FARMACOLOGIA MOLECULAR, 3

Autor: PÉREZ REYES PEDRO LUIS.
Año: 2001.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Estudiamos los efectos de los bifenilos policlorados (PCB) sobre el ciclo celular, partiendo de dos sistemas de estudio, cultivos primarios de túbulo renal de rata e intoxicaciones semicrónicas de ratas. Se obtiene que los PCB producen apoptosis en túbulo renal de rata de bazo, timo y corteza renal de ratas intoxicadas, que dicha apoptosis implica aumentos en los niveles de proteína Bax y disminución en los Bcl-2 así como en los de procaspasa-3, por otra parte se observa condensación celular y burbujeo tipo apoptosis. En las pruebas realizadas para observar niveles de citotoxicidad se concluye que los PCB se comportan de manera dosis, tiempo y forma molecular/mezcla dependiente. Las secuencias de citotoxicidad son las siguientes: Aroclor 1016>Aroclor 1248>Aroclor 1260; CB 77>CB 126>CB 153. Las secuencias de apoptosis son las siguientes; Aroclor 1016>Aroclor 1248> Aroclor 12060; CB 126>CB77>CB153. Se realizaron pruebas de proliferación celular, mostrando dosis dependencia, y clara capacidad los Aroclores 1016,1248 y 1260, así como el CB 126. Por otra parte, las proteínas cPLA2 y PKC-a sufren cambios dosis y tiempo dependiente en varios órganos de animales intoxicados. La cPLA2 ve aumentada su nivel en la célula y su translocación: la PKC-a sufre disminuciones en ambos parámetros. Se aprecio aumento en el valor de la hemoglobina corpuscular media en sangre de ratas intoxicadas, así como hiperplasia del hígado y atrofia del bazo y timo. Se concluye que los PCB producen citotoxicidad, proliferación celular y cambios en cascadas de transducción de señales y que lo hacen de manera dependiente de la dosis.

Autor: PELLICCIONI PATRICIA MIRIAM.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACION CONTINUADA.

Resumen: La Toxina Tetánica(TeTx) es una endopeptidasa de Zn2+ sintetizada por el bacilo Clostridium tetani, responsable de la enfermedad tetánica. La neurotoxina clostridiales presentan una elevada especificidad por sus sustratos proteicos localizados en la membrana, responsables de la fusión de la membrana vesicular con la membrana plasmática, impidiendo con su hidrólisis la liberación de los neurotransmisores contenidos en las vesículas sinápticas. Esta actividad es considerada como la principal causante de la toxicidad de las neurotoxinas clostridiales. La TeTx y el fragmento pesado Tc-TeTx terminal( no tóxico) inhiben el transporte de 5-hidroxitriptamina(5-HT) en cultimos primarios de neuronas corticolas de cerebro de rata. Por otro lado no se produce inhibición de la captación con el tratamiento de los cultivos con la cadena ligera L-TeTx, ni con la toxina boulínica A que produce activación de la captación de 5-HT. Este efecto producido por la TeTx coincide con la activación de fosfoinosítidos-fosfolipasa C y traslocación down-regulation de algunas isoformas de la PKC. TeTx induce traslocación de la PKCB, y down-regulation de las isoformas a y . La genisteína, inhibidor de tirosinas quinasasy bajas concentraciones del ester de forbol 12-O-tetradecanoilforbol 13-O-acetato producen inhibición de la captación de 5-HT a diferencia del ortovanadato de sodio y de factor de crecimiento fibroblasto básico que producen un efecto opuesto. Por otro lado el factor de crecimiento epidérmico no produce cambios significativos del transporte. Estos resultados sugieren que la TeTx podrían modificar el transporte de 5-HT en cultivos primarios de neuronas por mecanismos en los que interviene la proteína quinasa C y mecanismos de transducción ligados a la actividad tirosina quinasa. En la segunda parte del trabajo se estudiaron la activación de las diferentes isoformas de PKC y el consiguiente mecanismo de transducción en los que se incluye el TrKA, receptor del factor de crecimiento nervioso, y la fosfolipasa Cy1(PLCy1) en la fracción enriquecida P2 de sinaptosomas. Observamos que la TeTx induce una clara traslocación de la fracción soluble(citosol) a la fracción particulada(membrana) de las isoformas PKCB y y, mientras que la isoforma a muestra down-regulation. Ensayos de inmunoprecipitación con fosfotirosinas muestran aumento de la fosforilación del TrKA y de la PLCy1, y la activación del TrKA es corroborada por anticuerpos específicos anti-TrKA fosforilado. Finalmente, observamos activación del TrKA y de la PLCy1 por la acción del fragmento Hc-TeTx. Realizando ensayos de inmunoprecipitación, se observan aumentos de la fosforilación en el TrKA y el PLCy1, siendo ambos dependientes de la concentración y del tiempo. El efecto mostrado por el fragmento Hc sobre la foforilación en tirosina es comparado con el efecto producido por el NGF. La foforilación del TrKA inducida por el fragmento Hc fue corroborada usando un anticuerpo específico anti-TrKA fosforilado. Estos resultados observados con el fragmento Tc-TeTx coinciden con los descritos anteriormente con la TeTx.

Autor: LÓPEZ TOLEDANO MIGUEL ANGEL.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: HOSPITAL RAMÓN Y CAJAL.

Resumen: Las células tronco neurales dependientes del factor de crecimiento epidérmico (EGF) poseen un gran potencial de autorrenovación, así como un linaje multicelular, lo que las convierte en un excelente modelo para el estudiado de las señales implicadas en la regulación de los fenotipos neuronales existentes en el Sistema Nervioso central (SNC).Estudios realizados sobre otros sistemas celulares como una línea tumoral humana (hNT) o cultivos primarios neuronales procedentes de estriado de rata, han demostrado la acción sinérgica del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) y activadores de la proteína kinasia A (PKA) y la PKC en la inducción de la expresión de la enxima tirosina hidroxilasa (TH). El objetivo de la presente memoria de tesis doctoral consiste en caracterizar el desarrollo del cultivo desde un punto de vista fenotípico y dirigir in vitro la diferenciación de las neuronas generadas en los mismos hacia el fenotipo catecolaminérgico, caracterizandolos mecanismos intracelulares implicados en este proceso. El proceso de diferenciación espontánea del cultivo demostró que la progenie de las células tronco se ajustó a la generación de los tipos celulares presentes en el SNC adulto, neuronas, astrocitos y oligodendroctios, según un patrón temporal similar al acontecido en el desarrollo del SNC del embrión. Asimismo, presentó un patrón de expresión de receptores para el FGF característico, con una localización preferente sobre las células gliales generadas en el cultivo. La activación de estos receptores dio lugar a la modificación del patrón de diferenciación espontánea de las células tronco neurales. La acción conjunta del FGFb con activadores de la PKA en este sistema celular indujo la expresión del fenotipo catecolaminérgico, testado por inmunorreactividad a la enxima TH. Esta inducción fue dependiente del estadio de desarrollo del cultivo, siendo efectiva en tiempos avanzados de la diferenciación celular, cuando las células del cultivo presentan marcadores específicos de células neuronales y gliales difernciadas. El efecto inductor de la expresión de TH ocurre a través de la activación de vía sintracelulares que implican la fosforialción de MAPK, ya que la inhibición de su fosforilación con PD980558 abolió totalmente la inducción de TH mediada por FGFb + dbAMOc. La activación de la PKC por ésteres de forbol fue suficiente para generar células que expresaron el fenotipo catecolaminérgico, y esta activación potenció sinérgicamente tanto la fosforilación de la MAPK como el número de células TH+ del cultivo.

Autor: OTANO SAN MARTIN ANA TERESA.
Año: 2000.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA - FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En el presente trabajo se ha tratado, de una parte, de caracterizar la implicación de dos receptores sertonérgicos, 5-ht6 y 5-HT7, cuyo papel funcional en el sistema nervioso central no está aun establecido, en la depresión. Se ha pretendido por otro lado, contribuir al conocimiento y caracterización de los eventos moleculares que pudieran tener lugar tras administración repetida de fármacos antidepresivos que estuvieran relacionados con su eficacia clínica, en la esperanza de llegar a entender aspectos de la fisiopatología molecular de los procesos depresivos. El bloqueo de la síntesis del receptor 5-ht6 mediante el empleo de un oligonucleótido anstisentido no dio lugar a ningún efecto aparente en el test de la natación forzada, un modelo animal ampliamente utilizado para valorar la acción de fármacos antidepresivos. Sin embargo, este tratamiento indujo un efecto de tipo ansiógeno en dos modelos animales, el test de interacción social y el test del laberinto de la ansiedad. Por otra parte, estudios realizados mediante la administración de 8-OH DPAT en condiciones de inactivación de receptores por EEDQ parecen implicar al receptor 5-HT7 en procesos de facilitación del aprendizaje en roedores. El estuido de la administración de fármacos antidpresivos sobre factores de transcripción, mostró que el tratamiento con estos fármacos puede incidir inicialmente sobre la transcripción mediada por GRE, a través de una modulación positiva directa de la funcionalidad de GR. La adminsitración prolongada de antidepresivos, implicaría modificaciones en la expresión génica modulada por factores de transcripción tales como SP1, CREB y AP1. Teniendo en cuenta que es necesaria una administración crónica de los fármacos antidepresivos para poder observar un efecto terapéutico, es posible que, entre los factores determinantes de su eficacia clínica, tengan un papel importante los cambios dirigidos por la unión de estos factores de transcripción a las secuencias del DNA que los reconocen.

Autor: GRACIA VALÉN LUIS.
Año: 2000.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: La unión de péptidos antigénicos a las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II está mediada, en parte, por un conjunto conservado en enlaces de hidrógeno intermoleculares. Varias moléculas de agua estructural han sido identificadas con anterioridad en complejos cristalográficos de estructuras de HLA-II DR1 y péptido. Estas pueden participar en redes de enlaces de hidrógeno entre el HLA y elpéptido. En la primera parte de este trabajo se han estudiado las implicaciones de este tipo de moléculas de agua mediante el potencial de interacción molecular con una sonda de agua. Se han propuesto nueve zonas potenciales de agua en el interior de los complejos. Este tipo de aguas puede ser incoporado en el diseño racional de nuevos compuestos peptidomiméticos capaces de unirse a moléculas HLA-DR1. Especialmente cabe destacar el papel que pueden desempeñar en este sentido hasta dos moléculas de agua en el bolsillo P1, permitiendo, así, la redefinición de las preferncias de unión de residuos en el mismo. En un segundo estudio se ha propuesto el modo de unión de un conjunto de péptidos con un motivo común, denominado "2-6-11", que se unen al HLA de clase II, cuyas secuencias se ha encontrado en proteínas relacionada con numerosas enfermedades autoinmunes. Con el objetivo de probar estas hipótesis hemos realizado varias simulaciones de dinámica molecular del HLA-DR1 con dos péptidos. El primero se encuenta en la base de datos PDB, con Trp en posición (+1). El segundo, un péptido "2-6-11" con Lys en esta posición, se construyo por técnicas de modelización molecular. Se analizó especialmente el movimiento de las aguas. Para el péptido con Trp solo una de las moléculas de agua permaneció estable en el bolsillo P1, mientras que para el péptido con Lys, las dos moléculas de agua permanecen estables en el mismo y parecen importantes para la unión de este péptido.

Autor: GOMEZ CARRACEDO EVA.
Año: 2000.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La isquemia cerebral es una de las principales causas de muerte hoy en dia y por ello, es importante desarrollar una terapia que pueda actuar sobre los distintos mecanismos que se desencadenan en dicha patologia, no solo con el fin de disminuir su tasa de mortalidad, sino tambien para paliar total o parcialmente las graves secuelas de tipo neurológico que puede producir esta patologia. Durante la isquemia cerebral se desencadenan una serie de procesos fisiológicos que van a dar lugar al daño neurológico y consecuente muerte celular. El presente trabajo fue realizado con el fin de avanzar un poco más en la busqueda de una terapia frente a la isquemia, estudiando al efecto de tres farmacos que actuan por diferentes mecanismos de acción en la cadena fisiopatologida desencadenada durante el proceso isquemico, actuando sobre los distintos procesos neuroquimicos implicados en la lesion cerebral. Asi hemos actuado ne primer lugar sobre la acción de la ciclooxigenasa mediante la previa administracion de Indometacina, un inhibidor no selectivo de dicho enzima, en segundo lugar hemos actuado sobre la acción de la Oxido Nitrico Sintasa constitutiva (NOSc) previa administración del L-NAMEm un inhibidor no selectivo de esta enzima,y finalmente hemos utilizado el Desmetiltirilazad como barredor de radicales libres. Los estudios se han llevado a cabo en ratas sometidas a isquemia cerebral de 30 minutos de duracción y durante la reperfusión de 30 horas. Para determinar el efecto preventivo de los farmacos administrados, se llevo a cabo la determinacion de los siguientes parametros: determinación de la actividad de la NOSc, determinación de los niveles de GMPc , cuantificación de los receptores NMDA y evaluación del estado neurologico del animal a las 5 horas de la reperfusion. Los resultados obtenidos en este trabajo mostraron como la isquemia cerebral global transitoria de 30 minutos de duraccion producia un incremento significativo en la actividad de la NOSc, en los niveles de GMPc y en la activación de los receptores NMDA, mientras que el pretratamiento con todos los fármacos en estudio disminuían los valores alcanzados durante la isquemia a valores similares al control. Nuestros resultados mostraron tambien, como la reperfusión de 30 horas producia la disminución de los valores alcanzados en la actividad de la NOSc, de los niveles de GMPc y de la actividad de los receptores NMDA a valores similares al control, mientras que el pretratamiento con los farmacos en estudio y su asociación no produjeron mejoria en ninguna de los ensayos realizados. En cuanto a la evaluación del estado neurológico del animal, se observó como el pretratamiento con los diferentes compuestos mejoraban el estado neurológico del animal, destacando el efecto del Desmetiltirilazad. Los datos obtenidos en este trabajo confirman el efecto protector de estos farmacos frente a la isquemia cerebral de 30 minutos de duracción, destacando el efecto del L-NAME y del Desmetiltirilazad. En cuanto a la fase de reperfusión de 30 horas, nuestros datos reflejan que es la propia reperfusión la que produce una mejoria de todos los parametros analizados y no la administración de los compuestos en estudio. Sin embargo, si se observó como el pretratamiento con todos estos farmacos producia una mejoria del estado neurológico del animal, destacando el efecto del Desmetiltirilazad que fue de todos ellos el que produjo un mayor indice de proteccion y una mayor tasa de supervivencia.

Autor: MARTINEZ MARTINEZ-CAÑAVETE ALBERTO.
Año: 2000.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: 1.-Se han obtenido veinticuatro nuevos hibridos de la distamicina-A con bases primidínicas(AMF1-24), con el proposito de emplear el antibiótico de origen natural como vector de los agentes 5-fluorouracilo, timina,5-bromouracilo y uramustina. 2.-La estrategia seguida en el diseño de los nuevos hibridos se ha basado en el uso de espaciadores polimetilénicos de uno a seis atomos de carbono, que separan la unidad distamicinica de la pirimidinica. A traves de este diseño se ha pretendido que el fragmento uracilo-sustituido adopte diferentes posiciones espaciales dentro del surco menor, buscando asi facilitar su accion quimica sobre las bases del ADN. 3.-La sintesis de estos hibridos se ha desarrollado siguiendo mecanicos que involucran la formacion de la subestructura constituida por la base pirimídinica y el espaciador polimetilénico, la desformilación de la distamicina-A, y por último, el acoplamiento de ambas estructuras mediante un enlace amidico. 4.-El analisis elemental y las diversas técnicas espectrocópicas empleadas(1H-RMN, 13C-RMN y EM) han permitido determinar las estructuras de los veinticuatro compuestos finales (AMF1-24) y los sesenta derivados intermedios obtenidos(AMB1-24,AMA1-24, AMC19-24 y AMD19-24). Los antecedentes bibliograficos sobre espectroscopicos de derivados de la distamicina-A resuelven los diferentes atomos de hidrogeno y carbono de la estrucutra distamicina de forma generalmente agrupada. En este trabajo se ha conseguido, mediante un estudio de los efectos NOE y el desarrollo de tecnicas de resonancia bidimensional HMBC y HMQC, la resolución de la practica totalidad de los diferentes atomos de las estructuras distamicinicas, lo que constituye una aportación significativa y novedosa en este campo. 5.- El analisis conformacional computerizado ha permitido clasificar a los conformeros en dos familias diferentes denominadas inwardy outward, según muestren la unidad pirimidinica orientada, respectivamente, hacia dentro o hacia fuera del surco menor. Tras el estudio de las diferentes conformaciones de derivados fluorouracilicos, timinicos y bromouracilicos, se puede afirmar que no existen diferencias significativas de estabilidad entre ambas familias. 6.-Se ha estudiado, en los mismos compuestos anteriormente citados, el acoplamiento entre los nuevos hibridos y un dodecámetro de ADN rico en secuencias de bases adenina/timina. Los resultados de los ensayos de modelización molecular no permiten establecer una correlación directa con las actividades antineoplasicas encontradas. No obstante, el compuesto AMF2, que es el más activo de la familia derivada del 5-fluorouracilo (IC50=23 uM), presenta un mayor numero de enlaces de hidrogeno en su conformación outward que el resto de los hibridos estudiados. Actualmente se está analizando el acoplamiento con los derivados uramustínicos por lo que no a sido incluido en esta Memoria. 7.-Los hibridos fluorouacílicos (AMF1-6), timinicos, (AMF7-12) y uramustinicos(AMF19-24) han sido sometidos a diferentes pruebas biologicas para evaluar su actividad citostatica y/o antiviral. Los resultados obtenidos permiten afirmar que los derivados uramustínicos de cadena polimetilenica más larga, los compuestos AMF24(IC50=0,07 uM),AMF23(IC50=0,14 uM), y AMF22(IC50=0,11 uM) mejoran signficativamente la actividad antineoplasica de la talimustina (IC50=2,38 uM), unico derivado distamicinico que se encuentra actualmente en fase clinica II. Por tanto,se puede afirmar que la distancia fisica entre la uramustina y la distamicina condiciona la actividad citostatica. Además, conviene destacar que todos los hibridos uramustinicos mejoran la actividad de la distamicina-A(IC50=20 uM). 8.-Se ha analizado la selectividad de secuencia de alquilación de los derivados uramustinicos más potentes (AMF22-24) mediante un ensayo de parada de la polimerasa del Taq. Este estudio ha permitido concluir que: a) Estos hibridos mantienen la preferencia de acoplamiento de la distamicina-A sobre las bases adenina/timina respecto a las de guanina/citosina, tanto en la zona especifica de alquilación como en su "entorno de acoplamiento". B) Cuanto mayor es la selectividad de secuencia de alquilación (AMF23

Autor: ANTONIO GARCÍA ISABEL DE.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: I. DE NEUROBIOLOGÍA SANTIAGO RAMÓN Y CALA (CSIC).

Resumen: Las proteínas transductoras o proteínas G son una familia de heterotrímeros (a, b, y), las cuales al ser actividas tras la unión de un agonista al receptor, se disocian en a-GTP más dímeros by. Durante una serie de años se ha considerado que estas proteínas G estaban implicadas únicamente en los procesos que se suceden tras la estimulación del recptor y la posterior generación de segundos mensajeros. Sin embargo recientemente se ha demostrado que algunas de las subunidades a de las proteínas transductoras, en determinadas cirucunstancias, abandonan la membrana y alcanzan el cuerpo neural. En la presente Memoria de Tesis ponemos de manifiesto que tras su administración in vivo, subunidades a de las proteínas G son transportadas a través de las membranas neurales por un proceso dependiente de PKC siendo funcionalmente incorporadas a la cascada de señalización, consiguiendo recuperar la actividad de los agonistas en sistemas de señalización Ga-deficientes. Como las proteínas G se han implicado en la patofisiología de un alto rango de desórdenes neurales, los resultados indicados en este trabajo de investigación ofrecen el potencial para el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento de patologáis de receptor a nivel de proteínas G.

Autor: BENRE ZZOUK RACHID.
Año: 2000.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FARMACIA.

Resumen: El trabajo que recoge la presente memoria estudia tres tipos de derivados terpenicos naturales: En primer lugar, se estudia la actividad in vitro sobre diversos tipos de fosfolipasa A2, de cacospongionolida y cacospongionlida E, aislados de la esponja Fasciospongia cavernosa Schmidt. Los resultados obtenidos indican que estos compuestos inhiben preferentemente la fosfolipasa A2 secretora humana, con valores CI50 de 3 uM y 1,4 uM respectivamente presentado una potencia superior a la de los compuestos de referencia cacospongionolida B y manoalida. En segundo lugar, se realiza el estudio de E-isolinaridial, diterpeno neo-clerodano aislado de Linaria saxatilis var. Glutinosa y de su derivado semisintetico E-isolinaridial metilcetona, tanto sobre las actividades fosfolipasa A2 y 5-lipoxigenasa, como sobre otros parametros del proceso inflamatorio. Estos compuestos han mostrado una gran potencia como inhibidores de la PLA2 sinovial humana (CI50 de 0,2 uM y 0,4 uM). Ademas, inhiben la desgranulacion lisosomal (CI50 de 0,4 uM y 0,8 uM). Y la actividad 5-lipoxigenasa (CI50 de 0,5 uM y 1,3 uM). Por ultimo, se ha evaluado el mecanismo de la acción antiinflamatoria tanto in vitro como in vitro de aetiopinona, naftoquinona diterpénica aislada de las raices de Salvia aethiopis L.Inhibe de forma dependiente de la concentracion la liberacion de enzimas lisosomales (CI50=0,2 uM) y la generacion de anión superóxido, siendo tambien potente captador directo de dicho radical oxigenado (CI50=0,3 uM). Ademas, aetiopinona inhibe la peroxidacion lipidica en microsoma hepatico de rata, mostrando por lo tanto un claro perfil antioxidante. Aetiopinona inhibe de forma irreversible la produccion del LTB4 en neutrofilos humanos, efecto que se correlaciona con la inhibición que ejerce sobre la actividad 5-LO aislada (CI50= 0,1 uM). En los ensayos realizados in vivo, se ha confirmado la potencia y selectividad de aetiopinona como inhibidor de 5-LO. En el modelo de bolsa de aire en raton estimulado por zimosan, aetiopinona, administrada via intrabolsa o via oral, reduce de forma dosis-dependiente tanto la acumulacion de leucocitos como los niveles de LTB4 en el exudado. Además, se ha puesto de manifiesto su actividad antiinflamatoria por via topica en el test del edema en oreja de raton inducido por AA, disminuyendo tanto el edema como los niveles de dicho eicosanoide. En el modelo de broncoconstriccion en cobayo sensibilizado, mediado principalmente por leucotrienos, aetiopinona reduce el incremento de la resistencia pulmonar inducida por estimulo antigenico, con un efecto comparable al farmaco de referencia zileuton. Por tanto, aetiopinona es una molecula que presenta un potencial interes en el tratamiento de procesos inflamatorios y alergicos, debido principalmente a su potente efecto inhibidor de la actividad 5-lipoxigenasa.

Autor: RODRIGUEZ GONZALEZ DE ANTONA CRISTINA.
Año: 2000.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: CENTRO INVESTIGACION,HOSPITAL LA FE.

Resumen: Los hepatocitos humanos en cultivo primario son capaces de llevar a cabo muchas funciones tipicamente hepaticas y han sido utilizados con éxito para investigar los efectos de farmacos en las funciones especificas del higado. A pesar de esta ventaja, este sistema experimental pierde muchas funciones tipicas hepaticas a lo largo del cultivo y el acceso a estas celulas es muy escaso. Las lineas celulares hepaticas, por el contrario se dividen en cultivo, son accesibles y suelen tener un fenotipo estable, pero tienen un baja expresion de los enzimas de metabolizacion de farmacos. Esta tesis se ha centrado en estudiar cuales son los mecanismos que regulen la expresion de los principales enzimas de biotransformacion de farmacos, ya que esta informacion seria util para desarrollar lineas celulares capaces de expresar estos enzimas de dbiotransformacion de farmacos, ya que esta informacion seria util para desarrollar lineas celulares capaces de expresar estos enzimas. Se estudio la expresion de Citocromos P-450 en diferentes sistemas hepaticos, se determinó que la transcripcion es el mecanismo de regulacion mas importante para su expresion, se encontro una correlación entre la expresion de algunos factores de transcripcion especificos hepaticos y la de los citocromos P-450 y se determino cual es el efecto de los factores de transcripcion C/EBP-alfa y HNF-3 gamma en el citocromo 3A4.

Autor: VACAS OCAÑA JAVIER.
Año: 2000.
Universidad: CASTILLA-LA MANCHA.
Centro de lectura: QUÍMICA .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS DE CIUDAD REAL.

Resumen: En la presente tesis se ha abordado el estudio de la señal de adenosina, un culeósido con actividad neuromoduladora, mediada a través de los receptores tipo A1. Estos trabajos se han llevado a cabo en dos sistemas experimentales: uno in vitro y otro in vivo. En los estudio con tratamientos crónicos in vivo, se aislaban las membranas plasmáticas sinápticas de los cerebelos de animales tratados crónicamente con un analogo no hidrolizable de la adenosina el R-PIA y las mismas membranas procedentes de animales controles. Estas membranas se utilizaron en ensayos de unión con agonista y antagonistas tritiados, se midió la actividad adenilato ciclasa y también se estudio el efecto del tratamiento con R-PIA sobre las proteínas G. Los estudios en vitro se llevaron a cabo en cultivos primarios de células granulares. Y en estos, se hicieron también ensayos de unión con antagonistas A1, y medida de los mRNA para los receptores de adnosina. Además, se realizaron medidas del calcio citosólico libre con sondas fluorescentes Fura 2 con la idea de relacionar la señal de adenosina y este segundo mensajero intracelular. Como conclusiones de mayor relieve son destacables: que el tratamiento cróncio con R-PIA produce una desensibilización, que afecta a los niveles de proteínas G y prodece un efecto de Up regulation de los receptores. Por último, la señal de adenosina está relacionda con los niveles de Ca2+ citosólico libre y en las células granulares cerebelares se expresan los cuatro subtipos de receptores de adenosina.

Autor: CROS MASO ESTHER.
Año: 2000.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS-UNIVERSIDAD DE GIRONA.

Resumen: En esta tesis doctoral se ha aplicado el uso del grupo tetracloroftaloilo (TCP) como protector de la funcion amino de aminoacidos, ampliando de esta manera el numero creciente de grupos protectores disponibles para aminoacidos y facilitando el desarrollo de nuevas estrategias de sintesis de peptidos complejos en fase solida en condiciones suaves. La proteccion de aminoacidos con el grupo TCP se ha llevado a cabo mediante radiacion microondas, un metodo innovador que reduce considerablemente los tiempos de reaccion, la cantidad de disolvente y el material necesaros. Los aminoacidos se han protegido en 4 minutos a partir de anhidrido tetracloroftalico y el aminocido correspondiente convenientemente protegido, en caso necesario, en la cadena lateral, pero sin necesidad de proteccion en la funcion acido del aminoacido. Mediante este metodo, la obtencion de los crudos de reaccion tiene lugar con buenos rendimientos y purezas, por lo que no es necesario, en general, ningun proceso de purificacion posterior. Se ha protegido un grupo amplio de aminoacidos y la metodologia se ha mostrado compatible con la presencia de tritil tioteres y de t-butil eteres, esteres y carbamatos en las caenas laterales de los aminoacidos. Se han realizado tambien protecciones de algunos aminoacidos con el grupo TCP mediante reaccion a reflujo, comprobandose asi las ventajas del metodo de radiacion microondas. Por otra parte, tambien se han ensayado protecciones con ambos metodos de aminoacidos con otros grupos protectores ftaloilo sustituidos com tetrabromoftaloilo, 3-niroftaloilo i terafluoroftaloilo. Se ha medido la actividad optica de los L-aminoacidos N-TCP protegidos y se ha comparado con los D-aminoacidos, comprobando la ausencia de racemizacion durante el proceso de proteccion. Se han estudiado de manera exhaustiva las condiciones de eliminacion del grupo TCP en fase solida, estudiandose asimismo de manera detallada los subproductos formatos en determinadas condiciones de reaccion. Se han sintetizado diversos peptidos amida terminal usando aminoacidos N-TCP protegidos con buenas purezas del crudo de reacion, utilizando como reactivo de acoplamiento HBTU/DIPEA y hidrazina-DMF como reactivo para la eliminacion del grupo TCP. Asimismo, esta metodologia TCP/tBu ha sido aplicada a la sintesis de PNAs. Concretamente se ha protegido el monomero de PNA con timina como nucleobase con el grupo TCP mediante radiacion microondas, y dicho monomero se ha utilizado para la sintesis de un tetramero TCP-T4-Gly-NH2.

Autor: FAJARDO PAREDES IGNACIO JOSE.
Año: 2000.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Basándose en antecedentes bibliográficos que sugerían una interacción de los metabolismos de histamina y pliaminas en diversos puntos, la presente Tesis Doctroal supone un acercamiento a la caracterización de esta posible interrelación usando como modelo cultivos de células con fenotipo basófilo, un tipo celular en que ambos tipos de aminas son importantes en cuanto a función y viabilidad. Los resultados encontrados han pemritido concluir que parece existir un antagonismo entre los metabolismos de histamina y polaminas en este tipo celular. Usando un tratamiento inductor de la expresión y actividad de histidina descarboxilasa HDC consiste en la combinación de un éster de forbol PMA y un corticoide (dexametasona) se obtuvo la citada inducción de HDC al mismo tiempo que una inhibición de la expresión y actividad de la ornitina descarboxilasa ODC y una disminución del contenido de pliaminas totales así como de la tasa de proliferacion. En una segunda aproximación, la elevación de los niveles intracelulares de histamina incubando las células con histamina exógena sin inducción de HDC resultó en una disminución de la incorporación de pliaminas así como una inducción de la actividad espermidina/espermina acetil transferasa SSAT, enzima relacionada con el catabolismo de poliaminas. Puesto que estos resultados señalaban el antagonismo entre histamina y poliaminas en células basófilas citado arriba, se decidió evaluar la sensibilidad de las células basófilas a los productos de oxidación de pliaminas. Como resultado se encontró que dicha sensibilidad fue intermedia comparado con la de la línea de fibroblastos de ratón NIH/3T3 y la de tumor de mama EATC. El daño producido por los productos de oxidación de pliaminas se manifestó con fragmentación nucleosómica significativo de apoptosis. Un segundo objetivo propuesto ha sido la caracterizacion del procesamiento postraduccional de la histidina descarboxilasa de mamíferos. Se ha encontrado que, al menos en el modelo de mastocitos de ratón C57.1, la enzima es procesada por el extremo amino, lo que complementa la asunción general que existe de que la proteína se procesa por el extremo carboxilo. Por otra parte, se ha delimitado que se puede recortar la HDC de rata hasta el aminoácido 476 manteniendo actividad una vez expresada de forma transitoria en células COS7, si bien el recorte hasta el residuo 471 la iniciativa. Así, deben existir uno o más residuos esenciales para la actividad de la HDC de rata entre las posiciones 476 y 471. Finalmente, se ha detectado un efecto producido por la a-fluorometilhistidina (un inhibidor irreversible de la HDC), consistente en un cambio en la movilidad electroforética bajo condiciones no reductosas de formas recombinantes activas de la proteína. Este efecto podría consistir en la estabilización de una conformación en la que el complejo inhibidor-cofactor PLP permanece unido a la proteína por interacciones no covalentes, y es posible que sea de utilidad en futuros estudios realcionados con la estructura-función de esta proteína.

Autor: LÓPEZ GALERA ROSA M. .
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de realización: ESCUELA DOCTORADO Y FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: La incidencia de infecciones fúngicas ha aumentado en los últimos años debido al incremento de situaciones clínicas que comportan alteraciones en los mecanismos de defensa del organismo tales como neoplasias, pacientes portadores de un trasplante y tratados con fármacos inmunosupresores o síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA), entre otros. La anfotericina B (AnB), comercializada en 1956, continúa siendo el fármaco de elección para el tratamiento de las micosis sistémicas, aunque su utilización no está exenta de toxicidad. Las nuevas formulaciones lipídicas de AnB comercializadas a partir d e1995, han supuesto en la práctica clínica una mejora en la optimización de la terapia ya que su administración ha demostrado estar asociada a una menor incidencia de reacciones adversas. Antes de la comercialización de éstas, ha sido frecuente la utilización de AnB vehiculada en un exipiente de características lipófilas como es el intralipid 20%, preparada como formulación magistral en el momento de la infusión endovenosa por no disponer de estudios de estabilidad. La aspergilosis pulmonar invasiva es una infección fúngica que puede aparecer como complicación en la clínica de pacientes inmunodeprimidos cuya profilaxis con la formulación de AnB en solución acuosa para inhalación, ha demostrado una buena eficacia clínica exenta de los efectos adversos y toxicidad asociados a la administración endovenosa. En esta memoria se presentan los resultados de tres trabajos en formato de publicaciones en los cuales se estadariza y valida un método para la determinación de AnB en muestras biológicas (suero, secreciones respiratorias) y muestras lipídicas con aplicación a estudios farmacocinéticos y de estabilidad química de AnB cuando ésta se administra en diferentes formas famacéuticas.

Autor: PIQUÉ PERPIÑÁ MARIA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DPT. CIENCIAS FISIOLÓGICAS II (UNIV. DE BARCELONA).

Resumen: Aspirina y salicilato, drogas que pertenecen al grupo de antiinflamatorios no esteroidales (AINEs), inducen apoptosis en células leucémicas, a partir de la dosis 3-5 mM. Nuestro estudio demuestra que durante el proceso de apoptosis se activan las caspasas -9,-3 y -8. Además hemos demostrado que aspirina induce la liberación de citocromo c de la mitocondria al citosol. La liberación de citocromo c precede a la activación de las caspasas y, por lo tanto, desencadena su activación. El hecho que la liberación de citocromo c por aspirina tenga lugar en diversos tipos celulares y que haya muy buena correlación entre la inducción de liberación de citocromo c y la inducción de apoptosis por aspirina tenga lugar en diversos tipos celulares y que haya muy buena correlación entre la inducción de liberación de citocromo c y la inducción de apoptosis por aspirina, permite situar este hecho en la vía principal del mecasnismo de inducción de apoptosis por aspirina. En una segunda etapa, existiría un efecto dependiente de caspasas sobre la mitocondria, que podría corresponder a un loop de amplificación mitocondrial mediado por caspasas. En este loop de amplificación dependiente de caspasas puede estar implicado la proteolisis de Bid i la pérdida de AYM. El mecanismo que desencadena la liberación de citocromo c no se conoce. En nuestro modelo hemos descartado la inducción de PT mitocondrial y el efecto directo sobre las mitocondrias. El estudio de la posible implicación de los miembros de la familia de Bcl-2 revela que no participan cambios en los niveles de Bcl-2 ni Bcl-xL. El hecho que los niveles de la proteína antiapoptótica Mcl-1 disminuyan hace pensar que probablemente esté implicada i probablemente otros miembros proapoptóticos del tipo BH-3 only. La vía de transducción de señales que desencadena la liberación de citocrom c tampoco se conoce. Hemos descartado la posibilidad de la activación de receptores de la muerte, la activación de p38 MAPK i la desestabilización de los lisosomas. Nuestros resultados demuestran que la liberación de citocromo c está precedida por un aumento de ROS. El hecho que el antioxidante DPI proteja de la muerte hace pensar sobre un posible papel de algunas especies de ROS, como el superóxido. Finalmente, nuestros resultados demuestran que esta vía es inhibible por estrés de forbol, lo que sugiere que la activación de la vía mediada por PKC interfiere con la vía que desencadena la liberación de citocromo c. El hecho que las dianas propuestas de los AINEs: COX. IKKbeta i PPARK probablemente no sean determinantes para entender el mecanismo de inducción de apoptosis por AINEs, abre la posibilidad de la existencia de una nueva diana. Conocer los mecanismos que determinan y que regulan la sensibilidad a la apoptosis por salicilatos puede permitir diseñar sinergismos con otras drogas para potenciar la efectividad y encontrar nuevas dianas terapéuticas contra las que actuar más específicamente.

Autor: LOPEZ GIMENEZ JUAN F..
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El objetivo general de la presenta Tesis fue la caracterización farmacológica de los receptores pertenecientes a la familia 5-HT2 de la serotonina, asi como el estudio de su distribución anatómica en el cerebro de mamiferos. Para la consecución de estos objetivos se emplearon fundamentalmente tecnicas autorradiograficas, como la autorradiografia de receptores o la hibridación in situ. En primer lugar, se caracterizó el [3H] MDL100,907 para su uso como radioligando en estudios de autorradiografia de receptores, llegando a la conclusión de que el [3H]MDL 100,907 es el mejor radioligando en la actualidad para visualizar de forma selectiva los receptores 5-HT2A en cerebro de rata, mono y humano. Posteriormente se examinó la distribución de los receptores 5-HT2a y 5-HT2c en cerebro de mono empleando [3H]MDL100,907 y [3H] mesulergina respectivamente como radioligandos, al mismo tiempo que se usaron sondas de oligonucleotidos para la visualizacion del ARNm que codifica para cada subtipo de receptor. Ambos receptores distribuyen de forma heterogénea en cerebro de mono, presentando cada subtipo una distribución característica. El patrón de distribución observando en los experimentos de autoradiografia de receptores para ambos subtipos de receptores coincidía con la señal de hibridación obtenida en los estudios llevados a cabo con las correspondientes sondas de oligonucleótidos, sugirieron que ambos subtipos de receptores, 5-HT2A y 5-HT2C, presentan predominantemente una localización celular somatodendrítica. Otro estudio autorradiográfico realizado en esta Tesis fue el analisis de la posible alteración de diferentes subtipos de receptores de serotonina así como del transportador de serotonina en cerebro de ratones "knockout" para el receptor 5-HT2C. No se observaron alteraciones significativas en las densidades de los sitios de unión de los diferentes radioligandos utilizados, a excepción de aquellos que se unen al subtipo de receptor 5-HT2C. Este resultado demuestra que la ausencia del receptor 5-HT2C no modifica los niveles de expresión de otros subtipos de receptores de serotonina ni de su transportador en cerebro de raton. La caracterización farmacológica de los receptores de la familia 5-HT2 utilizando agonistas marcados radioactivamente mostraba una población heterogenea de receptores 5-HT2 utilizando agonistas marcados radioactivamente mostraba una población heterogenea de receptores 5-HT2a y 5-HT2C que incluye diferentes conformaciones de estos receptores, de acuerdo con el modelo ternario extendido de interacción farmaco-receptor acoplado a proteina G. Los compuestos antagonistas para el receptor 5-HT2A, MDL 100, 907 y ketanserina, diferecian estas distintas conformaciones de los receptores 5-HT 2A y 5-HT 2C marcados con farmacos agonistas.

Autor: NAVARRO ANTOLÍN FRANCISCO JAVIER.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Aunque la CsA ha supuesto un avance importante en el campo del transplante de órganos, produce efectos secundarios para los que se han propuesto numerosos mediadores, sin que ninguno de ello explique completamente la toxicidad observada. En la fisiopatología de estos efectos secundarios se ha sugerido la participación de las especies reactivas del oxígeno y del nitrógeno. El aumento de la expresión de la sintasa endotelial del NO (eNOS) en el endotelilo producido por la CsA y su dependencia de la formación de especies reactivas del oxígeno (ROS) había sido previamente documentado por nuestro grupo. Pero se desconocian el mecanismo molecular implicado y las especies reactivas concretas que podrían estar generándose en el endotelio en respuesta a la CsA. La capacidad oxidante de la CsA en un contexto extravascular también había sido sugerida por otros autores, sin embargo, la naturaleza química de las especies reactivas producidas por la CsA no era conocida. Detectamos que el mecanismo fundamental por el que la CsA aumenta la expresión del ARNm de la eNOS es un aumento de la tasa de transcripción del gen eNOS. Esta conclusión se fundamenta en que tanto el bloqueo farmacológico de la transcripción produce prácticamente la abolición del aumento de expresión, como en ensayos de transcripción in vitro de núcleos aislados de CEAB tratadas con CA y en ensayos de actividad del promotor humano de la eNOS transfectado en CEAB. En esta inducción transcripcional del gen eNOS por la CsA participa el factor transcripcional AP-1, ya que hay pérdida de la transactivación del promotor del gen eNOS en CEAB tratadas con CsA cuando a estr promotor se le muta el sitio AP-1 situado a -662 pares de bases desde el inicio de la transcripción. En concordancia con ello, la CsA aumenta la expresión del ARNm del gen c-fos, la presencia de la proteína c-Fos en el núcleo, y la actividad de unión del complejo AP-1 a la secuencia en cis que este factor tiene en el promotor humano del en eNOS. De forma concordante con esta inducción transcripcional del gen eNOS por la CsA, en CEAB tratadas durante 16h con este fármaco, se detectó un aumento del NO en el compartimento extracelular (evaluado como la acumulación de nitritos en el sobrenadante celular) y en el intracelular (evaluado como oxidación intracelular de la sonda sensible al NO DAF-2). Ademas se detectó un aumento de la producción extracelular e intracelular de NO en CEAB tratadas con CsA (durante sólo dos horas) por un mecanismo independiente de la transcripción. Esta producción rápida de NO fue dependeinte de la activación de la eNOS, sensible a inhibidores de la misma. Además el aumento de calcio intracelular y una posible translocación del enzima desde la membrana plasmática al citosol, son mecanismos sugeridos para esta activación. Se detectó que la CsA induce la formación intracelular de superóxido en CEAB, evaluada mediante la sonda DHE, previamente validada como detector de este radical libre mediante técnica de resonancia paramagnética y mediante la inhibición de su detección usando análogos lipofilicos de la superóxico dismutasa. Tras observar la formación tanto de NO como de superóxido en un mismo marco espacial y temporal (en el interior de células CEAB, durante las dos primeras horas de tratamiento), y la validez de la oxidación de la sonda DHR 123 como detector de peroxinitrito en CEAB, se demostró la formación de peroxinitrito en el compartimento intracelular de estas células. Esta oxidación fue parcialmente inhibida cuando se bloqueó por separado o conjuntamente la producción de cada uno de los dos precursores del peroxinitrito (disminuyendo el superóxido mediante la sobreexpresión de la MnSOD, o disminuyendo el NO mediante inhibidores de la NOS o ambos con NAC). La formación del peroxinitrito en las células endoteliales vasculares se confirmó mediante la inmunodetección de la formación de su huella o marcador biológico, la 3-nitrotirosina, proceso que fue sensible a NAC y a análogos lipofilicos (permeables) de la SOD. Finalmente precisamos que el factor limitante de la formación de peroxinitrito inducido por la CsA en las células endoteliales vasculares no es el NO producido, sino el anión superóxido. La cantidad de superóxido que la CsA induce determina, al unirse al NO en el compartimento intracelular, no soló la cantidad de peroxinitrito formado, sino además la cantidad de NO que per se puede ser potencialmente bioactivo. Dado que el NO no tiene capacidad de nitrar tirosinas, uno de los puntos principales que defiende este trabajo es reconocer al peroxinitrito como una de las especies reactivas inducidas por la CsA. A partir de esta observación, se puede empezar a pensar en la nitración de tirosinas como un mecanismo potencial de toxicidad/señalización por la CsA.

Autor: VICENTE AGULLO FRANCISCO MANUEL.
Año: 1999.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE OPTICA.

Resumen: El receptor nictínico es una proteína oligomérica de membrana, formada por la asociación de cinco subunidades homólogas, perteneciente al grupo de los canales iónicos activados por ligando. Las subunidades del receptor se organizan alrededor de un eje de simetría radial, formando un canal iónico a lo largo de dicho eje. El receptor nicotínico se expresa principalmente en reuronas, aunque también aparece en tejidos no neurales, capacitando a las células para responder a estímulos colinérgicos. En esta tesis doctoral se ha estudiado la implicación de aminoácidos localizados en el segmento M1 de subunidades neuronales, en la biogénesis y función del receptor. Para ello se han realizado construcciones quiméricas y mutaciones usando la subunidad a7 (como representante del grupo de receptores sensibles a a-bungarotoxina (a-Bgt) y las subunidades a3 y B4 (pertenecientes al grupo de receptores insensibles a a-Bgt). En el trabajo realizado se distinguen dos partes claramente diferenciadas, usándose, en ambas, la misma metodología para el estudio de las propiedades de los receptores, el marcaje de los receptores con ligandos radiactivos para cuantificar los receptores correctamente ensamblados. En la primera partes del proyecto se han identificado tres aminoácidos situados en el domino M1 de la subunidad a7 involucrados en la determinación de la especificidad del ensamblaje de dicha subunidad. Además, se ha demostrado la existencia de una interacción entre las regiones citoplásmicas de los segmentos transmembrana M1 y M2 de las subunidades a7, En la segunda parte del proyecto se ha caracterizado el papel que juega un residuo de arginina conservado en todas las subunidades de los receptores de acetilcolina. Se ha estudiado dicho aminoácido en las subunidades de los dos grupos de receptores neuronales antes citados. Para ello, se ha evaludado el efecto de la mutación de la arginina en las subunidades a7 y en las a3 y b4 como representantes de los dos grupos de receptores neuronales. Los resultados obtneidos demuestran que en los receptores a7, la arginina interviene en el transporte de receptores maduros a la superficie celular, mientas que en los receptores a3b4, controla la densidad de receptores expresados en los oocitos. También se ha realizado la caracterización de la función de este aminoácido de los receptores a3b4 mediante la medida de las corrrientes iónicas generadas en diversas combinaciones de receptores mutantes tras la estimulación con diverosos agonistas nicotinicos. Se ha comprobado que la arginina antes citada interviene en procesos de compuerta del canal iónico.

Autor: GALLARDO VELLIDO LOURDES.
Año: 1999.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las enzinas metabolizadoras de fármacos y carcinnógenos contienen dos tipos principales de enzimas: las de fase I, constituida principalmente por las enzimas del citocromo P450, y las de fase II, como las N-acetiltrnasferasas entre otras. Ya que estas enzimas están implicadas en procesos de activación y desactivación de carcinógenos y mutágenos, se puede predecir que cualquier alteración en la actividad de estas enzimas podría resultar en una alterada susceptiblidad para el cáncer. Se ha etudiado la implicación de algunas de estas enzimas ( CYP2D6, CYUP3A, NAT1 y NAT2) en el riesgo de desarrollar cáncer de prostata. El gen codificador de las enzimas NAT1 y NAT2 está localizado en una región que frecuentemente se pierde en algunos tipos de tumores, entre ellos el cáncer de próstata. Mediante PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y RFLP (polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción) se detectaron mutaciones de los genes CYP2D6 y NAT2 en 94 pacientes con cáncer de próstata y 160 voluntarios sanos. 11 muestras de tejido de próstata fueron genotipadas para CYP3A y NAT2 usando los sustratos específicos dextrometorfano, dextorfano y sulfametacina respectivamente. En general se obtuvieron las siguientes conclusiones: En tejido prostático humano se expresan actividades enzimáticas dextrometorfano o-demetilasa, dextrofano N-demetilasa y sufametacina N-acetiltransferasa. Todas ellas presentaron considerable variablidad interindiviudal. La actividad dextrometorfan o-demetilasa tiene características cinéticas similares a la actividad CYP2D6 hepática humana y nmuestra dependencia con el genotipo CYP2D6. La actividad dextrorfano N-demetilasa tiene características cinéticas similares a la actividad CYP3A hepátiaca humana. La actividad sulfametacina N-acetiltranserasa tiene características cinéticas diferentes de la actividad N-acetiltrnsfersa hepática no muestra dependencia con los genopitos NAT1 ni NAT 2, por tanto no está regulada por estos genes. No existe una asociación estadísticamente significativa entre el genotipo CYP2D6 y el riesgo de desarrollar cáncer de próstata, No se han observado pérdidas de heterozigosidad de los genes CYP2D6 ni NAT2 en tejido de adenoma prostático. La presencia de enzimas metalizadoras de carcinógenos en tejido humano de pr´stata con variabilidad interindicviudal puede estar involucrada en la regulación de niveles locales de carcinógenos y puede explicar en parte las diferencias interindivudales en la susceptibilidad al cáncer.

Autor: TARON ROCA MIGUEL.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO GERMANS TRIAS I PUJOL.

Resumen: La supervivencia de los enfermos con cáncer colerectal (CCR) en estadio avanzado continúa siendo baja a pesar de la incorporación de nuevos esquemas como la infusión continua de 5-Fluorouracilo(5FU)/LV y de la aparición de nuevos agentes activos en CCR con mecanismos de acción distintos al del 5FU, lo que ha permitido la incorporación de regímenes de polioquimioterapia. Entre estos agentes cabe destacar el Tomudex(Tx) y los inhibidores de la camptotecina(CPT-11 y Topotecan), todos ellos específicos de fase S del ciclo celular. El objetivo del estudio es analizar en células derivadas de tumores colectores humanos(HT29 y LoVo) cuales son los mejores esquemas de combinación de los derivados de la camptotecina, el Tx y el 5-FU para conseguir un máximo efecto cititóxico. Para ello se caracterizaron en primer lugar las perturbaciones de las fases del ciclo celular después de una exposición corta a una dosis de TPT(20 o 60 minutos) buscando el mejor esquema para conseguir el máximo reclutamiento de células en fase S del ciclo. La administración de TPTx1uM durante 20(HT29) o 60 (Lo Vo) minutos demostró reclutar un 43% o 29% más de celulas en fase S respecto de la población control, 10 y 8 horas después del tratamiento(HT29 y Lo Vo,respectivamente). Una vez realizada la tipificación se analizó la toxicidad de los esquemas secuenciales TPT->5FU(I),TPT->Tx(II),TPT->TPT(III), donde la admnistración del segundo agente se realizó en distintos intervalos correspondientes a diferentes proporciones de células en fase S inducidas por la primera exposición a TPT. Se analizaron también los esquemas inversos 5FU->TPT(IV),Tx->TPT(V) y TPT en infusión(10 horas)(VI). Globalmente se observó un efecto antagónico en todos los esquemas, excepto para TPT->TPT(III) y 5FU->TPT(HT29) donde se obtuvo un efecto antagónico en todos los esquemas, excepto para TPT->TPT(III) y 5FU->TPT(HT29) donde se obtuvo un efecto de sinergia/aditividad. En el estudio se demuestra que: 1) el antagonismo de los esquemas I y II proviene del efecto de la inhibición de la síntesis de DNA que ejerce el TPT, y de una sobrexpresión de Timidilato sintasa(TS) diana tanto 5FU como de Tx: 2)el tratamiento con TPT en este esquema no genera apoptosis, con independencia del gen p53. En un segundo objetivo se estudió en celutlas HT29 el efecto de la administración durante 24 horas de las secuencias TPT->5FU,5FU->TPT y TPT+5FU. En todos ellos se demostró un efecto antagónico en contra de los resultados publicados en la literatura para los mismos esquemas secuenciales con CPT-11 y 5FU, mientras que eran coincidentes para el caso de la administración simultanea CPT-11+5FU. Ante estas diferencias se analizaron los valores de expresión de TS y Toposomerasa I (Topo-I) y los patrones inducidos en ciclo celular después de la administración tanto individual como conjunta con 5FU de TPT, CPT-11 y el propio metabolito activo de CPT-11(SN38), como potenciales determinantes de las diferencias en la citotoxicidad de las combinaciones. Los resultados demuestran que para las exposiciones de 24 horas:1) no existen diferencias en la expresión de TS o Topo-I ni tampoco en el patrón del ciclo celular con independencia del derivado utilizado; 2) la administración de los tres agentes durante 24 horas comparta el mismo patrón de disminución en la síntesis de TS;3) la administración conjunta de 5FU comporta una ligera disminución en la expresión de TS y Topo-I; 4) la incorporación de 5FU al tratamiento individual comporta una normalización en el ciclo celular, y es responsable del efecto antagónico observado en la exposición simultanea de TPT/CPT-11/SN38 con el 5FU, por la inhibición que este último ejerce en la síntesis de DNA y en la progresión en fase S.