PROTEINAS, 10

Autor: FERNÁNDEZ RUANO MIGUEL LUIS.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Resumen: La proteína SP-A es una lipoproteína oligomérica de carácter multifuncional que se secreta por el epitelio pulmonar al espacio alveolar. La SP-A está implicadaen la respuesta inmune innata o no específica en el pulmón y en el ensamblaje,integridad y actividad tensoactiva del material lipoproteico que cubre la superficie alveolar-surfactante pulmonar-que evita el colapso de los alveolos al reducirse su área durante la espiración. Los objetivos del presente proyecto de investigación fueron 1) el análisis de los mecanismos de interacción de la SP-A con bicapas y monocapas de fosfolípidos del surfactante y 2) el estudio del proceso de autoagregación de esta proteína en distintas condiciones fisiológicas. Los resultados obtenidos aportan nueva información respecto a: la selectividad de unión del la SP-A por determinados fosfolípidos presentes en solución en vesículas unilamelares o en monocapas en la interfase aire-líquido;las fuerzas implicadas en la interacción de SP-A con dipalmitoilfosfatifilcoina(DPPC), fosfolípido mayoritario del surfactante; los requerimientos i)de concentraciónde Ca2+,ii) de fuerza iónica, iii) pH y iv)de determinantes estructurales de la SP-A para que se produzca la agregación de membranas inducida por dicho proteína, proceso que se lleva a cabo durante la ruta exocítica y posterior metabolismo intraalveolar del surfactante. Además, hemos determinado el efecto de la unión de lípidos sobre la estructura secundaria de la SP-A y su susceptibilidad frente a proteasas en las distintas condiciones fisiológicas que la proteína se puede encontrar en su compartimento intracelular y extracelular. Finalmente hemos analizado los distintos mecanismos de autoagregación de la SP-A y sugerimos que la SP-A debe unirse a lípidos, carbohidratos y superficies celulares en el espacio alveolar en una forma agregada, presentándose de una forma multivalente frente a sus distintos ligandos.

Autor: MARTINEZ RUIZ ANTONIO.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DPTO. BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR - FAC. CC. QUIMICAS.

Resumen: La alfa-sarcina es la más conocida de la familia de las ribotoxinas fúngicas, proteínas citotóxicas secretadas por hongos filamentosos, que presentan una exquisita especificidad de sustrato por un solo enlace del ribosoma, a la vez que la capacidad intrínseca de atravesar membranas celulares. Son proteínas que se habrían especializado por evolución a partir de un gen de la familia de las ribonucleasas microbianas extracelulares, menos específicas y no citotóxicas, como la rebonucleasa T1. Se ha estudiado la presencia de ribotoxinas en varios hongos del género Aspergillus y otros relacionados, concluyéndose que la ribotoxinas están más extendidas entre los hongos filamentosos de lo que se creía hasta ahora. También se ha estudiado la relación filogenética entre ellas. Asimismo, se ha encontrado un posible intermedio evolutivo en la hirsutelina. A, al comparar sus estructura primaria. Se han estudiado los mecanismo de produccióny secreciónd e toxinas en Aspergillus, tanto en el propio hongo, A.giganteus, como en la levadura Pichia pastoris, tomando como modelos la alga-sarcina y otra proteína citotóxica, la llamada proteína antifúngica (AFP), que se ha caracterizado en detalle. Se han dilucidado los pasos que se dan en el procesamiento protelítico de los precursores, estudiando más en detalle la eficiencia de la secuencia señal,y la especificidad del corte por la proproteína convetasa homóloga a la kexina (Kex2p). Se ha estudiado el mecanismo catalítico de la alfa-sarcina, estableciéndose que es una ribonucleasa ciclante ácida,y los papeles que ejercen los reiduso catalíticos en la transfosforilación: la His 137 es el ácido general, y el Glu 96 la base general. Asimismo, se han conseguido sistemas de producción recombinante, en Escherichia coli y en P.Pastoris, tanto para la altafa-sarcina como para la ribonucleasa U2. Esta última es la ribonucleasa no citotóxica más parecida a las robotoxinas y servirá de punto de partida para establecer el papel de las zonas añadidas a la sribotoxinas durante la evolución, que le conferirían las actividades especiales que tienen.

Autor: CHICHARRO GONZALO M. CARMEN.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA, UCM.

Resumen: Lesihumania es un protozoo parásito de vertebrados, incluido el hombre, en los que origina cuadros clínicos muy diversos denominados genéricamente lishmaniasis. Este parásito perteneciente a la familia de los tripanosomátidos, presenta dos formas morfológicas bien diferenciadas: el promastigote que se desarrolla en el interior del tubo digestivo del artrópodo vector (flebotomo), y el amstigote, que parasita células del sitema retículo-endotelial del hospedador vertebrado. Los amstigotes del complejo mexicana, presentan en su citoplasma un orgánulo lisosómico denominado megasoma, en el que se localiza la cisteína prteinasa objeto de nuestro estudio. Esta proteína está implicada en la capacidad invasiva y de supervivencia del parásito por lo que consideramos interesante estudiar su papel enla interacción parásito-hospedador. En primer lugar se ha definido la cisteína-proteinasa como una de las posibles dianas nautales del óxido nítrico (NO) y peróxido de oxígeno (H2O2), los principales compuestos leishmanicidas producidos por los macrófagos infectados, ya que ambos compuestos reducen significativamente la actividad proteolítica de este enzima. Por otro lado, se ha establecido que la cisteína-proteinasa mayoritaria de L. Pifanoi altera la capacidad de los macrófagos para actuar como células presentadoras de antígeno. La inhibición de la presentación antigénica es uno de los diferentes mecanismos que ha desarrollado el parásito para evadir el sistema inmune del hospedador y aumentar así su supervivencia dentro del mismo. Finalmente, se han definido los principales epitopos B y T de esta proteinasa en el modelo murino.

Autor: MILLAN PORTILLO OLGA.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: UNIDAD MEDICINA Y CIRUGIA EXPERIMENTAL, HGUGM.

Resumen: En este trabajo se estudianlos efectos de la luz ultravioleta A,B y C y de los sistemas de iamgen por resonancia magnética nuclear campo magnético estático radiofrencuencia y gradientes de campo sobre la línea celular L-132 (derivada de epitelio bronquial fetal humano sano), empleando como control positivo el estímulo de hipertemia. Como biomarcadores de la respuesta al estrés celular se emplea la inmunodetención de las proteínas de choque térmico de 72,73 y 27 kDa y el análisis de las variaciones intracelulares de AMPc y calcio comparativamente en células estimuladas y control. Se sugiere una explicaión, dentro de la respeusta celular al estrés, para la posible variación de los distintos parámetroes estudiados.

Autor: OLMO APARICIO M. TERESA.
Año: 1999.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La Memoria presenta una serie de estudios acerca de los sistemas proteolíticos que afectan a la estabilidad de la histidina descarboxilasa(HDC) de rata, relacionando la implicaciónde los fragmentos amino y carboxilo terminales de la proteína con la depencia por el ATP en la degradación in vitro de la misma. Los estudios de estabilidad se han llevado a cabo en dos sistemas distintos: por otra parte, es un lisado de reticulocitos y, porotra, en un medio reconstituido. Mediante el uso de inhibidores y activadores apropiados se ha demostrado la implicación de dos sistemas proteolíticos celulares diferentes: el proteasoma 26S y las calpaínas. Los estudios de relación estructura/función se continúan con el análisis de la importancia de tres residuos conservados en la actividad enzimática de la HDC. Por último, la Tesis recoge la primera caracterización de los intermediarios de reacción de una HDC dependiente de PLP.

Autor: HERNANDEZ MOLINA MARIA.
Año: 1999.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FISICA.
Centro de realización: FACULTAD DE FISICA.

Resumen: Se presenta un trabajo de investigación dentro del campo del magnetismo molecular en el se ha utilizado la estereoquimica del ion malonato. Se consiguieron vistalizar: 1) seis nuevos malonatos homonocleares de diferentes metales de transición (Cu,Co, Mn y Zn), dos malonatos heteronucleares(Na-Ni y Cu-Mn)buscando nuevas interacciones con carácter ferromagnetico global, 2) cuatro malonatos de tierras raras(Ln,Pr,Ga y Eu) que aportan nuevas geometrias de coordinacion y 3) cinco malonatos de Cu en los que se ha añadido bipiridina como ligando terminal para controlar la intensidad del acoplamiento magnetico. En total se resolvieron correcta º 16 estructuras cristalinas por difracción de rayos x de monocristal y se discuten aquellos aspectos cristaloquímicos que pueden estar relacionados con el comportamiento magnético de cada uno de ellos. La variedad estructural obtenida permite detectar hasta 12 tipos de interacciones diferentes que han sido caracterizados a partir de medidas de susceptibilidad magnética estática e interpretadas teniendo en cuenta diferentes tipos de modelos de canje. La tesis permite el considerar al malonato como un nuevo camino de interacción entre diferentes centros paramagnéticos.

Autor: PASTOR MOMPO M. JOSE.
Año: 1999.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA.

Resumen: Se estudia la talasemia heterozigótica deltabeta en su relación con la aterogénesis. Habiéndose descrito para la beta talasemia alteraciones vasculares y estrés oxidativo, así como alteraciones de la lipemia, que la relacionan con la aterogénesis, se estudia la talasemia heterozigótica deltabeta, forma más leve. Se utiliza la citometría de flujo como forma más específica y sensible que la lipemia, cuya utilidad se valora previamente, para detectar marcadores tempranos de riesgo aterogénico. A-DETERMINACIONES POR CITOMETRÍA DE FLUJO A- Parámetros estructurales y funcionales en leucocitos, expresión espontánea y tras PMA de moléculas de adhesión de la familia de la integrinas beta2, contenido intracelular de lípidos polares y apolares y actividad peroxidativa (ión, superóxido, peróxido de hidrógeno y glutation). B- Parámetros estructurales y funcionales en plaquetas, expresión de maracadores de activación (espontánea e inducida), expresión de superficie procoagulante (espontánea e inducida), cuantificación de plaquetas adheridas a eritrocitos. C- Parámetros estructurales y funcionales en eritrocitos, expresiónde superficie procoagulante (esponatánea e inducida). B-DETERMINACIONES BIOQUIMICAS Colesterol total y fracciones HDL y LDL, triglicéridos y apolipoproteína A1. Ferritina, hierro, transferrina. Nitrato en plasma y orina. SE LLEGA A LAS SIGUIENTES CONCLUSIONES 1- La citometría de flujo es útil como herramienta para valorar la capacidad aterogénica de las células en la talasemia deltabeta heterozigótica. 2- En la talasemia deltabeta heterozigótica los niveles de lípidos séricos están disminuídos, por lo que es dudosa su utilidad a la hora de valorar el riesgo aterogénico. 3- Las plaquetas de los pacientes con talasemia deltabeta heterozigótica tienen incrementada su asociación con los eritrocitos, comparados con un grupo de donantes sanos. Ello pude suponer un riesgo de estado protrombótico 4- Los monocitos de pacientes con talasemia deltabeta heterozigótica, cuando están sometidos a estímulo, presentan mayor capacidad adhesiva. Pese a que no se ha demostrado sobreexpresión de moléculas de adhesión en estado basal, cuando han sido sometrios a estímulo con PMA expresan más integrinas, lo que se traduce en un estado proadherente.

Autor: MARTÍN VILLAMOR PEDRO.
Año: 1999.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Se estudia la composición poretica del fluido intracavitario cerebral NTF en embriones de pollo, demostrando que durante el período expansivo cerebral existe una elevada tasa de proteínas y que su concentración sufre un gran incremento a lo largo de dicho periodo. Se identifican 21 fracciones porteicas por SDS-PAGE y se describe la evolución de cada una de ellas entre los estadios 20 y 28 de Hamburger y Hamilton. Mediante las técnicas del dot-blot y western-blot, se identifica la presencia en este fluido de Proteoglicanos (CSPG y HSPG), Citoquinas (IL-beta, IL-6), y factores de crecimiento (EGF, IGF, FGF2). El bloqueo selectivo mediante la inyección"in ovo" intramesencefálica de anticuerpo monoclonal anti-FGF2 provoca una disminución signficativa del número de células en fase de síntesis de DNA del neuroepitelio, demostrando que el NTF, a través de la presencia en el mismo de determinadas moléculas, es capaz de actuar sobre el comportamiento de las células neuroepiteliales. La demostración de la capacidad secretora del neuroepitelio, del contacto del polo apical de estas células con el fludio intracavitrio y la presencia endicho fluido de sustancias cpaces de modificar el comportamiento de esas células sugieren la posiblidad de que el fluido intracavitrio en fases tempranas del desarrollo cerebral constituya una vía no descrita de comunicación entre las pobalciones neuroblásticas que circunscriben la cavidad cerebral embrionaria.

Autor: MARTINEZ CAAVEIRO JOSÉ MANUEL.
Año: 1999.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Una de las armas más poderosas con que la Naturaleza ha dotado a los seres vivos tanto para su defensa como para la obtención de presas con las que nutrirse consite en la síntesis de péptidos o proteínas capaces de permebilizar la membrna plasmática d ela célula diana, despolarizarla y provocar su merte. A pesar de que el objetivo final de todas estas proteínas consiste enla permebilización de la bicapa lipídica, no existe un mecanismo común para todas ellas.En este trabajo se han utilizado diversas técnicas bio fisicas y bioquímicas para caracterizar el mecanismo mediante el cual el péptido antimicorbiano de plantas a-tionina y la equinatoxina-II producida por la anémona d emar Actinia equina son capaces de permeabilizar membranas celulares y membranas modelo. La a-tionina de trigo es un péptido de 45 aminoácidos que tiene unpeso molecular en torno a 5kDa y presenta un alto contenido en cisteínas y en residuos básicos. El mecanismo que permite a este péptido permeabilizar las membranas consite en recubrir la superficie de las vesículas a modo de "alfombra" hasta que la relación péptido/lípido alcanza un valor que permite desorganizar la arquitectura de la bicapa. La equinatoxina-II es una proteína de 179 aminoácidos, con un peso molecular de 19,8 kDa con actividad citotóxica ya que es capaz de formar poros con un diámetro estimado de 1,1 nm en las membranas celulares. El mecanismo propuesto para la permeabilización de las membranas consta de tres etapas: (1) unión a la superficie de las vesículas gracias a que se comporta como un tensoactivo, (2) formación en la superficie de la vesícula de un oligómero formado por 4 moléculas de proteínas, en un proceso favorecido por una elevada concentración local de toxina y (3) inserción del oligómero y formación de un poro en la superficie de contacto entre diferentes dominios lipídicos, que son los lugares donde el empaquetamiento de los lípidos de la bicapa puede presentar defectos o fisuras.

Autor: MIRÓ MUR FRANCESC.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Los mecanismos de control de la proteína quinasa CK2 son por el momento desconocidos pero su actividad se incrementa en células cancerosas o en células las cuales en respuesta a diferentes estímulos, como por ejemplo en regeneración hepática, entran en un proceso de proliferación como hipótesis para una explicación de la regulación de la actividad al parecer constitutiva de la proteína quinasa, fueron realizados estudios de asociación de esta quinasa conun factor que participa en elinicio de la síntesis proteica, eIF-2. Otra proteína que es sustrato de la CK2 y que interacciona con ella es la proteína supresora de turmores p53 durante la regeneración hepática y hemos evaluado la posible unión entre los niveles de p53 y los de actividad proteína quinasa CK2 utilizando diferentes modelos celulares.Hemos observado la existencia de elementos de respuesta a p53 en la región promotora del gen de CK2a. Hemos estudiado por experimentos de transfección el efecto de p53 silvestre y mutada sobre la actividad CK2. Finalmente hemos comparado los niveles y la distribución de CK2 usando diferentes líneas celulares que expresan o son defectivas en p53. Asimismo, también hemos utilizado el sistema de regeneración hepática para inducir la expresión de CK2 y p53. Con algunos de estos modelos hemos encontrado una correlación entre la expresión de p53 y CK2 que refuerza nuestra teoría de una posible regulación de la CK2 por la proteína p53. No obstante esta posible vía de regulación de la expresión de CK2 no sería la única existente, como podemos concluir después de examinar la expresión y distribución de CK2 y ver que presenta los mismos niveles y la misma localización en células de fibroblasto p53 +/+ i fibroblastos p53-/-.

Autor: GARCIA BASSETS IVAN.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR BARCELONA, CSIC.

Resumen: Las secuencias alternantes del DNA del tipo d(GA.TC)n son secuencias polimorficas de repeticiones homopurina homopirimidina. Este tipo de secuencia es relativamente abundante en genomas de organismos ecucariotas superiores y se localiza en regiones genomicas especialmente relevantes funcionalmente. De entre las formas polimórficas que adoptan in vitro, destacan las formas tricatenarias, y en especial a pH neutro la del tipo purina.purina.pirimidina[GA(GA.TC)] o *H-DNA, que se forma en presencia de ciertos iones de metales de transicion, como el cinc, el manganeso, el cadmio o el cobalto. Curiosamente además, este tipo de secuencias in vivo se localizan en regiones genomicas que son especialmente sensibles al ataque de reactivos y enzimas especificos de formas no-B-DNA. Para determinar la existencia de estos confomeros in vivo, nos hemos centrado en la cadena pirimidinica d(TC)n que es el principal elemento desestabilizador del confórmero *H-DNA. Esta y debido a su alta tendencia a hibridar con la cadena complementaria de purinas d(GA)n ypor consiguiente desmontar la estructura tricatenaria,problamente in vivo sea diana para ser unida por proteinas especificas que la estabilice. A estas proteinas las hemos llamado NOGA. En un extracto nuclear de células Friend de ratón hay cinco actividades principales de union a un oligonucleótido de secuencia d(TC)20. Estas actividades fueron aisladas, caracterizadas e identificadas como NOGA1/hnRNP L, NOGA2/hnRNP K y NOGA3/hnRNP I. Entre las tres tuvieron unas actividades electroforéticamente iguales a las cinco detectadas en el extracto nuclear inicial. De estas tres, la proteina claramente mas desconocida es NOGA1/hnRNP L. Su grado de especificidad por unir secuencias del tipo d(TC)n fue estudiado y demostró su también preferencia de union por secuencias del tipo d(CA)n y d(C)n ademas de por las d(TC)n. Su capacidad para unirse in vivo a secuencias d(GA.TC)n fue analizada mediante el ensayo de Un Hibrido en Saccharomyces cerevisiae, aunque este dio resultado negativo. No obstante, cuando se analizó el efecto de la proteina a nivel de cromatina de las regiones d(GA.TC)n en el mismo ensayo, este fue identico al observado con una proteina de unión a este tipo de secuencias(y que dio positivo en el ensayo) y fue diferente a cualquier otra situación.

Autor: SUTRIAS GRAU MONTSERRAT.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSITAT AUTONOMA DE BARCELONA.

Resumen: La proteína HMG1 pertenece al grupo de proteinas nucleares High Mobility Group. Esta proteína, de 27 kDa, es ubícua y muy abundante en el núcleo. Está compuesta por tres dominios distintos: los dominios A(N-ter) y B(central) son similares y contienen el motivo HMG-box; el dominio C(C-ter), de carácter acídico, esta desestructurado. Se ha sugerido que la función de HMG1 estaría relacionada con la regulacion de la transcripción dirigida por RNA polimerasa II. Se analizó la interacción de la HMG1 con los primeros intermediarios nucleoproteicos del Complejo de Preiniciación(o PIC) sobre un promotor basal. Se observó que la HMG1 interacciona directamente con los complejos TBP-promotor y TFIIB-TBP-promotor en EMSA. HMG1 estabiliza la unión de TBP al DNA e interfiere en la unión de TFIIB en el complejo. TFIIA y HMG1 compiten entre si por interaccionar con TBP. Por esta razón, TFIIA evita la interacción de HMG1 con los complejos TFIIA-TBP-promotor y TFIIA-TFIIB-TBP-promotor. El conjunto de resultados muestran que HMG1 afecta la formación del PIC en un promotor basal: debido a la unión de HMG1 a TBP,TFIIB no se une correctamente en el complejo, impidiéndose por tanto la formacion correcta del PIC. Este efecto podría ser contrarrestado por TFIIA. La interacción HMG1-TBP parecería ser especifica de especie, puesto que HMG1 interacciona con TBP humana(hTBP), pero no con TBP a través de la hélice-a H2´del dominio conservado core. Los residuos Ala319,Asn327 y Gly334 están directamente implicados en la interacción primaria con HMG1,siendo la contribución del residuo Asn327 la más importante. Estos residuos serian los responsables de determinar la especificidad de la interación con HMG1. HMG-box A interacciona con hTFIID en un extracto nuclear crudo de células HeLa, pero no con los complejos SL1 y TFIIIB. Esto sugiere que HMG1 regulará especificamente la transcripción producida por RNS pol II, pero no por RNA pol I o III. A pesar de ser similares en secuencia y estructura, los dominios HMG-box A y HMG-box B son funcionalmente distintos, ya que HMG-box B no interacciona con hTBP/hTFIID. Además, el efecto sobre la transcripción basan in vitro tambien es distinto entre los dos dominios. Mientras que HMG-box A(como proteína de fusión al dominio de unión a DNA, de Gal4) reprime fuertemente la transcripción de un promotor mínimo con lugares de unión de Gal4,HMG-box B muestra un pequeño efecto activador a baja concentración, y un efecto represor al aumentar su concentración en la reacción. Los dos dominios pues, realizarán funciones distintas dentro de la proteina. Se propone que HMG1 es un represor de la transcripción basal, al impedir la formación eficiente del complejo de preiniciación sobre el promotor basal. También podría actuar como cofactor en procesos específicos de activación y represión de la transcripción de la célula.

Autor: LOPEZ HELLIN JUAN.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Todo organismo dispone de mecanismos para hacer frente a las agresiones externas. Las células agredidas presentan una respuesta de shock térmico, con expresión de heat shock proteins, aunque poco se conoce de otras alteraciones de su metabolismo. Los organismos superiores agredidos presentan la respuesta de estrés, caracterizada por una gran perdida de proteinas tras la agresión. La función de la respuesta de estrés es preservar la vida, pero tiene unas consecuencias nocivas, como la perdida de masa y funcion muscular. Frenar la reacción de estrés se considera un objetivo terapéutico. Una de las formas habituales de intentar frenar la perdida de proteinas es mediante la nutrición. Objetivos: estudiar las alteraciones del metabolismo proteico celular y corporal causadas por una agresión, y diferencial las alteraciones causadas por la agresión de las causadas por una nutrición insuficiente. Modelo de agresión celular: linfocitos de donantes sanos agredidos con peróxido de hidrógeno ex vivo, y estudio tras 18 h de incubación. Modelo de agresión corporal:cirugía intestinal programada, con determinaciones previas, inmediatas, y a los 2,4 y 7 dias de la agresión. Resultados: los linfocitos de donantes ancianos son más lábiles ante la agresión. Los linfocitos agredidos de donantes jóvenes no presentan alteraciones en su síntesis proteica ni en AMPc ni GMPc, mientras que los de ancianos disminuyen los significativamente. En el organismo se observan componentes con distintos patrones evolutivos. Se postula que los componentes con máxima alteración inmediatamente tras la agresión, independientes de nutrición y pronta normalización son componentes iniciadores; los que presentan un máximo a los dos día de la agresión y son independientes de la nutrición forman parte de procesos reparadores; los que presentan un máximo el día dos tras la agresión, dependientes de nutrición, que serían parte de los procesos suminsitradores de sustratos a los procesos reparadores. Se comprueba este hecho demostrando la inhibición total de los procesos suministradores de sustratos el dia de la agresión alimentando a los pacientes con una nutrición completa las 24 h previas y las 24 h siguientes a la agresión,mientras que no se alteran los reparadores. Se concluye que la agresión por si misma no causa perdida de proteina de corporal, si no que es la interacción de la agresión con una nutrición insuficiente la causante de dicha perdida. La agresión con nutrición adecuada provoca un aumento de la sintesis de proteinas, con máximo a los 2 dias y progresiva normalización hasta el dia 7. La degradación de proteinas sigue el mismo perfil pero con valores inferiores, lo que implica sintesis neta de proteinas positiva. El uso de proteinas de vida media corta como la proteina transportadora de retinol o la transtiretina(prealbúmina) para evaluar la eficacia de la nutrición no es aconsejable, ya que su concentracion en plasma se ve más afectada para la agresión que por la nutrición. Un indicador de eficacia nutricional adecuado en condiciones de estrés es IGF-I, sensible a la nutrición pero no a la agresión. La influencia de la edad es escasa en la respuesta corporal a la agresión, pero es muy importante en la respuesta celular a la misma.

Autor: SANZ MONTE CAROLINA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BARCELONA.

Resumen: Halobacterium salinarum sintetiza la proteína bacteriorrodopsina, que forma la llamada membrana púrpura, cuando la concentración de oxígeno en el medio es insuficiente para el funcionamiento de la cadena respiratoria. La bacteriorrodopsina posee una molécula de retinal unida, la cual absorbe energía lumínica e inicia un fotociclo que da como resultado el transporte de protones desde el medio citoplasmático al medio externo. El gradiente de protones creado es utilizado por la ATPasa para la síntesis de ATP. El objetivo del trabajo ha sido profundizar en el conocimiento del proceso de expulsión del protón al medio externo, así como en la localización de los cationes divalentes que están fijados a la membrana purpura, los cuales son necesarios para un transporte correcta y eficaz. Para el estudio se construyeron los mutantes extracelulares E9Q,E74Q, E194Q, E204Q, E9Q+E74Q+E194Q+E204Q (4GLU) y los citoplasmáticos D36N+D38N y D102N+D104N. Las titraciones de los mutantes en medio ácido nos indican que el pka del aspártico 85, contraión de la base de Schiff, está aumentado en D102N+D104N, E194Q, E204Q y 4GLU en agua. Las diferencias con los resultados encontrados en 150 mM KC1 sugieren que estos grupos están involucrados en la unión de cationes. Por otro lado, el mutante 4GLU presenta un equilibrio entre dos formas, forma roja y forma púrpura, ya que las mutaciones han producido un cambio en el entorno del aspático 85, el cual puede ser restaurado por la adición de cantidades elevadas de ión cloruro. Los estudios de DSC, asi como la reacción de la hidroxilamina indican que las mutaciones de los glutámicos 194 y 204 provocan una descompactación de las hélices, una menor estabilidad de la proteina, y un mayor acceso de la base de Schiff al medio. Funcionalmente, el mutante E194Q y 4GLU parecen tener una producción de intermediario M disminuida, y los estadios por FTIR indican que el pka del glutámico Glu 194 esta acoplado al pka del aspartico 85 en el intermediario M del fotociclo, siendo este aminoácido el grupo que libera el protón al medio o bien una molécula de agua protonada unida a él.

Autor: CHACON MONTES PABLO.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.

Resumen: Este trabajo consiste en el desarrollo y aplicación experimental de un método basado en una combinación de cálculo de Debye y algoritmos genéticos, que permite resolver numéricamente el problema inverso de la dispersión de rayos-X, es decir, deducir ab initio la forma y dimensiones de macromoléculas en disolución a partir de su perfil de dispersión. Este algoritmo genera eficazmente modelos estructurales (formados por varios cientos de esferas idénticas) cuyos perfiles de dispersión se ajustan a un determinado perfil problema. Los modelos obtenidos con perfiles teóricos calculados a partir de estructuras cristalográficas son convergentes y reproducen las estructuras problema, a la resolución del modelo. Aplicando el método a los perfiles experimentales de dispersión de rayos-X de nueve proteínas a 2 nm resolución, se han obtenido en todos los casos modelos convergentes hacia una determinada forma y cuyos perfiles son superponibles con los experimentales. Estos modelos son generalmente compatibles con las correspondientes estructuras cristalinas, lo que valida la aplicabilidad del método. El número de esferas de cada modelo está correlacionado con la masa molecular de cada proteína. Se ha predicho la forma de tres proteínas de estructura cristalográfica desconocida y se ha explorado la determinación de cambios estructurales en disolución.#

Autor: REBOREDO PROL MERCEDES.
Año: 1999.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: En el presente trabajo se presenta una nueva metodología para la cria de Heliothrips haemorrhoidalis(Bouche, 1833) (Insecta:Thysanoptera) en laboratorio y se estudia el efecto de la temperatura sobre la duración del desarrollo. Una vez conseguida la cria en laboratorio, se ha estudiado el patrón proteico de los diferentes estadios, mediante electroforesis(SDS-PAGE), en nuestras procedentes de cinco poblaciones distintas de esta especie. Se ha conseguido establecer un patrón caracteristico de la especie, aunque se observa variación entre los estadios. La variación intraespecifica observada es baja y solo aparece en la población de Holanda. Esta tecnica permite la caracterización de diferentes especies de trips. A continuación, se obtuvieron anticuerpos policlonales frente a H. Haemrrhoidalis con el objetivo de desarrollar un método rápido para la detección precos de estadios larvarios de trips.

Autor: LECANDA CORDERO JUAN.
Año: 1999.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: Estudiando el patron de expresión del gen humano de la proteina intercambiadora de aniones AE2 en células HepG2, se observó la existencia de regiones promotores alternativas solapantes, en la mitad de 5´ del intron 2. Se identificaron dos exones iniciales alternativos (exones 1b1 y 1b2),cada uno de los cuales seune al exón 3 en los correspondientes transcritos AE2b1 y AE2b. El exón 1b1 es homólogo a la variante "b" descrita en rata. Codifica 3 aminoácidos iniciales (MTQ) en la isoforma AE2b1, que reemplazan a los 17 aminoacidos iniciales (MTQ) enla isoforma AE2b1 que reemplazan a los 17 aminoácidos (MSSAPRRPAKGADSFCT) de la forma completa de la proteina (AE2a). El exón 1b2 codifica 8 aminoácidos iniciales (MDFLLRPQ) en la isoforma AE2b2. Esta ultima isoforma no ha sido identificada en ninguna otra especie hasta el momento. La proporcion de estos transcritos AE2a, AE2b1 y AE2b, en celulas HepG2 fue determinada como 10:1:1, respectivamente. El exón 1b1 tiene sitios de inicio multiples, mientras que el exón 1b2 presenta un sitio de inicio predominante. El analisis de las secuencias de las regiones promotoras alternativas mostró la presencia de numerosos motivos de unión de factores de transcripción abundantes en el hígado (HNF). Ensayos duales de luciferasa demostraron la capacidad de estas regiones de activar la transcripción en celulas HepG2. El estudio semicuantitativo de la expresión de las tres isoformas en varios tejidos humanos (higado, estomago, recto,prostata,riñon y tiroides) indico que los transcritos altrnativos se expresan en higado y riñon, mientras que el transcrito AE2a se encontro en todos los tejidos estudiados. En la región promotora alternativa de AE2b, se ha identificado un polimorfismo C/T en la posición -290b1, muy cerca en direccion 5´de una caja GC con un motivo de unión a ETF. Este polimorfismo podria contribuir a la expresión disminuida de AE2 en la cirrosis biliar primaria, bien por si mismo o bien asociado a otros polimorfismos.

Autor: GARCIA VALLVE SANTIAGO.
Año: 1999.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: Mediante una combinación de los análisis del contenido en G+C, del uso de codones y análisis filogenéticos se proponen varios caasos de transferencia horizontal génica de glicosil hodrolasas, los enzimas responsables de la rotura de los enlaces O-glicosídicos. Contretamente, se proponen que los genes yagH de Escherichia coli, xynA y xynb de Bacillus subtilis fueron adquiridos mediante transferncia horizontal génica. También se proponen como casos de transferencia horizontal las glicosil hidrolasas, cuyas secuencias se conocen, de los hongos que viven en el rumen de los naimlaes rumiantes. Estas glicosil hodrolasas presentan una mayor similitud conglicosil hidrolasa de bacterias que con secuencias otros hongos. Esta transferencia habría permitido a un hongo ancestral colonizar un nuevo hábitat, el rumen de los animales rumiante, y explicaría porque todos los hongos que se encuentran en el rumen de los animales rumiantes, y explicaría porque todos los hongos que se encuentran en el rumen de los animales rumiantes son de la clase Neocallimasticales. Finalmente, se identifican mediante el análisis del genoma completo de las bacterias Escherichia coli, Bacillus subtilis y análisis del genoma completo de las bacterias Exherichia colii, Bacillus subtilis y Mycobacterium tuberculosis, todos aquellos genes que pueden ser casos de transferencia horizontal. Mucho de estos genes se encuentran en estructura de operones en regiones ricas o pobres en el contenido G+C. Contretamente se propone que aproximadamente el 16%, 12% y 5% de los genes de B. Subtilis, E. Coli y M. Tuberculosis, respectivamente,pueden haber sido adquiridos horizontalmente. A nivel metodológico se han desarrollado nuevas herramientas para comparar el uso de codones entre genes y entre un gen y la media de un organismo, así como para detectar aquellos genes de un genoma completo que se desvían en el contenido G+C y/o en el uso de codones. Esta metodología está basada en considerar un gen como un vector en un espacio multidimensional y utiliza varios parámetros como los coeficientes de correlación de Pearson, la distancia de Mahalanobis, la distancia de Hamming o la simulaciónde Montecarlo.

Autor: NEGRETE RODRIGUEZ JOSE ANTONIO.
Año: 1999.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Resumen: A la hora de realizar el diseño de una proteína, es muy importante la correcta elección de los aminoácidos que van a formar parte de la secuencia.En primer lugar hay que elegir aquellos aminoácidos que tengan la mayor tendencia a estabilizar la estructura secundaria que queremos formar. Para ello, se emplean los parámetros de propensión de los aminoácidos, que son una medida de la tendencia que tienen los aminoácidos a estabilizar o desestabilizar una estructura secundaria concreta. Por otro lado, hay que distribuir dichos amonoácidos en la secuencia (en función del carácter hidrofóbico o hidrofílico de la cadena lateral), de manera que al plegarse la cadena polipeptídica, las interacciones de las estructuras secundarias entre sí y con el solvente sean óptimas. Para cada esructura ssecundaria, existen unas distribuciones óptimas o patrones de distribución característicos. El objetivo de esta tesis es profundizar en el estudio de los parámetros de propensión y de los patrones de distribución de los aminoácidos tanto para hélice alfa como para cadena beta. Para ello, se ha realizado un exhaustivo análisis estadístico de patrones de distribución y de parámetros de propensión en una muestra de 3863 hélices alfa (obtenidas a partir de 546 proteínas) y en una muestra de 6362 cadenas beta (obtenidas a partir de 834 proteínas). Dicho análisis nos ha permitido obtener nuevas características de la hélice alfa y de la lámina beta en proteínas globulares y establecer así reglas útiles para el modelaje proteico. Los resultados más relevantes obtenidos en esta tesis respecto al análisis de parámetros de propensión han sido: A,-Demostrar la independencia de las propensiones de hélice alfa respecto la clase estructural. B,- Demostrar la dependencia de las propensiones de cadena beta del tipo de lámina paralela o antiparalela. Respecto al análisis de patrones de distribución de aminoácidos se han desarrollado toda una serie de reglas de distribución de aminoácidos hidrofílicos (cargados y dipolares) e hidrofóbicos (tanto alifáticos como aromáticos) tanto para hélice alfa como para cadena beta.

Autor: PÉREZ IRATXETA CAROLINA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE LA U.A,M.

Resumen: La información evolutiva contenida en los alineamientos múltiples de secuencias proteicas se está utilizando con propósitos predictivos, cada vez más ampliamente. Se trata de predecir aspectos estructurales y funcionales de las proteínas. En este contexto se trato de estudiar la plicabilidad de distintas técnicas de análisis multivariante infocadas a la extracción de información funcional. En el trabajo se comparan los resultados obtenidos con otras aproximaciones previas al problema. Así mísmo, se verificó la utilidad y aplicabilida del trabajo mediante el análisis de numerosos ejemplos.