PROTEINAS, 11

Autor: MARTINEZ GONZALEZ FRANCISCOO JAVIER.
Año: 1999.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: En esta tesis se han planteado los siguientes objetivos: 1)Estudio de la expresion de las HSPs en la especie Rattus norvergicus ante una parasitacion primaria y secundaria con el parasito Trichinella spiralis. 2)Estudio de la expresion de las HSPs de T. Spiralis ante tres agentes estresantes. 3)Purificacion y caracterizaion bioquimica e inmunologica de las HSPs mas relavantes de T.spiralis. Los resultados obtenidos demuestran: 1)La utilidad de estas proteinas para seguir la evolucion de una parasitosis y para comprender algunas adaptaciones parasitarias. 2)La fuerte antigenicidad de la hsp70 y hsp60 de T.spiralis para el sistema inmune del hospedador. Esta ultima caracteristica podria otorgar a estas HSPs un papel importante en el diagnostico de la triquinosis e incluso en el desarrollo de vacunas contra esta parasitosis.

Autor: TORRENT MAS JOAN.
Año: 1999.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS. UNIVERSIDAD DE GIRONA.

Resumen: Para analizar la contribucion de la region C-terminal propuesta como iniciadora del plegamiento (CFIS 106-118) en la estabilidad de la RNasa A, los residuos alifaticos de esta region fueron sustituidos, mediante mutagenesis dirigida, por otros residuos en los cuales la cadena lateral alifatica era progresivamente recortada. La mayor parte de las sustituciones proyectadas suponian deleciones no disruptivas de grupos metilo (eno). Ademas, se reemplazo la Tyr115 por un Trp, de forma que, potencialmente, se introducia una unica sonda fluorescente, no desestabilizadora, para seguir los cambios conformacionales que se puedieran generar en la region durante el proceso de plegamiento/desplegamiento de la proteina. Tanto los parametros cineticos, como los espectros de FTIR y CD, determinados para cada uno de las ribonoucleasas variantes, indican que las sustituciones aminoacidicas efectuadas presentan, en general, poco o ningun efecto en la estructura nativa y en la actividad de la enzima. Se utilizo la espectroscopia de adsorcion ultravioleta de cuarta derivada, la fluorescencia (para la variante con Trp) y la espectroscopia de infrarrojo por transformada de fourier, para seguir y caracterizar, en condiciones de equilibrio, las transiciones conformacionales de cada variante en funcion de la presion y de la temperatura. Los resultados se compararon con los que se obtuvieron por la proteina salvaje. Para determinar mas a fondo las caracteristicas del proceso de desplegamiento de la variante Y115W, las transiciones de desnaturalizacion inducidas por urea de esta variante y de la proteina salvaje, fueron examinadas mediante electroforesis en gradiente de urea y espectroscopia de fluorescencia. Curiosamente, los cambios conformacionales que resultan de la desnaturalizacion por presion son muy parecidas a los que se obtuvieron por temperatura. Enfrente de un aumento gradual tanto de presion como de temperatura, la estructura terciaria i los elementos de estructura secundaria de las proteinas estudiadas se pierden de forma conjunta y reversible. Estas variaciones estructurales que se promueven describen un proceso de desplegamiento muy cooperativo y en dos estados. Dado que las dos tecnicas (UV y FTIR) utilizan cada una un regimen de concentracion proteica muy diferente, los resultados indican que el proceso de desplagamiento por presion y por temperatura es intramolecular. Los resultados obtenidos sugieren que la hidrofobicidad y el volumen de las cadenas laterales del CFIS, junto con las interacciones de van de Waals entre elementos de estructura secundaria intervienen de forma muy notable en la estabilizacion de la proteina. Entre los diferentes aminoacidos alifaticos que pertenecen al CFIS C-terminal, la Val 108 es el residuo mas importante para preservar la integridad estructural del estado nativo. Las sustituciones en esta posicion causan pequeñas alteraciones conformacionales y una gran desestabilizacion de la proteina (por ejemplo, el punto medio de la transicion de desnaturalizacion por presion y por temperatura de la variante V108G disminuye unos 592 Mpa y 25ºC, respectivamente, respecto a la proteina salvaje.) De acuerdo con los resultados obtenidos, la variante Y115W ofrece una sonda util para seguir la cinetica de plegamiento/desplegamiento de la RNasa a.

Autor: COLL CONSTANS M. GRACIA .
Año: 1999.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: CIENICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La ribonucleasa de páncreas bovino, Rnasa A, es un modelo clásico para los estudios de plegamiento/desplegamiento proteico. La mayor parte de estos estudios se han centrado en alterar residuos de cisteína o de prolina para estudiar, desde un punto de vista cinético,la formación de los enlaces dusulfuro o las reacciones de plegamiento lento, respectivamente. En ese trabajo se han alterado los residuos hidrfólicos I106, I107, V108, A109, V116 y V118 que pertrenecen a aun región postulada como iniciadora del plegamiento de la RNAasa A, concretamente la comprendida entre los residuos I106 y V118, para obtener informacion sobre la contribución de estos residuos a la estabilidad glboal de la molécula y su importancia relativa dentro de esta región. Se ha obtendio por mutagénesis dirigida por oligonucléotido 13 variantes sencillas de la Rnasa A (I106L, I106V, I106A, I107L, I107V, I107A, V108A, V108G, A109G, V116A, V116G, V118A y V118G) en las cuales los residuos hidrfólicos mencionados han sido sustituidos por otros residuos de hidrofobicidad y tamaño inferiores. Cada cariante ha sido caracterizada con relación a la Rnasa A por medidas de actividad enzimática, determinación de estructura secundaria y terciaria mediante dicroismo cirucular y determinación de la estabilidad mediante el estudio termodinámico de la desnaturalización térmica seguida por dicroismo circular y calorimetria de barrido diferencial. Además, se han obtendio y carcterizado 3 variantes dobles de la Rnasa A (I106V+Y115W, I106A+Y115W y I107L+Y115W) con relación a la variante senzilla Y115W por espectroscopia de fluorescencia del estado excitado y por espectroscopia de fluorescencia de fase con multifrecuencia para comprobar la efectividad del residuo de triptófano introducción en la posición 115 como sonda luorescente local para detectar cambios conformacionales locales de la región I106-V118. Los resultados han indicado que de entre todas la posiciones alterades de la Rnasa A, la posición valina 108 es la más crítica para la estabilidad de la proteína.

Autor: ZARCO HERNÁNDEZ JORGE ARTURO .
Año: 1999.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LLEIDA.

Resumen: El trigo harinero (T. Aestivum L.) se han dedicado muchos esfuerzos a la obtención de genotipos con la translocación 1BL/1RS, que se relaciona con mejores carcterísticas agronómicas. Debido a ello en el Centro Internacional de Mejoramiento de Amiz y Trigo (CIMMYT) se ha incorporado la translocacion 1BL/1RS al trigo duro (T. Turgidum L.). Sin embargo,la influencia de dicha translocación en esta especie es poco conocida. Por ello, el siguiente trabajo se planteó con el objetivo de evaluar las diferencias que presentan los trigos duros con translocación 1BL/1RS procedentes del cultivar Altar 84, en algunas carcterísticas agronómicas, bioquímicas y de calidad. El material vegetal utilizado constó de ocho líneas isogéncias, cuatro con la translocacion cromosómica 1BL/1RS (1RS) y otras cuatro sin dicha translocación (1BS), además de incluir el progenitor Altar 84 y al cultivar Vitrón como testigo local. Los ensayos se realizaron en dos ambientes de México 1993-94 y en cuatro ambientes de España durante los ciclos 1994-95 y 1995-96. Los resultados de la evaluación agronómica indicaron que no se detectaron diferencias claras entre las líneas isogéncias 1RS y 1BS, ya que, si bien existieron valores medios significativamente mayores en nº de espigas/m2 y nº de granos/m2 en lso 1Bs, el peso de mil granos fue significativamente mayor en los 1Rs.Esto pudo influir en que se produjera un efecto compensatorio de tal forma que no existerion diferencias signficativas en rendimiento de grano entre genotipos 1BS y 1Rs. En las características físcas del grano, aunque en algunos parámetros se encontraron diferencias signifcativas entre los genotipos 1BS y 1RS,las magnitudes fueron pequeñas y variaron significativamente ente los ambientes. En las determinaciones físico-químicas y reológicas realizadas, sólo en intensidad del color amarillo y cantidad de proteínas los 1Rs mostraron valores mayores a los genotipos 1BS. En otros, como cantidad e índice de gluten, volumen de sedimentación, propiedades de mezclado, características alveográficas y textura de amsas, los genotipos 1RS mostraron una calidad significativamente ifnerior en comparación a los genótipos normales. Resultados similares se obtuvieron en la evaluación de la cocción del espagueti.Además, los niveles de calidad mostrados por lo genotipos 1RS fue tal que haría difícil su aprovechamiento enl a elaboración de pastar y otros posibles productos. La calidad inferior de las isolíneas 1RS también se puso de manifiesto en la estructura física del gluten,la cual se analizó en un microscopio electrónico de barrido, donde se observó que el gluten del trigo 1BS posee una estructura tridimensional apreciablemente más compacta, cerrada y continua que la estructura de los genotipos 1RS. La calidad inferior de los isolíneas con translocación 1BL/1RS (1RS) se explicó a través de los resultados obtendios en el análisis bioquímico de la proteína de reserva. Mientras las líneas normales (1BS) mostraron tener las subunidades de proteínas codificadas por el loci Glu-B3l Gli-B1, las líneas 1RS en todo momento carecieron de éstas. Además, se encontró que la fracción Glu LMW-B marcó la principal diferencia cuantitativa entre genotipos 1BS y 1RS.Los genotipos 1RS tuvieron 26% de las Glu LMW-B halladas en los genotipos 1BS. Así pues, con base a los resultados de este trabajo se puede concluir que la calidad inferior de los trigos duros con la translocación 1BL/1RS fue principalmente determinada por la carencia de las subunidades Glu LMW-B codificadas por el locus Glu B3, las cuales reperesentaron un proproción importante de las proteínas de reserva de los trigos duros normales estudiados.

Autor: ALVAREZ PALOMO ANA BELEN.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGIA. UNIVERSITAT BARCELONA.

Resumen: La caquexia cancerosa es un síndrome responsable de muchos de los fallecimientos de los pacientes con tumor y que entre otras caracteristicas incluye una fuerte pérdida de peso, alteraciones metabólicas y debilidad debida al desgaste de los músculos esqueléticos. Estudios in vivo han puesto de manifiesto el papel de la citoquinas producidas por el sistema inmunitario en respuesta al tumor, y en especial el factor de necrosis tumoral-a(TNF-a), en la aceleración de la proteólisis muscular. El primer objetivo de esta tesis fue el de caracterizar la acción directa del TNF-a sobre el metabolismo proteico muscular en cultivos de la linea muscular C2C12. Se encontró que, in vitro, la acción del TNF-a resultó ser bimodal: a baja dosis de TNF-a fue catabólica y a altas dosis, anabólica. La caracterización de la acción anabólica reveló que era debido tanto a cambios en la síntesis como en la degradación proteica, que posiblemente esta mediada por la inducción dela producción de interleuquinas (IL-6) endógena y que es dependiente de la sintesis de DNA. Tambien se llevaron a cabo estudios con ratas portadoras del hepatoma ascítico Yoshida AH-130 y ratones portadores del carcinoma pulmonar de Lewis destinados a buscar estrategias terapeuticas anticaquéticas. Los inhibidores de la sintesis de TNF-a (el inhibidor d ela fosfodiesterasa IV EMD 95932 y el doble inhibidor de la sintesis de TNF-a e IL-1 FR167653) mostraron ser ineficaces en la reversión de las alteraciones asociadas a la caquexia. Sin embargo el tratamiento con IL-15, citoquina que ha mostrado propiedades anabólicas en cultivos de líneas musculares, mostró una acción protectora del desgaste muscular mediante el bloqueo de la activación de las proteólisis, y en particular del sistema proteolítico dependiente de ubiquitina, ya que previamente descrito que acompaña a la presencia del tumor. La acción de esta citoquina sobre el musculo esqueletico es posiblemente directa ya que se reflejó en el mismo sentido en incubaciones de musculos aislados y en la linea celular C2C12.

Autor: LLOSAS LOSFELD M. MONT .
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: El PMSA es un activador general de las isoformas de proteina quinasa C (PKC). La adición de este efector en la línea celular epitelial intestinal HT-29 M6 causa la dispersión de las colonias celulares, una menor adesión celula-celula, y a dosis diez veces mayores, la disminución de la proliferación celular. Se investigó el mecanismo de regulación de los contactos celula-celula en este sistema. A nivel molecular la E-caderina, una proteína clave de los contactos aderentes pierde su funcionalidad. De manera concomitante se observa una mayor fosforilacion de la p120 catenina y una mayor cantidad de complejo p120/E-caderina. La p juega pues un papel importante en la regulación de los contactos adesivos. Para tratar de adscribir los efectos del PMA a una isoforma de PKC en concreto, se utilizaron activadores selectivos de algunas isoformas y se tranfectaron las células de manera constitutiva con diferentes isoformas nativas (PKCa, E y n) o mutadas constitutivamente activadas (PKCa+). Los resultados muestran que la PKCa en cuanto a la proliferación y su activacion parece ser necesaria para el crecimiento normal de la celula.

Autor: VAQUERO GARCIA ALEJANDRO.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: CID-CSIC.

Resumen: La proteina GAGA fue descrita hace unos 15 años de Drosophila melanogaster como un polipeptido capaz de reconocer y unirse a promotores de diversos genes. Esta actividad parecia basica para la correcta expresion genica. La primera función atribuida a GAGA era de activacion de la expresion genica, aunque en años posteriores, se propuso que su función real era antirepresora, mas que una activacion real. El objetivo de esta Tesis era dilucidar el papel de GAGA en la transcripcion mediante experimentos in vivo e in vitro. Hemos analizado la fnción de GAGA en la transcripción en un sistema heterólogo in vitro, utilizando extractos nucleares de celulas HeLa en lugar de celulas de Drosophila para evitar el problema de posibles interacciones con la proteina GAGA endogena. Nuestros resultados sugieren que GAGA tienen tambien una funcion activadora de la transcripción independiente de la actividad antirepresora. Ademas, la region responsable de esta funcion seria el dominio C-terminal, rico en glutaminas (Q), y el dominio N-terminal POZ (implicado en interacciones proteina-proteina) regularia esta actividad. El dominio Q muestra una alta actividad activadora en un contexto GAL4, y estudios de deleciones progresivas de este dominio sugieren una estructura modular y redundante. Por otra parte, esta activacion mediada por el dominio Q depende de la presencia de caja TATA en los promotores y en cambio, es independiente de la presencia de las proteinas TAF. A pesar de que GAGA no es capaz de activar la transcripcion in vitro en un extracto nuclear de celulas de Drosophila, la fusion GAL4-Q si puede activarla. Se obtuvieron resultados confirmatorios de esta activacion con experimentos in vivo, mediante transfecciones temporales en celulas SL2 de Drosophila, tanto con GAGA como con GAL4-Q, aunque con menor eficiencia que el factor de transcripcion GAL4-VP16(control positivo).

Autor: GINES PADROS SILVIA.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FÍSICA.
Centro de realización: U.B. (UNIVERSIDAD BARCELONA).

Resumen: En esta tesis se ha demostrado que la ADA, el receptor A, de Adenosina y el CDZ6 tienen carácter multifuncional ya que hemos observado: 1,- Interacción entre ADA y el receptor A, en células Pkm. La actuación con R-PIA internaliza ambas moléculas mediante caueolas. 2,- Los receptores A1 y D1 forman heterómeros AiR/DiR funcionales que están modulados por los agonsitas denosinicos y dopamínicos la forma agregada del receptor D1 es una forma acoplada funcionalmente a la adenilato ciclasa. Cuando ambos receptores se estiman se evita la agregación de ambos receptores y en estas condiciones el receptor D1 puede desensibilizarse. 3,- En estos heterómeros AiR/DiR está presente la ADA unidad al receptor A1. El AiR en su estado de alta afinidad modula las caractrísticas cinéticas del receptor D1 de dopamina. 4,- El complejo ADA/CDZ6 tiene un papel relevante en la adhesión célula-célula.La interacción entre ambas moléculas permite establecer los primeros contactos celulares y posteriormente la señalización inducida al interaccionar ADA y CD26 induce la activación las integrinas y permite una efectiva adhesión.

Autor: TOMAS FALCO EVA M..
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: El músculo esqueletico juega un papel importante en el metabolismo. Es el principal tejido metabolizador de la glucosa en estado absortivo, y los cambios en el transporte de glucosa estimulado por insulina alteran la disponibilidad de glucosa en el organismo. El transporte de glucosa en musculo tiene lugar por la actividad de dos isoformas de los transportadores de glucosa de difusion facilitada, GLUT4 y GLUT1. Ambas isoformas comparten la misma topologia estructural pero se diferencian en su localizacion celular. Mientras GLUT1 se localiza en membrana plasmatica y es el responsable del transporte de glucosa en condiciones basales y en menor grado de estimulacion por insulina, el transportador de glucosa GLUT4 presenta una localizacion intracelular asociado a amplias estructuras tubulovesiculares y endosomas multivesiculares en la zona perinuclear. GLUT4 es el responsable del transporte de glucosa estimulado por insulina. En respuesta a la estimulacion por la hormona se produce una redistribucion celular de GLUT4 desde su localizacion intracelular a membrana plasmatica incrementando el transporte de glucosa. El ejercicio, en musculos esqueletico y cardiaco, es otro estimulo que incrementa el transporte de glucosa por cambios en la localizacion intracelular de GLUT4. Los mecanismos de transduccion de la señal de estimulacion, por insulina y ejercicio, se desconocen, al igual que los mecanismos implicados en los cambios de distribucion celular y que se traducen en un aumento del transporte de glucosa. Identificar las proteinas que colocalizan en las poblaciones intracelulares enriquecidas en GLUT4 nos ayudaran por una parte, en conocer el tipo de compartimento intracelular que contiene GLUT4 y por otra, las proteinas implicadas y o respondable/-s de la redistribucion celular de este en respuesta a la estimulacion. El principal objetivo de mi tesis doctoral ha sido, por tanto, profundizar en la via intracelular del transportador de glucosa GLUT4, en musculos esqueletico y cardiaco. A partir de membranas intracelulares de GLUT4 procedentes de musculo esqueletico y musculo cardiaco hemos podido determinar la presencia de diferentes poblaciones intracelulares de GLUT4 con distinta composicion proteica y sensibilidad a la insulina o ejercicio. Ademas, ha sido posible identificar una proteina de 32 kDa, y que colocaliza en las poblaciones intracelulares de GLUT4 de musculo esqueletico, como el canal aionico dependiente de voltaje (porina 31HM) cuya implicacion en el trafico intracelular de GLUT4 esta en estudio. En musculo cardiaco hemos podido identificar otra proteina perteneciente a la familia de pequeñas GTPasas, de 24 kDa, Rab11 y que diferencia de la conocida Rab4 y que colocaliza en las vesiculas intracelulares de GLUT4, juega un papel en la regulacion del trafico de GLUT4 en respuesta a la insulina y distinta de la descrita para Rab4.

Autor: ADEVA ANTÓN ALBERTO.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA .
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: En la tesis se ha abordado la síntesis por métodos químicos de sistemas proteícos, empleando tanto aproximaciones clásicas como nuevas metodologías. En una primera parte del trabajo se ha sintetizado la Proteína Anticongelante Tipo III (AFP III) del Macrozoarces Americanus, con una longitud de 65 residuos, empleando una estrategia lineal de síntesis en fase sólida, altenativamente según un esquema de protección Boc/Bzl o Fmoc/Bu. Aunque también se ha abordado la síntesis mediante una estrategia de ligadura química tioéster esta metodología no ha permitido alcanzar el objetivo sintético deseado, si bien se ha aplicado con éxito a la obtención de un modelo peptídico sencillo. En el segundo capítulo se ha desarrollado una nueva metodología de ligadura química nativa, que ha sido aplicada con éxito a la obtención del dominio SH3 de la proteína quinasa de Abelson (Abl-SH3), de 56 residuos. Esta aproximación se basa en el empleo de una resina PEGA-NH2, modificada para la obtención de péptidos desprotegidos anclados al soporte sólido a través de un enlace tioéster, y ofrece una gran versatilidad en cuanto a la obtención de diferentes funcionalizaciones en posición C-terminal de un péptido a partir de un substrato único. Por otra parte, se ha desarrollado un procedimiento para la purificación in situ de dominios proteicos sintetizados mediante esta modalidad de ligadura química nativa, basado en la afinidad por ligandos peptídicos. Por último, se ha abordado la síntesis del dominio PDZ-3 de la proteína PSD-95, con una talla de 96 residuos. En este caso se ha segudio una estrategia de tipos ecuencial, basada en la metodología descrita en el segundo capítulo, a partir de tres segmentos peptídicos.

Autor: PAVÍA VILÁ SILVANA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: El PCI es una proteína de 39 aminoácidos con una estructura globular central de 27 residuos y dos colas, N-terminal y C-terminal. La parte globular de la proteína presenta una hélice 3 10, como única estructura secundaria regular, así como 4 bucles (loops) y está estabilizada por tres puentes disulfuro formados por las cisteínas C8-C27, C12-C24 y C18-C34. La presencia de estos puentes disulfuro nos permtie estudiar el replegamienyo del PCI a través de la captura de los intermediarios que se forman en el proceso de plegamiento a apartir de la proteína reducida. Esto permite conocer el número de intermediarios dependientes de disulfuro, su diversidad, su estructura y sus propiedades, proporcionándonos información sobre el mecanismo de plegamiento. En una primera fase del presente trabajo, hemos estudiado el aislamiento y la purificación de los intermediarios con tres puentes disulfuro (denominados "scrambled species" a partir de la mezcla de intermediarios que se obtiene tras efectuar el replegamiento del PCI a partir de PCI purificado o a partir de cultivos de C. Coli que expresan PCI. Así mismo, hemos realizado una caracterización estructural de los intermediarios "scrambled" aislados en forma pura, se han determinado sus constantes de inhibición, éstas son del orden uM (unas 1000 veces superiores a la estimada para el PCI nativo). También se ha determinado cuáles son las cisteínas implicadas en cada uno de los puentes disulfuro de la estructua de tales epecies mediante digestión proteolitíca y mediante reducción química paracial de un puente disulfuro. En una segunda fase, hemos estudiado la última etapa del camino de plegamiento del PCI, etapa donde las especies "scrambled" rompen y vuelven a formar sus puentes disulfuro para dar lugar a la estructura nativa. Estos experimentos han probado que el plegamiento del PCI no tiene lugar a través de una vía úncia sino que se dan múltiples vías paralelas. Finalmente en una tercera fase, se ha estudiado la influencia de agentes redox en la producción de PCI recombianante y en otras proteínas relacionadas. Se observó que la expresión de éstos en E. Coli, en forma secretada al medio, se acumulaba gran parte de la proteína en forma de intermediarios tipo "scrambled".

Autor: FERRER ARMENGOU CRISTINA.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUIMICA.

Resumen: La uteroglobina de conejo es una proteína globular que está formada por dos subunidades idénticas de 70 aminoácidos cada una, unidas en disposición antiparalela por dos puentes disulfuro. Se han sintetizado fragmentos helicoidales de esta proteína en fase sólida (monómeros) y en solución (dímeros). Se ha estudiado la estructura secundaria que adoptan todos estos péptidos por dicroismo circular, y algunos de ellos se han estudiado por resonancia magnética nuclear. Se ha realizado un estudio de interacciones helicoidales por formación de puente disulfuro que ha revelado la preferencia por la disposición antiparalela de los monómeros de la uteroglobina. El péptido UTG(1-28,29-70) representa la mitad de la uteroglobina y puede formar una pseudouteroglobina por dimerización no-covalente con otra molécula de heterodímero. Se han llevado a cabo aproximaciones al escalado de la síntesis convergente de la uteroglobina y se ha expresado la proteína en E. Coli.

Autor: MILLET AGUILAR-GALINDO OSCAR.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUIMICA.

Resumen: Se han desarrollado los experimentos de RMN necesarios para la adquisición eficiente de datos de relajación en moléculas marcadas selectivamente utilizando campos de confinamiento de espines débiles que cumplen la condición de Hartmann-Hahn. Las secuencias se han utilizado para la medida de parámetros de relajación a dos campos diferentes, de cuatro formas repetitivas de la molécula H-(VHLPPP)8-OH que contienen un único residuo de leucina marcado en diferentes unidades repetitivas. El análisis de los datos de relajación, utilizando diferentes modelos, permiten concluir que el comportamiento dinámico de todas las unidades repetitivas estudiadas excepto la situada en la posición N-terminal, es equivalente y no es comparable con una estructura desordenada. Se ha desarrollado un nuevo tipo de experimento llamado GAUDI que permite la medida de coeficientes de difusión traslacional a partir de experimentos 2D. Se ha propuesto un nuevo método basado en medidas de la dependencia de la velocidad de relajación transversal que permite determinar la escala de tiempo de procesos de intercambio químico entre especies que se encuentran en concentraciones marcadamente diferentes aunque la especie minoritaria no sea detectable a partir del espectro de resonancia magnética nuclear.

Autor: MASANES BERTRAN ROSA M..
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGIA.

Autor: MALDONADO BARAHONA SUSANA.
Año: 1999.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNVIERSIDAD DE ZARAGOZA.

Resumen: En este trabajo se ha desestabilizado la conformación nativa de la apoflavodoxina mediante la escisión específica de algunos segmentos de su secuencia y se ha estudiado la estructura y energética de los elementos restantes. Los objetivos abordados son: * El estudio de conformaciones intermedias que podrían aparecer en la reacción de plegamiento de esta proteína. * El estudio de la formación de estructura secundaria en ausencia de interacciones terciarias. * El estudio de la interacción entre distintas regiones de la proteína. * El estudio de la interacción con el sodio de la proteína.

Autor: CONTRERAS MOYEJA LELLYS MARIELA.
Año: 1999.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La tesis abarca como punto central el estudio de la perturbación que ejercen diversas proteinas y péptidos de membrana sobre la organización lipidica y como a su vez los lipidos son capaces de modular la estructura, funcion y dinamica de proteinas. Para ello se purificaron tres proteina,de lascuales dos son las ATPasas de Ca2+ y H+-K+, y la otra una proteina antifungica extraida de girasol, y se sintetizaron dos diferentes peptidos de interes biologicos involucrados en la pigmentacion de la piel y en el mecanismo de infeccion del virus del HIV. Previo a cualquier estudio se recontituyeron en sistemas modelo de membrana con el objetivo de simular su entorno real y de relacionar la estructura y la función que ejercen dichas proteinas y peptidos en la membrana. La caracterizacion de la estructura secundaria de proteinas en disolución y en membrana asi como las interacciones entre estos proteinas y los lipidos constituyentes de los sistemas modelo de membrana se realizaron mediante diversas metodologias biofisicas que incluyen la espectroscopia de infrarrojo por transformada de Fourier (FT-IR), la calorimetria diferencial de barrido (DSC), la fluorescencia en el estado estacionario y resuelta en el tiempo asi como la resonancia magnetica nuclear de 31P. Los resultados obtenidos a lo largo de la misma ponen en evidencia la existencia de interacciones especificas entre las diferentes proteinas y los lípidos utilizados en los sistemas modelo de membrana. Por ultimo estas interacciones demuestran la existencia de una modulación recíproca e indican la importancia que tienen en las diferentes metodologias biofisicas mencionadas anteriormente para obtener informacion a nivel molecular.

Autor: CANTO SILVA JOSE.
Año: 1999.
Universidad: POLITECNICA DE CATALUÑA.
Centro de lectura: INGENIEROS IDUSTRIALES.

Resumen: El estudio presentado utiliza los metodos de la dinámica molecular para la caracterizacion del espacio conformacional de peptidos y propone cambios en el tratamiento de la información que se obtiene. Las metodologias utilizadas son trayectorias de dinámica molecular y su implementación en el templado simulado iterativo (iterative simulated annealing) para la exploración del espacio conformacional, metodos de analisis estadistico no parametrico y tecnicas de analisis multivariante de clasificacion jerarquica. El método de las perturbaciones (FEP window-grouth) de la dinámica molecular se utiliza para el cálculo de la energia libre relativa de solvatación. En el estudio se tratan cinco sistemas diferentes: a) La Mentencefalina, sobre la cual se realizan tres estudios independientes: a.1)iterative simulated annealing a.2)generacion aleatoria de estructuras a.3)trayectoria de dinamica molecular. En el simulated annealing se proponen cambios en el tratamiento de la informacion obtenida (control y criterio de completitud, graficos de accesibilidad) y una nueva forma de realizar el analisis de clusters o conglomerados (single-link automatizado). La comparación con los resultados del proceso aleatorio y de la trayectoria de dinamica molecular permiten establecer la bondad de las modificaciones efectuadas y validar, de forma general, el simulated annealing como metodo. B) Los péptidos de secuencia FWRGDLVFDFQV(12 residuos) y AVYYCTRGYHSSLY (15 residuos). El primero corresponde aun fragmento de la proteina VP3 de la capside del virus de la hepatitis A y el segundo a un fragmento de la zona variable de la cadena pesada del anti-idiotipo que imita el epitopo del determinante a del antigeno de superficie del virus de la hepatitis B. Sobre los dos se realiza una exploracion del espacio conformacional de baja energia con la tecnica del iterative simulated annealing y se comparan los resultados del analisis del cluster tradicional con el nuevo metodo propuesto. C) La proteina kaliotoxina, un bloqueador del canal de potasio dependiente del voltaje kv 1.3 de la cual se realiza un análisis estructural detallado de los datos obtenidos mediante la simulación de dinámica molecular, prestando especial atención a los residuos más implicados en la posible interacción con el receptor. D) El sistema complejado (Cys-Pro-D-Val-Cys)2:M+, donde M+ es Li+, Na+ y K+. Sobre este sistema se estudia de forma comparativa la energia libre de solvatacion utilizando el metodo de las perturbaciones implementado para la dinamica molecular.

Autor: QUILES PÉREZ M. TERESA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: INTRODUCCIÓN HIPÓTESIS La respuesta del individuo anciano al estrés, cuando se movilizan depósitos de proteína corporal, se halla comprometida, y del mismo modo, la posterior recuperación y restauración de masa proteica. OBJETIVOS 1,- Caracterizar el cambio proteico global y hepático durante un estrés quirúrgico utilizando la perfusión de una dosis trazadora de L-[1-C14]-leucina. 2,- Determinar si tras la agresión, el metabolismo proteico global y hepático difiere entre ratas de 5 y 24 meses de edad (jóvenes-adultas y viejas). 3,- Analizar el efecto de la nutrición parenteral total (NPT) sobre el recambio proteico global y hepático en el estrés postquirúrgico. METODOS ESTUDIO PRELIMINAR 1 Tras cateterizar a las ratas la vena yugular izquierda y la arteria carótida derecha, se instalaron en jaulas durante 4 días. Se perfundió L-[1-C14]-leucina (2 uCi/ml) a un flujo de 0.5 ml/h durante 7 horas, con una extracción de sangre arterial cada hora. ESTUDIO PRELIMINAR 2 Los procedimientos fueron los mismos, excepto la perfusión de [1-C14]-leucina, que duró 6 horas. Tan sólo se extrajo una muestra de sangre arterial al final. Extirpamos y troceamos el hígado inmediatamente después del sacrificio del animal. ESTUDIO PRINCIPAL En todos los animales se colocaron catéteres en la vena yugular, arteria carótida y vena porta, y se mantuvieron bajo distintas condiciones. Perfundimos con L-[1-C14]-leucemia 6 horas, se recogieron muestras sanguíneas de arteria carótida y vena porta, se sacrificó al animal y se extrajo rápidamente el hígado. GRUPOS CONTROL (2 grupos, ratas de 5 y 24 meses): pienso y agua hasta que se estabilizaron en función de la ingesta y el balance nitrogenado. 8H (2 grupos): se dejaron recuperar durante 2 horas. 4D-PIENSO (2 grupos): 4 días con libre ingesta de pienso. 4D-PIENSO+SF: (2 grupos): 4 días con pienso y perfusión de suero fisiológico (100 ml/kg.d). 4D-NPT I: (2 grupos): 4 días con NPT (100 ml/kg.d). 4D-NPT II: (1 grupo de ratas de 5 meses): 4 días con NPT (170 ml/kg.d. ANÁLISIS Concentración de leucemia (cromatografía líquida de alta resolución) y radiactividad en las muestras plasmáticas y en la fracción proteica y no proteica de tejido. En la primera fracción, además, concentración de proteína, y en la última, radiactividad incorporada a alfa-cetoisocaproato (Cromatografía de intercambio iónico). En el estudio preliminar 1, se calculó el incremento de la actividad específica de la leucemia (regresión no lineal). En el estudio preliminar 2, calculamos la radiactividad incorporada a alfa cetoisocaproato. En el estudio principal, calculamos el flujo plasmático de leucemia, y la síntesis y degradación proteica hepática. ESTADISTICA Test t de Student, análisis de la varianza y análisis de correlación de Pearson. RESULTADOS Y DISCUSIÓN A las 6 horas de perfusión de L-[1-14C]-leucina, la actividad especifica alcanzó un "plateau" en ratas de 5 y 24 meses de edad, aunque en estas últimas el incremento fue más lento, posiblemente a consecuencia de que el flujo de leucina es menor. En el segundo estudio preliminar observamos que la fracción de radiactividad incorporada a alfa-cetoisocaproato fue semejante en hígado y plasam y entre ratas jóvenes y viejas (aproximadamente un 10%). En el estudio principal, concluimos que en situación control e metabolismo proteico no difiere significativamente en función de la edad (flujo plasmático: 166.8+-20.0 umol/h en ratas jóvenes y 143.9+-12.0 umol/h en ratas viejas). En el hígado, la proteolisis fue un 46% inferior (p

Autor: FERNANDEZ RECIO JUAN.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS .

Resumen: El trabajo desarrollado en la presente tesis se ha centrado, en primer lugar, en el estudio físico-químico del plegamiento y la estabilidad de la flavodoxina de Anabaena PCC 7119, para luego abordar un estudio más general de distintas interacciones moleculares esenciales en las proteínas. El primer objetivo ha sido el estudio de la ruta de plegamiento de la apoflavodoxina para determinar el modelo cinético más sencillo compatible con los datos experimentales. Los datos experimentales indican la presencia de un intermedio de plegamiento monométrico y no relacionado con la isomerización de prolinas. El ajuste de los datos experimentales a diferentes modelos cinéticos indica que el plegamiento de la apoflavodoxina a pH neutro sigue un mecanismo en el que el intermedio queda atrapado fuera de la ruta directa de plegamiento. El segundo objetivo ha sido el estudio de diferentes interacciones moleculares estabilizantes en proteínas. Por un lado se han caracterizado las interacciones no covalentes en las que interviene el único residuo de histidina que aparece en la aproflavodoxina. Esta histidina aparece implicada en una interacción catión- con una fenilalanina y en un puente de hidrógeno con una tirosina. Por otro lado, se ha estudiado el papel de las interacciones locales en hélices alfa. Se ha comprobado que la orientación favorable para que tenga lugar una interacción estabilizante entre las cadenas laterales de los aminoácidos triptófano e histidina en una hélice alfa es aquella en la que la histidina se sitúa a 4 aminoácidos de un triptófano hacia el extremo c-terminal de la hélice. El trabajo se ha complementado con el análisis de las bases de datos de estructuras de proteínas disponibles, y los resultados indican que las interacciones entre cadenas laterales de residuos intrahelicoidales no aparecen en las proteínas con la abundancia esperada de acuerdo a su carácter estabilizante. La última parte del trabajo se ha centrado en la predicción estructural mediante simulaciones por ordenador, y su aplicación a la formación de complejos entre proteínas. El algoritmo desarrollado ha sido probado en un conjunto de complejos cuya estructura se conoce, y se ha aplicado a la predicción de la estructura de los complejos que forma la enzima FNR con las proteínas ferredoxina y flavodoxina.

Autor: MAINER ALBIAC GABRIEL.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: VETERINARIA.

Resumen: En el presente estudio se ha pretendido profundizar en el conocimiento de los efectos de algunos factores tecnológicos, como los tratamientos térmicos y el desnatado, sobre la actividad biológica de las inmunoglobulinas procedentes del calostro bovino, para su posible aplicación a alimentos de base láctea. La adición a alimentos de inmunoglobulinas dirigidas especificamente frente a determinados agentes patógenos, permitiría obtener productos que podrían mimetizar la función de las inmunoglobulinas de la leche materna en los casos en que por una u otra causa no es posible para la madre amamantar a su hijo. Dichos alimentos podrían destinarse también a adultos con problemas de inmunodeficiencia. Se aislaron las tres clases de inmunoglobulinas presentes en el calostro bovino, IgG, IgA e IgM, y se elaboraron antisueros específicos frente a las mismas. La cuantificación por la técnica de inmunodifusión radial de las distintas clases de inmunoglobulinas en fracciones de leche entera, leche desnatada y nata, obtenidas tras el desnatado de la leche a distintas temperaturas, nos permitió determinar que existe una interacción entre las IgA e IgM y la fracción grasa de la leche, mayor al someter ésta a refrigeración. Se determinaron los niveles de las distintas clases de inmunoglobulinas en el calostro y leche bovinos, que resultaron ser máximos inmediatamente tras el parto, para decaer rápidamente durante los dos primeros días de lactación, y estabilizarse en torno a la primera semana. Las IgG son las inmunoglobulinas predominantes a lo largo de toda la lactación (90-70% del total de inmunoglobulinas) mientras que las IgA e IgM muestran niveles similares entre sí. Para estudiar el efecto de los tratamientos térmicos sobre la actividad biológica de las inmunoglobulinas se hicieron dos aproximaciones. En primer lugar, se estudió el efecto del calor sobre la pérdida de la capacidad de las inmunoglobulinas de ser reconocidas por anticuerpos dirigidos frente a las mismas (inmunorreactividad). Posteriormente, se consideró la pérdida por efecto del calor de la capacidad de neutralización de rotavirus bovinos por inmunoglobulinas obtenidas del calostro de vacas vacunadas frente a los mismos, como un modelo de la pérdida de la actividad biológica. Así, se llegó a la conclusión de que la desnaturalización de las inmunoglobulinas se ve favorecida por el aumento del tiempo y temperatura de tratamiento. Las IgG, las más termorresistentes, podrían resistir los tratamientos de pasterización más habituales en las industrias lácteas (72.C durante 15 segundos), pero no los tratamientos de esterilización de tipo UHT o en botella.