PROTEINAS, 12

Autor: DOMINGUEZ PEREZ M. ELENA.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: VETERINARIA.

Resumen: La transferencia de inmunidad pasiva a través del calostro ejerce protección al recién nacido durante las primeras semanas de vida. Sin embargo, existen numerosas circunstancias en las que no se dispone de calostro en cantidad suficiente o de calidad adecuada. Ante situaciones de falta o escasez de calostro es recomendable la administración de productos enriquecidos con inmunoglobulinas. Los tratamientos térmicos a los que normalmente se someten estos productos pueden dar lugar a la alteración de las inmunoglobulinas y por tanto a una pérdida parcial o total de su función biológica. Con objeto de conocer los tratamientos térmicos que se podrían aplicar a estos productos para garantizar su calidad higiénica y conservar la actividad de las inmunoglobulinas, en este trabajo se ha determinado el efecto de algunos de estos tratamientos sobre su capacidad de reconocimiento de antígenos. Los resultados obtenidos indican que las inmunoglobulinas bovinas conservan su capacidad de unión al antígeno tras los tratamientos de pasteurización; sin embargo, quedan totalmente desnaturalizadas tras los tratamientos de esterilización. También se ha determinado que las inmunoglobulinas de calostro bovino son más termosensilbes en medios de pH ácidos que a los pH más próximos la neutralidad, así como cuando se encuentran disueltas en tampón más que cuando están en calostro, donde su tendencia a la agregación es menor. También se ha estudiado la distribución de la actividad neutralizante de rotavirus en las diferentes clases de inmunoglobulinas, siendo las IgG las responsables de más del 90% de esta actividad. En los rumiantes recién nacidos es muy importante la administración de calostro durante los primeros días, ya que es la única vía para adquirir la inmunidad pasiva en estas especies. por ello, en este trabajo se han determinado las inmunoglobulinas que conservan la capacidad de unión al antígeno tras su paso por el tracto gastrointestinal y el tiempo que tardan en perder dicha capacidad una vez alcanzada la circulación sanguínea. Los resultados obtenidos indican que la cantidad de inmunoglobulinas absorbidas es menor del 20% de total de las ingeridas durante la primera media hora de vida. Además, las IgG absorbidas pierden su capacidad de reconocer a los antígenos de forma muy rápida durante los cuatro primeros.

Autor: GRACIA LOSTAO ANA ISABEL.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En la memoria de Tesis presentada se han abarcado cuatro problemas de enorme interés en el estudio de las flavoproteínas que han sido escasamente estudiados, como es el mecanismo de unión de las flavinas a las apoproteínas; la energética de los complejos que determinan, mediante la cuantificación de la contribución energética de cada parte del cofactor a la estabilidad de la holoflavoproteína y realizando un estudio termodinámico-estructural del estado de transición de los complejos; el estudio de modulación de potenciales rédox de las flavinas por las apoproteínas; y la determinación del residuo que actúa como entrada de electrones a la flavina en la apoproteína. Para este trabajo se han elegido la flavodoxina de la cianobacteria Anabaena PCC 7119 como modelo de estudio puesto que su gen está clonado y la proteína recombinante se expresa con buenos rendimientos. Para ello se han determinado las constantes de disociación y las constantes de velocidad de unión de los complejos de apoflavodoxina silvestre y mutantes del sitio de unión con FMN, riboflavina (FMN sin fosfato) y lumiflavina (FMN sin fosfato y sin ribitol) a fuerza iónica y concentración de fosfato variables. Asimismo se han determinado los potenciales rédox de los complejos mutantes y se han analizado la interacción de la proteína silvestre y mutantes con el FMN por calorimetría de titulación a diferentes condiciones para completar el estudio termodinámico del sistema. En este trabajo se han utilizado una gran variedad de técnicas: cinética de flujo detenido, espectrofluorimetría, dicroísmo circular, absorbancia en el UV-Visible, calorimetría diferencial de barrido, manejo de electrodos para determinación de potenciales de óxido-reducción, manejo de sistemas de anaerobiosis, fotólisis por pulso de láser, espectroscopía paramagnética electrónica, cultivos de células a mediana escala y otras. El cumplimiento de estos cuatro objetivos ha contribuido a entender como dos moléculas sin actividad biológica individual (la apoflavodoxina y el FMN) interaccionan y modifican sus propiedades para convertirse en una proteína funcional: la holoflavodoxina, capaz de intercambiar electrones con otras proteínas de cadena fotosintética.

Autor: CALLEJA RODRIGUEZ LUCIA.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: VETERINARIA.

Resumen: El primer objetivo de este estudio fue estudiar si el aceite de oliva ejerce un efecto sobre la concentración de lipoproteínas de alta densidad (HDL) y en particular sobre su apolipoproteína A-I y si este efecto está influido por el contenido graso de la dieta y regulado por la expresión hepática de su RNAm en ratas. Por otra parte se ha analizado la influencia de los cambios de esta apolipoproteína en el desarrollo de la lesión aterosclerótica en ratones genéticamente predispuestos para padecerla. De los resultados obtenidos, su discusión e interpretación pueden deducirse las siguientes conclusiones: . El estudio del colesterol plasmático en roedores, indica que la grasa poliinsaturada tiene un importante efecto hipocolesterolémico. El comportamiento de este tipo de dieta, en ratones, está influenciado por el sexo. En ratas, este descenso del colesterol es fundamentalmente debido a la disminución del colesterol transportado por las HDL. El efecto hipocolesterolemiante de la dieta monoinsaturada de aceite de oliva en ratas es más discreto y no está asociado al descenso del colesterol de las HDL. La elevación del colesterol de las HDL con dietas enriquecidas en grasas monoinsaturadas se aprecia más en el cerdo, lo que indica que es una respuesta compartida entre las diferentes especies, aunque variable en su intensidad. . Una dieta enriquecida en ácidos grasos poliinsaturados o monoinsaturados, se ha mostrado eficiente en la regulación de la trigliceridemia, en roedores. La falta de dicho efecto en cerdos apunta a una diferente respuesta entre especies en la regulación dietética de la trigliceridemia. . La concentración plasmática de apo A-I está influenciada por el tipo de dieta y por el sexo del animal. Así, en ratas y ratones, las dietas enriquecidas en ácidos grasos poliinsaturados presentan los niveles más bajos de esta apolipoproteína, en tanto que las dietas ricas en grasa saturada o en monoinsaturada de ácido oleico producen un aumento significativo de la apo A-I. En ratones, este incremento no se manifiesta de igual forma en ambos sexos, lo que indica que la influencia del ácido oleico sobre la apo A-I puede estar sometida a influencias hormonales. Este incremento de apo A-I plasmático observado con la dieta monoinsaturada en ratas y ratones es debido principalmente a la expresión de su mRNA hepático e intestinal. Todo ello indica que las diferentes dietas regulan la concentración plasmática de apo A-I a través de diferentes mecanismos y por la implicación diferencial de sus dos órganos de biosíntesis según las especies. . El estudio de la lesión aterosclerótica en los ratones carentes de apo E muestra una diferente susceptibilidad a los distintos tipos de grasa de la dieta en función del sexo. La lesión aterosclerótica de los machos es menor que la de las hembras, pero sin significación estadística. Dentro de las hembras, las lesiones menores corresponden a los animales alimentados con aceite de oliva de la variedad picual o a los alimentados con oleína de palma. Por el contrario en machos, las lesiones menores corresponden a los grupos alimentados con aceite de girasol.

Autor: ANDREU OLTRA ENRIQUE JOSE.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La degradación intracelular de proteínas (DIP) es un proceso fundamental para el metabolismo celular. Esta tesis estudia las vías de DIP que sigue el receptor de LDL, tanto en sus formas normales como en aquellas mutantes que causan hipercolesterolemia familiar (HF). La tesis se estructura en 3 objetivos que han implicado: i) la puesta a punto de la tecnología necesaria para el estudio fenotípico del receptor de LDL; ii) El desarrollo de un nuevo método no radiactivo, basado en el empleo de oro coloidal, para valorar la expresión del receptor de LDL funcional en células en cultivo. Este nuevo método se ha empleado con éxito en el diagnóstico fenotípico de enfermos de HF. por último, iii) se ha caracterizado la mutación C358Y que afecta al receptor de LDL, clasificándola como de clase 28 y de clase 5. La forma madura de este receptor mutante se degrada 2 veces más rbapido que la forma madura de receptor normal, siguiendo la vía lisosomal de DIP. La forma precursora, acumulada, en retículo endoplásmico, parece seguir la via del proteasoma.

Autor: RODRIGUEZ VAZQUEZ PILAR.
Año: 1998.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: La Protimosina alfa (ProT) es una proteína acídica nuclear, ampliamente distribuida en tejidos de mamíferos cuya expresión está asociada a los procesos de proliferación y diferenciación celular. En la presente Tesis Doctoral intentamos aproximarnos al conocimiento de la función biológica de la ProT. Para ello, transfectamos células HL-60, una línea celular humana leucémica mieloide, con vectores que expresan el RNA con sentido y antisentido de la ProT. Nuestros resultados indican que la sobreexpresión de la ProT provoca una importante inhibición del proceso de diferenciación en las células HL-60. Además, la sobreexpresión de la ProT provoca un incremento en la tasa de proliferación y en la tasa de síntesis de DNA, mientras que la inhibición de la expresión de la ProT provoca el efecto opuesto. El análisis de las fases del ciclo celular reveló que la sobreexpresión de la ProT causa un acortamiento en la duración de la fase G1. Por otra parte, el tratamiento de las células HL-60 no transfectadas con oligonucleótidos antisentido de la ProT induce en ellas un mecanismo de muerte celular mediante apoptosis. Finalmente, analizamos el efecto de la ProT sobre la estructura de la cromatina. Encontramos que en las células que sobreexpresan ProT, la accesibilidad de la nucleasa micrococal a la cromatina está fuertemente incrementada. En la escalera de DNA generada mediante la actividad de la nucleasa, el tamaño del mononucleosoma (146 pb, el fragmento de DNA unido al octámero de histonas) y sus multímeros corresponden al de los nucleosomas sin histona H1. El porcentaje de cromatina depleccionada en H1 es superior en las células que sobreexpresan ProT. Basándonos en estos resultados, proponemos una función biológica para la ProT en la remodelación de las fibras de cromatina a través de su interacción con la histona H1.

Autor: EZQUERRO SAENZ IGNACIO JOSE.
Año: 1998.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El factor transformante de crecimiento beta 1 (TGFbeta1) está asociado a los procesos de fibrosis y en particular a la cirrosis hepática. Por este motivo es de gran interés desarrollar inhibidores de esta citoquina. Se especuló que péptidos sintéticos correspondientes a secuencias del propio TGFbeta1, como de sus receptores, podrían bloquear la actividad biológica del TGFbeta1. Para este fin, se sintetizó un gran número de péptidos de aproximadamente 14 aminoácidos procedentes de diversas proteínas: TGFbeta1, receptor de tipo III del TGFbeta1, receptor tipo II del TGFbeta1, endoglina, fetuina y alfa2-macroglobulina. Estos péptidos se ensayaron en cuanto a su capacidad de inhibir el efecto del TGFbeta1 sobre el crecimiento in vitro de la línea celular MV-1-Lu. Se encontró que algunos péptidos eran capaces de inhibir al TGFbeta1 tanto en el ensayo biológico como en ensayos de bloqueo de la unión a sus receptores, medida por citometría de flujo o marcaje con TGFbeta1 radiactivo. Uno de los péptidos activos (p144) provenientes del receptor III del TGFbeta1 se administró subcutáneamente en la zona abdominal, a ratas Wistar, a la dosis de 70megas por animal, tanto durante el proceso de inducción de cirrosis con CC14, como al final de este proceso. Se observó que el p144 no fue efectivo al final del proceso de inducción de cirrosis. Sin embargo, la administración de 70megas de p144 por rata en días alternos durante la inducción de cirrosis experimental, fue capaz de inhibir la formación de fibrosis en forma significativa (p

Autor: ALORIA ESCOLASTICO KERMAN.
Año: 1998.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Las propiedades biológicas de las proteínas están determinadas por su estructura tridimensional. La adquisición de la estructura tridimensional de algunas proteínas requiere la mediación de otras proteínas denominadas chaperonas moleculares. Entre las proteínas que necesitan la ayuda de las chaperonas moleculares se encuentra la tubulina, la subunidad estructural y funcional del microtúbulo. Este trabajo pretende profundizar en el estudio del plegamiento de la tubulina y caracterizar el papel de la proteína p14 o cofactor A, primer cofactor identificado que participa en el proceso de plegamiento de tubulinas "in vitro". Los resultados obtenidos en el estudio de la relación estructura-función de la proteína p14 indican que ésta forma complejos estables con la B-tubulina y que la interacción se produce a través de 3 regiones de la p14. Además, se ha observado que la región 49-78 de la p14 y la región hélice-vuelta-hélice del dominio J de DnaJ tiene una posible homología estructural y quizá funcional en la unión a B-tubulina y DnaK respectivamente. También se ha estudiado la posible función de la p14 "in vivo", indicando los resultados obtenidos que la función de la p14 podría ser la de aumentar la producción de heterodímeros de tubulina cuando un mayor aporte de éstos sea requerido por la célula, como en el caso de la generación de los microtúbulos específicos del "manchette" y del flagelo durante la espermiogénesis, y también la de servir como reservorio de tubulina funcional.

Autor: COPADO JIMENEZ MARCO ANTONIO.
Año: 1998.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La AFP es una proteína que aparece en periodos embriofetales y desaparece en el adulto, reexpresándose en algunos tumores y otras enfermedades. Esta proteina es transportadora, principalmente de ácidos grasos, yuhasta ahora se pensaba que uno de sus ligandos principales era el docosa-hexenoico, pero las técnicas usadas en ete trabajo demuestran que al menos esta AFP en pollo transporta escualeno y no docasa-hexenoico. También se han caracterizado los recepteros de esta proteína y se han puesto de manifiesto algunas propiedades fisio-químicas. Por último, se ha hecho el estudio de su internalización y se ha visto lla falta de diferenciación de la retina mediante cultivo in-vitro de forma gradual al inmovilizar esta proteína con anticuerpos. En cuanta a la SA es una proteína muy similar a la AFP, pero a diferencia de ésta, también está presente en el adulto. En esta Tesis se han obtenido diversos parámetros que ponen de manifiesto nuevas diferencias con respecto a la AFP.

Autor: BOHN SARMIENTO URIEL.
Año: 1998.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA.
Centro de lectura: CIENCIAS MEDICAS DE LA SALUD.

Resumen: El oncogén HER2/neu (también llamado erbB2) codifica para una glucoproteína transmembranal de 185 kDa(p185), que es un receptor de factor de crecimiento con actividad tirosina quinasa intracelular. En humanos la amplificación génica (número extra de copias) del HER-2 conduce a la sobreexpresión de la p185. La sobreexpresión de la oncoproteína facilita la formación de homodímeros y de heterodímeros con otros miembros de la familia de receptores con actividad tirosina quinasa tipo I (receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y homólogos (HER3 y HER4), la autofosforilación del receptor y la subsecuente activación de sustratos con actividad quinasa envueltos en los mecanismos de transducción de señales, y que eventualmente afectarán la transcripción de genes que regulan la progresión de ciclo celular. En el cáncer de mama se ha descrito que entre un 5 y un 40% de los tumores de una serie presentan el oncogén HER2 amplificado y/o la p185 sobreexpresada. La sobreexpresión del oncogen HER2 (llamado también erbB2 o neu) juega un papel significativo en la patogénesis del cáncer de mama, y es un suceso que es considerado comunmente como un indicador de mar pronóstico. La sobreexpresión del HER2 ha sido también asociada a sensibilidad y/o resistencia a la terapia hormonal y a regímenes quimioterapéuticos, incluyendo CMF (ciclofosfamida, metotrexato y fluouracilo) y antraciclinas. La mayoría de los estudios sobre la expresión de este oncogén se han realizado mediante procedimientos cualitativos o semicuantitativos, tales como inmunohistoquímicas y western blot. En este trabajo hemos analizado cuantitativamente la p185 mediante un procedimiento tipo ELISA y estudiado su posible utilidad pronóstica en 217 pacientes con cáncer de mama con gánglios positivos. Las características de las pacientes de la serie se correspondían con las de la mayoría de las series en las que los tumores eran detectados por la propia paciente. Utilizando como punto de corte 260 fmol/mg proteína (previamente validado por nosotros), el 17,5% de los tumores presentaron la p185 sobreexpresada. La oncoproteína se asoció negativamente con el grado histológico y el contenido en receptores de estrógenos y de progesterona, y positivamente con el contenido en catepsina D. Con una mediana de seguimiento de 50 meses (rango: 10-90 meses, en el análisis univariante de la supervivencia libre de enfermedad y de la supervivencia global mostró que el grado histológico, el tamaño del tumor, el número de glánglios infiltrados, la p185 y los receptores estrogénicos eran las únicas variables asociadas con el comportamiento clínico de las pacientes. En el análisis multivariante, sin embargo, sólo el tamaño del tumor, el número de gánglios afectados, la p185 y los receptores de estrógenos permanecieron asociadas con la evolución de las pacientes. Las pacientes con la p185 sobreexpresada tenían un riesgo, tanto de recaída como de muerte por la enfermedad, de más de dos veces el que tenían las pacientes con la p185 normal. En base a los datos obtenidos, se puede afirmar que la estimación cuantitativa de la p185 es un procedimiento válido para el estudio de esta oncoproteína en el cáncer de mama.

Autor: SOCORRO LOPEZ JESUS MIGUEL.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.

Resumen: El presente Trabajo de Investigación versa sobre el estudio de la interacción del aluminio con la hexoquinasa. Primeramente se caracterizó la interacción in vitro. El metal se une preferencialmente a la proteína a las concentraciones más bajas, revirtiéndose el efecto al aumentar la concentración. La proteína tiende a formar especies de masa molecular alta, probablemente tetrámeros, hasta que a partir de la relación molar metal/proteína 187,5, la proteína se presenta únicamente en forma monométrica. El metal produce un cambio en la estructura tridimensional de la proteína que expone una población de triptófanos más externa y lleva al exterior gran cantidad de zonas hidrofóbicas. Este cambio conformacional, se traduce en pérdida de hélice alfa en la estructura secundaria de la proteína, lo cual genera una nueva estructura termorresistente. El análisisde la temperatura a la cuál la pérdida de hélice alfa es del 50% (Tm), supone un valor de 49 para la hexoquinasa de levadura nativa. El cambio conformacional y el proceso de monomerización provocan un descenso de la actividad de la hexoquinasa, llegando a ser la pérdida de actividad del 87%. El aluminio inhibe a la hexoquinasa, tanto cuando el sustrato variable es la glucosa como el ATP; en el caso del ATP, se observa que hasta el cambio conformacional apenas existen modificaciones, mientras que tras el cambio conformacional se produce una inhibición mayor. Respecto al estudio in vivo, se administró aluminio de forma subaguda a ratas Wistar comprobándose que el aluminio se incrementa progresivamente en el cerebro de la rata. Este hecho no produce daños tisulares pero sí importantes alteraciones en la ultraestructura celular. Se aisló la enzima de cerebro de rata. La actividad específica de la enzima muestra leves variaciones. La caracterización de las estructuras terciaria y secundaria de la isoenzima tipo I aislada, reveló una gran similitud con la isoenzima de levadura, obteniéndose un valor de Tm próximo a los 50 C.

Autor: SEGOVIA AZCORRA MARIA.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Se ha estudiado si la acumulación fenólica en los talos del líquen objeto de estudio esta fotorregulada, bien por un mecanismo fotomorfogénico (mediado por fitocromo) o bien por un mecanismo fotosintético (mediado por fotorreceptores fotosintéticos). Para ello se analizó el comportamiento de las variables relacionadas con uno u otro proceso. Las conclusiones que se obtuvieron al finalizar este trabajo fueron que la acumulación fenólica parace estar relacionada con la fotosíntesis (tasa de transferencia electrónica e incorporación de dióxido de carbono) mientras que la fotomorfogénesis sería responsable de la activación de otras vías, en las que se producirían variaciones en los niveles de AMPc y calcio.

Autor: CRUZ RODRIGUEZ ANTONIO.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: El surfactante pulmonar es un complejo lipoprotéico cuya función principal es modular la tensión superficial en la capa acuosa que recubre los alveolos pulmonares, estabilizando la superficie respiratoria. Se ha comprobado que las proteínas hidrofóbicas del surfactante SP-B y SP-C son esenciales para su función biofísica, aunque no se dispone de un modelo que explique, a nivel molecular, la participación de estas proteínas en la dinámica respiratoria. En la presente Tesis Doctoral se ha caracterizado la estructura de SP-B y SP-C en diferentes medios incluyendo disolventes orgánicos y sistemas fosfolipídicos, utilizando técnicas espectroscópicas. También se han caracterizado las interacciones de ambas proteínas con vesículas fosfolipídicas y la estructura de los correspondientes complejos lipoprotéicos. Para llevar a cabo esta caracterización se utilizaron técnicas espectroscópicas como la emisión de fluorescencia o la resonancia de espín electrónico. Por último se ha analizado la interacción de las proteínas SP-B y SP-C con monocapas de fosfolípido como modelo de los sistemas tensoactivos, caracterizándose el efecto de la presencia de ambas proteínas en la cinética de formación de monocapas interfaciales y en el comportamiento dinámico de éstas cuando son sometidas a compresión. Como resultado final se plantea un modelo que trata de explicar el mecanismo molecular mediante el cual SP-B y SP-C facilitan la dinámica respiratoria.

Autor: MARTIN PARRA JUAN ANTONIO.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Se han evaluado los efectos producidos por los metales Berilio y Vanadio sobre la Lisozima a distintos niveles, desglosando el trabajo en dos partes bien diferenciadas; un estudio a nivel molecular, llevadoa cabo en disolución, en el que se ha observado la influencia de la presencia de Berilio y Vanadio sobre la estructura y función de la enzima, relacionando éstos con determinados aspectos termodinámicos del sistema (estudios in vitro), y un estudio que ha tomado como base la exposición de animales de experimentación a ambos metales, mediante diferentes vías de administración, dosis y periodos de tratamiento (estudios in vivo). En el primero se ha detectado una interacción de los cationes metálicos con el centro activo de la enzima, sin que se produzcan modificaciones estructurales significativas en la misma. También se ha observado la aparición de estructuras diméricas por la presencia de ambos cationes en el medio y la existencia de una cooperatividad negativa en la interacción de ambos metales con los sitios de unión de estos metales para la enzima. En el estudio in vivo se ha detectado una influencia directa de la acumulación de ambos metales en órganos como bazo, pulmón o riñón sobre la concentración de la enzima, paralelamente a la aparición de efectos de toxicidad renal y hepática en algunos casos. Los efectos producidos en el tratamiento agudo y subagudo con cada uno de los dos metales son drásticamente diferentes en cuanto a los niveles de toxicidad observados y también parecen encontrar correlación con la cantidad de metal acumulado en cada caso. La exposición a los animales de experimentación a estos metales mediante ruta oral e intraperitoneal también revela una diferenciación de absorción o de disponibilidad de ambos cationes en función de la vía de administración.

Autor: LUQUE GONZALEZ CARLOS MANUEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El objetivo a llevar a cabo durante esta tesis ha sido el clonaje y caracterización de un grupo particular de isoformas de la proteína 4.1, aquellas codificadas por mRNAs que carecen del primer sitio de iniciación de la traducción (ATG-1), situado en el exón 2 del gen de 4.1, determinando su composición exónica y su localización intracelular, haciendo especial hincapié en las isoformas con distribución nuclear. Para identificar las señales responsables de la localización subcelular de las diferentes isoformas, se ha llevado a cabo un estudio comparativo entre estas y otras isoformas de 4.1 clonadas en el laboratorio, y de combinaciones de las mismas generadas por técnicas de DNA recombinante. Se ha demostrado que en la línea celular linfoide MOLT-4 coexisten al menos 7 isoformas diferentes de la proteína 4.1 que no se sintetizan a partir del primer sitio de iniciación de la traducción situado en el exón 2 del gen de la proteína 4.1. Estas isoformas se distribuyen predominantemente en el núcleo o en el citoplasma de la célula dependiendo de su composición exónica. Así mismo, en este trabajo se demuestra por vez primera la funcionalidad de un tercer sitio de iniciación de la traducción (ATG-3) localizado en el exón 8 del gen de la proteína 4.1, responsable de la traducción de isoformas de 4.1 de tamaños inferiores a 80 kDa. Por otro lado, se constata la existencia en el núcleo de la célula de isoformas de la proteína 1.4 de tamaño y propiedades bioquímicas distintas. Así, la isoforma 4.1H, con un peso de 80 kDa, pertenece al grupo de proteínas 4.1 que se extraen con Triton X-100, y la isoforma 4.1N, de 55 kDa, es un componente de la matriz nuclear. Las isoformas nucleares de la proteína 4.1 presentan varias señales de localización nuclear actuando de forma cooperativa. La región central de la proteína 4.1, entre las metioninas de los exones 8 y 17, es capaz de localizarse en el núcleo de la célula por sí misma. Cuatro aminoácidos básicos (KKKR) codificados por la unión de los exones 13 y 16 de la proteína 4.1 son necesarios y suficientes para la localización nuclear de las isoformas traducidas a partir del ATG-2. La presencia del dominio de asociación a proteínas de membrana (FERM) favorece la localización citoplasmática de la proteína 4.1. En ausencia de los aminoácidos codificados por el exón 5, las isoformas traducidas a partir del ATG-2 muestran una localización predominantemente nuclear. La presencia de un dominio FERM completo, que incluye a esos aminoácidos, es suficiente para retener a estas isoformas en el citoplasma, siempre que no expresen también los cuatro aminoácidos básicos (KKKR) codificados por la unión de los exones 13 y 16. El dominio N-terminal de las isoformas de la proteína 4.1 traducidas a partir del ATG-1 es suficiente para retener a la proteína 4.1 en el citoplasma, cualquiera que sea su composición exónica. Por lo tanto, la localización subcelular de cada isoforma es el resultado de la competición entre las diferentes regiones de la proteína 4.1, siguiendo un orden jerárquico. Así, las isoformas traducidas a partir del ATG-3 presentan una distribución nuclear. Las isoformas traducidas a partir del ATG-2 son nucleares siempre que carezcan de los aminoácidos codificados por el exón 5, o bien si incluyéndolos, poseen también los cuatro aminoácidos básicos (KKKR) codificados por la unión de los exones 13 y 16. Finalmente, la expresión de los 209 aminoácidos del dominio N-terminal propio de las isoformas traducidas a partir del ATG-1 determina una distribución mayoritariamente citoplasmática en todas las configuraciones exónicas estudiadas. Finalmente, el hecho de que varias isoformas se localicen a la vez en diversos comportamientos subcelulares sugiere la existencia de mecanismos de regulación modulando a las múltiples señales de localización distribuídas a lo largo de la proteína 4.1.

Autor: TEJERO DIEZ PEDRO.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Este trabajo es un esutdio de la funcionalidad de GAP43, proteína implicada en guía y extensión axonales en neuronas de hipocampo de rata en cultivo. Analizando las alteraciones de diferentes aspectos de la biología molecular de GAP43 (localización subcelular, fosforilación e interacción con otras proteínas), en respuesta a tratamientos que afectan la extensión axonal, proponemos un modelo de actuación de GAP43 en la célula que implica un ciclo entre las diferentes fracciones subcelulares dependiente de su fosforilación e interacción con otras proteínas.

Autor: SANZ FERNANDEZ MIGUEL ANGEL.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Las proteínas 6K del SFV y del SV son capaces de inducir cambios de permeabilidad a higromicina B cuando se sintetizan, tanto en bacterias como en células de mamífero. Un mutante de deleción en 6K del SV presenta defectos en el procesamiento de la poliproteína precursora de las glicoproteínas virales. Este defecto va acompañado de cambios en la maduración y transporte a membrana celular de las glicoproteínas virales que le hacen inviable. Psudorevertientes viables de este mutante presentan un procesamiento del precursor similar al wt, pero aún difieren de éste por su fenotipo de placa pequeña. La complementación de los pseudorevertientes con una 6K genuina expresada en trans no revierte el fenotipo de placa pequeña. Los replicones diseñados, basados en el genoma del SV que expresan "C + proteína heteróloga" permiten una síntesis abundante de proteínas recombinantes en células de mamífero. Estos replicones permiten un análisis rápido y eficaz de los cambios de permeabilidad de las proteínas heterólogas. Se ha clonado el genoma completo del virus de la polio dentro de un replicón del SV. El estudio de mutantes no viables del virus de la polio se ve facilitado por el empleo de este replicón.

Autor: VILLANUEVA ROIG JOSE HELIODORO.
Año: 1998.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Autor: SANCHO MOLINA M. CARMEN.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este trabajo se ha abordado la caracterización de proteínas de membrana del virus Vaccinia alteradas en virus mutantes fuertemente atenuados que han sido aislados de infecciones persistentes en cultivos celulares. En primer lugar, se ha caracterizado la fase del ciclo biológico responsable de la reducida infectividad de estos virus mutantes en cultivos celulares. Así, se ha demostrado que estos mutantes son defectivos en diseminación viral debido a su incapacidad para envolverse con membranas del aparato Golgi y producir virus extracelular envuelto. En segundo lugar, se ha identificado y caracterizado una glicoproteína estructural de 39 kDa (gen A4L) que aparece modificada en estos virus mutantes. Esta glicoproteína se localiza en la superficie externa del core viral y peretenece al grupo de proteínas citoplasmáticas modificadas por la adición de N-acetilglucosamina unida por enlace O-glicosídico. Los virus mutantes producen una proteína mutante que contiene mutaciones puntuales que afectan las propiedades estructurales y antigénicas de esta glicoproteína viral. Sin embargo, estas mutaciones no parecen estar afectando de una forma significativa la capacidad infectiva de estos virus en cultivos celulares. Por último, se han caracterizado las alteraciones ourridas en una proteína de 14 kDa (gen A27L) implicada en los procesos de entrada del virus a la célula, en la producción de virus envuelto necesario para que la salida del virus de la célula sea rápida y eficaz y para la fusión celular inducida por el virus Vaccinia. Se han identificado las mutaciones que ocurren en esta proteína en los virus mutantes y se ha analizado el efecto de estas mutaciones en los distintos aspectos de la biología del virus que han sido relacionados con esta proteína. De estos estudios se concluye que esta proteína posee diferentes funciones que pueden ser separadas. Así, mientras su función en el proceso de envoltura es fuertemente inhibida por las mutaciones detectadas, su función en la entrada viral e inducción de fusión celular no es apenas afectada..

Autor: ORTEGA LAHUERTA JOAQUIN.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Ribonucleoproteínas (RNPs) del virus de la gripe se reconstituyeron in vivo a partir de cDNA clonados que expresan las tres subunidades de la polimerasa y la nucleoproteína viral y RNAs molde de escasa longitud. La estructura de la RNPs purificadas se expresó por microscopía electrónica y procesamiento de imágen. Se obtuvieron estructuras circulares y eliticas en las cuales se puede definir la NP y el complejo de la polimerasa viral. Comparación de la estructura de las RNPs con varias longitudes indicó que cada número de NP interacciona con aproximadamente 24 nucleólidos. El análisis de la amplificación de RNPs con diferentes longitudes mostró que aquellas con la mayor eficiencia de replicación contienen un número par de monómeros de NP, sugeriendo que la NP se incorpora como dímero a las RNPs de nueva síntesis..

Autor: SABARIEGOS JAREÑO M. ROSARIO.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La proteína RecN de Baccillus subtilis se ha purificado a homegeneidad y se ha caracterizado tanto bioquímica como biofísicamente. RecN parece ser un octámero en solución y tiene una estructura típica de las proteínas de compactación de cromosomas. Desde el punto de vista bioquímico RecN tiene una actividad ATPasa débil independiente de DNA y una actividad DNAasa independiente de ATP. RecN tiene tanto en DNA de cadena sencilla como doble una actividad endonucleasa sin polaridad preferente. RecN corta sólo en una de las cadenas del DNA, haciéndolo en secuencias preferentes que son zonas ricas en G+C. Debido a estas actividades posiblemente RecN tenga la función de generar el sustrato para el inicio de la recombinación homóloga..