GENETICA BIOQUIMICA, 2

Autor: LESHER GORDILLO JULIA M..
Año: 1999.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: VETERINARIA.

Resumen: El amargos debido a limonoides es un fénomeno conocido como amargor retardado y se presenta en los zumos cítricos después de que el zumo ha sido extraído. Se han encontrado enzimas implicadas en el metabolismo de los limonoides que tienen la capacidad desamargar zumos cítricos. Así como microorganismos que pueden expresar constitutivamente estas enzimas, como es el caso de Rhondococcus fascians, un abacteria Gram positiva, que sin embargo no puede ser utilizada inmovilizada en reactores ya que no está descrita como un organismo GRAS por ser patógenas de plantas. Por lo que en eata tesis se desarrolla diversas técnicas de biología molecular para llevar a cabo el aislamiento del gen 1 dh de Rhodococcus fascians. Las técnicas utilizadas estuvieron basadas principalmente en PCR, como PCR inversa, PCR con adaptadores, y PCR previa digestión parcial, que permitieron el aislamiento de algunas secuencias que podrían tratarse del gen 1dh, una de ellas presenta una homología del 70% a nivel de DNA con el gen Rv2578c de Mycobacterium tuberculosis, y al traducir esta secuencia a péptido la homología aumenta al 80%, además de presentar una alta significación biológica al analizar filogenéticamente ambas especies. También ha sido posible el diseño de obligonucleótidos específicos a partir de dos secuencias obtenidas por pdPCR, que permitieron el desarrollo de un "gene walking" mediante "vectoreta". Por otra parte se han iniciado estudios de expresión diferencial, utilizando células de Rhodococcus fascians que presentan diferente actividad de la enzima limonoato deshidrogenasa.

Autor: BENITEZ BURRACO ANTONIO .
Año: 1999.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS ( UNIVERSIDAD CORDOBA).

Resumen: El proceso de maduración del fruto de fresa ( Fragaria x ananassa cv. Chandler, Duch) comporta importantes modificiaciones,entre las que se encuentra el reblandamiento de sus tejidos por modificación de la estructura de la lamela media de las células parenquimáticas, del cortex del receptáculo. En esta remodelación están implicados diversas enzimas pecitnolíticas, entre los cuales las más significativas son las pectato liasas. Gracias al trabajo desarrollado a lo largo de esta tesis doctoral se han clonado y caracterizado molecularmente tres genes de pectato liasa de fresa (plA, plB y plC) que se expresan durante el proceso de maduración del fruto, de manera que los niveles de transcrito alcanzan su máximo en los estadios finales dichos procesos (fruto rojo). Sin embargo,uno de los genes analizados ( plB) se expresa también,aunque en menor medida, en estadios precoces del desarrollo del fruto, seguramente debido al proceso generalizado de expansión celular que acompaña al crecimiento del receptáculo; éste gen se expresa, así mismo , en tejidos florales, En general, la expresión de los tres genes está reprimida en el fruto verde por las auxinas sintetizadas por los aquenios; la adición de auxima exógena a los frutos desaquinizados es capaz de revertir el efecto inductivo que la retirada de las núculas tiene sobre la expresión de los tres genes. En las condiciones habituales en las que se almacenan los frutos maduros tras su recolección ( 4ºC, atmósferas con un contenido elevado en CO2), los niveles de transcrito de los tres geners caracterizados disminuye. Estse descenso en más acudado que el que se produce en el caso de otros genes implicados también el la maduración del fruto, como es, por ejemplo, una celuladas, y cuya implicación en los fenómenos senescentes durante la post-cosecha debe ser más importante. Dos de los genes caracterizados son de copia única(plB y plC) , mientras que el tercero (plA) podría formar parte de una pequeña familia génica. La organización estructural de los genes es la misma en los tres casos, semejanza que se extiende también a las características de la zona promotora, al menos en lo que se refiere a los genes plA y plB. A lo largo de esta tesis doctoral se han puesto también a punto dos sistemas alternativos para la realización de experimentos de expresión transitoria de genes de fresa que se expresan durante la maduración del fruto;la electroporación de protoplastos y la transformación de tejidos de fruto mediante la pistola de partículas. Este último sistema ha permitido comprobar la capacidad reguladora de la expresión génica de regiones situados aguas debajo de la zona promotora de uno de los genes de pectalo liasa caracterizados (plA).

Autor: CASTEDO GOMEZ ALEJANDRA.
Año: 1999.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FISICA.
Centro de realización: FACULTAD DE FISICA.

Resumen: Los lípido Catiónicos ofrecen una alternativa eficaz frente a los virus, como mediadores en terapia géncia. A pesar de su potencialdiad, hay una compresión limitada de los mecanismos celulares y molecualres involucrados en transferencia génica mediada por lípidos catiónicos. La Tesis está dividada en cinco capítulos. En el capítulo introcutorio se presentan lois principios generales de la terapia génica, y se revisan los procesos de ensamblaje de las moléculas anfifilicas en orden a la formación de estructuras como micelas, vesículas y lamelas. En el capítulo dos se describen las téncicas y materiales utilizados en la parte experimental de la investigación. En el capítulo tres se presentan resultados detallados de estudios sobre propiedades fisicoquímicas de los bromuros de didecil- y didodecildimetilamonio en disolución acuosa. En particulaar se examinan los diagramas de fase de las citadas sales de doble cadena en el intervalo 15-45ºC, mediante conductividad, espectroscopía UV, reología y difusióndinámica de luz. En el capítulo cuatro constituye el núcleo de la Tesisi. Se describe la preparación de nuevos liposomas modificados mediante la adición de diferentes cantidades de DOPE (dioleilfosfatideiletanolamina). Se conoce que este mediador mejora la eficiencia de transfección de los sistemas liposomales a a l célula, pero hast ahora, no se ha usado en combinación con los bromuros de dialquildimetilamonio. Se han analizado sla interacciones de complejos lípido catiónico-ADN en base a medidas de absorción y fluorescencia con sondas de bromuro de etidio. Mediante técnicas de difusión dinámica de luz y microscopía electróncia de transmisión se han analizado las dimensiones de los complejos en su evolución temporal, así como con la adición de cloruro sódico. Por último, en el capítulo cinco se presentan las perspectivas de aplicación de un nuevo liposoma denomiado CS66 (de CSIRO, Sydeny, Asutralia). Este liposoma se ha estudiado con las técnicas descritas en los capítulos previos.

Autor: MORATILLA MARTINEZ MARTA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este trabajo se determina y analiza la secuencia de un gran número de fragmentos del genoma del pxvirus humano Molluscum contagiosum (MCV), construyéndose el mapa génico viral y estudiándose la variabilidad genética existente entre distintos aislados de MCV. Asimismo, se analiza la expresión de presuntos genes de este poxvirus con distintos patrones de expresión temporal. Finalmente, se caracteriza funcionalmente una proteína de MCV que presenta homología con las quimioquinas humanas. Los datos presentados demuestran que el genoma de MCV contiene una región central cuya organización genómica es muy similar a la observada en las regiones centrales de los genomas de Orthopoxvirus (OPV). Esta conservación se pierde en los extremos del genoma, que incluyen genes específicos de MCV, aparentemente implicados en la patogénesis típica de este poxvirus. La expresión de determinados genes virales ha sido demostrada in vivo. Los resultados derivados del análisis de transcritos, así como los deducidos de los datos de secuencia, sugieren que la regulación de la expresión génica de MCV es análoga a la de OPV. Por otra parte, se pone de manifiesto la existencia de elementos repetidos dentro de la región central del genoma, cuyo número variable confiere un tipo de heterogeneidad genética no descrita anteriormente. Finalmente, se ha estudiado el efecto del homólogo viral de quimioquinas-CC sobre la quimiotaxis de leucocitos, demostrándose que la proteína de MCV es un antagonista específico de quimioquinas-CC humanas.

Autor: GONZÁLEZ GARCÍA ISABEL.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: Se llevó a cabo un estudio de alteraciones genéticas en una muestra numerosa y no seleccionada de adenocarcinomas colorectales. Esta investigación incluye el estudio de inestabilidad en secuencias microsatelites (MSI), mutaciones en los genes bax, K-ras, p53 asi como un estudio de su relación con características anatomopatológicas. El estudio de estas alteraciones genéticas revelo la presencia de dos vías alternativas en la progresión de los tumores colorectales, que cuestionaria la validez general del modelo de Vogelstein. Asimismo se obtuvo una caracterización de las poblaciones con MSI que permite el desarrollo de aplicaciones clinicas en el indice de supervivencia paralos individuos que presentan MSI. Se obtuvo un conjunto de correlaciones signficativas entre las alteraciones genéticas y su relación con variables anatomopatológicas con importantes consecuencias para futuros estudios dentro de esta área.

Autor: ESCRIG DE CASAS ESTER.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La terapia génica consiste en la introducción en células somáticas, de genes o secuencias de oligonucleótidos, con fines terapeúticos. El objetivo de este trabajo ha sido el diseño de un modelo experimental paratransfectar el gen inf-ox a células tumorales (3LL y B16) y evaluar su eficacia en la inhibición de la progresión tumoral utilizando vectores no virales. El estudio ha permitido evaluar: 1. Las condiciones óptimas de transfección, utilizando dos sistemas distintos de transfección (DOTAP y PEI) y un gen trazador (gfp). La caracterización del sistema de transferencia génica está basado en criterios farmacológicos sobre: curvas dosis-respuesta (afinidad, eficacia máxima) y biodisponibilidad del gen. 2. El efecto antitumoral de la transfección del gen estudiando comparativamente los resultados obtenidos en un modelo de transfección intratumoral "in vivo" (utilizando tratamientos con una, dos y cuatro dosis), frente a un modelo en el cual se han modificado las células genéticamente "in vitro", y se han reimplantado en los animales. Los resultados muestran: i) Un retraso significativo en el crecimiento de tumores en ambas lineas, si bien este retraso es menor en la línea 3LL ii) En los modelos utilizando clones modificados genéticamente observamos un aumento en la supervivencia de los animales en ambas líneas. En el modelo "in vivo" también se obtiene un desplazamiento en la curva de supervivencia de la línea B16, aunque más discreto que en el modelo anterior.

Autor: GALLARDO MADUEÑO RAFAELA.
Año: 1998.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: VETERINARIA .

Resumen: EL diseño y optimización de la técnica RT-MPCR GeneScan nos ha permitido demostrar la regulación a nivel trasncripcional del balance entre los niveles de ribonucleótido reductasa (RRasa) y sus donadores de electrones glutarredoxina 1 (Grx1) y tiorredoxina 1 (Trx1). La ausencia de Trc1 y Grx1 dispara la transcripción de operón nrdAB (RRasa) y la ausencia de glutatión (GSH) y Trx1 la del gen grxA (Grx1) y adicionalmente la del gen fpg (Fapy-ADN glicosilasa). A partir de mutantes dobles deficientes en Grx1 y Trx1 o GSH y Trx1 hemos construído nuevas estirpes deficientes en las proteínas reguladoreas SoxR y SoxS. Estas estirpes mantienen niveles incrementados en la expresión de los genes nrdAB, grxA y fpg, lo que indica que dichos genes no forman parte del regulón soxRS. A partir de la estirpe silvestre y de la mutante doble deficiente en Trx1 y Grx1 hemos construído nuevas estirpes deficientes en la proteína reguladora OxyR. A partir de estas estirpes nuevas hemos llegado a la conclusión de que los genes grxA y fpg forman parte del regulón oxyR.

Autor: FERRE MASFERRER TURA .
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Resumen: Se generaron ratones transgénicos que expresaban glucoquinasa (GK) bajo el control del promotor del gen de la PEPCK (P-enolpiruvato carboxiquinasa). La sobreexpresión de la GK en hígado dió lugar a un incremento en la captación y utilización de la glucosa. Estos cambios en el metabolismo hepático de la glucosa conducía a una marcada reducción en la glucemia e insulinemia. Sin embargo, la sobreexpresión a largo término de elevados niveles de GK podía llevar a la aparición de resistencia a la insulina. También se observó una normalización en las alteraciones diabéticas al inducir diabetes experimental en estos animales. Por otro lado, se generaron ratones transgénicos que expresaban GK en músculo esquelético bajo el control de la cadena ligera de la miosina (MLC). Se observó también un incremento en la captación y utilización de la glucosa en el músculo, así como una disminución en la glucemia después de inducir un proceso diabético. Todos estos resultados demostraban la importancia de la GK en el metabolismo glucidilo así como su utilización como una aproximación útil para la terapia génica de la diabetes.

Autor: GADDOUR KAMEL.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL .

Resumen: Se han aislado y caracterizado a nivel molecular dos clones cDNA de endospermo en desarrollo de cebada correspondientes al inhibidor de tripsina BTI- CMc y a la cistatina Hv-CPI-II, con vistas a su ulterior utilización transgénica para aumentar la resistencia de las cosechas frente a plagas de Lepidópteros y Coleópteros, respectivamente. En ambos casos se ha determinado el número de copias y el patrón de expresión en cebada. Hv-CP-II presentó un gen específico de endospermo y un segundo gen relacionado que se expresa en hojas y raices. Ambas proteinas se han expresado en la bacteria E. coli. En el caso de BTI-CMc se ha mejorado su eficacia frente a tripsina por mutagénesis dirigida. Al expresar Hv-CP-II se ha comprobado su actividad inhibitoria frente a papaina purificada y frente a enzimas digestivos de Leptinotarsa decenlineata (escarabajo de la patata) y de Lyssorhoptus brevirostris (picudito acuático del arroz).

Autor: GREGORI DURAN XAVIER.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Resumen: Las células beta pancreáticas regulan la producción de insulina en respuesta a cambios en los niveles de glucosa en sangre, estas células expresan glucoquinasa (GK), que fosforila glucosa a glucosa-g-fosfato. La GK está considerada como el "sensor de glucosa" que relaciona los niveles de glucosa circulante con la producción de insulina. Para estudiar la implicación de la GK en la regulación de este proceso, se generaron ratones transgénicos que sobreexpresaban la GK bajo el control del promotor de insulina, estos ratones presentaban un fenotipo inesperado, que iba desde desarrollo de diabetes severa y muerte post-natal hasta hipoglucemia en la línea con un menor número de copias de transgén. La histopatología del páncreas reveló que los transgénicos presentaban una disminución en el número y el tamaño de los islotes, así como una desestructuración de los mismos. Estudios realizados con islotes aislados de la línea con un menor número de copias indicaban que había un incremento en la actividad glucoquinasa, en la utilización de glucosa y en la secreción de insulina. Estos animales indican que la sobreexpresión de GK puede comportar alteraciones en el desarrollo del páncreas endocrino.

Autor: UGALDE BILBAO CRISTINA .
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: DE BIOQUIMICA.

Resumen: En este trabajo hemos comenzado el estudio funcional de las regiones gen]omicas que controlan la expresi]on del gen que codifica la subunidad beta del complejo V mitocondrial de D. melanogaster. La regi]on promotora del gen consta de un inicio de transcripci]on heterogéneo sin caja TATA funcional. Estas características se mantienen en la regi]on 5' del gen hom]ologo de D. virilis y del gen que codifica la subunidad alfa-ATPasa de D. melanogaster. La comparaci]on de las secuencias promotoras e intr]onicas de estos genes pertenecientes al mismo complejo mitocondrial nos ha permitido detectar elementos comunes, posiblemente reconocidos por factores de transcripci]on tanto generales como especificos que podrían regular su expresi]on. Hemos caracterizado funcionalmente la actividad promotora de la regi]on 5' del gen beta-ATPasa de D. melanogaster, utilizando dos tipos de estrategias: i) in vitro, identificando en células en cultivo las regiones más relevantes para la expresi]on del gen e identificando la presenciade proteínas que se unen a las mismas. Hemos definido una zona relativamente pequeña del promotor que aparentemente contiene todos los elementos necesarios para la expresi]on del gen en este sistema, así como el efecto modulador de los intrones sobre la actividad del promotor en cultivos celulares. También hemos identificado diversas regiones a las que podrían unirse proteínas activadoras o represoras de la transcripci]on. La interacci]on de proteínas con elementos de secuencia ricos en A+T repetidos en el promotor podría se clave en la regulaci]on de la expresi]on del gen. En este sentido hemos identificado dos factores de transcripci]on de Drosophila, CF2 y GAGA, que podrían tomar parte en dicha interacci]on. ii) In vivo, analizando mutantes del gen ewq de Drosophila con objeto de comprobar su posible funci]on sobre la expresi]on de sus genes mitocondriales. Como segunda aproximaci]on, hemos comenzado el análisis de moscas transgénicas que expresan el gen testigo lac Z bajo el control de las regiones promotoras del gen beta-ATPasa de D. melanogaster y D. virilis caracterizadas in vitro. Estos ensayos nos han permitido definir los límites para la expresi]on constitutiva del gen in vivo, así como realizar una comparaci]on funcional preliminar de la actividad de un mismo promotor perteneciente a dos especies de Drosophila distanciadas evolutivamente 60 millones de años.

Autor: ALVAREZ RETUERTO ANA ISABEL.
Año: 1996.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y CIENCIAS MORFOLOGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: CONCEPTOS Y METODOS DE BIOL. CELULAR CON IMPLICACIONES BIOMEDICAS.

Resumen: 75 FAMILIAS DE LA C.A.V. CON AL MENOS 1 MIEMBRO AFECTO DE RP Y CLASIFICADAS GENETICAMENTE COMO 20% DE LA FORMA ADRP; 17,33% ARRP; 60% DE LOS CASOS SC O ESPORADICOS Y UN 2,66% DE CASOS NO CLASIFICADOS (NC), FUERON CHAQUEADOS MOLECULARMENTE EN EL GEN DE LA RODOPSINA PARA BUSCAR ALTERACIONES EN DICHO GEN SUSCEPTIBLES DE DAR CIERTA INFORMACION RELACIONADA CON ESA PATOLOGIA. DICHO CHEQUEO, REALIZADO USANDO: PCR, DGGE, DIGESTIONES Y SECUENCIACION DIO COMO RESULTADO UN 33,33% DE FORMAS ADRP JUNTO CON UN 23,07% DE ARRP; 33,33% DE SC Y 50% DE NC QUE PRESENTARON ALGUNA ALTERACION EN EL GEN DE LA RODOPSINA; DE ELLAS UN 13,33% DE LAS FORMAS ADRP Y UN 2,22% DE LOS CASOS SC ERAN MUTACIONES QUE PARECIAN SER RESPONSABLES DE LA AFECTACION. EL RESTO DE LAS ANOMALIAS EN LA SECUENCIA ERAN MUTACIONES SILENTES Y/O POLIMORFISMOS. DE TODO ELLO, SE CONCLUYE QUE EN NUESTRA MUESTRA DE PACIENTES CON RP DE LA C.A.V., LAS ALTERACIONES EN EL GEN DE LA RODOPSINA SE DAN EN UNOS RANGOS SIMILARES A LOS OTROS ESTUDIOS EN OTRAS POBLACIONES; ADEMAS, LA TRANSMISION DE LA RP, SIGUE UN COMPORTAMIENTO SEMEJANTE AL DE OTRAS POBLACIONES EN OTROS ESTUDIOS.

Autor: CARRION MARIN M. TERESA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL GEN MRAW ESTA LOCALIZADO DENTRO DEL CLUSTER DCW ("CLUSTER" GENICO DE DIVISION Y CRECIMIENTO) DEL MIN 2 DEL CROMOSOMA DE E. COLI, DE 939 NUCLEOTIDOS DE LONGITUD, Y QUE CODIFICA PARA LA PROTEINA MRAW DE 32.5 KDA, Y UN PUNTO ISOELECTRICO DE 6.1. LOS NIVELES DE EXPRESION DEL GEN MRAW DESDE EL CROMOSOMA, SON SIEMPRE CONSTANTES. SIN EMBARGO, EXISTE UNA SOBREEXPRESION DEL GEN CUANDO ESTE ESTA CLONADO EN PLASMIDOS DERIVADOS DE PUC9. ESTA SOBREEXPRESION DEL GEN MRAW EN PLASMIDOS, QUE TIENE LUGAR UNICAMENTE DURANTE LAS PRIMERAS FASES DE CRECIMIENTO, ES DEPENDIENTE DE: A) LA INDUCCION DE PROMOTORES DEL PLASMIDO VECTOR PUC9 UTILIZADO PARA CONSTRUIR ESTOS PLASMIDOS, B) LA LONGITUD DE LOS INSERTOS CLONADOS EN EL PLASMIDO VECTOR; C) EL TIPO DE ESTIRPE QUE SE TRANSFORME CON LOS PLASMIDOS; Y D) LA ESTABILIDAD DE LA PROTEINA EN LA ESTIRPE QUE SEA TRANSFORMADA. EN LA REGION REGULADORA DE MRAW, SE HA IDENTIFICADO Y CARACTERIZADO UNA UNICA CAJA SOS, PUDIENDO TRATARSE DE UN GEN SOS. LA PROTEINA MRAW PRESENTA UNA FORMA CITOPLASMICA Y UNA FORMA ASOCIADA DEBILMENTE A LA MEMBRANA INTERNA. ESTA MUY CONSERVADA EN LA EVOLUCION, Y SU FUNCION SE DEMUESTRA COMO ESENCIAL PARA LA VIABILIDAD CELULAR. ES UNA PROTEINA FIJADORA DE SAM, PRESENTANDO UNA ACTIVIDAD METILTRANSFERASA, CATALIZANDO LA METILACION DE UN ENZIMA DE SINTESIS DEL PEPTIDOGLICANO SEPTAL, LA PBP3, DESEMPEÑANDO UN PAPEL REGULADOR DE LA ACTIVIDAD DE ESTA E INDUCIBLE POR RESPUESTA SOS.

Autor: GONZALEZ RODRIGUEZ SEGUNDO.
Año: 1996.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: LOS FACTORES TERMINALES DEL COMPLEMENTO HUMANO SE SINTETIZAN MAYORITARIAMENTE EN EL HIGADO, SIN EMBARGO LA LINEA DERIVADA DE HEPATOMA HEP-G2, QUE PRODUCE LA MAYORIA DE LAS PROTEINAS DEL COMPLEMENTO, NO EXPRESA ALGUNOS COMPONENTES COMO C6, C7 Y FACTOR H. ESTE HECHO HA DIFICULTADO ENORMEMENTE EL ESTUDIO DE LA REGULACION DE ESTOS GENES. CON EL OBJETIVO DE ESTUDIAR LA REGULACION DE ESTOS GENES NOS HEMOS PLANTEADO EL OBJETIVO DE AISLAR Y CARACTERIZAR LAS REGIONES PROMOTORAS DE LOS TRES GENES HUMANOS: C6, C7 Y FACTOR H. HEMOS AISLADO APROXIMADAMENTE 1 KB CORRESPONDIENTE A LA REGION PROMOTORA DE C6, C7 Y FACTOR H, Y DETERMINADO SU INICIO DE TRANSCRIPCION EN HIGADO HUMANO. LOS TRES GENES TIENEN UN INICIO DE TRANSCRIPCION UNICO EN HIGADO, PERO EXCEPTO C7, CARECEN DE UNA CAJA TATA CANONICA. TODOS POSEEN NUMEROSAS SECUENCIAS CONSENSO TANTO PARA FACTORES DE TRANSCRIPCION UBICUOS, COMO ESPECIFICOS DE HIGADO. PARA ANALIZAR LA ACTIVIDAD FUNCIONAL DEL PROMOTOR DE C6 HEMOS CONSTRUIDO UN SISTEMA "REPORTER" Y ANALIZADO SU EXPRESION MEDIANTE ENSAYOS DE TRANSFECCION TRANSITORIA. MEDIANTE ESTOS EXPERIMENTOS HEMOS CARACTERIZADO QUE LA AUSENCIA DE EXPRESION DE C6 EN LA LINEA HEP-G2 SE DEBE A LA AUSENCIA DE TRANSCRIPCION DE SU PROMOTOR EN ESTA LINEA. MEDIANTE ENSAYOS DE RETARDO EN GEL CARACTERIZAMOS QUE ESTO SE DEBE A LA AUSENCIA DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION HEPATICO C/EBPA EN LA LINEA HEP-G2. ESTE FACTOR SE UNE A LA SECUENCIA C/EBP LOCALIZADA EN -67 DEL GEN DE C6 Y ES IMPRESCINDIBLE PARA SU EXPRESION. LA TRANSFECCION DE UN VECTOR DE EXPRESION DE C/EBPA EN LA LINEA HEP-G2 RESTAURA LA EXPRESION TANTO ENDOGENA COMO LA TRANSCRIPCION DE C6, C7 Y FACTOR H, SUGIRIENDO QUE LA AUSENCIA DE EXPRESION DE ESTE FACTOR EN ESTA LINEA ES LA RESPONSABLE DE LA AUSENCIA DE EXPRESION DE C6, C7 Y FACTOR H EN ESTA LINEA. POR ULTIMO HEMOS ANALIZADO LOS MECANISMOS QUE REGULAN LA EXPRESION DE ESTOS GENES DURANTE LA RESPUESTA DE FASE AGUDA. EL IFN-Y ES EL PRINCIPAL ESTIMULO QUE REGULA LA EXPRESION DE FACTOR H Y ESTE EFECTO ESTA REGULADO POR UNA SECUENCIA DE RESPUESTA A INTERFERON SITUADA EN -42 DEL GEN DEL FACTOR H.

Autor: LUQUE GARROFE M. TERESA.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA.

Resumen: La alcohol deshidrogenasa de Drosophila, de cadena corta, ha sido ampliamente estudiada, mientras que las alcohol deshidrogenas de cadena mediana no habían sido nunca estudiadas en este género. En este trabajo se describen retrosecuencias Adh en D. madeirensis y D. guanche, las cuales junto con las retrosecuencias Adh previamente descritas en D. subobscura, tienen un origen común y distinto al de las retrosecuencias Adh descritas en D. teissieri y D. yakuba. Por tanto, este tipo de secuencia no es tan infrecuente en invertebrados como inicialmente se creía. Se ha caracterizado por primera vez en Drosophila un gen que codifica para una alcohol deshidrogenasa de cadena mediana. Se trata del gen gfd/odh o Adh de clase III, y presenta una expresión constitutiva a lo largo del desarrollo. La Adh de clase III es la más ancestral de todas las alcohol deshidrogenasas presentes en vertebrados. Finalmente se ha descrito por primera vez una duplicación del gen Sfh que dió lugar a dos genes con la misma función. Ambos genes Sdh se expresan en el estadio de larva y adulto principalmente. La enzima SDH, 1 ha sido aislada y caracterizada, presentando las mismas características que sus homólogas en otras especies.

Autor: MARTIN CASTELLANOS CRISTINA.
Año: 1996.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DE MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA BIOQUIMICA Y GENETICA MICROBIANA.

Resumen: LAS CELULAS SE DIVIDEN VEGETATIVAMENTE POR UN PROCESO DENOMINADO CICLO DE DIVISION CELULAR, REPLICAN EL CONTENIDO DE DNA EN UNA FASE DISCRETA, DENOMINADA DE SINTESIS Y LO SEGREGAN EN OTRA FASE DENOMINADA MITOSIS. LAS FASES S Y M ESTAN SEPARADAS TEMPORALMENTE POR LOS PERIODOS G1 (PRECEDE A LA FASE S) Y G2 (PRECEDE A LA FASE M) ES EN EL PERIODO G1 DEL CICLO CELULAR EN EL QUE SE INTEGRAN SEÑALES TANTO EXTRACELULARES COMO INTRACELULARES QUE DETERMINAN BIOQUIMICAMENTE A LA CELULA A LA REALIZACION DE UN NUEVO CICLO DE DIVISION CELULAR. LA PROGRESION POR EL CICLO DE DIVISION DEPENDE DE LA APARICION PERIODICA DE ACTIVIDAD QUINASA. EN SCHIZOSECCHOROMYCES POMBE UNA UNICA QUINASA, CODIFICADA POR EL GEN CDA2+, ES CAPAZ DE PROMOVER LA PROGRESION POR TODOS LOS PUNTOS DEL CICLO CELULAR. ESTA QUINASA DEBE ASOCIARSE A UNA SUBUNIDAD POSITIVA (DENOMINADA CICLINA) PARA SER ACTIVA. EL OBJETIVO DE ESTE TRABAJO HA SIDO LA IDENTIFICACION DE LAS CICLINAS QUE ACTIVAN A CDC2 EN LA FASE G1 DEL CICLO CELULAR. SE HA DEMOSTRADO QUE LA CICLINA CIG2 ES LA ENCARGADA DE PROMOVER LA PROGRESION POR G1. ADEMAS, OTRAS CICLINAS CON EXPRESION POSTERIOR EN EL CICLO CELULAR (CIG1 Y CDC13) SON CAPACES DE LLEVAR A CABO ESTA FUNCION. HEMOS DEFINIDO A MENOL COMO UN INHIBIDOR DE COKS QUE INTERACION FISICAMENTE CON CIG2 IN VIVO Y ES CAPAZ DE INHIBIR LA ACTIVIDAD QUINASA ASOCIADA A CIG2 IN VITRO.

Autor: MARTINEZ ATIENZA MARGARITA.
Año: 1996.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: INMUNOLOGIA BASICA.

Resumen: LA DISTROFIA MIOTONICA (DM) ES LA MAS FRECUENTE DE LAS DISTROFIAS MUSCULARES AUTOSOMICAS DEL ADULTO. EL GEN DE LA DM SE LOCALIZA EN EL LOCUS 19Q13.3. LA MUTACION RESPONSABLE ES UNA EXPANSION DE CTG EN EL EXTREMO 3' NO TRADUCIBLE DEL GEN. OBJETIVOS: - ESTUDIO GENETICO MOLECULAR DE FAMILIAS CON DM EN ANDALUCIA ORIENTAL. - ESTUDIO DE ALELOS NORMALES EN ANDALUCIA ORIENTAL. - ESTUDIO DEL POLIMORFISMO INSERCION/DELECION EN INDIVIDUOS SANOS Y AFECTOS DE DISTROFIA MIOTONICA. MATERIAL Y METODOS: SOUTHERN BLOT E HIBRIDACION CON SONDA P5B1.4 Y PCR. RESULTADOS: DE LAS 26 FAMILIAS EN ESTUDIO 23 SON PORTADORAS DE LA MUTACION. SE HAN ESTABLECIDO 4 GRUPOS CLINICOS Y 4 GRUPOS GENETICOS ENTRE LOS CUALES SE HA ENCONTRADO CORRELACION. EN LA MAYORIA DE LAS TRANSMISIONES SE DA EL FENOMENO DE ANTICIPACION, EN UN SOLO CASO EL DE REGRESION. DE LOS 103 INDIVIDUOS NORMALES ANALIZADOS EL, 62,1% FUERON HTERO- CIGOTOS. LOS ALELOS NORMALES DE NUESTRA POBLACION SE DISTRIBUYEN EN TRES GRUPOS, SEGUN SU VALOR DE CTG. SE HA COMPROBADO ASOCIACION ENTRE EL ALELO INSERCION Y LOS GRUPOS 1 Y 3 DE ESTA DISTRIBUCION.

Autor: ZAVALETA PESANTES AMPARO IRIS.
Año: 1996.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Resumen: SE ESTUDIO LA DIVERSIDAD GENETICA DE 70 CEPAS DE LEUCONOSTOC OENOS (37 DE COLECCION Y 33 AISLADOS DE LOS CUALES 18 FUERON OBTENIDOS DE VINOS CON FERMENTACION MALOLACTICA ESPONTANEA) MEDIANTE LAS TECNICAS DEL RAPD (DNA POLIMORFICO AMPLIFICADO ALEATOREAMENTE), RIBOTIPADO, RFLP (POLIMORFISMO EN LONGITUD DE LOS FRAGMENTOS DE RESTRICCION) DEL ESPACIADOR RDNA 16S-23S, PERFIL DE PLASMIDOS PEQUEÑOS Y SECUENCIACION DEL ESPACIADOR RDNA 16S-23S Y DE FRAGMENTOS DE RAPD ESPECIFICOS DE ESPECIE. LOS PATRONES DE RAPD OBTENIDOS FUERON CEPA ESPECIFICOS Y MOSTRARON DOS AGRUPACIONES PRINCIPALES DE CEPAS, ESTAS AGRUPACIONES SE CORRELACIONARON CON LAS DEL RIBOTIPADO. SECUENCIAS DE DNA IDENTICAS ENTRE CEPAS REPRESENTATIVAS DE AMBOS GRUPOS OBTENIDAS DEL ESPACIADOR RDNA 16S-23S Y DE FRAGMENTOS DE RAPD INDICAN QUE LEUC. OENOS ES UNA ESPECIE FILOGENETICAMENTE HOMOGENEA. LOS PERFILES DE RFLP DEL ESPACIADOR FUERON IDENTICOS EN LAS 37 CEPAS DE COLECCION DE LEUC. OENOS PERO MUY DIFERENTES A LOS OBTENIDOS DE MIEMBROS DEL GENERO WEISSELLA Y OTRAS ESPECIES DE LEUCONOSTOC, ESTE METODO PUEDE CONSTITUIR UNA HERRAMIENTA ALTERNATIVA EN LA IDENTIFICACION DE LEUC. OENOS. DE LOS RESULTADOS SE CONCLUYE QUE LEUC. OENOS ES UNA ESPECIE FILOGENETICAMENTE HOMOGENEA, Y PRESENTA DOS AGRUPACIONES GENOMICAS PRINCIPALES.

Autor: GARCIA ARRANZ MARIANO ANDRES.
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: EN EL PRESENTE TRABAJO SE HAN AISLADO MUTACIONES EN SIETE GENES DISTINTOS QUE AFECTAN A LA REGULACION DE LA EXPRESION DEL GEN DE LA ATPASA DE LA MEMBRANA PLASMATICA DE LEVADURAS (PMA1). SE HA CLONADO Y SECUENCIADO UNO DE ESTOS GENES (APA1). CEPAS CARENTES DEL GEN APA1 SON DEFECTIVAS EN LA REGULACION DE LA EXPRESION DE PMA1 POR GLUCOSA.

Autor: PALAU CASTAÑO M. TERESA.
Año: 1995.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL PARASITO TRYPANOSOMA CRUZI ES EL AGENTE ETIOLOGICO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS. POSEE UN CICLO BIOLOGICO COMPLEJO CON ALTERNANCIA ENTRE UN HOSPEDADOR VERTEBRADO Y UN INSECTO VECTOR, LO QUE IMPLICA UNA NECESIDAD DE ADAPTACION SELECTIVA. EN LA NATURALEZA LA POBLACIONES DE T. CRUZI SE ENCUENTRAN COMO GENOTIPOS DOMINANTES LLAMADOS CLONES MAYORES POR IDENTIFICACION ISOENZIMATICA. EN EL PRESENTE TRABAJO SE HACE UN ESTUDIO COMPARATIVO DEL COMPORTAMIENTO DE LOS CLONES MAYORES 19, 20 Y 39, BAJO DEL PUNTO DE VISTA DE LAS CARACTERISTICAS BIOLOGICAS Y LA MANERA DE COMO INCIDE EN LAS MANIFESTACIONES CLINICAS DE LA ENFERMEDAD. EL PROCESO DE DIFERENCIACION O METACICLOGENESIS OCURRE EN TRES MEDIOS ANALIZADOS CON PORCENTAJES DEL 14 AL 95%, DEPENDIENDO DEL CLON. EL ESTUDIO DE METABOLITOS DE EXCRECCION EN MEDIO DE CULTIVO, MOSTRO PRODUCCION DE SUCCINATO, ACETATO, ALANINA Y MALATO. OBSERVANDOSE DIFERENCIAS CUANTITATIVAS Y CUALITATIVAS ENTRE LOS CLONES. EN CUANTO A LA INFECCION CELULAR IN-VITRO SE PUDO COMPROBAR QUE ESTOS CLONES DESARROLLAN SU CICLO INTRA CELULAR EN VERO Y J774 (MACROFAGOS) CON INDICES DE INFECCION MAXIMO DE 80% EN VERO Y 67% PARA MACROFAGOS. REFERENTE A LA INFECCION EXPERIMENTAL EN MODELO MURINO CON ESTOS CLONES, SE ENCONTRO PREPATENCIAS CORTAS EN PARASITEMIAS RELATIVAMENTE BAJAS CON DURACION DE LA FASE AGUDA DE 56 DIAS EN LA CEPA DE RATON SWISS SIN PRODUCIRSE MORTALIDAD. SEGUN LOS RESULTADOS HISTOPATOLOGICOS SE REVELA TROPISMO TISULAR VARIADO SIENDO EL MUSCULO EL TEJIDO DE PRIMERA ELECCION. PROCESOS INFLAMATORIOS SEVEROS Y HALLAZGO DEL PARASITO A MANERA DE PSEUDOQUISTES LO QUE CONFIRMA EL ESTABLECIMIENTO DE LA INFECCION. EL CLON MAYOR 20 NO PRESENTO PSEUDOQUISTES EN CORAZON, SIENDO ESTE UN RESULTADO INTERESANTE YA QUE ES EL CORAZON EL ORGANO MAS AFECTADO EN LA ENFERMEDAD DE CHAGAS.