanismo de alarma a través del cual un individuo reconoce un daño en la integridad física de su organismo. El sistema opioide, tanto los receptores opioides como sus ligandos, intervienen en la modulación del dolor. La clonación de los receptores opioides ha permitido el desarrollo de nuevos fármacos que intervengan en la analgesia. La clonación de un nuevo receptor de la familia opioide, ORL1, así como su ligando, nociceptina u orfanina FQ, han abierto un nuevo campo para el estudio y desarrollo de nuevos compuestos que puedan ser utilizados en la terapéutica del dolor. Un pez cebra ha sido utilizado como modelo para el estudio de enfermedades en el hombre. Hasta el momento se han clonado cuatro tipos de receptores tipo opioide en este modelo experimental (ZFOR1, ZFOR2, ZFOR3 y ZFOR4). En este trabajo nos propusimos clonar el receptor homologo al receptor ORL1 de mamíferos en el pez cebra. Como resultado de este trabajo hemos clonado un nuevo receptor en el pez cebra denominado ZFORL. Este nuevo receptor presenta una alta homología con los receptores tipo ORL de mamíferos, cerca del 60%, y con los receptores opioides alrededor del 50%. Los estudios de expresión de este receptor dentro del sistema nervioso del pez cebra muestran una amplia expresión a lo largo del sistema nervioso del pez cebra y, que además difiere de los clonados en el pez cebra y presenta algunas diferencias con los clonados en mamíferos, principalmente en el cerebelo. La transfección de su cDNA en una línea celular permitió la caracterización de sus propiedades farmacológicas, confirmando una unión específica y saturable, y con un solo sitio de unión del ligando endógeno Nociceptina (KD=0.36nM; BMAX=120.6fmol/mg proteína). Estudios de desplazamiento revelaron que el ligando opioide endógeno dinorfina A presentaba una mayor afinidad por el receptor que el propio ligando Nociceptina, con unos valores de Ki de 0.5nM y 1.91nM respectivamente. Finalmente estudios de activación demostraron que el receptor era funcional así como que el ligando endógeno nociceptina fue el ligando más eficaz.

Autor: CASTILLO PATERNA M. MAR.
Año: 2002.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: E.U. ÓPTICA Y OPTOMETRÍA (ÁREA DE FARMACOLOGÍA).

Resumen: El envejecimiento es un proceso que siempre ha provocado gran interés y dado lugar a especulaciones sobre sus causas y los factores que fijan un límite a la duración de la vida de los animales y seres humanos. Además, es un hecho de gran importancia socio-económica debido al incremento del coste de los servicios sanitarios y asistenciales. El envejecimiento de la población se ha convertido en la carga más onerosa de los servicios sanitarios de los países desarrollados debido a una gran variedad de procesos degenerativos crónicos además de los diferentes tipos de cáncer e infarto. De entre las numerosas teorías propuestas sobre las causas del envejecimiento está el concepto de que éste pueda derivar de una lesión celular por radicales libres del oxígeno, productos del metabolismo celular, probalemente el proceso biológico más importante ligado al estrés oxidativo. De ahí, el interés de establecer dos modelos para el estudio del envejecimiento prematuro: in vitro e in vivo. Los resultados obtenidos en el modelo in vitro nos indican que la inducción de un daño por estrés oxidativo en células del EPRb produce un daño celular semejante a lo que sucede en el envejecimiento con una pérdida de energía y de viabilidad celular, y que el tratamiento con antioxidantes tiene un efecto protector sobre estas células, y que Tioprolina y N-acetil cisteína protegen de la muerte por apoptosis. En el modelo de envejecimiento in vivo, los resultados nos indican que los animales que poseen a una edad temprana un peso entre 32 y 34 gramos tiene mayor esperanza de vida que los animales que a esa misma edad su peso es superior a 35 gramos, y que el tratamiento con antioxidantes en animales de mayor peso previene de la mortalidad. El tratamiento de estos ratones con Tioprolina posee un efecto protector sobre la supervivencia del grupo y los parámetros bioquímicos.

Autor: TROCHO MUÑOZ M. CARMEN.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Autor: ALONSO GASCÓN M.MERCEDES .
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE QUÍMICA MÉDICA (CSIC).

Resumen: La Enfermedad de Alzeimer (EA), es actualmente, junto al cáncer y las enfermedades cardiovasculares, uno de los principales problemas de salud en los países desarrollados. A pesar de los enormes esfuerzos que se están haciendo en los últimos años sobre el conocimiento de las bases moleculares de la enfermedad, todavaía hoy no existen fármacos curativos o capaces de detener la enfermedad. Una de las estrategias terapéuticas que se están estudiando actualmente es evitar la formación de los ovillos neurofibrilares, una de las lesiones histológicas características de la enfermedad. Este objetivo se puede cumplir impidiendo la hiperfosforilación de la proteína tau a través de inhibidores selectivos del enzima GSK-3beta. En este trabajo se muestran los derivados de 1,2,4-tiadiazolidin-3,5-diona como los primeros inhibidores selectivos de GSK-3beta a nivel micromolar que actúan por un mecanismo ATP -no competitivo. Con los buenos resultados biológicos iniciales, se propone la optimización de la síntesis de las TDZDs tanto en solución como en fase sólida. Además, para valorar la influencia de cada heteroátomo del anillo en la actividad biológica, se realizarán una serie de modificaciones estructurales, cuya evaluación biológica frente a GSK-3 permitirán establecer una serie de conclusiones sobre la relación estructura química-actividad biológica. Estas conclusiones SAR se corroborarán a través de un modelo CoMFA que nos permitirá proponer la síntesis de nuevos derivados de TDZD. Con estos datos y junto con las coordenadas cristalográficas del enzima (publicadas durante la realización de esta tesis) mediante un estudio de modelización molecular de docking automático se observará la zona de unión más probable inhibidor-enzima, proponiéndose un posible modo de unión irreversible. Adicionalmente se utilizarán modelos matemáticos de redes neuronales para comprobar la buena biodisponibilidad oral y la alta capacidad para atravesar la barrera hematoencefálica de las TDZSs. Por último, ser realizan una serie de ensayos biológicos tanto in vitro como in vivo para conocer posibles acciones adicionales en el tratamiento con TDZDs, como es, por ejemplo, su capacidad antiinflamatoria por activación de PPAR-gamma.

Autor: HERNANZ MARTÍN RAQUEL .
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UAM.

Resumen: Durante las etapas tempranas del shock séptico se produce una reducción del flujo sanguíneo y de la presión de perfusión cerebral, a pesar de la hipotensión sistémica que lo caracteriza. La inducción de iNOS y COX-2 por la endotoxina bacteriana (lipopolisacárido, LPS) podría estar asociada con estos efectos deletéreos. Por otra parte, aunque se ha descrito que alteraciones en el sistema inmune están implicadas en la cascada de sucesos que conducen a la hipertensión, el efecto de LPS en el sistema cardiovascular de animales hipertensos no se conocen bien. Por ello, el objetivo de esta Tesis ha sido estudiar los mediadores que participan en los efectos vasculares de LPS tanto a nivel cerebral como periférico. Por otra parte, debido a que el cerebro es especialmente sensible a las alteraciones producidas por la hipertensión, se ha estudiado si la hipertensión modifica la participación de estos mediadores en los efectos cerebrovasculares de LPS. Para ello, en arteria cerebral media y mesentérica superior de ratas normotensas e hipertensas, se ha estudiado: 1.- El efecto de LPS sobre las respuestas vasculares a estímulos vasoconstrictores y vasodilatadores. 2.- La participación de derivados de iNOS y COX-2, así como de especies reactivas de oxígeno, en el efecto de LPS. 3.- El efecto del LPS sobre la liberación basal y estimulada de NO. 4.- La formación de depósitos intracelulares de NO tras el tratamiento con LPS. De los resultados obtenidos en este trabajo se concluye que la endotoxina bacteriana modifica de manera opuesta las respuestas vasculares en arterias cerebrales y en arteria mesentérica superior. En arterias cerebrales, LPS produjo un aumento en las respuestas vasoconstrictoras y una reducción en las respuestas vasodilatadoras, lo que podría estar relacionado con la reducción del flujo cerebral que se observa en las primeras etapas del shock séptico. En arteria mesentérica superior, en cabmio, LPS indujo hiporrespuesta a vasoconstrictores, lo que contribuye a explicar la hipotensión sistémica que caracteriza el shock endotóxico. Estas diferencias regionales en los efectos del LPS pueden estar relacionadas con la diferente participación de mediadores de iNOS y COX-2, así como de especies reactivas de oxígeno, que se ha encontrado. Además, con la hipertensión, donde se ha descrito la existencia de un proceso inflamatorio crónico, la participación de estos mediadores está alterada.

Autor: MORET TATAY INÉS.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAT DE FARMACIA.

Resumen: En el presente trabajo de tesis doctoral, se aborda la posibilidad de estimular el sistema inmune mediante la utilización de células modificadas genéticamente para producir citoquinas, pudiendo mediar en el rechazo de una implantación de tumor e incrementar la supervivencia de los animales vacunados frente a los controles. La primera parte del trabajo ha consistido en la caracterización de los complejos formados entre los vectores no virales DOTAP (lípido) y PEI (polímero) con el ADN, mediante el desarrollo de procedimientos que permitan la cuantificación del ADN que forma parte de los complejos. Posteriormente se ha valorado la estabilidad del ADN cuando es sometidos a procesos degradativos. Tras caracterizar dos de los complejos, mayormente utilizados en la terapia génica no viral, se ha aplicado uno de estos complejos en terapias antitumorales in vivo, mediante la vacunación de los animales (ratones) son células tumorales modificadas genéticamente para producir citoquinas y posteriormente irradiadas. Se han empleado plásmidos que codifican para las citoquinas GM-CSF y para la IL-4, por ser mediadores del sistema inmune, y como línea celular la B16 que corresponden a un melanoma murino. Se ha empezado la vacunación utilizando de las células transfectadas. La administración in vivo de los clones celulares productores de GM-CSF ha resultado en la supervivencia del 100% de los animales vacunados con la dosis más elevada utilizada,y que ha descendido al 80% cuando la dosis se ha reducido de 1 millón a 0.2 millones por ratón. Sin embargo la producción de IL-4 no ha mostrado efecto antitumoral, ni la administración conjunta de células productoras de GM-CSF y de células productoras de IL-4. Posteriormente se ha utilizado como vacuna células transfectadas pero no seleccionadas (transfección reciente), que tambien ha permitido que el 100% de los ratones sobreviva a una implantación de tumor a la dosis más elevada utilizada. Reduciendo la dosis a 0.2 millones/ratón/dosis la supervivencia final ha sido del 20%. Además, este rechazo del tumor es duradero porque al reimplantar tumor en los ratones supervivientes permite obtener un 20% de supervivencia que se incremente al 100% cuando se da una dosis de vacuna previa a la reimplantación del tumro. Se ha valorado los mecanismos implicados en la respuesta inmunitaria mediante la determinación en sangre periférica de inmunoglobulina por inmunodifusión radial, y de IFN e IL-4 por RT-PCR cuantitativa. Por último se ha estudiado el efecto inhibitorio sobre la progresión de tumores al administrar células modificadas genéticamente productoras de GM-CSF tras la implantación del turmo, observándose retraso (significativo estadísticamente) en la mortalidad de los ratones vacunados frente a los controles, que indica la posibilidad de que el desarrollo de este tipo de terapias pudieran ser aplicadas en el tratamiento del cáncer.

Autor: GUILLEM PRIMO VICENTE MARTÍN.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: La entrega específica y eficiente de ácidos nucleicos a las células diana es uno de los objetivos prioritarios de la terapia génica no viral. Aunque los poliplejos (complejos ácidos nucleico-polímero catiónico) basados en polietilenimina han demostrado ser buenos agentes de transfección, la entrega del ADN mediada por poliplejos sucede de forma inespecífica y resulta además especialmente ineficiente en la transfección de algunos tipos celulares, como las células hematopoyéticas. En este trabajo se recoge la construcción de un inmunopoliplejo, un vector no viral dirigido basado en un esqueleto polipléjico y su aplicación en la transferencia de ácidos nucleicos (genes y oligonucleótidos) a diversas líneas celulares derivadas de linfomas humanos. La principal característica del inmunopoliplejo reside en la posibilidad de reemplazar fácilmente el elemento direccionador (un anticuerpo biotinilado, en el cual reside la capacidad de unión específica a la membrana de la célula diana) sin necesidad de alterar el esqueleto del vector. Esto sucede porque al polímero catiónico polietilenimina (PEI) se le ha unido covalentemente la proteína strptavidina (St), cuya misión es la de actuar como punto de anclaje al poliplejo de cualquier proteínas biotinilada, a través de la interacción específica streptavidina-biotina. La actividad de transfección de los inmunopoliplejos fue estudiada in vitro en la transferencia tanto de genes (empleado el gen de la proteína fluorescente verde como marcador) como de oligonucleótidos (marcados con fluoresceína) a diversas líneas celulares linfocitarias humanas que son fenotípicamente distintas respecto a la presencia de los antígenos CD3 y CD19 en su superficie: las líneas celulares de tipo T (Jurkat (CD3+, CD19-) y JRT3 (CD3-, CD19-) y la de tipoB (Granta 519, pues es CD3-, CD19+). Como elementos direccionadores del inmunopoliplejo se utilizaron los anticuerpos biotinilados anti-CD3 y anti CD19. Los resultados indican que la actividad del inmunopoliplejos es esencialmente específica ya que solo cuando se produce reconocimiento especifico antígeno-anticuerpo se dan niveles de transfección significativos, tanto en la transferencia de genes como de oligonucleótidos, siendo estos valores además muy superiores comparados con diversos agentes de transfección inespecíficos comerciales. Se concluye que el inmunopoliplejo es un buen vector no viral para la transferencia selectiva de ácidos nucleicos en los modelos celulares hematopoyéticos estudiados.

Autor: VICENTE MARTÍNEZ ANA M..
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La hemo oxigenasa (HO) es la enzima que cataliza la degradación oxidativa del grupo hemo, dando lugar a al formación de bilirrubina, CO y Fe2+. Se han descrito tres isoformas de HO: dos constitutivas (HO-2 y HO-3) y una inducible (HO-1) por diferentes agentes o estímulos que producen estrés oxidativo u otras condiciones patológicas. Numerosos estudios apoyan la teoría de que la HO-1 actúa como molécula citoprotectora en aquellas situaciones en las que se encuentra inducida. Durante la influencia se producen diferentes factores de estrés con el potencial de inducir HO-1; de hecho esta proteina está presente en diferentes modelos de inflamación, donde además ha mostrado efectos protectores y antiinflamatorios. En la presente Tesis Doctoral se ha estudiado en primer lugar, la regulación de HO-1 en macrófagos, células con una importante función en las respuestas inflamatorias e inmunes. Los resultados obtenidos han permitido establecer el importante papel que desempeña el NO en la regulación de la expresión de HO-1 durante el proceso inflamatorio. Además hemos demostrado que un inhibidor selectivo de COX-2, es capaz de potenciar la inducción de HO-1 por el NO exógeno a nivel transcripcional. Esta enzima se induce durante el proceso de fagocitosis de zimosán donde está regulado por el NO endógeno, lecuotrienos adicionados exógenamente y el glucocorticoide dexametasona. Por otro lado, la inducción de HO-1 en macrófagos peritoneales de ratón cultivados en condiciones basales constituye un marcador de estrés oxidativo que depende del estado redox celular y la generación de NO por la NOS constitutiva e inducible. En segundo lugar hemos demostrado el papel antiinflamatorio y regulador de HO-1 en un modelo experimental in vivo, el modelo de bolsa de aire en ratón estimulado por zimosán. Además hemos establecido las posibles interrelaciones entre HO-1 y otras enzimas inducibles en este modelo, NOS-2 y COX-2, de manera que el NO derivado de NOS-2 ejerce una regulación positiva de la expresión de HO-1 y ésta a su vez, una regulación negativa de la expresión de COX-2.

Autor: MONFORT EROLES M. PILAR.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES CITOLÓGICAS.

Resumen: La encefalopatía hepática es un síndrome neuropsiquiátrico complejo que se presenta en pacientes con fallo hepático agudo o crónico y conduce, entre otras, a alteraciones en la personalidad, la función intelectural, la coordinación neuromotora y en el nivel de consciencia. La hiperamonemia se considera el principal factor responsable de las alteraciones neurológicas en la encefalopatía hepática. Esta tesis se ha centrado en identificar alteraciones a nivel molecular en vías neuronales de transducción de señales asociadas al receptor NMDA que puedan ser responsables de alteraciones neurológicas de la Encefalopatía hepática. Hemos comprobado que en un modelo de fallo hepático crónico (con hiperamonemia) la vía de transducción de señales glutamato-óxido nítrico-GMP cíclico asociada al receptor NMDA está alterada en cerebro del animal in vivo del mismo modo que en un modelo de hiperamonemia sin fallo hepático. Esto indica que la hiperamonemia crónica y no otros factores es responsable de la alteración de dicha vía. Hemos conseguido restaurar la capacidad de aprendizaje de ratas hiperamonémicas mediante la manipulación farmacológica de la vía glutamato-óxido nítrico-GMP cíclico en cerebro, que está alterada en dichas ratas y participa en ciertos procesos de memoria y aprendizaje. Con el fin de correlacionar las alteraciones a nivel molecular con las alteraciones a nivel neurológico se ha estudiado si la hiperamonemia altera la potenciación a largo plazo (LTP) dependiente del receptor NMDA en el hipocampo, proceso considerado la base molecular de ciertas formas de memoria y aprendizaje, mostrando los resultados obtenidos que la LTP está alterada en hiperamonemia. A continuación estudiamos el mecanismos molecular implicado en la LTP que está alterado en hiperamonemia. Para ello, previamente identificamos una vía de transducción de señales que se activa durante la LTP en cortes de hipocampo de ratas control. Los resultados obtenidos muestran que durante la LTP se activa la vía guanilato ciclasa soluble-proteína quinasa dependiente de cGMP-fosfodiesterasa que degrada cGMP y que la activación de esta vía es necesaria para que la inducción de la LTP se produzca adecuadamente. Por último se estudió si esta vía está alterada en hiperamonemia y en caso de ser así si dicha alteración/es son las responsables del deterioro de la LTp observado en situación de hiperamonemia. Los resultados obtenidos muestran que la hiperamonemia altera la modulación de esta vía en este tipo de LTP y que la alteración se produce a nivel de la activación de la fosfodiesterasa que degrada cGMP por la proteína quinasa dependiente de cGMP. Esta alteración parece ser la responsable de la pérdida del mantenimiento de la LTP observado en hiperamonemia.

Autor: DOLZ IZQUIERDO M. CARMEN.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOMEDICINA DE VALENCIA CSIC.

Resumen: A partir del sobrenadante del cultivo de la haloarquea Haloferax gibbonsii Ma 23.39 se obtiene la halocina H6 que inhibe el intercambiador Na+/H+ de haloarqueas sensibles. Este intercambiador es vital para estas células que viven en ambientes hipersalinos y lo precisan para mantener la homeostasis del Na+. Una purificación del sobrenadante del citado cultivo de H.gibbonssi sobre la base de la precipitación con acetona y FPLC en fase reversa con gradiente de acetonitrio permite purificar un péptido que conserva toda la actividad de H6. Este péptido, PINHE, tiene un peso molecular de 2732 Da y está formado por 28 aminoácidos. Se trata de un péptido hidrófobo y termorresistente, soporta rangos amplios de pH, su actividad es independiente de la concentración salina y es sensible a pronasa y resistente a tripsina. Sobre la base del objetivo principal del presente trabajo de determinar si tanto H6 como PINHE inhiben elintercambiador NHE de eucariotas se desarrolló un modelo de ensayo para determinar la actividad de NHE. Dicho modelo se basó en producir una acidificación del citoplasma de células de mamíferos conpulsos de ácido propiónico y seguir la evolución del pHi (intracelular) por citometría de flujo. Se bloquearon otros transportadores implicados en la regulación de pHi (NCS y NDAE). La actividad de NHE se calculó sobre la base de determinar la velocidad inicial de recuperación de pHi a partir del ajuste matemático de los datos experimentales. Todas la células utilizadas: fibroblastos de ratón NIH3T3, embrionarias de riñón humano HEK293, cardiomiocitos de ratón HL-1 y cultivos primarios de músculo esquelético humano respondieron al modelo experimental propuesto de forma similar. Tanto H6 como PINHE inhiben el NHE de células de mamífero. PINHE inhibe de forma específica y reversible el NHE. Esta inhibición es dependiente de la concentración de PINHE pudiendo calcularse una concentración inhibitoria del 50% (IC50) de 4.8 uM (HEK293), 9.5 uM (NIH3T3) y 13 uM (HL-1). La inhibición de NHE por PINHE evita la acumulación intracelular de Na+ y Ca++ tras la acidificación, previniendo el denominado "efecto cascada". PINHE no es citotóxico no inhibiendo el crecimiento de NIH3T3. PINHE se perfila como un candidato a prevenir a paliar los efectos perjudiciales de la isquemia, reperfusión o hipoxia severa que cursan con la acidificación del citoplasma.

Autor: GONZÁLEZ CONTRERAS LUIS GERARDO.
Año: 2001.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En esta Tesis Doctoral se estudia los cambios adaptativos producidos por el tratamiento crónico con el agonista opioide morfina (45 mg/kg/día durante seis días a través de minibombas osmóticas s.c. Y 20 mg/kg (i.p) dos veces día durante tres días) en dos sistemas efectores celulares como son los canales de potasio dependientes de ATP y la Na+, K+-ATPasa sinaptosomal a nivel del sistema nerviosos central. En una primera fase se evaluó la modulación inducida por la administración mantenida de la morfina sobre las propiedades de fijación del radiolognado (3H)glibenclamida, con la finalidad de observar si la tolerancia a la morfina producía cambios adpatativos sobre los canales de potasio dependientes de ATP. En una segunda fase es estudió la modulación tanto por la administración aguda como crónica de la morfina sobre la Na+, K+-ATPasa cerebral y la implicación de las proteínas G en dicha modulación. En una tercera fse, se valoró la implicación funcional in vivo de la estimulación de la Na+,K+-ATPasa en la analgesia inducida por la morfina, tanto en animales controles como en tolerantes a este opioide. Claramente queda demostrado en esta Tesis Doctoral que la tolerancia a la mforina efectivamente produce cambios adpatativos tanto en los canales de potasio dependientes de ATP como en la actividad enzimática de la Na+, K+-ATPasa cerebral. Igualmente queda demostrado en este trabajo que la administración aguda de la morfina produce un aumento de la actividad de la Na+, K+-ATPasa sinaptosomal y que este efecto es modulado a través de las proteínas Gi/o sensibles a la toxina pertúsica (bloqueante selectivo de este subtipo de proteínas G). Finalmente fue también demostrado que la estimulación in vitro de la actividad de la Na+, K+-ATPasa inducida por la morfina tiene efectivamente una repercusión funcional in vivo, puesto que la co-administración de inhibidores específicos de la enzima (ouabaína i.c.v) anatagoniza el efecto analgésico de la morfina, pero no modifica dicho efecto analgésico bajo condiciones de tolerancia a este opioide.

Autor: GONZÁLEZ IGLESIAS SARA .
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La isquemia cerebral es una de las principales causas de muerte en la actualidad y por ello, es importante desarrollar una terapia que pueda actuar sobre los distintos mecanismso que se desencadenan en dicha patología, no sólo con el fin de disminuir su tasa de mortalidad, sino también para paliar total o parcialmente las graves secuelas de tipo neurológico que se pueden producir. Duarante la isquemia cerebral se desencadenan una serie de acontecimientos fisiológicos que van a dar lugar al daño neurológico y a la posterior muerte celular. El presente trabajo fue realizado con el fin de avanzar un poco más en la búsqueda de una terapia eficaz grene a la isquemia cerebral, utilizando para ello tres fármacos con efectos diferentes al actuar por diversos mecanismos de acción en la cadena fisiopatológica desencadenada duran el proceso isquémico. Así inicialmente hemos administrado a los diferentes grupos de animales, el DESMETILTIRILAZAD, un barredor de radicales libres que actua sobre la membrana celular estabilizándola e inhibiendo la activación de la peroxidación lipídica, la salida masiva de aminoácidos excitotóxicos, y, consecuentemente el incremento en la concentración intracelular de calcio. Otro de los compuestos utilizados ha sido la DIZOCILPINA, un potente antagonista de los receptores NMDA, con el fin de bloquear el paso de calcio al interior de la célula acoplado a los canales iónicos asociados a estos receptores, y por último, hemos administrado un antagonsita de los canales iónicos asociados a estos receptores, y por útlimo, hemos administrado un antagonista de los canales de calcio tipo L, el NIMODIPINO, que bloquea otra de las principales vías de entrada de este ión en el interior de la célula. También administramos la combinación de los tres compuestos con el fin de establecer la exisencia de un posible sinergismo potenciador. Los estudios se han llevado a cabo en ratas sometidas a isquemia cerebral de 30 minutos de duración y en ratas sometidas a reperfusión de 30 horas. Para determinar el efecto preventivo de los fármacos administrados, se llevó a cabo la determinación de los siguientes parámetros: determinación de la actividad de la NOSc, determinación de los niveles de GMPc, cuantificación de los receptores NMDA y evaluación del estado neurológico del animal a las 5 horas de la reperfusión. Los resultados obtenidos en este trabajo mostraron como la isquemia cerebral global transitoria de 30 minutos de duración producía un incremento significativo en la actividad de la NOSc, en los niveles de GMPc, y en la activación de los receptores NMDA, mientras que el pretratamiento con todos los fármacos en estudio disminuian los valores alcanzados durante la isquemia y en muchso casos se aproximaban a los valores control. Nuestros resultados mostraron también, que la reperfusión de 30 horas producía una disminución de los valores alcanzados en la actividad de la NOSc, de los niveles de GMPc y de la actividad de los receptores NMDA a valores similares a los valores control, mientras que pretratamiento con los fármacos en estudio y su asociación no produjeron mejoría en ninguno de los ensayos realizados exceptuando el efecto que la administración del nimodipino y, por lo tanto, de la triple asociación (debido a la presencia en ella de éste último), presentó sobre los valores de la NOSc incrementándolos ligeramente respecto a los valores control, debido posiblemente a sus propiedades de mejora del flujo sanguíneo. En cuanto a la evaluación del estado neurológico del animal, se observó como el pretramiento con los diferenes compuestos mejoraban el estado neurológico del animal, destacando el efecto del Desmetiltirilazad y exceptuando el caso de la Dizocilpina donde esa mejoría fue inexistente. Los datos obtenidos en este trabajo confirman el efecto protector de estos fármacos frente a la isquemia cerebral de 30 minutos de duración, destacando el efecto del Desmetiltirilazad y del Nimodipino. En cuanto a la fase de reperfusión de 30 horas, nuestros datos reflejan que es la propia reperfusiónla que produce una mejoría de todos los parámetros analizados y no la administración de los compuestos en estudio.Sin embargo, si se observó como el pretratamiento con todos estos fármacos producía una mejoría del estado neurológico del animal, destacando los efectos del Desmetiltirilazad y del Nimodipino que fueron los que proporcionaron un mayor índice de protección y una mayor tasa de supervivencia.

Autor: VEGA CHAPELA M. JESUS.
Año: 2001.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Se ha sintetizado una serie de agonistas potenciales del receptor RxR basados en el esqueleto de 6-ter-butil-1,1-dimetilindano utilizando reacciones de acoplamiento catalizadas por metales de transicion. Asimismo, se ha diseñado la sintesis de analogos de acidos 9-cis-retinoico en los que se ha sustituido el anillo de ciclohesenilo por el grupo 3,5-ditec-butil: benceno. Se, han sintetizado dos familias de analogos heterociclicos de la prostaglandina 15-desoxi-A12,14-PGJ2, lugando selectivo de PPARy. Una familia de analogos presenta una estructura de tiofeno 2,3-disustituido. La otra familia presenta un esqueleto de S-lactona, L,B insaturada.

Autor: OTERO CABREDO M. PAZ.
Año: 2001.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: Este trabajo de Tesis Doctoral trata sobre el diseño basado en la estructura, la síntesis estereocontrolada y la posterior evaluación de la actividad biológica, de una serie de compuestos, ligandos potenciales de receptores nucleares, en concreto, ciclopentenonas y retinoides. Las ciclopentenonas, posibles agonistas del receptor TPAR son análogos estructurales del agonista natural más potente del receptor, una prostaglandina de la serie J. Se ha abordado la síntesis de cuatro series de análogos de prostaglandinas diferentes, obteniendo tres de ellas con excelentes resultados y llegando a obtener intermedios avanzados en la restante, que conducirán a los productos finales en muy pocas etapas. Los ritinoides, posibles ligandos selectivos de RXR, están basados en la estructura del ligando natural, el ácido 9-cis-retinoico, y se caracteriza por incorporar carbociclos entre las posiciones 9 y 10 de la cadena lateral del retinoide. Los resultados de la actividad biológica han revelado que toda una serie de análogos de prostaglandinas muestran afinidad por el receptor; además, también uno de los retinoiedes sintetizados se mostro activo. Por otro lado, se han realizado estudios de modelización molecular con el fin de explicar, desde el punto de vista estructural, los resultados biológicos experimentales de los retinoides y se ha llegado a una serie de conclusiones importantes para el diseño de nuevos análogos.

Autor: MONTERO VÉLIZ EVA IRENE.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Se ha realizado la síntesis y caracterización estructural de compuestos de platino(II), mono y dinucleares, y de platino (IV), con geometría trans y distintas aminas alifáticas. El estudio de la actividad citotóxica en líneas celulares sensibles y resistentes al cisplatino, muestra para estos compuestos unas propiedades citotóxicas diferentes de las presentadas por el cisplatino, pues no sólo son activos frente a líneas celulares sensibles a esta droga, sino que, en algunos casos, estos compuestos son capaces de vencer la resistencia al mismo, siendo el compuesto trans-(PtCl2(dimetilamina)(isopropilamina)) el que presenta mayor actividad. Por este motivo hemos estudiado su capacidad de inducir apoptosis, su interacción con ADN y con oligonucleótidos, y los efectos que provoca en el cambio conformacional B - Z del ADN. Los resultados obtenidos indican que: * La inducción de apoptosis por el compuesto trans-(PtCl2(dimetilamina)(isopropilamina)) en células A2780cisR está relacionada con la formación de un nivel alto de aductos intercatenarios en el ADN genómico. * El compuesto trans-(PtCl2(dimetilamina)(isopropilamina)) también induce la formación de aductos intercatenarios en ADN de plásmidos y en oligonucleótidos sintéticos de doble cadena. La formación del aducto intercatenario se produce entre una guanina y su citosina complementaria a diferencia del cisplatino, que produce dicho aducto, mayoritariamente, entre guaninas situadas en cadenas complementarias. * La formación de aductos intercatenarios por el compuesto trans-(PtCl2(dimetilamina)(isopropilamina)) retrasa la transición B-DNA - Z-DNA, inducida por NaCl. Las conclusiones anteriores muestran que la unión a un centro trans-PtCl2 de diferentes aminas alifáticas da lugar a compuestos capaces de vencer la resistencia al cisplatino, que podría dar lugar a un espectro clínico de actividad complementario a dichos fármaco.

Autor: PARODI TALICE ADRIANA.
Año: 2001.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE PARASITOLOGÍA Y BIOMEDICINA LÓPEZ-N..

Resumen: En este trabajo, se ha conseguido identificar y caracterizar un transportador de tipo ABC ("ATP binding cassette") denominado LtrABC1.1 en Leishmania tropica, el cual muestra una gran homología y/o similitud con la subfamilia ABCA previamente descrita en mamíferos, y que recientemente se ha relacionado con el transporte de lípidos. Se ha clonado y secuenciado el gen responsable del mismo, que se ha situado en los cromosomas con tamaño de 1,2 y 0,6 Mb respectivamente; este resultado aporta una información muy útil en el marco del proyecto genoma de Leishmania, y que ayudará en el futuro en el conocimiento y mapeo de otros transportadores de tipo ABC en estos organismos. Mediante diversas técnicas, se ha conseguido la sobreexpresión de esta proteína, lo que ha resultado de gran utilidad a la hora de obtención de anticuerpos policlonales frente a LtrABC1.1. Estos anticuerpos han sido empleados posteriormente en experimentos de inmunofluorescencia directa e inmunocitoquímica para localizar el citado transportador LtrABC1.1 en el bolsillo flagelar de este parásito. El trabajo se completa finalmente, con un estudio sobre infección de macrófagos con células de Leishmania que sobreexpresan el transportador LtrABC1.1, y en los cuales el grado de parasitación es menor que en los experimentos control. Estos resultados parecen sugerir que esta proteína podría desempeñar un papel clave en los procesos de infección, posiblemente alterando algún factor implicado en la invasión celular del parásito en la célula hospedadora, y abre interesantes perspectivas biotecnológicas en el conocimiento de la infección por parte de estos parásitos en las células hospedadoras.

Autor: SIMÓN FERNÁNDEZ BELÉN.
Año: 2001.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA DE LA UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: La primera referencia de B. Taci en la literatura entomológica española data de 1943, con el trabajo taxonómico de Gómez-Menor (1943). Pero su papel como plaga no fue relevante hasta mediados de los años 80, coincidiendo con una explosión demográfica del insecto en diversas partes del mundo, y muy especialmente en el sur de Estados Unidos, debida a la aparición y diseminación a escala mundial de un nuevo biotipo del insecto, denominado biotipo B. Este nuevo biotipo presenta una serie de características biológicas que permiten su rápida adaptación a hábitats y huéspedes muy diversos, desplazando y sustituyendo a biotipos locales y transmitiendo nuevos virus de malas hierbas a plantas cultivadas. Este hecho despertó el interés por caracterizar la distribución de biotipos de Bemisia tabaci en nuestro país y dio fruto a un amplio conocimiento de la situación en España de los biotipos existentes describiendo por primera vez un biotipo denominado en un primer momento biotipo no-B y finalmente llamado biotipo Q, cuya existencia no se había descrito antes en ningún otro país. También se conocía la existencia de un biotipo descrito en una sola prospección en 1995 en Nerja (Málaga) denominado biotipo S y la presencia del biotipo B en Barcelona, Madrid y Sureste de la Península. También existe amplia información acerca de la eficiencia de Bemisia tabaci como vector de una serie de virus que causan graves daños en cultivos hortícolas españolas, tales como: el virus del amarilleo en cucurbitáceas (CYSDV), crinivirus presente en España desde principio de los años 90; el rizado amarillo del tomate (TYLCV), begomovirus citado por primera vez en 1992; clorosis en tomate (ToCV), crinivurs de reciente introducción, cuya primera cita bibliográfica es de 2000 y amarillo en vena del pepino (CVYV), Potyvirus citado en 2001 por primera vez en el sureste español. La información de la situación en España era muy amplia pero se echaba de menos un conocimiento equivalente de la situación en los países de nuestro entorno, ya que sólo se conocía la presencia predominante del biotipo B en toda la cuenca. Y ampliar esta información es interesante, ya que los países de la cuenca mediterránea comparten un situación agroclimática que da lugar a una convergencia en las técnicas de producción, además del intenso intercambio de material vegetal entre estos países, que puede dar lugar a medio plazo a la difusión de problemas fitopatológicos. Esto nos hizó plantear una prospección de gran alcance para aclarar la situación de bitipos de B.tabaci en toda la cuenca mediterránea. Intentando resolver si el biotipo Q era exclusivo de la Península Ibérica o estaba presente en otro países de la cuenca. También se intentó aclarar el origen del biotipo Q, si era un biotipo introducido o era autóctono en los países en los que se encontró. Y se realizó un estudio comparativo de poblaciones de biotipo B y Q para tratar de inferir rutas de propagación de los mismos. La situación actual de los biotipos, a partir de los datos presentados en esta Tesis, muestra una sitaución mucho más compleja y cambiante de la esperada, que podríamos resumir en los siguientes aspectos: El biotipo Q está mucho más extendido en la cuenca mediterránea de lo que se había sospechado. La prospección ha revelado por primera vez su presencia en: Cabo Verde, Canarias, Marruecos, Mali, Francia, Italia, Grecia, Israel y Egipto. Al determinar la variabilidad poblacional de diversos países, se deduce que la presencia del biotipo Q en Marruecos e Italia no obedece a una introducción reciente sino que podría ser un biotipo autóctono de estos países al igual que en España. El biotipo B no se ha detectado en el sur de la Península Ibérica desde 1998, ni tampoco en Marruecos, Portugal ni en Cabo Verde. Sin embargo, coexiste con el biotipo Q en muchos lugares tales como en el Norte de España, Francia, Italia, Grecia, Israel y Egipto. Los datos de RAPD-PCR y AFLPs sugieren que el biotipo Q es el autóctono de la cuenca mediterránea, mientras que el B se ha ido introduciendo más recientemente con un aparente gradiente de introducción de Este a Oeste. También se ha confirmado la existencia en el Sur de España del biotipo S, cuya presencia sin riesgos agronómicos, es más estable y extensa de lo que se sospechaba. Al analizar la secuencia del gen mitocondrial COI, de este biotipo S se le ha emparentado con poblaciones africanas monófagas en mandioca, que constituyen un clade filogenético singular. En Sicilia se ha descrito la existencia de una población muy singular, monófaga de Euphorbia carachas, en una zona de 800 m de altitud y de bajas temperaturas. Al analizar la secuencia del gen COI de esta población vemos que aparece próximo a poblaciones de Pakistán y Nepal, incluidos en el clade Indio. También con análisis de secuencia del gen COI se ha puesto de manifiesto la existencia en Pakistán de tres clades filogenéticos diferentes, el B confirmado así datos poco concluyentes en bibliografía anterior y la existencia mezclada de poblaciones pertenecientes a los clades Surasiático y Mediterráneo Africano