PROTEINAS, 13

Autor: RICHARD RODRIGUEZ EVA M..
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .

Resumen: EN dicho trabajo se ha abordado el estudio de las bases moleculares de la AP, en primer lugar caracterizando los niveles de mRNA y de la proteína inmunorreactiva a cada una de las dos subunidades a y b del enzima PCC. Este estudio ha permitido identificar el gen responsable de la deficiencia, completando la clasificación de los pacientes en los dos grupos de complementación genética, así como correlacionar los datos obtenidos con los resultados del análisis molecular. Una vez clasificados los pacientes, el segundo objetivo ha sido el análisis molecular del gen PCCA, identificándose 10 mutaicones diferentes 8 de ellas nuevas. Asimismo, se han analizado mediante mutantes de deleción los dominios de la subunidad a implicados en la interacción heteromérica con la subunidad b, concluyendo que los 71 aminoácidos carboxiterminales de la subunidad a intervienen en dicha interacción. Otro aspecto fundamental del trabajo ha sido la optimización de un sistema de expresión in vitro de la subunidad a, analizando su síntesis, importe mitocondrial y estabilidad. Dicho sistema ha servido para estudiar el efecto de la mutación M348K, la más frecuente en los pacientes estudiados, concluyendo que la proteína mutante aunque se sintetiza, se importa y procesa correctamente, es altamente inestable en el interior de la mitocondria..

Autor: MARTIN SERRANO JUAN .
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: DAB389CD4 es una inmunotoxina en la que se ha sustituido el dominio receptor de la toxina diftérica por los dominios D1 y D2 del CD4 humano, de forma que la proteína resultante elimina selectivamente las células infectadas por el VIH, ya que el dominio 1 de CD4 interacciona con la proteína de la envuelta del VIH, gp120, la cual se expresa en la membrana de las células infectadas por el virus. En la presente Tesis Doctoral se describe la actividad antiviral frente al VIH de DAB389CD4 y también se describe el mecanismo de inmunosupresión de la inmunotoxina. En la Tesis se demuestra que DAB389CD4 tiene una actividad anti-VIH muy potente en linfocitos aislados de pacientes con SIDA, en los cuales erradica las células infectadas pro el VIH de forma selectiva. También se demuestra que DAB389CD4 es activa frente a macrófagos infectados por el VIH y que no es tóxica para es población celular, describiéndose también que existe un fuerte efecto sinérgico entre DAB389CD4 y el inhibidor de la protesa del VIH Ritonavir. También hemos analizado la eficacia antiviral de DAB389CD4 en el modelo animal hu-PBL-SCID y observamos que la inmunotoxina disminuye la carga viral del VIH en los ratones infectados. Cuando hemos estudiado el efecto de DAB389CD4 en la activación linfocitaria observamos que DAB389CD4 tiene un efecto inmunosupresor in vitro cuando los linfocitos son activados a través del complejo TCR-CD3 debido a la inhibición de la producción de Interleuquina 2 en el cultivo. Finalmente, demostramos que DAB389CD4 tiene una conformación dimérica en solución que le permite interaccionar in vitro con moléculas HLA de clase II con mayor afinidad que las formas solubles de CD4 y este hecho explicaría el efecto inmunosupresor descrito..

Autor: JIMENEZ SARMIENTO MERCEDES.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Se ha descrito un nuevo anticuerpo, mAb8, que en distintos organismos reconoce antígenos asociados a estructuras implicadas en la división cuya distribución es dependiente del ciclo celular y está conservada. Asimismo, se han descrito las secuencias proteicas correspondientes en Parascaris univalens y Schizosaccharomyces pombe de 84.2 y 141.8 kD, respectivamente. Ambas presentan homologías con proteínas tipo miosina y tienen capacidad para formar filamentos enrollados o "colied-coli". Los resultados obtenidos a partir de la interrupción del gen responsable en Schizosaccharmyces pombe denominado alml permiten concluir que Alml es importante, aunque no esencia para la división mitótica, resultando necesaria para la germinación de las esporas. Alml es un nuevo componente de la región media en Schizosaccharomyce pombe que puede estar involucrado en los mecanismos celulares implicados en la segregación nuclear al inicio de la mitosis..

Autor: HERNANDEZ RAMIREZ GRECO .
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: LA síntesis de proteínas en eucariontes es un proceso complejo que consiste en tres etapas principales, la iniciación, la elongación y la terminación. De ellas, la iniciación es la fase limitante y la más frecuentemente sujeta a regulación. Todos los mRNAs eucariontes poseen en su extremo 5' una estructura llamada cap (m7GTPN, donde N es cualquier nucleótido), y que es reconocida por el factor de inicio de la traducción eIF4E. Este factor, en complejo con el eIF4G, que es una proteína adaptadora y con el eIF4A, que se encarga de desnaturalizar la estructura secundaria presente en la región no traducida 5' de los mRNAs, regulan la entrada de los mRNAs al ribosoma. En Drosophila melanogaster, ninguno de estos factores había sido clonado, ni tampoco se conocía la estructura genómica de los genes de estos factores. Los objetivos de esta tesis doctoral dueron caractrizar y clonar tanto los cDNAs como los genes de los factores eIF4E, eIF4G, eIF4A y eIF4B de Drosophila, así como el estudio de la expresión de dichos genes. También determinamos el patrón de la presencia de los mensajeros de estos genes durante el desarrollo. El eIF4E es codificado por un gen de copia única que expresa tres mRNAs diferentes, que a su vez codifican dos isoformas de la proteína, una de ellas no identificada previamente. Los mensajeros de este factor se expresan ubicua y heterogeneamente en el embrión durante el desarrollo, con una acumulación preferencial en las células polares. La proteína es esencialmente citoplasmática. El eIF4G es una proteína codificada por un gen de copia única de 16 kb, que expresa un solo mRNA y que codifica a una proteína de 180 kDa. El eIF4A es un solo polipéptido que es codificado por dos diferente mRNAs que son producidos por un splicing alternativo en la región 3' no traducida, y cuyo extremo amino interacciona con el eIF4G. El eIF4B es codificado por un sólo mRNA..

Autor: HERNANDO MONGE EVA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .

Resumen: Los Parvovirus son virus icosahéricos con genomas DNA que replican su genoma y maduran en el núcleo de la célula. La infección por Parvovirus requiere funciones celulares expresadas transitoriamente durante la fase S del ciclo celular. Hemos analizado si la localización subcelular de las proteínas VP1 y VP2 de la cápsida del Parvovirus MVM es ciclo celular dependiente. En células A9 o 4K, permanentemente transfectadas con el gen VP de MVM, arrestadas por confluencia del cultivo (fase G1), las VPs se sitúan exclusivamente en el citoplasma. Resultados similares se han obtenido sincronizando mediante privación de suero (GO), o de isoleucina seguida de la adición de afidicolina (transición G1/S). Sin embaergo, cuando las células se liberan del arresto, las proteínas VPs se localizan progresivamente en el núcleo de las células coincidiendo con la entrada en fase S (monitorizada por expresión de PCNA). Además el doble bloqueo con timidina retiene a las VPs en el citoplasma, pese a la expresión y localización nuclear normal de PCNA: Por tanto, la traslocación al núcleo de las proteínas estructurales del MVM requiere la síntesis del ADN CELULAR: Esta regulación ciclo-dependiente del transporte es ejercida asimismo sobre el transporte de las proteínas sintetizadas de novo en la infección por MVM. VP1 y VP2 presentan requerimientos distintos para su transporte nuclear. Cuando se expresan por separado, VP2 pero no VP1 se transporta al núcleo independientemente de la fase del ciclo celular. En coexpresión de ambas proteínas, la interacción con VP2 enmascara funcional y físicamente, entre la NLS de VP1, posiblemente, el transporte al núcleo opera por cambios conformacionales que exponen la NLS de VP2 y de VP1 para su interación con la maquinaria de transporte. El tipo de fosforilación de VP2 no cambia significativamente a lo largo del ciclo, ni requiere la presencia de las proteínas no estructurales. Por el contrario, VP1 experimenta una defosforilación progresiva desde su síntesis, que sucede en algún estadío anterior al esamblaje en cápsulas, y de forma casi definitiva durante la ecapsidación del ADN viral..

Autor: ESCOLAR BLASCO LUCIA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Se ha caracterizado el mecanismo de represión empleado por la proteína Fur para inhibir el inicio de transcripción en regiones promotoras reguladas por hierro. El represor y la ARN polimerasa compiten por la unión a secuencias solapantes en la zona promotora. Ambas proteínas son sustituidas una por otra en los promotores regulados, de acuerdo únicamente con la concentración de hierro. La interacción de Fur con el ADN ha sido también estudiada. La proteína reconoce sus secuencias de unión sobre el ADN como repeticiones de 6 pb GATAAT y no como secuencia pal indrónicas. La repetición de esa secuencia genera sitios FUR extendidos con mayores afinidades por la proteína como resultado de una ocupación cooperativa del conjunto de repeticiones. Se ha determinado que un mínimo de tres repeticiones son necesarias para una unión estable de Fur al ADN in vitro, aunque la disposición necesaria in vivo son dos repeticiones directas y una tercera inversa. Esta reinterpretación de la caja Fur ha permitido dar una explicación coherente a los datos publicados..

Autor: CEBRIAN BAUX ANA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La muerte celular programada o apotosis es un proceso fisiológico de regulación del número de células que elimina aquellas no deseadas o potencialmente peligrosas como linfocitos autorreactivos, células autoinmunes o células infectadas por virus. Un gran número de virus codifican proteínas reguladoras de este tipo de muerte. El virus de la peste porcina africana, un deoxivirus icosaedrico de la familia Asfarvirdae, hemos demostrado que induce apoptosis y codifica dos fases de lectura abierta implicadas en la regulación de dicha muerte celular, la A224L y la A179L, objeto del trabajo de esta tesis. La caracterización del gen A179L así como de la proteína codificada por dicho gen nos ha permitido determinar que pA179L es una proteína homóloga a las proteínas de la familia de Bel-2 reguladoras de la apoptosis, indispensable en el ciclo de replicación del VPPA y que se expresa tanto a tiempos tempranos como tardíos de la infección. Por distintas aproximaciones hemos demostrado que pA179L es capaz de inhibir tanto la apoptosis inducida en células de mamífero, utilizando inhibidores de la síntesis de macromoléculas, como la apoptosis inducida por la infección de virus. Además por ensayos de mutagénesis dirigida hemos demostrado que pA179L inhibe la apoptosis con un mecanismos similar al del BcL-2 puesto que los dominios estructurales de pA179L BH1 y BH2 son indispensable para la función de la proteína, al igual que está descrito para otras proteínas de la familia de BCL-2. Por inmunofluorescencia presenta un patrón de localización mitocondrial. Por último hemos demostrado que la expresión de pA179L inhibe la apoptosis inducida por baculovirus en células de insecto y apoya los datos obtenidos en células de mamífero, además implica a la proteína en el mantenimiento del anclaje de las células infectadas a la matriz extracelular minimizando la apoptosis..

Autor: ROPERO SALINAS SANTIAGO.
Año: 1998.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Las proteínas que unen GTP, son transductores de señales, encargadas de transmitir estas señales al interior celular. Estas proteínas se localizan en la membrana plasmática, donde el colesterol juega un papel muy importante regulando la función de algunas proteínas. Este trabajo muestra que la falta de colesterol celular provoca una disminución de la actividad GTPasa de proteínas que ligan GTP, a través de la disminución en su capacidad hidrolítica, ya que no se modifica ni la unión, ni el intercambio de nucleótidos de guanina, favoreciendo un aumento de la cantidad de estas proteínas en su forma unida a GTP, y por tanto activas. Así, se puede concluir que el colesterol en condiciones fisiológicas actúa como un estimulador de la actividad GTPasa de estas proteínas, regulando de este modo los procesos de tranducción de señales en los que están implicadas. Este efecto regulador es poco probable que se ejerza a través de cambios en las caracteristicas de la membrana, ya que el efecto del colesterol es el mismo en membrana plasmática y en proteínas obtenidas tras inmunoprecipitación con anticuerpos específicos.#

Autor: SAGRERA APARISI ANA.
Año: 1998.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es un virus patógeno aviar perteneciente al grupo de los paramixovirus. Posee una envoltura membranosa que rodea a una nucleocápsida helicoidal. La nucleocápsida está formada por una molécula de RNA de polaridad negativa y tres tipos de proteínas: la NP, P y L. La envoltura membranosa consiste en una bicapa lipídica, que deriva de la membrana plasmática de la célula infectada, y tres tipos de proteínas: la proteína F (de fusión) que es una glicoproteína transmembranal, formada por dos subunidades; la proteína HN(Hemaglutinina-Neuraminidasa) que es también una glicoproteína transmembranal, orientada con el dominio carboxiterminal hacia el exterior de la membrana; y la proteína M(de matriz), que no está glicosilada y se dispone en la cara interna de la membrana, formando una especie de armazón. En el trabajo se ha utilizado NDV de la cepa Clone-30, y en concreto, las proteínas HN y M han sido el objeto de estudio. En los que se refiere a la proteína HN, se ha investigado como afecta la desnaturalización térmica a la estructura y función de la misma, empleando para ello diversas técnicas, como son: el estudio de la pérdida de actividad enzimática, la influencia en el "binding" del virus a membranas, microcalorimetría diferencial de barrido, y cambios en la fluorescencia intrínseca del triptófano. Para los estudios se ha utilizado proteína HN en diferentes formas: en el NDV intacto, en envolturas solublizadas, en envolturas reconstituidas y la fracción globular soluble, correspondiente al dominio carboxiterminal externo de la proteína (CT-HN). Por este motivo, como paso previo, se ha desarrollado un sistema de obtención y purificación de la CT-HN, eliminando así los problemas que plantea el estudio de proteínas de tipo transmembtanal, que en ausencia de detergente tienden a agregar. Se ha llevado a cabo también la caracterización cinética de la actividad sialidásica de la proteína HN en NDV de tres cepas distintas (Clone-30, Hitchner B1 y California), describiendo por primera vez el modelo cinético de Inhibición por sustrato para la cinética en el caso de la cepa Clone-30 (hasta el momento considerada de tipo Michaelis-Menten). Por último, y mediante técnicas de biología molecuar, se ha amplificado por PCR el gen hn, que codifica la proteína HN, y se ha clonado y secuenciado. Conocida la secuencia hemos obtenido el perfil de hidrofobicidad de la proteína y basándonos en análisis comparativos con otras cepas, hemos llevado a cabo una predicción de la estructura secundaria. Para la proteína M, se ha investigado la influencia que el tipo de solvente, así como de la fuerza iónica del mismo,tienen en la agregación de la proteína, y la reversibilidad de dicho proceso. Mediante el empleo de microcalorimetría diferencial de barrido, y mediante estudios de fluorescencia, ya sea analizando los cambios en la fluorescencia intrínseca del triptófano, como las variaciones en las formas espectrales del mismo, se ha analizado el efecto que la desnaturalización térmica provoca en la estructura de la proteína. Las técnicas de fluorescencia se han aplicado también al estudio de la estabilidad de la proteína frente al pH. Finalmente, las técnicas de biología molecular, nos han permitido amplificar por PCR el gen m, que codifica la proteína M, clonarlo y secuenciarlo. A partir de la secuencia de nucleótidos, se ha obtenido el perfil de hidrofobicidad de la proteína y se ha realizado una predicción de la estructura secundaria. El gen f, que codifica la proteína de fusión, de la cepa Clone-30 de NDV, también ha sido amplificado por PCR, clonado y secuenciado.#

Autor: PEÑAS PARRILLA M. MANUELA.
Año: 1998.
Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: E.T.S.I.A.

Resumen: Las hidrofobinas son proteinas de carácter hidrofóbico que se han encontrado recubriendo las paredes de los hongos. En este trabajo, se han purificado hidrofobinas a partir de diferentes estados del desarrollo como a partir de cuerpos fructíferos asi como de micelio vegetativo monocariótico y dicariótico. A partir de cuerpos fructíferos se ha obtenido una hidrofobina (de clase I) que se ha denominado Fbh1. La obtención de la secuencia amino-terminal de esta hidrofobina nos ha permitido mediante transcripción reversa la obtención de la secuencia cDNA correspondiente al mRNA. Este cDNA nos ha pemitido la expresión de la hidrofobina en un organismo heterólogo en Escherichia coli. Mediante las técnicas de hibridación in situ e inmunolocalización se pudo comprobar que la expresión del gen fbh1 es uniforme a lo largo de todo el cuerpo fructífero a excepción de las laminillas, asi como, que la proteina Fbh1 se localiza recubriendo todas las hifas que conforman el cuerpo fructifero. La secuencia genímica de fbh1 también se ha obtenido y ha permitido la localización de 3 secuencias intergénicas en la región codificante asi como una region 5´no transcrita de 667 pares de bases y una region 3´no transcrita de 1020 pares de bases. A partir de micelio vegetativo dicariótico y monocariótico se han obtenido los cDNAs codificantes de 3 hidrofobinas que se han denominado Vmh1, Vmh2 y Vmh3, todas ellas con prioridades pertenecientes a la clase I. Todas ellas se expresan tanto en el estado monocariótico como dicariótico.

Autor: FEIJOO CARNERO M. CARMEN.
Año: 1998.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD CIENCIAS: UNIV. DE VIGO.

Resumen: Mediante cromatografía a través de concanavalina A-sepharosa se separaron dos formas moleculares de la sialidasa colorrectal humana que difieren en su sensibilidad frente a distintos compuestos inorgánicos y orgáncios , en su masa molecular determinada mediante cromatografía de exclusión molecular y en sus capacidad para hidrolizar el sustrato sintético ácido 2'4-metilumbeliferil a-D-N-acetil-neuramínico (MU-NANA), y los sustratos naturales neuraminil-lactosa, fetuina y ganliósidos. Partiendo de una de las formas moleculares, se purificó 149 veces una sialidasa lisosómica de mucosa colorrectal humna que representa un porcentaje minoritario de la actividad sialidásica celular. Dicha sialidasa es activa frente al sustrato MU-NANA y frente a los sustratos naturales 3' neuraminil-lactosa y fetuina. Mediante el procedimiento cromatográfico empleado, se comprobó que al menos parte de la sialidasa lisosómica de mucosa colorrectal humana se encuentra asociada a la B-D-galactosidasa formando un complejo enximático. En pacientes con adneocarcinoma colorrectal se produce un incremento estadísticamente significativo de la actividad sialidásica del tumor respecto a la mucosa sana.Dicho incremento no se debe a alterciones en propiedades físcio-químicas o cinéticas de la enxima ni a la presencia de activadores en el tejido tumoral. Mediante estudios cuantitativos e inmunohistoqúmicos se comprobé que en el adenocarcinoma colorrectal se produce alteraciones en los patrones de sialilación con respecto a la mucosa sana. Asimismo, los niveles séricos de ácido siálico total y de ácido siálico ligado a glicoconjugados aumentan significativamente en pacientes con cáncer colorrectal con respecto a individuos sanos. Los datos de sensibilidad, especificidad, eficiencia diagnóstica y el valor del área bajo la curva de ROC indican que el ácido siálico sérico podría tener utilidad en el diagnóstico de pacientes con adenocarcinoma colorrectal Por otra parte, la concentración de ácido siálico en suero pero peratorio y la variación de los niveles de actividad sialidásica en el tejido tumoral, respecto a la mucosa sana presentan valor pronóstico para el cáncer colorrectal que es independiente del aportado por las características clinicopatológicas clásicas. Esto sugiere que dichas variables podrían presentar utilidad en las predicciones efectuadas por el anatomopatólogo con relación al pronóstico de los pacientes con cáncer colorrectal.

Autor: CORTÉS CLOSAS ALFREDO.
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.

Resumen: El docecasatélite es un satélite centromérico de drosopmila que presenta una marcada asimetría en la distribución de residuos entre sus dos cadenas, siendo una cadena rica en citosinas y la otra en guaninas. La cadena rica en Guaninas forma estructuras intramoleculares muy estables. Se ha detectado en extractos nucleares de drosophila la existencia de una actividad de unión específica para la cadena rica en citosinas del podecasatélite. Se ha purificado la proteína responsable de esta actividad de unión, y se ha llamado DDP-1 (drosophila dodecasatellite protein-1) se ha clonado y seqüenciado el cDNA de DDP-1 y se ha detectado que DDP-1 es la homóloga en drosopmila de las proteínas de la familia de las vigilinas, proteínas con 15 dominios KM de unión a ácidos nucleicos de cadena senzilla. Se ha caracterizado detenidamente la unión de DDP-1 a ácidos nucleicos in vitro, se ha immunolocalizado DPP-1 en embriones y órganos larvales, y se han generado moscas transgénicas para DPP-1 para abordar el rescate genético de genes candidatos.

Autor: MARTÍ RENOM MARC ANTONI.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La tesis expuesta el pasado 21 de enero de 1999 se subdivide en cuatro capítulos relacionados pero independientes en cuanto a su lectura. El primer de ellos nos hace una breve introducción al campo de la Dinámica Molecular, así como al sistema de simulación utilizando, el PCI o Inhibidor de Carboxipeptidasa de Patata. En este capítulo también se introducen los conceptos básicos del proceso de plegamiento y desplegamiento proteico. El segundo capítulo detalla los resultados y las conclusiones de las simulaciones por computadora del desplegamiento del PCI. Estas simulaciones nos demuestran que es imprescindible reducir los puentes disulfuro y aumentar la temperatura del sistema para desplegar la proteína. La simulación de desplegamiento se utiliza como base para el estudio de replegamiento del PCI que se presenta en el capítulo tercero de la tesis. En este capítulo se profundiza es el estudio del plegamiento del PCI, una vez se observó que la metodología utilizada para replegar el PCI daba resultados satisfactorios, se utilizó en el estudio de las estructuras intermedias del plegamiento. Finalmente, el capítulo cuarto nos presenta el desarrollo y la aplicación de un nuevo campo de fuerzas para la Dinámica Molecular, basado en la función de MORSE. Este nuevo potencial nos permite simular la rotura y la formación de enlaces entre átomos. Procesos fundamental durante el plegamiento del PCI o de proteínas similares.

Autor: FUENTE GARCIA MIGUEL ANGEL.
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: EN ESTE TRABAJO SE DESCRIBE LA CLONACION Y SECUENCIACION DE TRES NUEVAS PROTEINAS DE MEMBRANA QUE PERTENECEN A LA SUPERFAMILIA DE LAS INMUNOGLOBULINAS, EN CONCRETO A LA LLAMADA SUBFAMILIA DEL CD2: CD84 HUMANO, CD84 MURINO Y LY-9 HUMANO. SE HAN PRODUCIDO ANTICUERPOS MONOCLONALES CONTRA ESTAS PROTEINAS Y SEHA ESTUDIADO SU EXPRESION, SIENDO TODAS ESPECIFICAS DE TEJIDOS HEMATOPOYETICOS. SE HA ESTUDIADO LA LOCALIZACION CROMOSOMICA DE CD84 HUMANO (CRM 1Q24) Y CD84 MURINO (TERCIO DISTAL DEL CRM1). SE HIPOTETIZA QUE ESTAS TRES MOLECULAS PUEDEN INTERVENIR EN LA ADHESION INTERCELULAR Y TENER COMO LIGANDOS OTROS MIEMBROS DE LA SUBFAMILIA. DEL CD2 ADEMAS, DEL ESTUDIO DE SUS COLAS CITOPLASMICAS, SE DEDUCE QUE PUEDAN TRANSDUCIR SEÑALES INTRACELULARES.

Autor: ALVAREZ FORTES ENRIQUE PEDRO.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El papel de la mitocondria en el metabolismo energético de Leishmania es un proceso dependiente del estadio. Para conocer la contribución de la mitocondria al metabolismo energético de los promastigotes, su funcionalidad fue estudiada en parásitos transfectados con la proteina desacoplante mitocondrial 1 (UCP1), que promueve la permeabilidad a protones en la membrana interna mitocondrial. El gen UCP1 fue insertado en el vector pX63NEO y transfectado en promastigotes de Leishmania major. La proteína es transcrita y expresada adecuadamente. De acuerdo con las técnicas de Northern y Western, respectivamente. Además, la UCP1 es perfectamente direccionada a la mitocondria y es funcional dentro del parásito de acuerdo con lo siguiente: 1) Reducción del potencial de membrana mitocondrial 2) Disminución del control respiratorio, y su reversión por GDP, un inhibidor de UCP1. 3) No se observa que el metabolismo energético del parásito se vea afectado por la presencia de la UCP1.

Autor: CARCER DIAZ GUILLERMO DE.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA (FACULTAD DE MEDICINA) PROGRAMA DE DOCTORADO: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA .

Resumen: El trabajo de esta tesis ha consistido en la identificación de proteínas relacionadas con procesos de proliferación y biogénesis de los ribosomas, en A.cepa. Tras una busqueda inicial de proteínas en una fracción nuclear de ribonucleoproteinas, se identificaron dos proteínas, denominadas NopA64 y NopA100. Ambas tienen una localización nucleolar, y están implicadas tanto en fenómenos de proliferación, como de expresión de genes ribosómicos. Estas proteínas localizan estrechamente con la fibrilarina (marcador del procesamiento temprano de los pre-rRNAs), y con el factor de transcripción ribosómico UBF. También se ha determinado con mayor precisión la distribución en el nucleolo de las primeras fases de la expresión del rDNA, viendo cómo la transcripción ocurre focalizada en la periferia de los Centros Fibrilares, dentro del Componente Fibrilar Denso, que en la zona proximal de dicho componente, el procesamiento temprano y la transcrición colocalizan, justo donde NopA64 y NopA100 se encuentran localizadas en mayor concentración.

Autor: CORTES RUIZ ARANZAZU.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIENCIAS MORFOLOGICAS, FACULTAD DE MEDICINA PROGRAMA DE DOCTORADO: INMUNOLOGIA BASICA.

Resumen: Se ha caracterizado el gen POR de Trypanosoma cruzi. Un gen de copia única localizado en los cromosomas VI y XII, de 1659 pb y con un uso de codones que se desvia del promedio calculado para la especie. Se purificó parte de la región aminoterminal de TcPOR, frente a la cual se obtuvieron anticuerpos en conejo. Estos anticuerpos inhibieron la actividad lítica que poseen los sobrenadantes de T. cruzi condicionados a pH ácido, y su presencia en el medio de infección origina una disminución en la producción de tripomastigotes al final del proceso. Mutantes nulos para el gen POR son incapaces de completar el proceso de infección y presentan una actividad lítica disminuida respecto a los parásitos de la cepa salvaje. Los parásitos de la cepa salvaje son capaces de entrar en la célula presentando un porcentaje de infección similar a los parásitos de la cepa salvaje, pero una vez dentro de la célula los parásitos son incapaces de multiplicarse. Levaduras transformadas con el gen POR presentan actividad lítica sobre eritrocitos de conejo a pH 5.5. Por tanto, TcPOR está implicada en el proceso de infección de T. cruzi, posiblemente participando del proceso de ruptura de la membrana vacuolar por formación de poros.

Autor: COVELO ARTOS GUILLERMO.
Año: 1997.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La protimosina alfa (ProTalfa) es un polipéptido cuya función nuclear se relaciona con la proliferación celular, aunque no son conocidos los mecanismos mediante los cuales su actividad se ejerce. Con la intención de esclarecer su función, llevamos a cabo la caracterización de componentes celulares que en linfocitos de bazo de ratón en proliferación muestran afinidad por la ProTalfa enlazada a Sepharosa. En esta investigación encontramos que la mayor parte de los blancos específicos de la ProTalfa en estas células son citosólicos y la actividad proliferativa de las células incrementa la concentración de estos componentes pero no su número, de 11 proteínas principales. Similares componentes con afinidad por ProTalfa, en movilidad electroforética, se encontraron en linfocitos tumorales (células NC-37), si bien es mayor la presencia, entre éstos, de proteínas nucleares. Entre las proteínas presentes en los subfraccionados de linfocitos de bazo de ratón en proliferación, que presentan afinidad por la ProTalfa, hemos caracterizado las histonas H3, H2B, H2A y H4, confirmando los datos previos de nuestro laboratorio que han demostrado la interacción de estas proteínas con la ProTalfa. Para profundizar en esta afinidad hemos investigado la interacción de la ProTalfa con los nucleosomas purificados de linfocitos de bazo de ratón, mediante experimentos de inducción de enlaces cruzados con el agente químico DSP demostrando que la ProTalfa se une a los nucleosomas por medio de sus cuatro histonas, principalmente de las H3, H2A y H2B, siendo más destacada esta unión a relaciones molares nucleosomas:ProTalfa 0,6:1. Cuando las histonas se encuentran libres del nucleosoma, se unen a la ProTalfa principalmente las histonas H2A y H2B, siendo la relación molar óptima la 0,1:1 (mezcla equimolecular de histonas:ProTalfa). En ausencia del enlazador DSP la electroforesis no desnaturalizante y la filtración molecular separan a la ProTalfa de los nucleosomas. La interacción de la ProTalfa con los nucleosomas no produce desplazamiento de ninguna de las histonas del nucleosoma. La caracterización de proteínas citosólicas, procedentes de linfocitos de bazo estimulados, que presentan afinidad por la ProTalfa nos ha llevado al aislamiento y purificación de una proteína de 38 kDa (p38), que se une principalmente a la región amino-terminal de la ProTalfa y tras su secuenciación parcial no hemos encontrado homologías con ninguna de las proteínas de secuencia hasta ahora conocida. Los anticuerpos generados contra un undecapéptido de esta proteína han permitido conocer su localización subcelular, su presencia en otros tipos celulares así como la relación de su presencia con la actividad proliferativa de las células. Tanto en linfocitos de bazo como en timocitos de ratón, la p38 se ha detectado únicamente en citosol, siendo sus niveles 12 veces superiores en los primeros, y mientras en los linfocitos esplénicos sus niveles son 10 veces mayores cuando las células son estimuladas a proliferar, en los timocitos la variación es mínima. Por otro lado, en las células NC-37 la p38 se ha detectado mayoritariamente en nucleoplasma, en unos niveles 2,5 veces superiores que en linfocitos de bazo en proliferación.

Autor: EMBADE URRUTIA M. NIEVES.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: Las proteínas Rho son GTPasas de bajo peso molecular que se encuentran en su estado activo unidas a GTP. Varios miembros de esta familia son capaces de inducir transformación y células sobreexpresando estos genes son tumorigénicos cuando se inyectan en ratones desnudos. Existen evidencias de que también podrían estar involucrados en procesos de metástasis, pero hasta ahora sólo existían evidencias in vitro. En este estudio se inyectaron células sobreexpresando el gen rho de Aplysia californica tanto en la vena de la cola de ratones desnudos (ensayo de metástasis experimental) como en la pata posterior (ensayo de metástasis espontánea). Se pudo comprobar como estas células eran capaces de colonizar tanto el pulmón como otros órganos (ganglios linfáticos, tejido adiposo de los hilios pulmonares, etc). Estos datos se reprodujeron utilizando los genes humanos rho A y rac 1 en su versión activada, así como los oncogenes db1, vav y ost que son factores de intercambio para los miembros de la familia rho. Nuestros datos demuestran la participación de los genes rho en la inducción de metástasis in vivo.

Autor: ESTARREADO MESEGUER VICTOR.
Año: 1997.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: La alfa-fetoproteína, proteína plasmática característica del periodo fetal y neonatal en los mamíferos, transporta ácidos grasos poliinsaturados y, muy particularmente, DHA, ácido graso principal de la serie n-3, y componente fundamental de los lípidos estructurales del cerebro y de la retina. Existe una amplia evidencia de que el propio DHA podría ser esencial durante el desarrollo fetal y neonatal en los mamíferos y en particular en el hombre, por lo que es precisa la presencia de un transportador que facilite la acreción este ácido graso en el cerebro en desarrollo. Se ha propuesto en diversas ocasiones que la función de la AFP era precisamente asegurar el transporte e incorporación del DHA en los lípidos cerebrales. En el presente trabajo se ha planteado un objetivo principal: intentar correlacionar las proporciones de DHA incorporados en cerebros de ratas con los niveles de AFP plasmáticos. A este fin se han diseñado diversas estrategias para obtener ratas neonatales con una concentración de AFP baja. En primer lugar, se han seleccionado ratas que espontáneamente muestran una concentración de AFP baja (aproximadamente la mitad de la concentración media presente en las ratas de su misma edad); en segundo lugar, en ratas neonatales se ha inducido una reacción inflamatoria mediante la inyección de trementina lo que provoca una disminución notable del nivel de dicha proteína; del mismo modo, se ha inducido un descenso en el nivel de AFP sérico mediante la inyección del glucocorticoide dexametasona. En todos los casos estudiados, se observa una disminución significativa en la proporción de DHA incorporado en el cerebro. Este efecto podría ser específico porque no se observa un cambio similar en otros PUFA. Se ha estudiado también, en ratas neonatales, el efecto de la fase aguda inducida por la trementina sobre la concentración de algunas proteínas plasmáticas y sobre el metabolismo lipídico, en lo que respecta a la composición lipídica del suero y al contenido de ácidos grasos en el hígado.