LIPIDOS

Autor: TRIOLA GUILLEM GEMMA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: La ceramida es uno de los esfingolípidos más estudiados debido a su participación en la señalización de procesos antimitogénicos, como la apoptosis. El último paso de la biosíntesis de novo de la ceramida es la introducción de un dolbe enlace trans entre las posiciones 4 y 5 de la dihidroceramida. Esta reacción está catalizada por la dihidroceramida desaturasa (DCHD). Teniendo en cuenta que la dihidroceramida no presenta ninguno de los efectos de la ceramida a nivel celular, se ha propuesto que la DHCD puede ser una buena diana terapéutica en patologías que transcurren con aumentos de la biosíntesis de novo de la ceramida. A pesar de este interés, en el momento de iniciar este trabajo no se conocía ningún inhibidor de este enzima. En esta tésis Doctoral se describe la síntesis del primer inhibidor de la DHCD, el compuesto (2S,3R)-11, derivado de una sustitución formal del doble enlace trans de la ceramida por un anillo de cilopropeno. También se presenta i disucte el estudio de su actividad in vitro en microsomas de hígado de rata, donde el compuesto (2S,3R)-11 es un inhibidor competitivo de la DHCD y presenta una Ki de 6 uM y su actividad in vivo, utilizando cultivos primarios de nueronas cereberales, en los que (2S,3R)-11 presenta una elevada potencia con una IC50 de 23 nM. Finalmente, se detalla la síntesis de diferentes análogos (2S,3R)-11, el estudio de la actividad de los cuales ha permitido establecer relaciones estructura-actividad. Las conclusiones principales de estos estudios son las siguientes: la presencia del anillo de ciclopropeno, así como la configuración 2S,3R son indispensables para la inhibición de la DHCD. Además, la presencia de un hidroxilo libre en C1, y una amida N-monosustituida también son necesarios para la actividad. También se requiere que el grupo N-acilo del inhibidor sea similar al del sustrato usado, para manifestarse la inhibición in vitro. Por sustitución de la amida de (2S,3R)-11 por una función urea, se obtiene un análogo que presenta una actividad inhibidora de la DHCD, mientras que el correspondiente carbamato y el compuesto con el átomo de nitrógeno metilado son inactivos frente este enzima.

Autor: RICO PRADOS M. CRUZ.
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La aterosclerosis y sus complicaciones asociadas son una de las mayores causas de mortalidad y morbilidad del mundo desarrollado. Se trata de una enfermedad inflamatoria multifactorial caracterizada por una progresiva proliferación celular y por la acumulación de lípidos, elementos fribrosos y productos oxidados en la pared arterial. Un resultado interpretado a favor de la hipótesis de la oxidación es la inhibición del desarrollo de las lesiones ateroscleróticas en modelos animales por antioxidantes capaces de eliminar los radicales lipídicos. Las plantas son las principales fuentes investigadas en la búsqueda de nuevos antioxidantes que limiten el desarrollo de la aterosclerosis, por su alto contenido en vitaminas, compuestos fenólicos, carotenoides y otras moléculas. Este es el caso de la cúrcuma, una planta de origen aisático de la Familia de las Zingiberáceas, cuyo rizoma de color naranja vivo es usado comunmente como una especia en la cultura asiática. Los principales componentes del extracto de cúrcuma son los curcuminoides: curcumina, demetoxicurcumina, bisdemetoxicurcumia y compuestos polipeptídicos como la turmerina. Los principales efectos de la cúrcuma, relacionados con el objeto de estudio de la presente Memoria son su actividad antioxidante e hipocolesterolémica, junto con su actividad antiinflamatoria. El objetivo fundamental de este trabajo ha sido evaluar la actividad antioxidante de un extracto de cúrcuma en la prevención y evolución de la aterosclerosis en conejos comparándola con la de la curcumina, por ser el componente mayoritario de dicho extracto, y con la vitamina E, por ser un antioxidante clásicamente estudiado, y los objetivos específicos han sido: 1,- Determinar el efecto del extracto de cúrcuma sobre distintos parámetros bioquímicos y de oxidación medidos en plasma, LDL, hígado y bilis. 2,- Estudiar histológicamente el efecto del extracto de cúrcuma sobre las lesiones en el árbol arterial y el tejido hepático. 3,- Estudiar el efecto del extracto de cúrcuma sobre el daño oxidativo a nivel de ADN. Para conseguir estos objetivos se planteó el siguiente diseño experimental: se han utilizado 49 conejos machos New Zealand a los que se suministraron 150 g de dieta diariamente y auga "ad libitum". Los animales se distribuyeron en 7 grupos: un control sano al que se suministró una dieta estándar. El resto de los grupos a los que se les suministró una dieta aterogénica con un 3,5% de grasa saturada y un 1,5% de colesterol. Al control enfermo no se les suministró ningún sumplemento: a los grupos A, B y C se les administró el extracto de cúrcuma (dosis mínima, intermedia y máxima, respectivamente) a una dosis equivalentes a 1.8, 18 y 36 mg/d de curcuminoides respectivamente. Los grupos VE y CU fueron suplementados con vitamina E y curcumina respectivamente a una dosis diaria igual a la dosis intermedia administrada del extracto de cúrcuma, y el periodo de experimentación fue de 30 días. Tras realizar las distintas pruebas experimentales, se han obtenido los siguientes resultados: 1,- El extracto de cúrcuma, según los parámetros bioquímicos medidos, da lugar a partículas de LDL menos aterogénicas, por su tamaño, su perfil de ácidos grasos, su estatus en moléculas antioxidantes, y su menor susceptibilidad a la oxidación. También muestra buenos resultados en la prevención y regresión del desarrollo de la lesión ateromatosa y del daño tisular hepático. 2,- El efecto del extracto de cúrcuma parece ser dosis-dependiente, siendo la dosis más efectiva la B (0.15 g/d). Dosis superiores no sólo no tienen un efecto mayor, sino que no presentan efecto alguno. 3,- La curcumina pura presenta un efecto tenue, lo que indica que la acción del extracto de cúrcuma es debida a la interacción de los distintos componentes del mismo, más que a su componente mayoritario. 4,- La vitamina E, aunque es un buen antioxidante de moléculas lipídicas, no parece tener efecto alguno, al menos en nuestras condiciones y modelo experimental, en la prevención y desarrollo de las lesiones ateroscleróticas.

Autor: DIAZ GARCIA JULIO JOSÉ.
Año: 2003.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Importancia de identificar el "periodo silente" previo al diagnóstico de DM 2, identificando marcadores precoces del mismo. A partir de evidencias recientes, se sustenta el marco teórico: -Estudio AMORIS (Lancet 2001) concluye: 1) El análisis multivariable demostró una correlación positiva entre el IM mortal y APO B y APO B/APO A1. 2) La APO B era más fiable que el LDLc para predecir el riesgo de IM mortal tanto en hombres como en mujeres, y la APO A1 se mostró como protector frente a esta circunstancia. 3) La APO A1 y la APO B son mejores marcadores que el Col.T, HDLc y LDLc par predecir el riesgo aterogénico. -Los estudios MONICA (Arch Inter Med 2003) Y NHANES III (Prev Cardiol 2001), coinciden en que los pacientes cuyo valor de PCR se encuentra en el percentil más alto presentan más eventos coronarios que los que se encuentran en los más bajos. OBJETIVOS: * Evaluar FRCV en prediabetes y su evolución a DM2. * Detectar el tipo de dislipemia (EAS) y estudiar las alteraciones en las APO. * Analizar los índices de riesgo clásicos frente a los nuevos indicadores. * Analizar los nuevos indicadores de Insulinoresistencia, sin utilizar insulinemia ni péptido C. * Evaluar los marcadores de inflamación (PCR). * Examinar la relación entre marcadores. CONCLUSIONES: 1) Dada la alta tasa de factores de riesgo econtrados en prediabéticos, debemos aplicar medidas de cribado según las recomendaciones de las organizaciones internacionales. 2) La Dislipemia es uno de los factores claves en estos pacientes, clasificarla según la EAS, analizar los parámetros lipídicos clásicos y determinar APO A1 y APO B para distinguir la dislipemia más aterogénica. Aplicar los nuevos indicadores de insulionresistencia para establecer tratamientos más enérgicos. 3) Incorporar a la práctica clínica los marcadores de la inflamación como la PCR, por la íntima relación que tiene con los FRCV y los índices aterogénicos y marcadores de Insulinoresistencia para detectar pacientes con riesgo vascualar alto.

Autor: COPERIAS ZAZO JOSE LUIS.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA.

Resumen: Los enfermos con insuficiencia renal terminal en terapia sustitutiva presentan un riesgo elevado de complicaciones cardiovasculares. La mortalidad por esta causa es mayor que en la población general y se desarrolla prematuramente. Los factores que contribuyen a este riesgo son, entre otros, la alteración en el metabolismo lipoproteico con la consiguiente dislipemia y el aumentado estrés oxidativo. La dislipemia renal se caracteriza por la disminución de HDL y ligeros incrementos de VLDL, IDL y LDL. Esta dislipemia puede verse afectada por el tipo de diálisis y de las soluciones de diálisis peritoneal empleadas y se han ensayado agentes osmóticos alternativos. También se ha implicado como causa de la acelerada aterosclerosis, al aumentado estrés oxidativo, como lo indican la aumentada susceptibilidad a la oxidación de las LDL y la mayor presencia de LDL oxidadas y de anticuerpos frente a ellas en el plasma. Las causas de este mayor estrés oxidativo pueden ser la mayor pérdida de antioxidantes y la activación de los neutrófilos que supone el contacto de éstos con las membranas de diálisis. Por todo ello nos planteamos estudiar los efectos del tratamiento con probucol en pacientes con insuficiencia renal crónica (IRC) sometidos a hemodiálisis (HD) o a diálisis peritoneal (DP). El probucol es un fármaco con propiedades hipolipemiantes y antioxidantes. En la situación basal, es decir antes del tratamiento, los pacientes con IRC presentaban, en promedio, pequeños cambios en las concentraciones de cLDL y apo B respecto de los controles sanos y claramente disminuidas las de lípidos en HDL y apo A. El tratamiento con probucol durante seis semanas produjo sólo ligeros descensos en estos parámetros, tanto en los pacientes en HD como en DP. En cambio, se incrementó notablemente la resistencia a la oxidación de las LDL, examinada in vitro tras su inducción con cobre. La intensidad de este efecto se correlacionó con el contenido de probucol en las LDL, pero no con los otros antioxidantes lipofílicos presentes en estas lipoproteínas. De hecho, el contenido de alfatocoferol en las LDL disminuyó por efecto del tratamiento con probucol. Todos estos cambios revirtieron a las seis semanas después de haber cesado el tratamiento. La adición de quercetina, un flavonoide con propiedades antioxidantes, al medio de incubación de las LDL incrementó de forma sinérgica la resistencia a la oxidación de las LDL procedentes del período de tratamiento con probucol. Este resultado permite proponer la utilización conjunta de estos antioxidantes para potenciar la resistencia a la oxidación de las lipoproteínas. Finalmente, en pacientes sometidos a DP, se analizaron los efectos del cambio del medio habitual de diálisis a otro basado en aminoácidos, Nutrineal. No se encontraron variaciones en ninguno de los parámetros bioquímicos analizados, incluidos lípidos y vitaminas liposolubles. Tampoco se alteraron los parámetros de oxidación de las LDL, por lo que puede concluirse que este medio no modifica la situación clínica de estos enfermos

Autor: SÁNCHEZ-VERA GÓMEZ-TRELLES ISABEL.
Año: 2003.
Universidad: SAN PABLO CEU.
Centro de lectura: F. CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: Durante la gestación se producen importantes cambios metabólicos y hormonales, entre los que se incluye un aumento en las concentraciones de los lípidos plasmáticos, concentraciones que en otras situaciones aumentan la oxidación de las LDL, lo que podría dañar la placenta y afectar el endotelio vascular. Nuestros resultados ponen de manifiesto que, a pesar de la hiperlipidemia, durante la gestación se produce una menor oxidación de las LDL, lo que podría ser debido al aumento en las contracciones plasmáticas de los estrógenos, potentes antioxidantes. Sin embargo, en gestaciones complicadas con diabetes gestacional y retraso de crecimiento intrauterino, se observa una mayor oxidación de las LDL, en el primer caso debido a una exagerada hiperlipidemia, y en el segundo caso debido a una disminución en los niveles de estrógenos. También hemos observado una relación entre una mayor oxidación de las LDL y un menor peso fetal, presumiblemente al dañar las LDL oxidadas a la placenta y limitar el aporte de nutrientes al feto. Finalmente, observamos en el animal experimental que la disminución de la hiperlipidemia gestacional reduce el crecimiento fetal.

Autor: CARPEÑO BARRADO GEMA.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La aterosclerosis es un proceso largo y lento durante el cual no se manifiesta ninguna sintomatología definida hasta que aparecen graves complicaciones. En su evolución inciden una serie de circunstancias que la agravan o contienen y se definen como factores de riesgo cardiovascular; de entre ellos, hasta la fecha el único factor para el cual se ha hallado una explicación razonable sobre su relación causal con la aterosclerosis es la hipercolesterolemia. Las estatinas son los fármacos hipolipemiantes más ampliamente prescritos en la actualidad, habiendo sido demostrada ampliamente su eficacia reduciendo la mortalidad y morbilidad cardiovascular. Así mismo, se les ha atribuido una serie de efectos beneficiosos independientes de su efecto hipolipemiante; entre estos efectos pleiotrópicos destacan los que ejercen sobre la respuesta inmune. En nuestro laboratorio, Montero y colaboradores observaron en PBMC in vitro que las estatinas, a través de la inhibición de la prenilación de proteínas, activaban la caspasa 1 y, consecuentemente la secreción de IL1b e IL18 por los monocitos/macrófagos, lo que comportaba la estimulación de la secreción de IFNg por los linfocitos. Con estos antecedenes, nos planteamos estudiar el perfil de respuesta inmunológica que presentaban dos grupos de pacientes, unos con cardiopatía isquémica (IC) y otros con hipercolesterolemia familiar homozigota (HFHo), en situación basal y tras ser tratados con estatinas. En todos ellos se produjo el efecto hipolipemiante esperado. En cuanto a la respuesta de los linfocitos, activando una muestra de sangre con ionomicina y PMA para estudiar el grado de activación (CD69) y el perfil de síntesis de distintas citocinas (IL2, IFNg, IL4), como resultado más sobresaliente se observó un incremento en la síntesis de IFNg por parte de los linfocitos CD8+/CD3+ tras el tratamiento durante 8 semanas con atorvastatina en los pacientes con IC. En la muestra de sangre estimulada con LPS no se encontraron cambios en la síntesis de aquellas citocinas por efecto del tratamiento farmacológico. In vitro, las estatinas a dosis de 1 mM tampoco ejercieron ningún efecto. El mevalonato añadido al medio de incubación en presencia de LPS, por el contrario, produjo un incremento del número de linfocitos CD8-/CD3+ sintetizadores de IFNg, resultado que fue muy repetitivo en las distintas visitas para cada individuo. Este efecto no se correspondía con cambios en la expresión de los complejos presentadores de antígeno en monocitos, esto es, MHC I, MHCII y HLA-DR. Se analizó la población responsable resultando ser los linfocitos T TCRgd. En las células de un paciente con hiperinmunoglobulinemia D (deficiencia de la mevalonato quinasa), no se produjo este efecto del mevalonato sobre los linfocitos T TCRgd. Este resultado, junto con otros obtenidos al analizar el efecto de inhibidores de la mevalonato pirofosfato descarboxilasa (fluoromevalonato y fenilacetato) e intermediarios isoprenoides de la ruta del colesterol, permiten atribuir este efecto del mevalonato a sus derivados fosforilados inmediatos. Finalmente, se demostró que en esta respuesta al mevalonato estaban implicadas las vías de señalización de p38 y ERK, y que era inhibida por dos inmunosupresores clásicos, como ciclosporina y tacrónimus (FK506).

Autor: CORTINAS HERNÁNDEZ LUCÍA .
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Resumen: El objetivo de la Tesis doctoral fue valorar la interacción entre el grado de poliinsaturación y el nivel de alfa-tocoferol dietéticos sobre el valor nutritivo y la estabilidad oxidativa de la carne de pollo. Así mismo, también se pretendió estudiar la responsabilidad de la síntesis endógena sobre el depósito de ácidos grasos (AG) en la misma. Para ello se diseñaron dos experimentos. Ambos experimentos se basaron a niveles crecientes de acetato de alfa-tocoferol (0,100,200 y 400 mg/kg) y de ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) dietéticos. En el primer estudio el gradiente de poliinsaturación dietético se consiguió reemplazando una grasa saturada (sebo) por una mezcla de aceites poliinsaturados (linaza y pescado) suplementados a un nivel constante de 9%. En el segundo estudio este gradiente se consiguió mediante la adición de niveles crecientes de la fuente de grasa poliinsaturada (2,4,6 y 8%). Para la realización de cada estudio experimental se utilizaron 192 broilers hembras. En relación a la composición de AGPI, a medida que aumentó el grado de poliinsaturación dietético, el contenido y proporción de los mismos en muslo y pechuga aumentó exponencialmente. Además, el consumo de una dieta con elevados niveles de ácidos grasos saturados (AGS) y monoinsaturados (AGMI) dio lugar a que la proporción de AGPI se deposite a un ritmo fraccional superior que al consumir raciones con un mínimo contenido de estos AG. Por otro lado, la concentración de AGS y AGMI en los tejidos de las aves dependió de la aportación de la dieta y de la síntesis endógena. Así, al aumentar el nivel de grasa añadida al pienso, de 0 a 10%, el depósito de AGS procedentes de la síntesis endógena disminuyó de 37,8 a 17,8% en el muslo y de 39,2 a 23,3% en la pechuga. De forma similar el depósito de AGMI procedentes de la síntesis endógena disminuyó de 48,5 a 8,0% en el muslo y de 42,6 a 9,8% en la pechuga. Por otro lado, la suplementación con acetato de alfa-tocoferol a dosis inferiores o iguales a 400 mg/kg, no afectó al contenido de AG del muslo y de la pechuga. La concentración tisular de alfa-tocoferol en el muslo fue 1,8-2,3 veces superior a la pechuga. En ambos tejidos dicha concentración fue directamente proporcional al consumo del mismo, e inversamente proporcional al consumo de AGPI. La reducción del depósito de alfa-tocoferol en los tejidos de las aves por un aumento del grado de poliinsaturación fue más elevada en aquellos tejidos de los pollos alimentados con elevadas dosis de acetato de alfa-tocoferol. La cantidad de alfa-tocoferol necesaria para conseguir un nivel de enriquecimiento en la carne de pollo de 40 mg/kg varía en función del grado de poliinsaturación dietético, por cada unidad de aumento de AGPI en la ración se necesita incrementar 3-4 mg alfa-tocoferol para contenidos dietéticos de AGPI bajos (15-20 g/kg) y 12-23 mg alfa-tocoferol para contenidos altos (superior a 55-60 g de AGPI/kg). En general, los procesos de cocción y posterior conservación de refrigeración del muslo de pollo favorecieron los procesos de oxidación de la fracción lipídica. Además, la susceptibilidad a la oxidación de la carne de pollo aumenta proporcionalmente a su contenido enAGPI y se reduce a medida que aumenta su concentración en alfa-tocoferol. Además, el efecto antioxidante del alfa-tocoferol presentó una saturación. En este sentido, la estabilidad oxidativa de la carne de polo no se vio afectada por un aumento en el nivel de alfa-tocoferol dietético de 200 a 400 mg/kg.

Autor: HERNANDEZ OCHOA IGOR.
Año: 2003.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: SE ESTUDIA EL EFECTO DE LA ADICIÓN DE TRES LIPASAS COMERCIALES DIFERENTES (DOS DE ORIGEN PREGÁSTRICO ANIMAL Y OTRA FÚNGICA) SOBRE LA LIPOLISIS, LA PROTEOLÍSIS Y LOS COMPUESTOS VOLÁTILES DEL QUESO IDIAZABAL. LOS QUESOS CON LIPASAS DE ORIGEN PREGÁSTRICO ANIMAL TENÍAN, MAYORITARIAMENTE, ÁCIDOS GRASOS LIBRES DE CADENA CORTA, MIENTRAS QUE LOS QUESOS ELABORADOS CON LIPASA FÚNGICA O SIN LIPAS PRESENTARON MAYORÍA DE AGL CADENA LARGA. ESTOS RESULTADOS SE REPITIERON EN VERANO Y EN INVIERNO. EN INVIERNO, LOS QUESOS ELABORADOS CON NIVELES SIMILARES DE LIPASA AÑADIDA PRESENTARON UNA MENOR LIPOLISIS TOTAL QUE LOS ELABORADOS EN VERANO. TAMBIÉN SE ELABORARON QUESOS CON CUAJO DE CORDERO EN PASTA, COMPARANDOLOS A NIVEL ANALÍTICO Y SENSORIAL CON LOS QUESOS ELABORADOS CON LAS LIPASAS COMERCIALES. LOS QUESOS CON LIPASA PREGÁSTRICA COMERCIAL O CON CUAJO EN PASTA FUERON SIMILARES SENSORIALMENTE, Y DIFERENTES DE LOS ELABORADOS CON LIPASA FÚNGICA O SIN LIPASA. ELABORAMOS QUESOS A ESCALA COMERCIAL (2001 Y 5000 L DE LECHE), COMPROBANCO COMO LOS QUESOS ELABORADOS CON CUAJO EN PASTA O CON LIPASA PREGÁSTRICA ANIMAL ERAN COMPARABLES A NIVEL ANALÍTICO (AGL) Y SENSORIAL. EL AHUMADO SUAVE DE LOS QUESOS NO AFECTÓ A LA ACTIVIDAD LIPASA NI A LA LIBERACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS EN EL QUESO. HAY UNA RELACIÓN INVERSA ENTRE LA CONCENTRACIÓN DE AGL DE CADENA CORTA Y LA CONCENTRACIÓN DE AMINOÁCIDOS LIBRES EN EL QUESO, SI BIEN LOS PRINCIPALES FACTORES QUE INFLUYEN EN ESTA SON LAS CONDICIONES DE ELABORACIÓN Y EL TIEMPO DE MADURACIÓN. LOS AMIINOÁCIDOS MAYORITARIOS SON LA VALINA, LA LEUCINA Y EL GRUTÁMICO. SE HAN DETECTADO MÁS DE 90 COMPUESTOS VOLÁTILES DIFERENTES EN EL QUESO, SI BIEN TAN SÓLO DIEZ ESTABAN PRESENTES EN TODOS LOS QUESOS ANALIZADOS (DOS ÁCIDOS, DOS CETONAS, DOS ESTERS Y CUATRO ALCOHOLES). EL GRUPO MAYORITARIO ERA EL DE LOS ÁCIDOS, SEGUIDO DE LAS CETONAS. LOS HIDROCARBUROS, LOS ALDEHIDOS Y LOS ESTERES SON MINORITARIOS EN LA MAYORÍA DE LOS CASOS.

Autor: SILVA ABUIN ARTURO.
Año: 2002.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: INSTITUTO DE ACUICULTURA.

Resumen: El objetivo planteado de identificar la procedencia de partidas de almeja japonesa comercial, Ruditapes philippinarum (Adams et Reeve, 1850), llevó a determinar el patrón de composición de los principales esteroles presentes en esta especie de molusco bivalvo, a lo largo de varios ciclos anuales, en siete localidades de producción situadas en distintos países de la UE: en Francia estudiamos la localidad bretona de CARNAC, en España dos localidades gallegas muy próximas geográficamente, RIANXO y CARRIL situadas en la Ría de Arousa, en Italia cuatro localidades de la costa alto adriática: MARANO, CHIOGGIA, SCARDOVARI y GORO. Se realizaron muestreos mensuales o quincenales en los momentos en los que era posible encontrar en el mercado almejas de cada una de las localidades a estudiar, procediendose a liofilizar la carne y conservándola a -20ºC. Con una alícuota de la carne liofilizada se procedió a extraer los lípidos totales por el método de Folch, y de ellos se extrajeron los esteroles, cuantificándolos e identificándolos por Cromatografía de gases asociada con Espectrometría de masas. También y como método más sencillo y simple de extracción de esteroles, se ensayó un método novedosos de saponificación directa, con ahorro del tiempo de análisis y del empleo de solventes caros y contaminantes. Se aplicaron a los resultados del contenido porcentual de los esteroles más abundantes en cada localidad, mediante el programa estadístico SPSS, una clasificación multivariante y discriminante y como resultado se obtuvo que los esteroles: 24-Norocolestadieno, 22-cis-Dehidrocolesterol, 22-trans-Dehidrocolesterol, Brasicasterol, 24-Metilencolesterol, Campesterol, Beta-Sitosterol, y el Índice de Condición se definen como las variables disciminantes que permiten la clasificación y diferencian el origen en almeja japonesa Ruditapes philippinarum (Adams et Reeve, 1850). Una segunda conclusión fue la determinación de un patrón común de composición de esteroles para todas las poblaciones de almeja japones estudiadas formado por los onde esteroles más abundantes identificados en esa especie, cuyo contenido y evolución anual sigue una pauta determinada y diferente en cada una de las localidades, demostrándose que los esteroles pueden ser empleados como marcadores bioquímicos para la determinación del origen en esta especie de bivalvo. Como tercera conclusión se demostró que la saponificación directa es un método rápido, sencillo y menos costoso de extracción de esteroles, que puede emplearse con garantías para la determinación del contenido de los esteroles más abundantes en almeja japonesa Ruditapes philippinarum (Adams et Reeve, 1850), y que no altera en ningún caso el resultado de la clasificación.

Autor: MARTÍNEZ PATIÑO DOROTEA.
Año: 2002.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: BIOLOGÍA.

Resumen: Se estudian dos especies de moluscos bivalvos que pertenecen a la familia Solenidae, Solen marginatus y Ensis siliqua, ambas autóctonas en Galicia y de creciente interés comercial, localizadas en dos bancos naturales de la zona intermareal en la costa N.de Galicia, en la Ría de Ortigueira y Ría del Barquero, respectivamente. Los objetivos planteados se centran en la descripción de sus ciclos gametogénicos desde dos puntos de vista, uno histológico y el otro bioquímico, así como su relación con las reservas energéticas en función de su composición bioquímica mayoritaria y la composición de las gónadas en ácidos grasos en los lípidos polares y en los lípidos neutros. El fin es conseguir desarrollos de cultivos larvarios que produzcan semillas de calidad para la repoblación de bancos naturales. Las dos especies presentan un ciclo anual de reproducción con un período de madurez y puesta que coinciden a finales de la primavera, con un corto período de reposo en Solen marginatus a diferencia de Ensis siliqua cuyo reposo es más amplio. La estrategia reproductiva de las dos especies se adapta al modelo conservador, almacenando reservas energéticas para emplearlas posteriormente en la reproducción. Acumula preferentemente glucógeno que va a emplear en el desarrollo gametogénico y lo transforma en reservas lipídicas que almacena sobre todo en la masa visceral donde se incluyen las gónadas. En las dos especies los resultados obtenidos nos confirman que los lípidos neutros son un buen parámetro indicador de los estadíos de madurez sexual en ovocitos, mientras que los lípidos polares reflejan los estadíos de madurez sexual en espermatozoides, sobretodo se observa en Ensis siliqua. Los ácidos grasos esenciales EPA y DHA son mayoritarios en las reservas lipídicas de los ovocitos de estas dos especies. El aporte de estos ácidos grasos, así como del 14:0, 16:0, 18:0, 18:1(n-9) y 16:1(n-7) a través de la alimentación en criadero, puede mejorar el acondicionamiento de los progenitores y obtener puestas de calidad para la producción de semilla. El tamaño de los huevos y la duración del cultivo larvario de estas dos especies de Solénidos es diferente. El período larvario de Ensis siliqua es de 20 días, mientras que el de Solen marginatus es tan solo de 8 días. En este último caso, los huevos tienen un mayor tamaño presentando además una cubierta coriónica rica en ácidos grasos saturados y monoinsaturados. El menor tiempo de desarrollo larvario puede estar relacionado con las características peculiares de los ovocitos de Solen, mayor contenido en lipidos de reserva y recubrimiento coriónico.

Autor: GUIJARRO HUERTAS GLORIA M..
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL CLÍNICO UNIVERSITARIO SAN CECILIO.

Resumen: OBJETIVOS 1,- Identificar los predictores bioquímicos que mejor permitan asignar a cada paciente con infarto agudo de miocardio (IAM) a un grupo concreto de riesgo cardiovascular futuro. 2,- Integrar la experiencia obtenida en un protocolo de actuación en los pacientes con IAM. POBLACIÓN Y MÉTODOS Se determinaron marcadores de daño miocárdico (Troponina I (TpI)), inflamción (Proteína C Reactiva Ultrasensible (PCR)) y metabolismo lipoproteico (colesterol total, colesterol de lipoproteínas de alta (HDL) y de baja (LDL) densidad, Triglicéridos y Apoproteína A-I (Apo-AI)), en 80 pacientes, 32 mujeres y 48 hombres, de 38-78 años de edad (media 50.9), diagnosticados clínica, bioquímica y/o electrocardiográficamente de IAM. Se excluyeron aquellos pacientes que padecieran o hubieran sufrido en las 4 semanas previas al IAM un proceso intercurrente inflamatorio o de otra naturaleza que pudiera interferir con las determinaciones bioquímicas. Se realizó un seguimiento clínico con revisión final a los 39,4 meses (rango 37-43). El estudio bibliográfico se realizó en Hemerotecas universitarias de Granada y Murcia, y en Internet (Bases de Datos, Páginas Webs Médicas y Revistas Médicas on line). RESULTADOS La supervivencia a los 39,4 meses del IAM fue del 86,25%. Los marcadores lipídicos no tuvieron ningún valor predictivo secundario. El valor de p en la TpI y Apo-AI estuvo próximo al de la significación estadística. El valor de la PCR fue significativamente mayor en el grupo de IAM respecto al grupo control (5,4 veces mayor), y en el subgrupo de IAM fallecidos respecto al de IAM supervivientes (2,44 veces mayor). El riesgo de sufrir IAM es 1,46 veces mayor en los pacientes con PCR alta que en los que tienen PCR normal. Existió una pequeña relación inversa entre PCR y TpI. Esto puede deberse a que la inflamación crónica subyacente (expresada por la PCR elevada) desestabiliza precozmente al proceso aterosclerótico, provocando ruptura y trombosis de placas ateroscleróticas pequeñas, en arterias más pequeñas o segmentos más distales, dando lugar a infartos que, aunque pequeños, son muy repetitivos y de pronóstico maligno por la agresividad y reiteración del proceso inflamatorio. CONCLUSIONES 1,- La PCR, marcador de inflamación, fue el único predictor significativo de mortalidad. La TpI y Apo-AI quedaron cerca de la significación estadística. La inflamación crónica juega un papel patogénico muy importante en el desarrollo de la enfermedad aterosclerótica. 2,- Los valores de TpI, LDL y PCR permiten clasificar a los pacientes con IAM en grupos de diferente pronóstico evolutivo, subsidiarios de estrategias diagnósticas y terapéuticas más o menos agresivas. 3,- Los parámetros bioquímicos ayudan eficamente al médico clínico para afrontar con acierto el diagnóstico, valoración pronóstica y tratamiento del IAM. REFLEXIÓN FINAL Hace unos años que se erradicó la Fiebre Reumática, una enfermedad inflamatoria de base infecciosa. Un día no lejano se acabará con las consecuencias mortales de la enfermedad aterosclerótica, una plaga mundial cuyas complicaciones más graves están medidas por mecanismos inflamatorios. Los estudios bioquímicos son decisivos para comprender y tratar mejor el proceso inflamatorio que subyace en los pacientes que fallecen por IAM.

Autor: CASTILLO FERNÁNDEZ SERGIO.
Año: 2002.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS Y VETERINARIA.

Resumen: La hipercolesterolemia familiar (HF) es una enfermedad autosómica dominante que se caracteriza por presentar una elevadas concentraciones de colesterol total y colesterol en LDL (cLDL) en plasma. Está causada por mutaciones en el gen del receptor de las LDL (rLDL) que codifica para una proteína de membrana de 839 aminoácidos que se encarga de la retirada plasmática de las lipoproteínas de baja densidad o LDL. Clínicamente, se caracteriza por la presencia de una elevada incidencia de enfermedad cardiovascular prematura (ECVP) y la presencia de depósitos de colesterol en las articulaciones (xantomas) y en la córnea (arco corneal). La HF es una de las enfermedades monogénicas más frecuentes que se conoce y está asociada a una disminución en la esperanza de vida, de donde radica su importancia socio-económica. Se calcula que alrededor de 200.000 pacientes de HF fallecen al año en el mundo por causas cardiovasculares. Los objetivos del trabajo fueron la caracterización de los defectos en el gen del rLDL de 146 sujetos con diagnósticos clínico de HF, la descripción de esta población y de sus factores de riesgo; la determinación de la presencia de la mutación R3500Q causante de Apo B defectuosa familiar y último, la valoración de la influencia del genotipo de Apo E en este subgrupo estudiado. Para llevar a cabo estos objetivos se utilizaron técnicas de biología molecular, como son la PCR, SSCP y la secuenciación autómatica. Se han detectado 52 mutaciones distinta en el gen del rLDL; 16 de ellas que se describen por primera vez en este trabajo y otras 16 que no se habían caracterizado hasta la fecha en la población española. Este dato confirma la elevada heterogeneidad de las causas moleculares de HF en nuestro país. El genotipo Apo E no parece estar afectando mucho a la expresión fenotípica de la HF y la variante R3500Q del gen de Apo B asociada a BDF es rara en España, aunque podría ser causa frecuente de hipercolesterolemia en la CCAA de Galicia. Los factores que resultaron mejores predictores del riesgo cardiovascular en la población con HF diagnósticada genéticamente fueron el cociente CT/cHDL, el género masculino, la edad, los niveles de cLDL y los niveles de cHDL. La población con HF analizada en este estudio presentó una incidencia de ECVP cercana al 30% y una prevalencia de depósitos lipídicos del tipo xantomas y arco corneal del 35%, cifras inferiores a las descritas en otros estudios europeos, dejando abierta la posibilidad a una experiencia aparentemente menos desfavorable de esta enfermedad en nuestro país.

Autor: NAVARRO FERRANDO M. ÁNGELES.
Año: 2002.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: En la presente investigación se han empleado dos modelos animales para conocer la influencia del contenido y saturación de la grasa, independiente del colesterol dietético, en la regulación lipoproteica tanto a corto plazo como largo plazo. Se evaluó la caracterización de la -- como modelo postprondial así como el estudio de la composición de la HDL en función tanto de la cantidad como del saturación de la grasa; y se estudió el papel tanto del hígado como de los distintos segmentos del intestino en los cambios observados en la composición plasmática de las HDL. Un segundo modelo animal estudiado fue el cerdo, se llevó a cabo la verificación de lipoproteínas en función de la cantidad de grasa y de la saturación a largo plazo y la -- hepática e intestinal de la agrupación génica apoAI/CIII /A-IV.

Autor: PARDO PARDO RAÚL.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Las fosfolipasas D (PLDs) son enzimas regulables que catalizan la hidrólisis de la fosfatidilcolina para dar lugar a fosfatidato (PtdOH), una molécula capaz de funcionar como segundo mensajero y que se ha implicado en procesos celulares como el tráfico vesicular, la reorganización del citoesqueleto y la proliferación celular. Los alcholes primarios, como el 1-butanol, pueden derivar la formación de PtdOH por la PLD hacia la formación de los correspondients fosfatidilalcoholes (moléculas inactivas). Es por ello que los alcoholes primarios son ampliamente usados en el estudio de las funciones celulares en las que se hayan implicados enzimas PLD. Esta tesis se centra en el estudio de procesos celulares en los que intervienen enzimas PLD, y en particular, el estudio de su implicación en el ondulamiento de la membrana plasmática (membrane ruffling) y en la proliferación celular. El ondulamiento de la membrana plasmática es un proceso dinámico que requiere del reordenamiento del citesqueleto de actina. Tanto mastocitos como linias celulares relacionadas responden a la estimulación por antígenos como una reorganización profunda de su citoesqueleto cortical y con la exocitosis de sus gránulos de secreción. Nosotros hemos observado que la inhibición de la formación de PtdOH por la PLD mediante la incubación con 1-butanol se traduce en la inhibición de la ondulación de la membrana plasmática en células RBL-2H3 (una línea celular mastocitaria). Medidas de la actividad PLD en respuesta a antígeno indican que la ondulación de la membrana requiere de la producción continua de PtdOH por la PLD. En estudios de transfección con PLD1 y PLD2 marcadas con GFP (green fluorescent protein) se observa la colocalización de PLD2 en las ondulaciones de membrana de células RBL estimuladas con antígeno. Por otra , GFP-PLD1 muestra una distribución intracelular localizada en vesículas citoplasmáticas. Por ello asumimos que la isoforma PLD2 es esencial en los cambios a nivel de citoesqueleto que se observan en respuesta a la estimulación por antígeno. En el estudio de la implicación de la PLD en la proliferación celular se emplearon astrocitos en cultivo como modelo celular. Se determinó la activación de la PLD en respuesta a una batería de estímulos. Asimismo, se determinó la estimulación de la incorporación de timidina al DNA como reflejo de la actividad mitogénica en respuesta a los mismos estímulos. Observamos una clara ausencia de correlación entre la activación de la PLD y la magitud de la respuesta mitogénica. De este dato concluimos que la formación de PtdOH por la PLD no parece ser un mecanismo comunmente implicado en la transducción de señales proliferativas. Por otra parte, la inhibición de la formación de PtdOH (por incubación en presencia de alcoholes primarios) no se traduce en la reducción de la actividad proliferativa en respuesta a diversos mitógenos, apoyando la conclusión anterior. Tras concluir que la activación de la PLD no era un requerimiento necesario en la transducción de señales mitogénicas, nos propusimos explorar mecanismos moleculares implicados en la proliferación de astrocitos. Observamos que concentraciones de litio en el rango milimolar inducen un bloqueo en el ciclo celular a nivel de G2/M en astrocitos proliferantes. Asimismo, el litio retrasa la progresión a través del ciclo celular en astroctios deprivados de suero y estimulados por el mitógeno endotelina-1. La adición exógena de myo-inositol no es capaz de revertir los efectos del litio sobre el ciclo celular y estos no se reproducen por la inhibición selectiva de la glucógeno sintasa quinasa-3 (GSK3). Estos resultados sugieren que los efectos del litio no son mediados ni por inhibición de inositol monofosfatasas ni por inhibición de GSK3, dos de sus dianas farmacológicas reconocidas. Por el contrario, el pretratamiento con litio de astrocitos proliferantes reducen la activación de ERK1/2 (extracellar regulated kinase 1/2) y de su quinasa reguladora MEK 1/2. El litio previene también la activación de dichas quinasas en respuesta a endotelina-1 en astrocitos deprivados de suero. En células granulares de cerebelo concentraciones milimolares de litio promueven la activación de MEK y ERK. Los efectos opuestos del litio en neuronas y astrocitos nos llevan a proponer su uso terapeútico en situaciones de daño traumático en el sistema nervioso central.

Autor: ASPICHUETA CELAÁ PATRICIA.
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA, UPV-EHU.

Resumen: La secreción de VLDL por el hígado es un proceso esencial para cubrir las necesidades de lípidos combustibles, estructurales y precursores biosintéticos de otros tejidos. Los mecanismos implicados en la secreción de VLDL dependen de la disponibilidad de los lípidos constituyentes y de la apoB, así como de la actividad de la proteína microsomal transferidora de triacilglicéridos y de la integridad de la ruta secretora. Cualquier alteración en el estado metabólico hepático puede afectar a los procesos de síntesis de los componentes de las VLDL y comprometer su disponibilidad provocando cambios en su ensamblaje y secreción. Los hepatocitos son heterogéneos y se sbae que numerosos enzimas implicadas en el metabolismo lipídico están distribuidas a lo largo del acino hepático con una mayor actividad en células periportales o perivenosas. Este trabajo se planifició con el fin de analizar la zonación hepática de la secreción de VLDL y de los procesos implicados en su biogénesis, así como su adaptabilidad en las situaciones de ayuno y de sepsis. Este estudio ha revelado que los hepatocitos periportales tienen mayor capacidad lipogénica que los perivenosos. A pesar de ello, no existen diferencias en la secreción de VLDL entre las células de distinta procedencia acinar, lo cual concuerda con la homogeneidad zonal de los mRNA de la apoB y de la proteína microsomal transferidora de triacilglicéridos. El ayuno de 18 horas no produce zonación en la secreción de VLDL pero disminuye el número de partículas secretadas y la capacidad lipogénica sobre todo en los hepatocitos periportales. La sepsis induce únicamente la zonación de la secreción de VLDL con apoB100 sin producir una distribución heterogénea de la expresión génica de la apoB y al igual que el ayuno, afecta de forma más marcada a la población de hepatocitos periportales que aumentan la secreción de unas VLDL "especiales" con un contenido menor de triacilglicéridos.

Autor: PÉREZ FERNÁNDEZ SILVIA.
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA UPV/EHU.

Resumen: En el presente trabajo se ha estudiado el efecto de las principales prostaglandinas sintetizadas y liberadas por las células sinusoidales hepáticas sobre la formación y secreción de VLDL en el hepatocito, la lipogénesis y los niveles de expresión de algunas proteínas implicadas, así como los niveles de RNAm de los receptores diana de dichas prostaglandinas. También se ha estudiado la respuesta del hepatocito a la lL-6 y el efecto que cada prostaglandina ejerce en presencia de la lL-6 sobre los citados parámetros, en esta nueva condición considerada fisiopatológica. Los hepatocitos de rata en cultivo tratados con una concentración fisiológica (5uM) o patológica (50 uM) de la PGE2, PGD o PGF2alfa secretan un menor número de partículas de VLDL con una composición en lípidos constante para la concentración 5 uM de las PGE2 y PGD2 y reducida para las concentraciones 5 uM de la PGF2alfa y 50 uM de cualquiera de las tres protaglandinas. En el estudio sobre la lipogénesis en los hepatocitos de rata, las prostaglandinas reprimen la síntesis de novo de colesterol, mientras los demás lípidos requeridos para la formación y ensamblaje de la partícula de VLDL no se ven afectados. Los tratamientos a corto plazo con PGD2 o PGF2alfa reducen el nivel de RNAm de la apoB que, sin embargo, recupera su tasa de expresión en tratamientos a largo plazo. La lL-6, citoquina responsable de la respuesta de la fase aguda en la reacción inflamatoria, induce la expresión del RNAm de la apoB y la secreción de partículas de VLDL que presentan una cantidad de lípidos anomarlmente baja. En los hepatocitos de rata tratados simultáneamente con PGE2 50 uM y la lL-6, el incremento en la secreción de partículas de VLDL observado por la acción en solitario de la lL-6 se anula recuperándose los niveles control. La expresión de los receptores de prostanoides parece estar fuertemente controlada por citoquinas. La citoquina clave de la fase aguda lL-6 induce rápidamente la expresión del receptor EP4, mientras que reduce la de los receptores EP2 y FP en los hepatocitos de rata. La expresión inducida por la Il-6 de los receptores EP4 parece establecer una retroinhibición que permite a la PGE2 frenar la inducción de las proteínas positivas de fase aguda. La expresión de los receptores de prostanoides alterada por la exposición de los hepatocitos de rata a la lL-6 tiende a normalizarse con los tratamientos de cualquiera de las prostaglandinas en estudio a concentración 50uM.

Autor: FERNÁNDEZ RODRÍGUEZ MARÍA.
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Como otras glándulas exocrinas, las glándulas salivares se componen de dos tipos celulares: acinos y ductos. La diferencia anatómica entre ambos tipos celulares se corresponde con diferencias en los papeles fisiológicos que juegan cada tipo celular. La secreción de la saliva es controlada por inervaciones simpáticas y parasimpáticas tanto en acinos como en ductos. Además, la secreción salivar también es controlada por agonistas purinérgicos. La presencia de receptores purinérgicos ha sido descrita en diversos tejidos, entre ellos en glándulas salivares parótidas y submandibulares. Con el trabajo realizado en esta Tesis, se ha demostrado la existencia de algunos de estos receptores purinérgicos en glándula submandibular de rata mediante técnicas de inmunohistoquímica y biología molecular. Además, se ha estudiado también el efecto de diferentes drogas anestésicas sobre la respuesta de las células de glandula submandibular de rata, y posteriormente estos anestésicos han sido utilizados como herramientas para la discriminación de la respuesta de los receptores purinérgicos. Por otro lado, también se ha estudiado la interacción de la respuesta de los receptores purinérgicos con la respuesta al neurotransmisor muscarinérgico carbacol.

Autor: ISUSI NEIRA EFREN.
Año: 2001.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA, UPV/EHU.

Resumen: El hígado juega un papel fundamental en la regulación del metabolismo del colesterol y en su distribución en todo el organismo. Dentro del complejo mecanismo regulador están implicados procesos tales como la esterificación del colesterol y la hidrólisis de sus esteres, así como la secreción de estos y otros lípido formando parte de lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) que son enviadas a la circulacion sanguinea y alcanzan diversos tejidos del organismo. Las estaninas son moléculas inhibidoras de la HMG-CoA reductosa que se utilizan habitualmente en el tratamiento farmacológico de la hipercolesterolemia ya que actuan sobre el higado reduciendo la biosíntesis de colesterol, ante lo cual el hepatocito responde aumentando el nº de receptores y la captura de LDL plasmáticas para aumentar el aporte de colesterol. Aunque existen numerosos trabajos del efecto hipocolesterolemiante de las estaninas en humanos, se han realizado muy pocos estudios sobre su influencia en el metabolismo de esteres de colesterol en el higado. El objetivo del proyecto que se presenta es estudiar el efecto de 3 inhibidores de la HMG-CoA reductasa, atorvastanina, lovastatina y simvastatina, sobre el metabolismo de esteres de colesterol y la secreción de VLDL. Se valora para ello la actividad de los enzimas acil-CoA: colesterol aciltransferasa y colesterol ester hidrolasa lisosomal, citosolica y microsomal, reguladoras de la formación e hidrólisis de los esteres de colesterol y se determina el numero de particulas de VLDL secretadas asi como su composicion lipidica y apoproteica y de tamaño. Con objeto de completar la panorámica del metabolismo de los ésteres de colesterol y de analizar con correción y concreción los puntos de actuacion de los farmacos mencionados, se han valorado los ritmos hepáticos de lipogénesis y colesterogénesis en las celulas control y en las tratadas con las estaninas. El estudio se ha llevado a cabo en dos modelos celulares:a) en hepatocitos de rata, b) en celulas del hepatoblastoma humano HepG2. Lo que contribuye a conocer con mayor precisión el mecanismo de actuación de estas 3 estaninas seleccionadas sobre las células hepáticas de los dos modelos más ampliamente utilizados en estudios afines, la rata y el humano. Se ha comprobado que los hepatocitos son más sensibles al tratamiento con estaninas, y que las estaninas ejercen marcados efectos a nivel subcelular sobre las enzimas que dirigen la formulación e hidrólisis de los ésteres de colesterol que son especifivos para cada estanina y tipo celular. En ambos modelos celulares la disponibilidad intracelular de colesterol modula a corto plazo la cantidad de colesterol esterificado que se secreta en las VLDLy a largo plazo el numero de particulas de VLDL y la cantidad de lipidos que transportan.

Autor: COMESA ZAMORA PABLO.
Año: 2001.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Las PKCs constituyen una familia de serin-treonin quinasas con importantes funciones en el control de procesos celulares como la proliferación y la diferenciación celular. Esta familia se divide en tres grupos de isoenzimas(clasicas, nuevas y atipicas) dependiendo de su estructura primaria y de los requerimientos de acticadores y cofactores para su regulación como el Ca2+, el diacilglicerol (DAG) y los fosfolipidos aniónicos. Las PKCs clasicas pueden ser activadas por Ca2+, el diacilglicerol (DAG) y los fosfolipidos aniónicos. La PKCs clasicas pueden ser activadas por Ca2+ y/o por DAG o esteres de forbol. En estas iosenzimas, la region reguladora esta comopuesta por dos dominios conservados: el dominio C1, al que se unen eldiacilglicerol (DAG) y los esteres de forbol, y el dominio C2, al que se unen el Ca2+ y la fosfatidilserina (PS). Las PKC nuevas pueden seractivadas por DAG o esteres de forbol pero de manera independiente de Ca2+ y aunque tambien contiene estos dos dominios reguladores, el dominio C2 no tienen los grupos funcionales necesarios para que se enlace el Ca2+. Por ultimo las PKC atipicas no son reguladas ni por Ca2+ni por DAG y carecen del dominio C2. En este trabajo realizamos mutaciones puntuales en el sistio de union a calcio del dominio C2 de la PKC clasica, PKCalfa encontrandose que los residuos, D187,D246 y D248, están implicados en la capacidad de la proteina para traslocarse a la membrana y tambien en la actividad catalitica de la enzima. Los dominios C1 y C2 estan relacionados pues uno de estos residuos, el D187, participa tanto en la union de la enzima a la membrana como en la activacion inducida por el DAG. Las mutaciones en los union a fosfatidlserina (PS) del dominio C2 de esta isoenzima han permitido saber que los residuos T251,R216 y R249, estan directamente implicados en el enlace a fosfolipidos aniónicos y tambien en la posterior activacion de la enzima. Ademas, se ha encontrado que N189 puede actuar como un desencadente de la actividad enzimática, ya que su mutación no afecta a la unión a fosfolípidos pero sí inhibe la activación de la enzima. Tambien estudiamos el efecto dos moduladores de la actividad de la PKC como son el eter lipidico antitumoral ET-18-OCH13 y el acido todo-trans-retinoico. El ET-18-OCH3 es capaz de inhibir a bajas concentracioines y activar a altas concentraciones a la PKCalfa. El grupo metoxilo de la posición sn-2 del esqueleto de glicerol presente en la molecula de ET-18-OCH3 es determinante para desarrollar tanto el efecto inhibidor como activador de la PKCalfa. La sustitución del grupo colina de la posición sn-3 por serina aumenta en gran medida la capacidad del eter para activar a la enzima a bajas concentraciones del éter. Además del grupo metoxilo de la posicion sn-2 tambien el enlace eter de la posicion sn-1 es determinante para desarrollar este efecto activador sobre la PKCe. La sustitución del grupo colina de la posición sn-3 por serina aumenta aunque ligeramente la capacidad del eter para activar a la enzima. Por ultimo el acido todo-trans-retinoico(atRA) es capaz de activar a la PKCalfa en ausencia o a bajas concentraciones de PS, mientras que a concentraciones mayores de PS, este acido inhibe la actividad enzimatica. Los resultados parecen indicar que el atRA compite con la PS por el mismo sitio de enlacedel dominio C2 pues los mutantes afectados en el sitio de enlace a PS no son capaces de modularse por el atRA en la misma medida que la enzima tipo silvestre y el aumento enla concentracion de DAG compensa la perdida de actividad de los mutantes al ser estimulados atRA en ausencia de PS. Los iones Ca2+parecen mediar la union del atRA a la PKCalfa pues en ausencia de Ca2+no hay efecto significativo del atRA sobre la actividad quinasa y el atRA no es capaz de modular la actividad de los mutantes afectados en el sitio de union a Ca2+ en la misma medida que la de la enzima tipo silvestre.

Autor: JIMENEZ LOPEZ JOSE MANUEL.
Año: 2001.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Se ha examinado la influencia de dos agentes xenobióticos, etanol y hexadecilfosfocolina, sobre el metabolismo de fosfolípidos y lípidos neutros, empleando como sistema experimental la línea celular de hepatoma humano HepG2. Estas células preservan la mayor parte de las características hepáticas morfológicas y funcionales, constituyendo un modelo apropiado para estudios de metabolismo lipídico hepático. No obstante, presentan características diferenciales, con respecto a hepatocitos normales, para metabolizar el alcohol. Así, hemos demostrado que estas células ADH-negativas oxidan activamente el etanol a través de la vía microsomal dependiente del citocromo P450, principalmente por isoformas no inducibles por el alcohol. Las células HepG2, por tanto, muestran resistencia a la acción tóxica y estimulación lipogénica causada por etanol en hepatocitos normales. Se observan, no obstante, determinadas acciones a nivel metabólico, concretamente, una inhibición específica de la síntesis de novo de fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina, así como un incremento en la secreción de triacilglicerol recién sintetizado al medio extracelular. Empleando también las células HepG2 como modelo experimental, se ha llevado a cabo el estudio de la acción ejercida por el compuesto antitumoral hexadecilfosfocolina, perteneciente a una nueva clase de agentes antineoplásicos sintéticos, las alquilfosfocolinas. Este análogo lipídico presenta actividad citostática hacia las células hepatomales HepG2. El tratamiento de hexadecilfosfocolina disminuye la incorporación de diversos precursores lipogénicos exógenos a fosfatidilcolina, ocasionando una reducción en la producción de esfingomielina y un acúmulo de ceramida. Se produce, además, una estimulación de la producción de novo de acilgliceroles y de la síntesis de fosfatidiletanolamina vía CDP-etanolamina como consecuencia de la exposición celular a la alquilfoscolina. Este agente altera la distribución intracelular de la colina-fosfato citidililtransferasa en células HepG2, interfiriendo con la translocación de la forma soluble e inactiva de la enzima a la membrana. Las alteraciones metabólicas causadas por hexadecilfosfolina desencadenan finalmente apoptosis, confirmando el potencial de este análogo fosfolipídico como agente antineoplásico, de modo que la aplicación sistémica de alquilfosfocolina podría ser útil en el tratamiento quimioterapéutico de determinados tumores de procedencia hepática.