PROTEINAS

Autor: RODRÍGUEZ ARNEDO ADORACION.
Año: 2004.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS UNIVERSIDAD DE ALICANTE.

Resumen: La proteína isocitrato deshidrogenasa es una enzima clave del ciclo de los ácidos tricarboxílicos. Cataliza la descarboxilación oxidativa del isocitrato en a-cetoglutarato en presencia de NAD(P)+ y liberando CO2 en el proceso. En el organismo halófilo Haloferax volcanii, esta enzima es dimérica, dependiente de NADP+ y de la presencia de Mg2+ como catión divalente, siendo estable en un amplio rango de concentraciones salinas. En la actualidad existen muchas isocitrato deshidrogenasas secuenciadas pero muy pocas estructuras tridimensionales de esta enzima resueltas; en concreto sólo dos, las de los organismos Escherichia coli y Bacillus subtilis, pero ninguno de ellos presenta comportamiento extremófilo. A pesar de ello, las isocitrato deshidrogenasas diméricas presentan un elevado grado de identidad de secuencia, lo que permite trabajar con estas dos enzimas como modelos. En particular, en la enzima de E. coli, se han realizado estudios de regulación por fosforilación, de mutagénesis para producir el cambio en la especificidad del coenzima a NAD y para identificar los aminoácidos implicados en la unión del sustrato, así como ensayos cristalográficos con la consecuente resolución de la estructura tridimensional. En este trabajo, se han realizado estudios filogenéticos, bioquímicos y físico-químicos como fluorescencia, dicroísmo circular y ultracentrifugación diferencial, así como ensayos de mutagénesis dirigida para producir el cambio de especificidad de la enzima por el coenzima a NAD; además, se ha realizado el modelado teórico de la enzima, tanto en su forma nativa como mutante. Para realizar la gran mayoría de estos estudios es necesario obtener gran cantidad de isocitrato deshidrogenasa que, por cultivo del organismo de procedencia, Hfx. volcanii, sería muy complicado de conseguir y requeriría mucho tiempo y esfuerzo. Para ello se ha clonado y expresado la enzima de forma heteróloga en E. coli, se ha renaturalizadodo a partir de los cuerpos de inclusión y se ha purificado hasta homogeneidad, obteniendo la cantidad necesaria para poder realizar cada uno de los ensayos.

Autor: VILLACÉ LOZANO PATRICIA.
Año: 2004.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA (CSIC).
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA (CSIC).

Resumen: LA PROTEÍNA HUMANA STAUFEN FORMA COMPLEJOS DE ELEVADO TAMAÑO (10MDa) QUE CONTIENEN RNAs Y PROTEÍNAS. LOS RNAs ASOCIADOS A LOS COMPLEJOS DE STAUFEN SON DE DIVERSA NATURALEZA Y SU UNIÓN AL COMPLEJO PUEDE DEPENDER DEL dsRBD3 DE STAUFEN. EL ESTUDIO DE LAS PROTEÍNAS ASOCIADAS A LOS COMPLEJOS DE STAUFEN HUMANOS INDICA SU POSIBLE IMPLICACIÓN EN EL TRANSPORTE Y TRADUCCIÓN LOCALIZAD DE RNAs MENSAJEROS.

Autor: Gómez Ramos Alberto.
Año: 2004.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Centro de Biología Molecular.

Resumen: Tau es una proteína asociada a microtúbulos que en condiciones normales cumple funciones de estabilización de los mismos. En condiciones patológicas se autoagrega en forma hiperfosforilada formando estructuras filamentosas en las enfermedades llamadas tauopatías. En este trabajo se ha abordado el tema de la fosforilación y ensamblaje aberrantes de la proteína tau en cuanto a su relación con los productos del estrés oxidativo 4-HNE y acroleína, descubriendo que la acroleína induce un aumento en la fosforilación de tau que se debe fundamentalmente a la acción de la quinasa activada por estrés p38, el 4-HNE actúa sobre la proteína tau fosforilada induciendo la formación de polimeros similares en cuanto a estructura a los filamentos encontrados en la tauopatía demencia supranuclear progresiva (PSP). Por otro lado se ha realizado un sistema celular basado en las células de insecto Sf9 y su vector infectivo natural, los baculovirus para la formación de filamentos de tau. Se ha demostrado que la presencia de tres de las mutaciones de tau encontradas en la tauopatía FTDP-17 (G272V, P301L y R406W), son suficientes para la formación de filamentos de tau similares a los encontrados en las tauopatías, que con estas tres mutaciones tau se hiperfosforila más que el tau silvestre y que esta fosforilación es debida fundamentalmente a la acción de la quinasa GSK3. La inhibición selectiva de esta quinasa con litio es suficiente para evitar de forma significativa la formación de estos filamentos. Por último, hemos abordado el tema de la regulación de la quinasa GSK3, descubriendo que el producto tungstato sódico, inhibe la fosforilación de tau en aquellos sitios que requieren una fosforilación previa ( "primados"), los cuales tienen una mayor relevancia en cuanto a la interacción de tau con los microtúbulos ya que la fosforilación en estos sitios inhibe mas la interacción entre tau y tubulina que la fosforilación en sitios "no primados"

Autor: IBAÑEZ RODRIGUEZ CRISTINA.
Año: 2004.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: INSTITUTO BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR..
Centro de realización: INSTITUTO BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR.

Resumen: El descubrimiento de la especificidad y eficacia del bloqueo de la unión neuromuscular originado por las toxinas botulínicas ha promovido su uso creciente como fármacos en el tratamiento de patologías caracterizadas por hiperactividad de la unión neuromuscular. Como consecuencia del gran auge que tiene el uso de las toxinas botulínicas en clínica y cosmética, se hace necesario mejorar su estabilidad y actividad, asi como resolver los problemas de antigenicidad, derivados fundamentalmente de la necesidad de repetir la inyección de las toxinas botulínicas para mantener su acción. El descubrimiento de que la fosforilación en tirosinas aumenta la actividad y estabilidad de las toxinas botulínicas, proporciona una estrategia para la modificación racional de las BoNTs con el objeto de mejorar sus propiedades para su uso clínico y cosmético. El objetivo general de este trabajo es conocer el efecto de la fosforilación en la regulación de las toxinas botulínicas, como estrategia para desarrollar nuevas especies de toxinas botulínicas, más activas, más estables y más pequeñas para su uso farmacológico y cosmético. Este estudio se centrará en la cadena ligera (que es donde reside la actividad proteasa dependiente de zinc) de los serotipos A y E. Asimismo, el estudio pretende dotar los dominios catalíticos de las BoNTs de capacidad de translocación a través de la membrana celular. Los experimentos de mutagénesis dirigida han permitido la localización de la única tirosina fosforilada por la quinasa Src, en las dos cadenas ligeras de los serotipos A y E. La modificación covalente de este residuo aumenta notablemente la estabilidad térmica de la actividad del endopeptidasa, sin afectar su eficacia catalítica. Los intentos de emular el efecto de la fosforilación de tirosinas de forma más estable con un mutante constitutivamente fosforilado (Y?E, Y?W), no han tenido el resultado esperado, por lo que habrá que utilizar otras tecnologías, como la evolución dirigida, para lograr este objetivo. La fusión de la cadena ligera de la Toxina Botulínica A con el dominio de transducción de proteínas TAT, produjo una enzima activa y permeable en la célula, según los experimentos de inmunocitoquímica y de corte de SNAP25 citosólico en las células intactas PC12. Por tanto, se ha conseguido obtener una especie de toxina botulínica, activa y con capacidad de entrar en células, mucho más pequeña que la holoenzima. La sustitución de la cadena pesada por el dominio TAT ha provocado una disminución del tamaño de la proteína del 65%. Esta especie podría constituir una nueva generación de toxinas botulínicas para su uso en clínica, la disminución del tamaño probablemente reduzca significativamente la respuesta inmune.

Autor: MEDIALDEA FERNÁNDEZ CONCEPCIÓN.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Estudio del moco cervical humano en muestras autoextraídas por la paciente en su casa y en muestras extraídas por el ginecólogo en la consulta. Con el apoyo de parámetros biofísicos (moco cervical, temperatura basal, ecografía vaginal), se estudian parámetros microscópicos como lo son el calculo de porcentajes de los distintos tipos de cristalización y el estudio de la canalización en moco cervical humano. Como resultado del estudio microscópico se aporta una clasificación morfológca de la canalización simplificada, en cinco grados, para facilitar el diagnóstico de fertilidad en la clínica, y se describen por primera vez algunos elementos importantes para el análisis del grado de fertilidad de las muestras que se han dejado secar tapadas con un cubreobjetos. Asimismo se estudian parámetros bioquímicos, como lo son las proteínas y glucoproteínas que contiene el moco cervical human, con el objetivo de encontrar diferencias en las proteínas y glucoproteínas del moco cervical de las distintas fases del ciclo ovárico. Como resultado de nuestra electroforesis SDS-PAGE de proteínas y después del teñido con reactivo de Schiff se pone de manifiesto, en las muestras extraídas en momento del ciclo con niveles altos de estrógenos, la presencia de una glucoproteína que hemos denominado E, cuyo PM está por encima de 300 KD; Asimismo, en las muestras extraídas en momento del ciclo con influencia progesterónica, se evidencia otra glucoproteína que hemos denominado G, cuyo PM está por encima de 200 KD. En momentos de transición en el predominio hormonal aparecen las dos glucoproteínas teñidas con igual intensidad, o bien no aparece ninguna de las dos. En los geles teñidos con tinción de Coomasie hemos observado la presencia y la evolución a lo largo del ciclo ovárico de cuatro proteínas más significativas, que hemos denominado: proteína A (70 KD), proteína B (60 KD), proteína C (50 KD) y Proteína D (15 KD). La tendencia de aparición a lo largo del ciclo ovárico de las glucoproteínas E y G y de las proteínas A, B, C y D es similar en las muestras obtenidas en la consulta, y en las muestras autoextraídas por la paciente. Aportamos por primera vez evidencias a nivel bioquímico de la existencia de los cuatro tipos de moco cervical descritos (Odeblad 1997), que se producirían en distintas áreas del cervix. Hay que continuar la investigación para identificar las glucoproteínas, tanto el corazón proteico como el segmento glucosilado, y tratar de lograr un test que pueda ser usado por las pacientes en casa para conocer su estado de fertilidad o infertilidad, incluso en situaciones de especial dificultad. La identificación de las glucoproteínas y proteínas del moco cervical podría servir también para el tratamiento de la subfertilidad o esterilidad relacionada con las proteínas o glucoproteínas del hidrogel cervical.

Autor: TABARES CARRERAS GLORIA.
Año: 2003.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GIRONA.

Resumen: En los países desarrollados una de cada cinco personas morirá a causa del cáncer. Las células cancerosas presentan modificaciones en los glicanos presentes en la superficie celular y esta glicosilación anómala podría reflejarse en las glicoproteínas de secreción. Por este motivo se plantea el estudio de la glicosilación de dos proteínas de secreción en situación normal y tumoral: la ribonucleasa pancreática humana (RNasa 1) y el antígeno prostático específico (PSA).La RNasa 1 es una glicoproteína secretada mayoritariamente por el páncreas. A pesar del establecimiento de un método inmunológico más sensible, respecto de los descritos anteriormente, para la detección de los niveles séricos de esta glicoproteína, no se han observado diferencias significativas entre la concentración de RNasa 1 en sueros de pacientes control sanos, afectados de neoplasia pancreática, de pancreatitis o de otras patologías.El estudio de las estructuras glucídicas de la RNasa 1, mediante ensayos inmunológicos, permite observar diferencias importantes en la glicosilación entre la situación normal y tumoral: Los antígenos sialilados sLex y sLea solamente aparecen en la RNasa 1 de medio de cultivo de células de adenocarcinoma pancreático Capan-1 y MDAPanc-3 y el antígeno fucosilado Ley sólo en RNasa 1 de páncreas de donante.Estos resultados se han confirmado después de purificar la RNasa 1 secretada por la línea MDAPanc-3, secuenciar sus estructuras glucídicas y compararlas con las de la RNasa 1 purificada del medio de las células Capan-1 y de páncreas de donante.El PSA es una glicoproteína secretada principalmente por la próstata. Sus niveles séricos se utilizan actualmente como marcador del cáncer de próstata, pero su especificidad no permite diferenciar claramente una situación benigna de una maligna.La purificación y caracterización glucídica del PSA secretado por las células de carcinoma prostático LNCaP muestran diferencias muy claras con la glicosilación que presenta el PSA purificado de plasma seminal.Principalmente, el PSA presente en situación tumoral, purificado del medio de cultivo de células de carcinoma prostático, no contiene ácido siálico, pero presenta niveles más altos de fucosilación que el PSA en situación normal. El PSA purificado de plasma seminal de donante sí presenta ácido siálico. Estos resultados se han obtenido mediante ensayos inmunológicos con detección por lectinas y se han corroborado por secuenciación glucídica. El PSA purificado del suero de un paciente de neoplasia prostática presenta un contenido en ácido siálico muy similar al del PSA de plasma seminal.De acuerdo con las estructuras glucídicas que mejor diferencian el PSA de situación normal y tumoral, se ha llevado a cabo la caracterización glucídica de muestras biológicas que contienen PSA. Se han desarrollado diversos ensayos inmunológicos de detección por lectinas o asociados a actividad sialiltransferasa, con un enriquecimiento previo en PSA por inmunoadsorción indirecta o cromatografía por interacción tiofílica. Los resultados de los diferentes ensayos concluyen que el PSA del suero de pacientes de neoplasia prostática presenta un contenido en ácido siálico similar al del plasma seminal de donante, pero ligeramente menos sialilados, es decir, más cercanos al PSA secretado por las células LNCaP, que no presentan ácido siálico. Estos resultados concuerdan con los determinados sobre muestras de PSA purificado.La separación del PSA por electroforesis bidimensional muestra varias formas de pI ácido en el PSA de plasma seminal, explicadas por la presencia de ácido siálico, y formas de pI más básico que el teórico para el PSA, secretado por las células LNCaP, que corresponde a formas pPSA. En el suero de pacientes de neoplasia prostática se conjugan las formas sialiladas y las formas pPSA. Cosa que concuerda con las observaciones de la glicosilación del PSA por métodos inmunológicos.Conocidos estos resultados, perece que el estudio de la glicosilación anómala de proteínas de secreción podría llegar a aplicarse en el diagnóstico del cáncer.

Autor: CASADO VELA JUAN.
Año: 2003.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: SALA DE JUNTAS DE LA FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: AGROQUÍMICA Y BIOQUÍMICA (FACULTAD DE CIENCIAS).

Resumen: La podredumbre apical (Blossom-end rot) es una fisiopatía que afecta a frutos de tomate y pimiento causando desorganización de tejidos y pardeamiento en zonas apicales de frutos verdes inmaduros. Este trabajo de investigación incluye la puesta a punto de métodos de extracción y purificación de polifenol oxidasa (PPO) de frutos de tomate y mostramos su posible implicación en procesos de necrosis en tomate. Todos los frutos de tomate han sido obtenidos en invernadero utilizando cultivo hidropónico. Las polifenol oxidasas de tomate son una familia de siente isoenzimas. Hemos puesto a punto la retrotranscripción a cDNA, amplificación por PCR y clonaje para la determinación de RNAm presentes en frutos de tomate e identificación de isoenzimas en frutos con ocho a diez días de desarrollo post-antesis mediante secuenciación y digestión con enzimas de restricción. Una aproximación proteómica, incluyendo electroforesis bidimensional (2-DE / 2D-PAGE) y espectrometría de masas (MALDI-TOF y HPLC/MS-MS) al estudio de esta fisiopatía ha permitido identificar la implicación de el ciclo antioxidante ascórbico-glutatión y la inducción de la ruta de las pentosas fosfato para la detoxificación de especies reactivas de oxígeno (ROS). La utilización de detergente Triton X-114 ha resultado muy ventajosa para la extracción y purificación de proteínas parcialmente hidrofóbicas y su visualización mediante electroforesis bidimensional, y ha permitido la identificación de numerosas proteínas mediante MALDI-TOF, entre las que se incluyen: chaperonina 21, OEE II, malato deshidrogenasa, dehidroascorbado reductasa, superóxido dismutasa, glutatión peroxidasa, tiorredoxin peroxidasa, quinona oxidorreductasa, glutatión transferasa, IN2-1, UDP glucosa pirofosforisala, fructokinasa, ribosa isomerasa, triosa fosfato isomerasa, pirofosfatasa inorgánica, DIP-1, dienolactona hidrolasa, treonina deshidratasa, endoquitinasa y proteínas de virus de mosaico de tomate (variedad L).

Autor: COTO REVUELTA XABIER.
Año: 2003.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGIA.

Resumen: Se han estudiado las lipoproteínas del suero humano (LDL, VLDL, y HDL) por espectroscopia de IR viéndose que las diferentes composiciones proteicas y lipídicas dan lugar a diferentes tipos de espectros. También se han estudiado los cambios producidos en LDL por acción de alcoholes de bajo peso molecular (donde se comprueba que se afecta tanto a la parte externa como al núcleo hidrofóbico de la partícula), y por la modificación de pH. Con cambios de menos de una unidad de pH no se observan grandes modificaciones, mientras que a un pH claramente ácido (4,5) si se ven modificaciones en estructura secundaria con una bajada de más de 20ºC en la T de desnaturalización. Por otra parte se ha estudiado la mioglobina de caballo, tanto su estabilidad y desplegamiento térmico como su interacción con estrógenos a diferentes concentraciones y tras su oxidación. Se ha visto que la adición de ligando externo modifica la estabilidad de la proteína. En los anteriores casos también se ha utilizado la novedosa técncia de 2D-IR mediante la cual se han corroborado los diferentes resultados obtenidos por el tratamiento tradicional y se ha podido discernir de manera más clara entre ellos.

Autor: NOGUES GONZALEZ M. ISABEL .
Año: 2003.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En este trabajo se ha tratado de profundizar en el conocimiento e los mecanismos de funcionamiento de la cadena de TE desde el PSI al NADPH en la cianobacteria Anabaena, abordando en primer lugar el proceso de interacción entre FNR y Fd o Fld y entre Fld y PSI, así como la modulación algunas propiedades de los cofactores en el interior de la proteína. Con respecto a la primera parte, los estudios que aquí se exponen indican que aunque la interacción inicial entre la FNR y la Fd o Fld tiene lugar a través de interacciones electrostáticas, su orientación mutua no es la más eficiente para la TE. Son interacciones de tipo hidrofóbico en el entorno más próximo a los centros redox, junto con el efecto entrópico favorable asociado, las que juegan, en último término, un papel crítico en la orientación de dichos centros de forma óptima para la TE. De nuevo se apoya la idea de que la FNR usa el mismo sitio de interacción para Fd y Fld (Martínez-Júlvez et al., 1999), aunque cada uno de los residuos no participa de igual manera en los procesos de formación del complejo y TE entre las dos proteínas. Por otro lado se ha demostrado que el entorno proteico del FMN en la Fld es el que modula las propiedades redox del FMN, así como su unión a la apoproteína y por lo tanto los procesos de TE en los que la Fld interviene. Esta modulación viene dada por el entorno electrónico del FMN, por las interacciones tanto de puente de hidrógeno como hidrofóbicas, entre el FMN y la proteína, y por el cambio conformacional desde la forma oxidada a la semiquinona.

Autor: SALVADOR MONTOLIU NATALIA.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAT DE FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES CITOLOGICAS.

Resumen: Los niveles intracelulares de proteínas se determinan por el balance entre los procesos de sintesis y degradación. La degradación intracelular de proteínas tiene implicaciones fisiológicas y patológicas importantes. Los dos sistemas proteolíticos más importantes en células eucariotas, son los proteasomas y los lisosomas. De entre las vías de degradación lisosomal de proteínas, la vía autofágica mediada por carabinas es un proceso selectivo aún muy desconocido. El primer objetivo de esta tesis consiste en estudiar la conformación de las proteínas citosólicas que atraviesan la membrana del lisosoma para su degradación selectiva. Empleando DHFR, con o sin metotrexato sintetizada in vitro y marcada con 35S, y lisosomas, aislados de hígado de ratas en ayuno prolongado, determinamos que el metotrexato afecta la entrada de DHFR (que sigue una vía de degradación lisosomal mediante autofagia mediada por carabinas) a los lisosomas, pero no su unión a la membrana del lisosoma. El segundo objetivo de esta tesis permitió el estudio de una secuencia similar a KFERQ (secuencia que se postula dirige la degradación selectiva) en la proteína GAPDH (excelente sustrato de la vía autofágica mediada por carabinas), observando que en concreto el aminoácido glutamina de esta secuencia, y por tanto la secuencia completa, no es importante en la señalización de esta proteína para su degradación selectiva, mientras que la conformación de la proteína parace crucial en su degradación. En el tercer objetivo de esta tesis doctoral estudiamos la importancia de la proteína Lamp2 como receptor de la vía autofágica mediada por carabinas, observando que los datos obtenidos en fibroblastos embrionarios de ratones (control, deficientes en Lamp1, deficientes en Lam2, y deficientes en Lamp1 y en Lamp2) no apoyan el papel de esta proteína como receptor de la vía autofágica mediada por carabinas.

Autor: LOPEZ ANDREO M. JOSE.
Año: 2003.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA. UNIVERSIDAD DE MURCIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA. UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: El trabajo de investigación desarrollado en la presente tesis doctoral se ha referido a la proteína quinasa C (PKC), un componente de cascadas de señalización celular que en mamíferos agrupa a 10 isoenzimas clasificadas según su activación en tres clases: PKC clásicas, nuevas y atípicas. En la tesis se ha estudiado el apael de la región reguladora en las PKC clásicas y nuevas. Dentro de la región reguladora de estas isoenzimas se distinguen dos dominios, el C1 que une diacilglicerol (DAG) y ésteres de forbol y el dominio C2 que en las PKC clásicas une fosfolípidos aniónicos en paresencia de calcio, mientras que en las PKC nuevas no se conoce con exactitud el modo en el que actua. Además de los citados lípidos, se sabe que existen otros compuestos lipídicos de gran importancia fisiológica que afectan a la activación de la PKC por interacción con su región reguladora. Sin embargo, no se conoce el lugar exacto de la proteína que mediaría la actuación de estos otros lípidos, ni tampoco el mecanismo implicado. Teniendo en cuenta todo lo anterior, en la presente tesis se ha estudiado el papel que desempeña el dominio C2 en la activación de la isoenzima nueva PKC epsilon, y por otro lado se ha determinado el mecanismo de regulación del ácido araquidónico y del retinoico sobre la isoenzima clásica PKC alfa. Para resolver las cuestiones planteadas acerca de la PKC epsilon se construyeron mutantes de la proteína afectados en el dominio C2 y se realizaron estudios in vivo de localización de la proteína en la membrana e in vitro de actividad quinasa. Los resultados confirmaron la importancia del dominio C2 en la localización en la membrana y la activación de la proteína y además se demostró la necesidad de la presencia en las membranas de ácido fosfatídico y diacilglicerol para permitir los citados procesos en condiciones fisiológicas, permitiendo postular un modelo de activación de la proteína por síntesis de sus activadores. Por otra parte, para resolver las cuestiones planteadas acerca de la regulación de la PKC alfa por el ácido araquidónico, se construyeron mutantes de los dominios C1 y C2 de la proteína, y mediante ensayos de actividad quinasa en diferentes condiciones de composición lipídica, se demostró que el ácido araquidónico activa a la enzima por el sitio de unión a calcio y fosfatidilserina del dominio C2, y que el dominio C1 participa inespecíficamente. Finalmente para resolver las cuestiones planteadas acerca de la actuación del ácido retinoico sobre la isoenzima alfa, se recurrió nuevamente a la realización de ensayos de actividad quinasa con mutantes de los dominios C1 y C2 de la proteína, quedando demostrado que el ácido retinoico actía sobre la proteína mediante los dos sitios funcionales del dominio C2. A través del sitio de unión a calcio y fosfatidilserina activa a la enzima, mientras que ejerce el enfecto contrario (inhibidor de la activación) mediante su interacción con la zona rica en lisinas.

Autor: ESCLAPEZ ESPLIEGO JULIA M..
Año: 2003.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: AGROQUÍMICA Y BIOQUÍMICA.

Resumen: El gen codificante de la glucosa deshidrogenasa (GlcDH) de Haloferax mediterranei, se expresó en E.coli, obteniéndose una elevada concentración de proteína en forma de cuerpos de inclusión. La enzima fue renaturalizada y purificada, siendo idéntica a la obtenida a partir de Hfxmediterranei, lo que permitió su uso en ensayos de cristalización y determinación de su estructura. Ésta se llevó a cabo mediante el método de "hanging drop", obteniéndose la estructura tridimensional a 2.0A mediante difracción de rayos X. Del análisis de esta se dedujo la existencia de un elevado número de residuos ácidos en superficie, con la consiguiente disminución de residuos de lisinas. La generación y estudio de dos formas mutantes generadas mediante mutagénesis dirigida de un residuo implicado en la unión del Zn, la caracterización estructural a excelente resolución y el estudio preliminar de los sustratos en el centro activo permitieron proponer un mecanismo plausible de catalisis. También se realizó un triple mutante con cierto impacto sobre la tolerancia salina de la enzima, -- estudios estructurales todavía están en desarrollo. Las estructuras de la forma no mutada y de uno de los mutantes están depositadas en el Protein Data Bank.

Autor: CANALS BUJ MERITXELL.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: Clásicamente, los receptores acoplados a proteínas G eran considerados como unidades monoméricas, sin embargo, recientemente, un gran número de resultados ha permitido la aceptación del estado dimérico como un estado frecuente para este tipo de proteínas. Los receptores de dopamina y los receptores de adenosina forman parte de esta gran familia de receptores de siete dominios transmembrana. Para estos receptores se ha demostrado una importante segregación y colocalización de sus subtipos A2A (A2AR) y D2 (D2R) a nivel de las neuronas GABAérgicas estriatopalidales de los ganglios basales, la principal estructura del estriado que desarrolla un papel fundamental en el control de la actividad motora. Además, en los últimos años se han acumulado evidencias que sugieren una relación de tipo antagónico entre estos dos subtipos de receptores a distintos niveles. Así, en primer lugar, se ha caracterizado de la interacción funcional y molecular entre los receptores A2A de adenosina y D2 de dopamina. En experimentos de doble inmunocitoquímica se observa una importante colocalización entre A2AR y D2R, tanto en células de neuroblastoma humano SH-SY5Y establemente transfectado con D2R como en cultivos primarios de neuronas de estriado. Además, en ambos tipos de células también se observa que la incubación con los correspondientes agonistas induce la clusterización de los dos receptores efecto que, en el caso de SH-SY5Y va seguido de la cointernalización de estos. Aunque, la interacción molecular A2AR-D2R se ha demostrado por experimentos de coimmunoprecipitación, también se ha estudiado si esta interacción existe en células vivas. Para ello se han puesto a punto las técnicas de FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) y BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer) que se basan en la transferencia de energía entre dos dipolos electromagnéticos que estan a una distancia menor que 100 permitiendo monitorizar interacciones entre proteínas en células vivas. Así, usando ambas técnicas se ha confirmado la interacción A2AR-D2R y se ha observado que el nivel de transferncia de energía no varía por activación de ninguno de los dos receptores. Finalmente, tanto distintas aproximaciones experimentales, como modelos teóricos de interacicón ha puesto de manifiesto las zonas comprendidas entre los dominios transmembrana 5 y 6 (con el tercer bucle intracelular) de D2R y la cola C-terminal de A2AR, como zonas importantes para la formación del heterómero A2AR-D2R. Recientemente, se han descrito fenómenos de homodimerización para un gran número de receptores acoplados a proteínas G. Así, el segundo objetivo de esta tesis se ha centrado en investigar la homdimerización del subtipo A2A de los receptores de adenosina. La dimerización de este receptor se ha demostrado empleando las técnicas FRET y BRET y, además, el empleo de la aproximación de TR-FRET (Time Resovled-FRET) y de experimentos de biotinilización, han permitido comprobar que es el dímero y no el monómero la especie presente en la membrana plasmática hecho que sugiere la forma dimérica como la entidad funcional para este receptor. El patrón de expresión de los receptores de adenosina A1 y A2A durante la segunda parte de las gestación y en el periodo neonatal sugiere que puedan estar involucrados en la diferenciación y migración neuronal. Por esta razón, como último objetivo de esta tesis, se ha centrado en la identificación de los receprotes de adenosina implicados en la regulación de procesos de diferenciación neuronal y los mecanismos celulares implicados en estos efectos. Así, se ha observado que la activación de los receptores A1 y A2A de adenosina induce el crecimiento de neuritas en células de neuroblastoma humano SH-SY5Y, proceso que parece ser un estado inicial de diferenciación de estas células. Mediante el uso de inhibidores de distintas vías de señalización intracelular, se propone que en los procesos de crecimiento de neuritas participan de forma independiente la activación de laPKC y de la vía de las MAPK. En resumen, el conjunto de resultados obtenidos sugiere que la adenosina no solamente actúa como un neuromodular importante sino que también puede ejercer por si misma efectos tróficos que modulen la actividad en el sistema nervioso central.

Autor: VALENCIA SANMIGUEL EVA M..
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: DPTO. BIOLOGÍA ESTRUCTURAL - IBMB - CSIC.

Resumen: Con la realización de esta tesis se ha profundizado en el conocimiento de las ADHs pertenecientes a la superfamília de las MDRs, que contienen ZINC y son dependientes de NADP(H). Concretamente a través de: 1,- La cristalización y determinación de la estructura de ADH8 de R.perezi, que aporta las bases de la especifidad de confactor de este enzima, única en vertebrados y explica su peculiarmente elevada actividad con retinal. 2,- La cristalización y resolución de la estructura de ScAdh6p, primera estructura tridimensional determinada de un enzima CINAMM alcohol deshidrogenasa y de un miembro de la superfamilia de las MDRs den S. Cervisiae.

Autor: BENAVENTE MORENO FERNANDO JULIÁN.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAT DE QUÍMICA.

Resumen: El objetivo final de esta tesis doctoral ha sido el establecimiento de metodologías analíticas para la separación y caracterización de mezclas complejas de péptidos y proteínas de gran interés terapéutico, empleando para ello la Cromatografía de Líquidos (LC) y la Electroforesis Capilar (CE) con detección por Espectrofotometría Ultravioleta (UV) y sus acomplamientos ala Espectrometría de Masas (MS). Este objetivo principal engloba otros más concretos que se detallan a continuación: * Desarrollar modelos que describan el comportamiento cromatográfico y electroforético de sustancias peptídicas presentes en mezclas complejas, con la finalidad de poder predecir, a partir de un reducido número de medidas experimentales, las condiciones para obtener una separación óptima de estos analitos. Se establecen dos tipos de modelos: - Modelos que explican el comportamiento cromatográfico de los analitos en función de la polaridad de la fase móvil. - Modelos que explican el comportamiento cromatográfico y electroforético de los analitos ionizables en función del pH de la fase móvil cromatográfica o del electrolito utilizado para la serpación electroforética, las constantes de disociación de los analitos estudiados y los coeficientes de actividad. * Determinar mediante los modelos anteriores los valores de pKa, en medio acuoso o hidroorgánico, de las sustancias analizadas. * Utilizar la Cromatografía de Líquidos acoplada a la Espectrometría de Masas con Ionización por Electrospray (LC-ESI-MS) para la separación y caracterización de las sustancias presentes en crudos de síntesis de hormonas peptídicas de gran interés terapéutico. Proponer las condiciones de separación óptímas para una posterior purificación por LC a escala preparativa de la hormona peptídica sintetizada y para identificar las impurezas presentes en las mezclas. * Combinar la LC, la LC-ESI-MS y la CE para profundizar en el análisis de crudos de síntedis de hormonas peptídicas de gran interés terapéutico. Utilizar modelos semiempíricos que explican la migración electroforética de las sustancias peptídicas para corroborar asignaciones estructurales. * Aplicar la Electroforesis Capilar acoplada a la Espectrometría de Masas con Ionización por Electrospray (CE-ESI-MS) para separar y caracterizar mezclas complejas de hormonas peptídicas. Optimizar sistemáticamente las variables relacionadas con este tipo de acoplamiento, que afectan a la sensibilidad y a la selectividad de las separaciones. * Desarrollar metodologías analíticas basadas en la Extracción en Fse Sólida acoplada en línea a la Electroforesis Capilar (SPE-CE) para mejorar los límites de detección obtenidos por CE. Optimizar sistemáticamente las variables implicadas en la preconcentración de los analitos. Utilizar la metodología SPE-CE desarrollada para preconcentrar, separar y caracterizar mezclas peptídicas en muestras diluidas, empleando su acoplamiento a la Espectrometría de Masascon Ionización por Electrospray (SPE-CE-ESI-MS). * Separar las glicoformas de la Eritropoyetina Humana Recombinante (rHuEPO) mediante CE, estableciendo una metodología analítica reproducible y potencialmente compatible con el uso CE-ESI-MS. Optimizar las variables que afectan a la reproducibilidad y selectividad de las separaciones. * Caracterizar las glicoformas de la rHuEPO empleando diferentes técnicas de MS.

Autor: SABATÉ LAGUNAS RAIMON.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMÀCIA .
Centro de realización: FACULTAT DE BARCELONA.

Resumen: Los bromuros de alquilamonio, tensioactivos catiónicos, manifiestan una gran capacidad interactiva y asociativa con gran número de sustáncias, entre ellas los colorantes, y las proteínas y péptidos. El estudio de las características fisicoquímicas de monómeros, agregados premicelares y micelas de estos permite poder profundizar en el proceso de micelización y en el estudio de la relación entre las diferencias características micelares y la capacidad y proceso de interacción. La utilización de la microeelectroforesis de efecto Doppler, técnica nunca antes utilizada para determinar variaciones en la carga superficial micelar a diferentes concentraciones de tensioactivo, ha permitido obtener interesante información sobre las propiedades superficiales micelares y el efecto que puede tener la fuerza iónica del medio sobre estas, proporcionando así la posibilidad de determinar características micelares que hata el momento eran de difícil seguimiento; así como también, la detección, seguimiento y estudio de la evolución de los agregados premicelares, de muy difícil detección con la mayoría de técnicas utilziadas clásicamente en el estudio de sistemas micelares. El estudio de la interacción tensioactivo - colroante ha proporcionado información detallada de este tipon de procesos, aportando valores de constantes de unión, fracciones de colorantes unidas a micelas y de la localización del colorante en cada entorno micelar, como también información sobre las propiedades interficiales de las propias micelas. Se ha comprobado de forma detallada el efecto de la cabeza polar y la cola hidrocarbonada de los tensioactivos en este tipo de interacciones, demostrando así la importancia del tipo de micela en la localización de los colorantes en estas. La interacción tensioactivo - proteína o péptido ha posibilitado ir más allá en el estudio de las propiedades interactivas de los tensioactivos. El estudio de la interacción tensioactivo - alfa-amilasa ha permitido comparar el efecto de los monómeros y las micelas de tensioactivo en la interacción tensioactivo - proteína. El seguimiento de este proceso ha permitido observar el efecto agregante de los monómeros de tensioactivo y la acción solubilizante y desagregante de las micelas sobre los agregados anteriormente formados. El efecto del pH del medio, y de la cabeza polar y la cola hidrocarbonada del tensioactivo han sido estudiados en profundidad. Dentro de las interacciones micela - péptido, un ejemplo que puede justificar plenamente este tipo de estudios es el efecto antiagregante de las micelas de bromuro de dodeciltrimetilamoni en el proceso autogregación del péptido beta-amiloide, principal componente de las placas seniles o amiloideas que aparecen en la enfermedad de Alzheimer. Las placas amiloideas, que se forman en los espacios interneuronales, conllevan la destrucción de neuronas y por tanto la reducción de neurotranmisores el equilibrio de los cuales es esencial para el correcto funcionamiento del cerebro. El estudio de la interacción micela - beta-amiloide permite no tan solo poder cuantificar el efecto antiagregante de este tipo de micelas, sino que admeás aporta un sistema simple para poder estudiar el efecto de las zonas apolares (las cadenas gidrocarbonadas) y las zonas polares cargas (la cabeza polar) en el proceso de autoagregación de este péptido.

Autor: PLAZA TRUJILLO GUIDO ARMANDO.
Año: 2003.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESCUELA T.S. DE INGENIEROS AGRÓNOMOS Y MONTES.

Resumen: El efecto de las malas hierbas en la disminución de la producción agrícola esta considerada entre el 30 al 50%. Imazetapier es un herbicida que actúa sobre la enzima ALS, primera enzima común en la ruta biosintética de la valina, leucina e isoleucina. Bidens pilosa y Euphorbia heterophylla son especies comunes en los campos de soja del Brasil y actualmente se reportan diferentes poblaciones resistentes a herbicidas de los grupos sulfonilureas e imidazolinonas. Los objetivos del presente trabajo fueron: determinar el principal mecanismo de resistencia de los diferentes biotipos, establecer el nivel de resistencia para éste herbicida, y evaluar la respuesta de los biotipos a otros herbicidas con similar mecanismo de acción. La respuesta de las plantas tratadas con imazetapir confirmaron las resistencia de los biotipos denominados RI, RII y RIII de Euphorbia heterophylla y del biotipo R de bidens pilosa. Los resultados de los ensayos de invernadero y los ensayos de ALS in vitro de Bidens pilosa sugieren que la resistencia a imazetapir es debida a una alteración en el sitio de acción debida a una mutación. Estos fue confirmado con la amplificación de los dominios C, A, D, B y E de las ALS. Algunas de estas sustituciones fueron encontradas por fuera de los dominios conservados donde las mutaciones pueden conferir resistencias al herbicida, o están localizadas en regiones no conservadas del gene. Esto sugiere que estas sustituciones no son responsables de la resistencia observada. Sin embargo, la sustitución de M18 por T localizada en el dominio D fue encontrada en las plantas resistentes. Los resultados de la actividad de las ALS de las plantas de Euphorbia heterophylla demostraron que la resistencia de los biotipos RI y RIII esta asociada con cambios en la enzima. El principal mecanismo de resistencia del biotipo RII es debido a la menor absorción del imazetapir. Los resultados de los análisis de ceras no muestran diferencias en la composición cuticular entre los biotipos, sin embargo los estudios de microscopia electrónica muestran diferencias en la morfología y en las cantidades de las ceras. Las aplicaciones de herbicidas inhibidores de la ALS en ensayos de invernader.

Autor: BERNIER VILLAMOR LAURA.
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: ESTACIÓN EXPERIMENTAL DEL ZAIDÍN (CSIC).

Resumen: En los últimos años, y en todos los reinos, se ha descrito un nuevo tipo de enzimas, las Peroxirredoxinas (Prx), capaces de intervenir en los sistemas de destoxificación de las especies de oxígeno reactivo reduciendo el H2O2 y distintos alquilhidroperóxidos. En vegetales superiores una de las enzimas pertenecientes a esta familia, la peroxirredoxina de dos cisteínas (Prx de 2-Cys), se localiza en el cloroplasto donde parece estar involucrada en procesos de gran importancia como la protección de la fotosíntesis, la destoxificación de H2O2 a nivel del ciclo agua-agua, la protección de los tilacoides y también en procesos de señalización celular. En el estudio presentado en esta Tesis Doctoral se ha aislado el cDNA que codifica la Prx de 2-Cys de Pisum sativum mediante PCR. El cDNA aislado codifica una enzima con gran similitud a Prx de 2-Cys descritas en otros organismos presentando las dos cisteínas características de este tipo de enzimas así como los motivos peptídicos conservados alrededor de ellas, igualmente presenta otros aminoácidos esenciales para la actividad de estas enzimas. Se ha sobreexpresado la proteían recombinante en E.coli utilizando el sistema de expresión pET. La proteína recombinante se purificó y se llevó a cabo una caracterización cinética exhaustiva, así como la determinación de ciertas características físico-químicas. Se determinó que la enzima prsenta dos conformaciones distintas, dimérica y decamérica, favoreciéndose esta segunda por la fuerza iónica del medio, el estado redox de la enzima, el pH bajo y el anión fosfato. Se ha demostrado la actividad antioxidante de la enzima presentando propiedades comparables a las descritas para otras enzimas similares y se ha visto que se reduce por Tiorredoxina (Trx) y ciclofilina. Mediante inmunocitoquímica se ha confirmado la localización cloroplastídica de la Prx de 2-Cys de P.sativum, dentro del cloroplasto la enzima se localiza fundamentalmente en el estroma, asociándose parcialmente a membranas tilacoidales. Se han establecido además condiciones para el crecimiento de cristales de la Prx de 2-Cys de P.sativum recombinante, lo que supone un punto de partida para la resolución de la estructura tridimensional de la enzima. Por otra parte se ha estudiado la Prx de 2-Cys de forma comparativa con una Prx de tipo II citosólica de P.sativum. Para ello se ha aislado el cDNA que codifica esta segunda enzima y se ha sobreexpresado y purificado la proteína recombinante. Se ha desmotrado la actividad antioxidante de esta segunda Prx siendo más eficiente en la reducción de hidroperóxidos que la Prx de 2-Cys. Por último se han llevado a cabo estudios de regulación de la expresión bajo estrés oxidativo de ambas proteínas. La expresión de la Prx de 2-Cys muestra una regulación positiva en condiciones oxidantes, pero es mayor el efecto negativo que se produce en condiciones reductoras. Sin embargo la Prx de tipo II citosólica se regula positivamente en condiciones oxidantes por TBHP, pero no por otro tipo de oxidantes, sufriendo en condiciones reductoras una regulación similar.

Autor: CÓRDOVA PAZ SOLDÁN OFELIA MAGDALENA.
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la Enfermedad de Chagas, es un protozoo que como la mayor parte de los protozoos parásitos, se caracteriza por una poseer una estrecha dependencia metabólica del hospedador. La imposibilidad de sintetizar sus propios ácidos grasos tanto para su metabolismo energético, como para la síntesis de nuevas membranas, supone la necesidad de captar dichos ácidos grasos bien por un proceso de difusión a través de las membranas o mediante la presencia de transportadores específicos de este proceso, como las proteínas capaces de ligar los ácidos grasos fatty acid binding protein "FABP" , descritas en otros organismos. La existencia de proteínas capaces de ligar ácidos grasos ha sido descrita en helmitos parásitos como Schistosoma mansoni "Sm14-FABP", Schistosoma japonicum, Fasciola hepatica "Fh15-FABP", Fasciola gigantica "Fg-FABP", Echinococcus granulosus, Moniezia expansa, Ascaris suum As-p18, Bbrujia malayi "Bm-FAB-1", en algunos protozoos parásitos incluso más primitivos evolutivamente hablando como Giardia y Leishmania. Empleando técnicas cromatográficas se logró purificar estas proteínas capaces de ligar ácidos grasos de T.cruzi, mostrando ser una proteína oligomerica de aproximadamente de 60 kDa en su estado nativo, que mediante técnicas electroforéticas en SDS-PAGE, da monomeros entre 45 a 10 kDa, sendo la de 10 kDa la de mayor interés, por su propiedad de ligar ácidos grasos. Los estudios de isoelectroenfoque de esta proteína, revela que posee un punto isoeléctrico (pI) de 3,39, similar al observado en protoxxos patógenos como Giardia y Leishmania, indicando un carácter ácido de esta proteína. La determinación de la característica de equilibrio de la proteína purificada de T.cruzi al ácido oleico marcado radiactivamente 14C y los resultados sometidos a análisis de Scatchard, muestran un sitio con alta selectividad (Kd de 1.15 uM+-0.19) y un sitio de unión de 0.13. Una baja estequimoetría de p=0.13, que podría deberse a a los efectos de agre gación que afectaría la unión a los ácidos grasos, observada previamente en H-FABP de porcino. En la espacificidad de asociarse a diferentes ligados, revelan su capacidad de unir ácidos grasos saturados e insaturados, compuestos hidrofóbicos como el colesterol, androsterona, alfa tocoferol y nifurtimox. La observación de la interacción de la proteína con el nifurtimox (molécula de elección para el tratamiento de la Enfermedad de Chagas, hace posible la participación de esta FABP en T.cruzi, en la respuesta del parásito a este fármaco, no cmo molécula diana pero si como transportadora, capaz de llevar al fármaco hasta la mitocondria donde ejercería su acción. El cambio conformaiconal al que se somete la proteína tras la unión al ligando proprociona un mecanismo que asegura el suministro de los ácidos grasos al núcleo, mitocondria o microsomas permitiendo a la proteína difundirse en los núcleos debido a su bajo peso molecular, confirmado mediante estudios de inmunocitoquímica, su presencia a estos niveles. El estudio de las proteínas capaces de ligar ácidos grasos FABP, como ya se ha descrito anteriormente no solo incluye su papel Bioquímico y Fisiológico en el transprote y metabolización de los ácidos grasos, sino también el que dichas proteínas puedan ser utilizadas como proteínas antigénicas, debido a su exposición al ambiente extracelular, ser muy conservadas estructuralmente y el poseer diferentes secuencias dependiendo de las especie donde se las aisló. En este sentido, la inoculación de la fracción purificada de T.cruxi en ratones balb/c, fue capaz de inducir la producción de anticuerpos y por ende una elevada respuesta humoral. Así como, su posible papel inmunogénico, tras ser evaluado los niveles de anticuerpos y de inducción de citoquinas tras una inmunización con dichos antígenos. De nuestros resultados se desprende que mediante estudios Inmunológicos, como el Inmunoblot, las FABP de T.cruzi presenta una actividad antigénica, semejante a las encontradas en otro sprotoxxos y helmintos, detectándose el reconocimiento de la banda de 10 kDa (antígeno) por las inmunoglobulinas de los sueros de pacientes con Enfermedad de Chagas y Lishmaniosis, debido a la existencia de epítopes comunes reconocidos por los sueros de los individuos de Leishmania. La posibilidad de obtener protección contra T.cruzi ha constituido uno de los principales anhelos de muchos investigadores. Sin embargo, las características de la enfermedad han mostrado, que la obtención de antígenos protectores es difícil. Al estudiar la inducción de interleucinas en linfocitos esplénicos, procedentes de los ratones previamente inmunizados, tras enfrentarlos "in vitro" con formas epimastigotes, de T.cruzi, se observó en el medio de cultivo, un incremento en los niveles tanto de IFNgamma e IL-4, sugiriendo una activación de las células T CD4+ y CD8+, resultados similares a los observados en macrófagos "in vivo" durante una infección por T.cruzi. En relación a nuestros resultados, se puede sugerir que la FABP desempeña o protagoniza un papel muy importante en la mediación de la respuesta inmune, dependiente de una interacción entre la respuesta inmune parcialmente protectora y la respuesta que incrementa los síntomas de la enfermedad. La determinación de los niveles de INFgamma y de IL-4 muestra que los niveles son mayores en ratones inmunizados e infectados con respecto a ratones infectados. Así las Tc-FABP, inducen una respuesta inmune tipo Th 1/Th 2 semejante a lo que ocurre en la infección con T.cruzi, sugiriendo esta doble inducción un reonocimiento común de epítopos de la Tc-FABP por las células pertenecientes a los tipos Th1 y Th2. La elevación de los niveles de IgG2 encontrados en los animales inmunizados frente a lo que ocurre en los animales simplemente infectados sugiere en los primeros una activación la respuesta Th1 frente a la Th2. Los datos procedentes tanto de la producción de anticuerpos como los indicadores de una activación de la respuesta inmune celular TH1 sugieren que estas proteínas podrían ser una alternativa importante para investigar la posibilidad de usarlas tanto de antígeno diagnóstico frente a esta parasitosis como potencialmente antígenos de vacunación. En base a la experiencia previa con otras FABP aisladas de parásitos o la utilización de antígenos recombinantes de FABP de S.mansoni (rSm14), donde se consigue una elevadísima protección que ronda una protección total contra F.hepática, sin causar respuesta autoinmune. Nos conlleva a pensar que debemos continuar ensayando nuevos sistemas de inmunización con las Tc-FABP o con los genes o fragmentos de los mismos a fin de poder estudiar una potencial inmunización activa frente a este agente infeccioso productor de una de las enfermedades más dañinas a nivel mundial.

Autor: GALLEGO-NICASIO MORALEDA JESÚS ALFONSO.
Año: 2003.
Universidad: SAN PABLO CEU.
Centro de lectura: F. CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: La modificación oxidativa de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) parece ser un factor patogénico esencial en el desarrollo de enfermedades cardiovasculares. El hecho de que este tipo de lipoproteínas sean captadas activamente por los macrófagos, a partir de sus receptores "scavenger", indica la posibilidad de cambios estructurales en la parte proteica (apo B100) de la LDL. Se han estudiado los cambios conformacionales que se producen en la estructura secundaria de la apo B100 como consecuencia de la oxidación, así como la influencia de la glucosa en la oxidación y estructura de LDL utilizando espectroscopia FT-IR. También se ha estudiado el efecto que el flavonoide crisina, como antioxidante, ejerce sobre lípidos (dimiristoilfosfatidilcolina y dipalmitoilfosfatidilcolina), proteínas (seroalbúmina humana) y lipoproteínas (LDL), para lo que se han utilizado como técnicas instrumentales la espectroscopia de fluorescencia y FT-IR. Los resultados indican que en el proceso de oxidación de LDL se produce un aumento generalizado de la estructura beta, como consecuencia de la pérdida de acodamientos y/o alfa-hélices. Por otro lado, se ha observado que el flavonoide crisina retrasa la oxidación de la LDL y preserva a la apo B100 de los cambios estructurales que en esta proteína se producen durante el proceso oxidativo.