PEPTIDOS, 2

Autor: MARTÍN ROMERO CONSUELO.
Año: 2001.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD DE SEVILLA.

Resumen: La leptina se presenta como factor lipostático postulado hace más de 40 años. El peso se mantiene estable durante años gracias a la leptina. Tiene profundos efectos en el apetito y el balance energético, pero además ejerce su influencia sobre el metabolismo y múltiples sistemas endocrinos (incluidos los relacionados con la pubertad, fertilidad y homeostasis de energía) a través de su receptor. Uno de sus efectos es un papel inmunomodulador. Con estos antecedentes se planteó el trabajo de caracterizar esa función de la leptina y profundizar en este campo. Hemos encontrado que la leptina potencia la activación linfocitaria, dirige la respuesta de los linfocitos T colaboradores hacia un fenotipo Th1. Ambas acciones son mediadas por la isoforma larga del receptor de leptina. Hemos descrito que tanto la isoforma larga como la variante corta del receptor se presentan en las células mononucleares y en concreto en los linfocitos. La activación de la isoforma larga del receptor de leptina desencadena una señalización en la que participan varias vías: la activación de JAK-STAT junto con el reclutamiento de Sam68, una proteína de unión al ARN de función desconocida la activación de PI3K y de MAPK. Como sucede con otros receptores de citoquinas el receptor de leptina seinduce en situaciones de activación linfocitaria: hemos encontrado que aumenta su expresión in vitro en respuesta a la activación con lectinas e in vivo en la infección por VIH, donde además el receptor está activado, lo que podría implicar a la leptina en esta situación fisiopatológica. En conclusión, la leptina juega un claro papel inmunorregulador de los linfocitos humanos y esta función puede participar en procesos fisiopatológicos de respuesta inmunológica.

Autor: GARCÍA CARRIL ANA.
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: QUÍMICA .
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: Nuestro objetivo consiste en emular los receptores biológicos y lograr receptores sintéticos que enlacen de forma selectiva ciertas secuencias peptídicas de tamaño considerable en presencia de otros similares. Para ello nos hemos marcado las siguientes metas concretas: * Diseño y síntesis de receptores diméricos. * Síntesis (partición y mezcla) de una biblioteca peptídica con codificado químico. * Estudios de selectividad y afinidad de los receptores diméricos. Se llevó a cabo la síntesis de dos receptores diméricos basados en la unión de dos centros activos a través de un brazo o conector aromático, de forma que cada centro activo reconozca una región del péptido. Para estudiar las propiedades de los receptores sintetizados, se preparó una biblioteca peptídica sobre soporte sólido con el método combinatorio de "Partición y Mezcla" con codificado de Still. Los péptidos poseen dos secuencias tripeptídicas idénticas fijas en los extremos, que se enlazarían a los centros activos. El tramo intermedio consta de una secuencia variable de aminoácidos elaborada combinatorialmente. La síntesis de la biblioteca se llevó a cabo utilizando 23 aminoácidos de las series D y L con las cadenas laterales protegidas y 17 marcadores aromáticos polihalogenados. Se hicieron ensayos de selectividad y afinidad de los receptores con la biblioteca y el receptor que posee un brazo más largo y flexible, resultó ser el más selectivo. Éste reconoce dos secuencias peptídicas (Ac-(D)Asn-(L)Val-Gly-(D)Pro-(D)Val-(D)Asn-(L)Val-Gly-Poliestireno, y Ac-(D)Asn-(L)Val-Gly-(D)Pro-(D)Pro-(L)Lys-(D)Asn-(L)Val-Gly-Poliestireno) con unas constantes de asociación superiores a las que presenta uno solo de los centros activos con un tripéptido. Estos resultados están a favor del reconocimiento del nonapéptido por los dos extremos del receptor. Se han realizado estudios preliminares de modelización molecular y se aprecia un tamaño comparable entre el receptor y el sustrato y una disposición adecuada de los grupos entre los que se pueden formar interacciones intermoleculares, resultados que se corresponden con los datos experimentales.

Autor: CABA NAUDÍ JOSEP M..
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAT DE QUÍMIQUES, UB.

Resumen: En el primer capítulo de esta Tesis se realiza la semisíntesis en solución, a escala de gramos, del depsipéptido cíclico de origen marino alplidina (deshidrodidemnina B), partiendo del depsipéptido cíclico de origen marino didemnina A, obtenido a partir de fuentes naturales. En esta síntesis tiene lugar un acoplamiento entre la diunidad Pir-Pro-OH y la didemnina A (Pir=ácido pirúvico, Pro=prolina). También se realiza un estudio de los estados comformacionales que presenta la aplidina por medio de hplc, RMN y mecánica y dinámica molecular. En el segundo capítulo de esta Tesis se realiza la síntesis del péptido cíclico trunkamida A y de análogos de éste. Los principales puntos de estas síntesis son: - Síntesis de los derivados protegidos de serina y treonina: Fmoc-Ser(DMA)-OH y Fmoc-Thr(DMA)-OH (Fmoc: fluorenilmetoxicarbonil; DMA: dimetilailéter) para incorporarlos a la síntesis de los péptidos lineales. - Síntesis de los péptidos lineales en fase sólida. - Macrociclación de los péptidos lineales en solución. - Formación del heterociclo de tiazolina o oxazolina (dependiendo del análogo). También se realiza un estudio de las estructuras conformacionales que puede adoptar la trunkamida A y un isómero de ésta per medio de RMN y dinámica molecular.

Autor: MUNTASELL CASTELLVÍ AURA.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Autor: OSACARIZ RADA JUAN CARLOS.
Año: 2000.
Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESCUELA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: El objetivo de esta tesis consistió en el aislamiento y la identificacion de bacterias productoras de bacteriocinas a partir de diferentes origenes. En un "screening" inicial realizado mediante siembra en picadura; la cepa Bacillus cereus Bc7 mostro una clara actividad artinucrobiana. La cepa mostraba un amplio espectro de actividad frente a Gran positivos, siendo inactiva frente a gram-negativos. La purificacion hasta termogeneidad, mediante cromatografia en fase reversa (FPLC) reveló que producía dos bacteriocinas diferentes llamadas cereina 7 y cereina 8. El analisis de la secuencia de ADN, obtenido por amplificación mediante PCR revelo que la cereina 8 era una proteina de 56 aminoacidos con una región lidr aminoterminal del tipo doble glicina de 18 a.a. Y que se podía englobar dentro de las bacteriocinas de la clase II.

Autor: EXPÓSITO CASTRO M. ANGELES.
Año: 2000.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Autor: BAILÉN LATORRE MIGUEL ÁNGEL .
Año: 2000.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS. UNIV. DE ALICANTE.

Resumen: En la presente memoria se recoge la preparación de nuevas sales de aminio utilizando como ureas de partida la tetrametilurea (TMU) y la dimetilpropilenurea (DMPU) y como nucleófilos el 1-óxido de 2-mercaptopiridina, el ion fluoruro y la N-hidroxisuccinimida, y siguiendo un procedimiento "one pot". Estas sales de aminio se han usado como reactivos de acoplamiento peptídico par acoplar aminoácidos estéricamente impedidos, tanto en disolución como en fase sólida,obteniéndose rendimientos generalmente buenos. Asimismo, se han utilizado las sales anteriormente preparadas para la obtención de amidas, amidas de Weinreb y O-metil y O-bencil hidroxamatos con redimientos generalmente buenos. Por último, los derivados de N-hidroxisuccinimida se han utilizado para la preparación de ésteres de succinimida derivados de aminoácidos, obteniéndose éstos enantioméricamente puros y con buenos rendimientos.

Autor: FERNANDEZ LOPEZ SARA.
Año: 2000.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICA.

Resumen: Pépticos ciclicos que contienen un número par de aminoácidos de configuración D- y L-alternada pueden adoptar una conformación circular plana y autoensamblarse mediante la formación de puentes de hidrógeno entre distintas subunidades. Este proceso de autoensamblaje da lugar a estructuras supramoleculares con forma tubular. En este trabajo hemos investigado el uso de estos nanotubos peptidicos como una nueva clase de agentes antimicrobianos. La simplicidad de la subunidad fundamental permite la modificación y selección de péptidos con buena actividad antimicrobiana y baja toxicidad frente a células mamiferas. Se han diseñado y sintetizado diferentes octapéptidos y hexapéptidos cíclicos con estructuras anfipáticas para su estudio como péptidos antimicrobianos. Los péptidos ensayados mostraron buenas actividades antimicrobianas in vitro, con concentraciones inhibitorias mínimas (MIC) que son rapidamente letales para las bacterias, limitando la adquisición de resistencias. In vivo, estos péptidos mostraron alta eficacia frente a infecciones letales de Staphylococcus aureus resistente a meticilina(SARM) en ratones, con dosis de protección medias de 8-15 mg/kg.

Autor: VAZQUEZ SENTIS EUGENIO.
Año: 2000.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICA.

Resumen: El proceso de la transcripción genética es fundamental en el control del desarrollo y funcionamiento celular. Se ha demostrado la relación entre desajustes del control transcripcional con enfermedades como el cancer; es por lo tanto de gran importancia la comprensión de las bases moleculares de dicho control. La transcripción genética está regulada por proteinas que se unen al ADN de forma especifica llamadas factores de transcripción. El objetivo del presente trabajo de tesis es el diseño y sintesis de análogos peptídicos del factor de transcripción de levaduras GCN4. Dicho factor de transcripción interacciona con el surco mayor del ADN en forma de dímero. El diseño de las moléculas sintetizadas simplifica el motivo de union al ADN tomando unicamente uno de los monómeros, mimetizando el otro por medio de una molécula pequeña capaz de unirse al surco menor del ADN. Se llevó a cabo la síntesis y evaluación de la capacidad de unión de diversas moléculas formadas por la unión covalente de la región de reconocimiento del GCN4 con análogos de la Distamicina, cuya unión al surco menor del ADN ha sido ampliamente documentada. Las pruebas llevadas a cabo mediante tecnicas de Dicroísmo circular y Desplazamiento en Gel de Poliacrilamida demostraron la capacidad de unión al ADN de uno de los análogos sintetizados, con una constante de afinidad en el rango de concentraciones nano Molar. Dichos experimentos tambien demostraron la importancia de la cadena que conecta la región básica del GCN4 con el tripirrol análogo de la Distamicina para permitir la unión al ADN de forma especifica.

Autor: MONTILLA DE LA TORRE MANUEL.
Año: 2000.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El VIP es un pétpido constituido por 28 aminóacidos cuyo peso molecular es de 3.326 dalton. Fue aislado en 1970 por Said y Mutt a partir del intestino delgado porcino. Se ha encontrado VIP inmunorreactivo en casi todo el organismo, con un amplio espectro de acciones biológicas, llegándose a considerar como un neuropéptido con funciones neurotrasmisoras y neuromoduladoras (Goyal et al, 1980). Caracterizándose receptores para VIP en numerosas zonas del SNC (Staun-Olsen et. Al., 1982). Varios estudios han identificado receptores específicos de alta afinidad en diversas células del sistema inmune (Guerrero et al., 1981; Viik et al., 1985; Calvo et al., 1986a; Segura et al., 1991). Dichos receptores han sido caracterizados funcionalmente usando 125 I-VIP como radioligando en experimentos de unión y molecularmente mediante experimentos de "cross-linking" covalente. Se ha evidenciado que la acción del VIP esta mediada por la activación de la adenilato cilasa, produciéndose un incremento de los niveles intracelulares de AMPc (Guerrero et al., 1981; Ottaway et al., 1983; Calvo et al., 1986 a; Segura et al., 1992 a; Sakakibara et al., 1994). Diversos trabajos en ratones han demostrado que el VIP modula diferentes funciones de células del sistema inmune de este animal (Ottaway y Greemberg, 1984; Stanisz et al., 1986);Ottaway et al., 1987), así como demuestran la existencia de receptores para VIP en diversas células inmunes del ratón (Ottaway y Greeberg, 1984; Blum et al., 1992). Por otra parte, han sido descritos diferentes anatagonistas para VIP, y se han realizado estudios para demostrar este efecto antagonista en diferentes áorganos de diversos animales (Pando et al,m 1986; Blanck et al., 1990; Espat et al., 1995). En el presente trabajo se han caracterizado por primera vez receptores para VIP en macrófagos peritoneales de ratón. Demostrándose, que estos receptores están acoplados a la denilato ciclasa. Además, se ha determinado su crrespondiente peso molecular, y se ha demostrado también como los péptidos (4-C1-D-Phe6-Leu17) VIP y (Ac-Tyr1, D-Phe2) GRF-(1-29)-NH2 se comportan como antagonistas de tipo competitivo y específicos del sistema receptor-efector del VIP en macrófagos peritoneales de ratón.

Autor: VILLANUEVA CARDUS JOSE.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: La primera parte de la tesis consiste en dos trabajos de ingeniería de proteínas utilizando como proteína modelo el inhibidor de carboxipeptidasa de patata (PCI). En el primero de los trabajos se ha llevado a cabo el clonaje y la caracterización del cDNA que codifica para el PCI. En primer lugar se determinó cual es la secuencia de DAN de la región codificante para el gen del PCI. Además se ha estudiado al inducción de la expresión génica de este gen en la planta de patata, determinando también su localización subcelular.También se ha sugerido una posible función del pro-péptido carboxiterminal como una señal de direccionamiento vacuolar. Por otra parte se han realizado estudios funcionales y estructurales preliminares del PCI con el propéptido N-terminal. En el segundo trabajo se ha construído una nueva variante del PCI, el retroCI, en el que se han mantenido los espacios entre cisteinas pero no la secuenica entre ellas (el denomiando efecto contexto) para estudiar si el espacio entre cisteína pero no la secuencia entre ellas (el denominado efecto contexto) para estudiar si el espacio entre cisteínas es capaz de gobernar la formación específica de los puentes disulfuro. Además la variante construída tiene la particularidad de ser una retroproteína, es decir, una proteína en que la dirección del esqueleto proteico se ha invertido. Se ha construído, expresado, purificado y caracterizado. En la segunda parte de la tesis se han desarrollado dos nuevas técnicas de espectrometría de masas para péptidos y proteínas. La primera de estas técnicas es una aplicación de la espectrometría de masas MALDI-TOF a la monitorización de la expresión y la pruficación de proteínas recombinates. Esta técnica esta basada en uan resina de fase reversa para desalar y concentrar protéinas antes de ser analizadas por espectrometría de masas. Esta técnica ha sido de gran utilidad a la hora de analizar, por espectrometría de masa, muestras que contenián altas concentraciones de sales, caotropos o detergentes, o muestras que venían de cultivos bacterianos que expresaban proteínas recombianntes. La segunda aplicación es el desarrollo de una metodología para monitorizar el intercambio H/D en proteínas enteras. En este trabajo se ha deteminado el núcleo de intercambio lento del PCI en diferentes estados de plegamientos y se han comparado,mediante este parámetro, el dominio de activación de la procarboxipeptidasa A2 humana (ADA2h) silvestre versus tres mutantes con diferente estabildiad conformacional.

Autor: CARVALHO GOMES PAULA ALEXANDRA DE.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICA, UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Autor: LÓPEZ MACIÁ ÁNGEL.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: La Kahalalide F es un depsipéptido cíclico aislado del molusco Sacoglossan Elysia rufescens y del alga verde la cual se alimenta, Bryopsis sp., que presenta una elevada actividad antitumoral. En la presente tesis doctoral se ha llevado a cabo la primera síntesis de este producto natural, así como su determinación estructural. Antes de iniciar la síntesis de este péptido natural se realizó un estudio previo con dos objetivos: la síntesis de un depsipéptido cíclico modelo, la kahalalide B, y el desarrollo de una metodología que permitiera obtener dideshidroaminoácidos en una secuencia peptídica en fase sólida. Una vez conseguidos estos objetivos se sintetizó la kahalalide F, se determinó su estructura mediante diferentes técnicas espectroscópicas y se estableció una metodología general para la síntesis del mencionado producto y sus posibles análogos. Finalmente se sintetizaron una serie de análogos de la kahalalide F, uno de los cuales presenta una actividad biológica ligeramente superior a la del producto natural.

Autor: LORENZO GONZALEZ OSCAR.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FAC. MEDICINA.

Resumen: El sistema Renina-Angiotensina (SRA) está compuesto por diferentes péptidos (Angiotensinas) y enzimas degradativas implicados en la patogenia del daño tisular. Se ha observado que además del SRA circulante, existe uno a nivel local (riñon, vaso, corazon) cuyos niveles se encuentran elevados en estas situaciones. En estas patologias se ha encontrado activación de factores de trascripcion, como NF-kBy AP-1, que regule la expresión de genes implicados en estos procesos. Ene ste trabajo hemos estudiado la hipótesis de que la Angll pueda comportarse como una verdadera citoquina proinflamatoria y profibrogenica. La infusión sistemica de Angll en ratas normales aumentó de forma significativa la actividad renal y vascular de NF-kB y AP-1, la presión sanguinea, el daño tubular y el infiltrado inflamatorio. Además, las celulas infiltrantes presentaron NF-kB activado, lo que sugiere la participacion de la Angll en la activación de las celulas inflamatorias. En riñón y aorta, la Angll aumento la produccion de mediadores implicados en el daño tisular, cmo TNF-a,CTGF y PTHrP. Cuando los animales se trataron con antagonistas de los receptores de angiotensina AT1 o AT2, se observaron respuestas diferentes. El antagonista AT1 normalizo la presion arterial, disminuyó la actividad de NF-kB en celulas glomerulares y tubulares, y disminuyo la actividad AP-1 en celulas renales, el daño tubular, la fibrosis y la producción renal de CTGF y PTHrP. El antagonista AT2 disminuyó significativamente el infiltrado infiltrado inflamatorio y la actividad de NF-kB en celulas glomerulares e inflamatorias. Por otro lado, en celulas epiteliales tubulares en cultivo, la Angll aumentó la actividad de NF-kB solo via AT1, mientras que en celulas mesangiales, mononucleares y del musculo liso vascular, ambos receptores participaron en este proceso. En cultivos de celulas epiteliales tubulares, la Angll activo el factor AP-1 a través del receptor AT1. En celulas mesangiales y vasculares obtenidas de ratones deficientes del gen del receptor AT1, la Angll tambien activo NF-kB. AT1 y AT2 comparten señales intracelulares (radicales del oxigeno), sin embargo las tirosina quinasas solo participan en la ruta AT1/NF-kB, y las ceramidas en la del AT2/NF-kB. Debido a que en situaciones de daño tisular en los organos diana de la hipertension se ha observado una elevacion de los niveles de Angll y de enzimas degradativas, estudiamos si otros productos de degradación del SRA estan implicados en estos procesos a través de la activacion de NF-kB. AT1 y AT2 comparten señales intracelulares (radicales de oxigeno), sin embargo las tirosina quinasas solo participan en la ruta AT1/NF-KB, y las ceramidas en la del AT2/NF-kB. Debido a que en estas situaciones de daño tisular en los organos diana de la hipertension se ha observado una elevacion de los niveles de Angll y de enzimas degradativas, estudiamos si otros productos de degradación del SRA están implicados en estos procesos a través de la activación de NF-kB. Las Angiotensinas III, IV y (1-7) activaron NF-kB con una respuesta similar a la Angll. Además, examinamos la implicación de la Anglll en el daño renal y sus mecanismos intracelulares. Mediante experimentos en ratones deficientes del receptor AT1, y estudios farmacologicos con antagonistas de los receptores AT1 y AT2, observamos que en celulas mesangiales la Anglll estimulo la activación de NF-kB ( y degradación de IkBa) principalemnte a traves del AT2. Además, observamos que la Anglll esta implicada en el desarrollo de la inflamación y fibrosis, ya que regula la expresión de Angiotensinógeno, c-fos, TGF-B y fibronectina, de modo similar a la Anglll, y estimula la síntesis de quimioquinas como el MCP-1, con actividad quimiotactica para monocitos. En conclusión, estos datos indican la compleja participación del SRA en la patogenia del daño renal y vascular y dan una nueva visión de otros péptidos de este sistema en estos procesos.

Autor: YAGÜE GALLARDO JESUS.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MADRID.

Resumen: Se determinó la especificidad peptídica de tres subtipos de HLA-B39: B3905 y B3909 (Amerindios) y B3910 (africano). La especificidad de HLA-B3905 se aproxima a la de B1509 y B3801, ausentes en Amerindios. La especificidad de B3909 se aproxima a la de HLA-B27, ausente en Sudamerindios. Sin embargo, la especificidad de B3910 es totalmente distinta a B3901 y se aproxima a la de HLA-B53, asociado a protección contra malaria. Los datos sugieren que la evolución de HLA-B39 está dirigida por antígeno. Se identificó un ligando N(alfa)-acetilado en el repertorio natural de HLA-B39 indicando que las moléculas de clase I clásicas pueden unir in vivo péptidos con el grupo NH2-terminal bloqueado, aspecto previamente descartado por consideraciones de estabilidad y estructurales. B3910 une naturalmente un dodecámero abundante con NG, NG-dimetil-Arginina en posición 6, posiblemente accesible para el reconocimiento por CTLs. Se destaca la relevancia de la espectrometría de masas de trampa iónica cuadrupolar en el análisis de repertorios peptídicos de MHC y en la caracterización de modificaciones post traduccionales y proteómica.

Autor: GARCIA ALONSO ANGEL.
Año: 1999.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICA.

Resumen: Los secretagogos de la hormona de crecimiento GHS son un conjunto de moléculas sintéticas de naturaleza peptídica y no peptídica. La clonación del recptor para estos liberadores no clásicos de GH (hormona de crecimiento) conjuntamente con la más reciente caracterizaciónde su ligando endógeno, llamado Ghrelin, ha supuesto de forma enequívoca la demostración de la existencia de un nuevo sistema fisiológico que regula la secreción de GH. La expresión del gen de GH depende de un factor de transcripciónespcífico de la hipófisis, llamado Pit-1, El objetivo de este trabajo es determinar si el hexapéptido sintético GHRP-6, un referente en el mundo de los GHS, así como el ligando endógeno Ghrelin regulan la expresiónd el gen d ePit-1,Dado que el efecto de estos compuestos sobre la secreción de GH parece ser más prominente en ratas neonatas, se ensayaron los efectos de GHRP-6 sobre la expresión del gen Pit-1 en cultivos monocapa de células adenohipofisarias (AH) de ratas macho de 15 días, así como los efectos sobre el promotor de gende Pit-1 mediante el uso de una línea celuar HEK-293-GHS-R que sobreexpresa el receptor de los GHS (GHS-R). Finalmente se compararon los efectos de Ghrelin y GHRP-6 sobre el promotor de Pit-1. Mediante una combiación de northern blot (estudio del mRNA) y western blot (estudio a nivel de protínas) se comprobó que GHRP-6 activa de forma tiempo y dosis-dependiente la expresión del gen de Pit-1 en cultivos de células AH de ratas macho de 15 días. Así mismo se comprobño que este efecto es directo bore el gen de Pit-1, mientras que el efecto (tabmién observado) de GHRP-6 sobre la expresión de los genes de GH y prolactina pudiera ser mediado por el propio Pit-1 Así mismo, mediante RIA (radioinmunoensayo) se vio que GHRP-6 a una dosisi 10-6 M causaba un aumento en la GH secretada por las células al medio de cultivo tras 4h de tratamiento. Mediante experimentos de trasnfección en la línea celular y en cultivos primarios conplásmidos condiferentes fragmentos del promotor de Pit-1 se vio que tanto GHRP-6 como Ghrelin aumentaban la expresión de dichos plásmidos siempre y cuando en los mismo estuvisen presentes los CRE (elementos de respuea al cAMP) existentes en el promotor. Hay que señalar que el efecto ejercido por GHRP-6 yj Ghrelin sobre la expresiónd e dichos plásmidos es similar, indicando el paralelismo en el comportamiento de ambos, lo que es de incuestionable relevancia fisiológica. Finalmente, se ha llevado a cabo un estudio sobre los mecanismo intracelulares de transducción de la señal de GHRP-6, viéndose que están implicadas distinas proteínas quinasa: PKC, PKA y MEK.

Autor: CERDA REVERTER JOSE MIGUEL .
Año: 1999.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: INSITITUTO DE ACUICULTURA TORRE DE LA SAL(C.S.I.C.).

Resumen: Los objetivos del trabajo presentado han sido (1) caracterizar los péptidos de la famia del NPY en la lubina mediante clonación, (2) analizar el patrón de expresión central y (3) evaluar el efecto del NPY sobre la secreción in vivo e in vitro de LH. Los resultados permiten concluir que algunos vertebrados no tetrápodos expresan 3 péptidos de la familia de NPY,y a diferencia de lo propuesto todos ellos se expresan en el cerbro de la lubina. El PNY puede modular la secreción in vivo o in vitro de LH y el proceso es dependiente del estado energético del animal.

Autor: MARTÍN VILA MARTA .
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD CIENCIAS (UNIV. AUTÓNOMA BCN).

Resumen: Se ha realizado la síntesis de y-hidroxiácidos ciclopropánicos enantioméricos obteniéndose buenos rendimientos globales, usando el D-gliceraldehido como precursor quiral. La eficacia y utilidad de las rutas sintéticas se ha conseguido realizando manipulaciones controladas de los grupos funcionales y mediante transformaciones altamente esteroseclectivas, como son las condensaciones de Wittig-Horner y las cilopropananciones. Las estereoquímica syn/anti de los cicloaductos se ha asignado inequívocamente. También se ha realizado la síntesis de b-aminoácidos cilopropánicos y ciclobutánicos, a partir de una inducción de asimetría mediante una hidrólisis quimioenzimática de diestres meso y posterior trasnposición de Curtis.El exceso enantiomérico de los derivados ciclobutáncios fue del 91%, siendo un 63% ee para los ciclopropánicos. Por otro lado, también se ha iniciado la síntesis y estudio de la estructura secundaria de los primeros b-péptidos que contienen anillos ciclobutánciso. Por rayos X se observa una conformación de horquilla (estudio estructural en estado sólido), mostrando un empaquetamiento del crista muy compacto por la formaciónde puentes de hidrógeno intermolecualres, también observado en el estudio estructural en disolución (experimetnos de RMN y dicroismo circular). Se ha realizado con éxito el estudiode la isomerización Z-E de pentenoatos quirales efectuando irradiaciones en continuo en varios solventes y en presencia de diferentes fotosensibilizadores. La relación Z/E en el estado fotoestacionario se ha determinado, mostrando predominio del isómero termodinámicamente más estble. También se han observado las especies transitorias (técnica de fotólisis de destello), siendo la primera vez que tripletes originados por enoatos son detectados. Los cálculos teóricos ha permitido determinar las geometrías y las energías de los estados excitados diastereoméricos.

Autor: BUSTO DURÁN REBECA.
Año: 1999.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El péptido intestinal vasoactivo (VIP) péptido activador de la adenilato ciclasa hipofisaria (PACAP) y la somatostaina son neurotransmisores ampliamente distribuidos en el organismo de mamíferos. Sus acciones biológicas están mediadas por su unión a receptores acoplados a proteínas G (GPCRs) localizados en la membrana plasmática de las células dian. Estos receptores se encuetran acoplados a múltiples sistemas efectores, y entre ellos a través de proteínas G (Gs o Gi) a la adenilil cilasa. Los resultados obtenidos muestran que en el pulmón humano, se expresa el ARNm de los tres tipos de receptores para VIP/PACAP (VPAC1, VPAC2 y PAC1). En el caso del receptor PAC1 se observa la presencia de sus variantes de expresión "null2 e hip o hop. Además estos receptores se expresan con un peso molecular aparente de aproximadamente 70 Kda, siendo funcionales en su acomplamiento a al adenilil ciclasa. Los receptores VPAC1 y VPAC2, se localizan en pulmón humano en células blancas (macroófagos y linfociots) y en células musculares lisas de vasos sanguíneos. Por otro lado, en las muestras estudiadas de cáncer de pulmón humano, se expresan los tres tipos de receptores de VIP/PACAP, estos receptores son funcionales, pero están pobremente acoplados a la adenilil ciclasa. Con objeto de profundizar en el conocimiento de otros GPCRs y de sus mecanismos de transducción de señales, elegimos un tipo celular concreto como es el fibroblasto de pulmón fetal humano. En los fibroblastos de pulmón fetal humanos e expresan las subunidades altas y alba i1-3 de las proteínas G, e , igualmente, los receptores de somatostatina SSTR1-4 pero no el SSTR5. Estos receptores de somatostatina SSTR1-4 están acoplados a la adenilil ciclasa a través de proteínas Gi. Por su parte los receptores beta-adrenérgicos de los fibroblastos de pulmón fetal humano son funcionales y activan esta enzima. Por otro lado, hemos puesto de manifiesto que el Ro 25-1553-I 125, descrito como un agonista selectivo de receptores VPAC2, se une selectivamente a los receptores VPAC acoplados a proteínas Gs, mientras que el VIP-I 125 reconoce dos estados del ereceptor VPAC1, los sitios de unión de alta afinidad (Acopaldos a proteínas Gs) y los de baja afinidad (no acoplados a proteínas Gs). Ambos estados del receptor VPAC1, están implicados en la activación de la adenilil ciclasa en respuesta a los agonistas.

Autor: CONTRERAS DÍAZ MIQUEL ÁNGEL.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUÍMICA.

Resumen: La presente tesis doctoral consta de dos partes bien diferenciadas. En la primera parte se ha llevado a cabo el estudio de las características estructurales que determinan la formación espontánea de trímeros cíclicos con tres puentes disulfuro a partir de la oxidación de un péptido lineal con dos cisteínas. En segundo lugar se ha estudiado la dependencia del proceso de trimerización con diversos cambios en diferentes posiciones de la secuencia. Así, se ha demostrado que la obtención de los trímeros es un proceso vinculado a una discontinuidad estructural localizada en el centro de la secuencia de los péptidos helicoidales precursores, la cual impide la ciclación de los dímeros paralelos lineales en el transcurso de la oxidación. La formación de puentes disulfuro que conforman el trímero y el dímero antiparalelo no introduce distorsiones significativas en la conformación de las cadenas. La trimerización tiene lugar con buenos rendimientos en diversas variantes del péptido original. Esto posibilita la obtención de toda una familia de trímeros. En el análisis estructural de diversos trímeros, se ha observado que los espectros de RMN y fluorescencia no presentan evidencias de un empaquetamento de las cadenas laterales. La segunda parte se inserta en los esfuerzos de muchos laboratorios para sacar provecho de las constantes de acoplamiento dipolares para la determinación de estructuras tridimensionales de proteínas. Los lantánidos, por su carácter paramagnético y sus especiales propiedades de relajación que causan un ensanchamiento de señales muy pequeño,pueden ser una herramienta muy útil para inducir orietnación parcial en proteínas que necesitan calcio para su función. De cara a la demostración experimental de esta idea, el sistema elegido ha sido un mutante del dominio C2A de sinaptotagmina I, el cual ha sido expresado marcado con 15N. Posteriormente se ha asignado por RMN esta proteían tanto en su forma apo- como unida a calcio y a iterbio(III), y se han determinado experimentalmente las constantes de acoplamiento dipolares N-H en todos los casos. Con estos datos se ha podido comprobar la conservación de la estructura tridimensional entre la forma nativa y el mutante, así como la ausencia de cambios con formacionales significativos asociados a la unión del metal. Se ha desarrollado así un método para la inducción de orientación paracial en proteína.