PROTEINAS, 15

Autor: SALINAS MIRALLES EVA M..
Año: 1997.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El presente trabajo trata de estudiar los mecanismos moleculares implicados en el proceso de la secreción hormonal a la luz e la hipotesis SNARE recientemente descrita en la terminal sináptica, utilizando como modelos biólogicos dos sistemas endocrinos: la célula cromafín de la médula adrenal y la célula beta pancreática. Se ha descrito, en el presente trabajo la presencia de sintaxina 1, una de las proteínas involucradas en el proceso secretor, en ambos sistemas endocrinos, así como en células hipofisiarias y se demuestra el papel funcional que desempeña esta proteína en la secreción regulada por calcio tanto de catecolaminas como de insulina, mediante el uso de anticuerpos específico anti-sintoxina o péptidos sinteticos que engloban secuencias de sintaxina que intervienen en la interacción con otras proteíbas del complejo secretor. Así mismo, se muestra por primera vez la secreción de insulina en célula beta pancreática de ratón inducida por análogos no hidrolizables de GTP, por un mecánismo secretor alternativo e independiente de calcio, en el que no participan la sintaxina de forma directa. Finalmente se estudiaron posibles mecanismos de regulación del proceso de secreción que pudieran estar mediados por procesos de fosforilación de alguna de las proteínas involucradas en la maquinaria exocitótica.

Autor: ALVAREZ MARTINEZ M. TERESA.
Año: 1996.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LAS ANEXINAS SON UNA FAMILIA DE PROTEINAS QUE PODRIAN PARTICIPAR EN FENOMENOS CELULARES TALES COMO LA EXOCITOSIS, LA ENDOCITOSIS, O TODO PROCESO CELULAR QUE IMPLIQUE MOVIMIENTO Y FUSION DE MEMBRANAS COMO LA FAGOCITOSIS, ASI COMO EN EL EFECTO ANTIINFLAMATORIO DE LOS GLUCOCORTICOIDES O EL EFECTO ANTICOAGULANTE DEL ENDOTELIO, Y COMO SUSTRATOS DE QUINASAS DE LA SERINA/TREONINA O TIROSINA.ESTE TRABAJO PONE DE MANIFIESTO LA INTERACCION EXISTENTE ENTRE LA ANEXINA I HUMANA Y LA PROFILINA, PEQUEÑA PROTEINA REGULADORA DE LOS FILAMENTOS DE ACTINA, MEDIANTE METODOS TAN DIVERSOS COMO ELISA; OVERLAY, SLOT-BLOT O BIACORE (RESONANCIA PLASMICA DE SUPERFICIE). ASI MISMO SE HA ESTUDIADO EL EFECTO QUE ESTA INTERACCION EJERCE SOBRE ALGUNAS DE LAS FUNCIONES MAS CONOCIDAS, TANTO DE LA ANEXINA (AUTOASOCIACION, UNION A LOS LIPOSOMAS EN PRESENCIA DE CALCIO O AGREGACION DE VESICULAS), COMO DE LA PROFILINA (INHIBICION DE LA POLIMERIZACION DE LA ACTINA).

Autor: ARMISEN GIL M. PILAR .
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LOS GELES DE AGAROSA, SON SOPORTES MUY HIDROFILICOS E INERTES. LA AGAROSA ESTA CONSTITUIDA POR FIBRAS GRUESAS QUE PARA LA MAYORIA DE LAS PROTEINAS (EN FUNCION DE SU TAMAÑO) SEMEJA UNA SUPERFICIE PLANA CONTRA LA CUAL INTERACCIONAN. EN ESTA TESIS DOCTORAL SE PRETENDE APROVECHAR LAS VENTAJAS DE LA AGAROSA (DERIVADAS DE SU MORFOLOGIA) FRENTE A OTROS SOPORTES, AL MISMO TIEMPO QUE SE ESTABLECEN ESTRATEGIAS QUE PERMITEN SUPERAR LOS INCONVENIENTES. EL ACOPLAMIENTO PROTEINA-SUPERFICIE PLANA PRESENTA VENTAJAS A LA HORA DE REALIZAR PROCESOS DE INMOVILIZACION MULTIPUNTUAL, PUDIENDO DISEÑAR INMOVILIZACIONES DIRIGIDAS DE PROTEINAS POLIMERICAS, O METODOS DE ENMASCARAMIENTO DE DETERMINADAS AREAS DE PROTEINAS. SI BIEN EL EMPLEO DE UN SOPORTE TIPO SUPERFICIE COMO LA AGAROSA, CONLLEVA TAMBIEN ALGUNAS DESVENTAJAS: TALES COMO IMPEDIMENTOS ESTERICOS QUE DIFICULTAN EL ACCESO DE LIGANDOS O SUSTRATOS MACROMOLECULARES QUE TIENEN QUE ACTUAR CON PROTEINAS O ENZIMAS. TAMBIEN, LA MORFOLOGIA TIPO SUPERFICIE PLANA PUEDE DAR LUGAR A INTERACCIONES NO ESPECIFICAS QUE PUEDEN COMPLICAR LOS PROCESOS DE PURIFICACION DE PROTEINAS.

Autor: BERMEJO ROMAN RUPERTO.
Año: 1996.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA FISICA PROGRAMA DE DOCTORADO: METODOLOGIA Y TRATAMIENTO DE LOS FENOMENOS QUIMICOS.

Resumen: SE HAN PURIFICADO LAS BILIPROTEINAS PRESENTES EN LA MICROALGA SPIRULINA PLATENSIS: C-PC Y APC. SE HAN SEPARADO EFICAZMENTE LAS SUBUNIDADES QUE LAS CONSTITUYEN EN CONDICIONES DE DESNATURALIZACION, POR CROMATOGRAFIA DE HPLC EN FASE REVERSA, LO QUE HA PERMITIDO CORROBORAR LA PUREZA, ANTERIORMENTE COMPROBADA POR ESPECTROFOTOMETRIA Y SDS-PAGE. SE HA OBTENIDO Y PURIFICADO EL CROMOFORO FICOCIANOBILINA, UNICO PRESENTE EN AMBAS BILIPROTEINAS, MEDIANTE METANOLISIS Y POSTERIOR EXTRACCION CON DISOLVENTES ORGANICOS, HABIENDOSE DEMOSTRADO SU MEDIANTEHPLC EN FASE REVESA. MEDIANTE EL METODO DE ACUPUNTURA EN GELSE HAN CRISTALIZADO AMBAS BILIPROTEINAS. LA CALIDAD DE LOS CRISTALES OBTENIDOS HA PERMITIDO SU CARACTERIZACION MEDIANTE DIFRACCION DE RAYOS-X. LOS CRISTALES DE AMBAS PROTEINAS PERTENECEN AL SISTEMA HEXAGONAL. C-PC AL GRUPO ESPACIAL P6 O P63 MIENTRAS QUE PARA APC SE HA ASIGNADO EL GRUPO P6322, HABIENDOSE DETERMINADO SUS PARAMETROS DE RED. LAS PROPIEDADES ESPECTROSCOPICAS DE ABSORCION Y EMISION DE AMBAS BILIPROTEINAS NO SE ALTERAN APRECIABLEMENTE EN LOS INTERVALOS DE TEMPERATURA Y PH COMPRENDIDOS ENTRE 30-50 GRADOS C Y 4-9 RESPECTIVAMENTE. MEDIANTE ESPECTROSCOPIA FT-IR SE HA DETERMINADO LA ESTRUCTURA SECUNDARIA DE LA BILIPROTEINAS EN DISOLUCION. LOS ESPECTROS DE POLARIZACION DE FLUORESCENCIA MUESTRAN LA EXISTENCIA DE DISTINTOS TIPOS FUNCIONALES DE CROMOFOROS. SI SE ADMITE LA EXISTENCIA DE CROMOFOROS SENSIBILIZANTES Y FLUORESCENTES, SE PUEDE DECONVOLUCIONAR EL ESPECTRO DEABSORCION DE LAS BILIPROTEINAS DEMOSTRANDO LA EFICAZ TRANSFERENCIA DE ENERGIA CUANDO AMBAS BILIPROTEINAS SE ENCUENTRAN EN ESTADO DE AGREGACION TRIMERICO. MEDIANTE UNA SENCILLA METODOLOGIA SE HA MODIFICADO EL ACIDO POLIRRIBOCITIDILICO POLI (C) Y SE HA UNIDO A EL MEDIANTE CONJUGACION EFECTIVA LA BILIPROTEINA CORRESPONDIENTE. LOS CONJUGADOS OBTENIDOS SON DE UTILIDAD EN LA DETECCION FLUORIMETRICA DE LA HIBRIDACION CON ACIDO POLIRRIBOINOSINICO POLI (I). REFERIDA HIBRIDACION SE PUEDE DETECTAR EN MEDIOS HOMOGENEOS MEDIANTE EL AUMENTO DEL GRADO DE POLARIZACION DE FLUORESCENCIA QUE HA RESULTADO PROPORCIONAL AL PORCENTAJE DE HIBRIDO FORMADO. SE HAN INCLUIDO LAS BILIPROTEINAS EN MICELAS REVERSAS DE AOT EN ISOOCTANO. EL CROMOFORO SE ENCUENTRA LOCALIZADO EN LAS INMEDIACIONES DE LA INTERFACIE MOLECULAR AGUA-SURFACTANTE. LAS BILIPROTEINAS SE UNAN ISNESPECIFICAMENTE AL INTERIOR DE LA MEMBRANA CELULAR DE HEMATIES.

Autor: BOU AREVALO GERMAN.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HAN PURIFICADO DOS PROTEINAS QUINASAS PREVIAMENTE IDENTIFICADAS, PK60S Y CK-2, RESPONSABLES DE FOSFORILAR LAS PROTEINAS RIBOSOMICAS ACIDAS DE LEVADURA. TAMBIEN SE HAN IDENTIFICADO Y CARACTERIZADO TRES NUEVAS PROTEINAS QUINASAS, LLAMADAS RAP-I, RAP-II Y RAP-III CAPACES DE REALIZAR LA MISMA FUNCION. SE HAN EXPRESADO EN E. COLI CADA UNO DE LOS GENES DE LAS PROTEINAS P Y SE HAN PURIFICADO LAS PROTEINAS RECOMBINANTES. POSTERIORMENTE SE HAN REALIZADO ESTUDIOS CINETICOS DE LOS ENZIMAS CON CADA UNA DE LAS PROTEINAS P POR SEPARADO, CALCULANDOSE LOS PARAMETROS CINETICOS. LOS RESULTADOS PONEN DE MANIFIESTO UNA ALTA ESPECIFICIDAD DE RAP-I Y RAP-III RESPECTO A LAS PROTEINAS P, MOSTRANDO INCLUSO MAYOR AFINIDAD CUANDO LAS PROTEINAS ESTAN UNIDAS AL RIBOSOMA. SE HA ESTUDIADO TAMBIEN LA ESPECIFICIDAD DE LAS P. QUINASAS DE LEVADURA RESPECTO A PROTEINAS RIBOSOMICAS ACIDAS DE OTROS ORGANISMOS; E. COLI, T. CRUZI, RATA Y MAIZ. TAMBIEN SE HA DEMOSTRADO LA CONEXION DEL MODELO DE FOSFORILACION/DESFOSFORILACION DE LAS PROTEINAS P RESPECTO A LA CASCADA TRANSDUCCIONAL DEPENDIENTE DE LA PROTEINA QUINASA C (PKC) EN LEVADURA.

Autor: CAZORLA ARRATIA PILAR.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER ES UNA DOLENCIA QUE AFECTA PRINCIPALMENTE A PERSONAS DE EDAD AVANZADA. EXISTEN CUATRO GENES RELACIONADOS CON EL DESARROLLO DE DIVERSAS FORMAS DE LA ENFERMEDAD; POR OTRO LADO, SE CONOCEN PROFUNDAS ALTERACIONES DEL CITOESQUELETO NEURAL. EN ESTA TESIS SE HA REALIZADO UN ANALISIS DE LAS RELACIONES ENTRE LAS PROTEINAS: ESPECTRINA, PROTEINA PRECURSORA DEL AMILOIDE, APOLIPOPROTEINA E Y LAS RECIENTEMENTE IDENTIFICADAS PRESENILINAS. SE DESCRIBE LA EXISTENCIA DE FUERTES INTERACCIONES MOLECULARES ENTRE APP Y APOE, EL EFECTO DE APOE SOBRE LA FOSFORILACION DE LA ESPECTRINA, Y SE SUGIERE UNA RELACION MOLECULAR ENTRE APP Y PRESENILINAS, LO CUAL PODRIA RESULTAR EN LA GENERACION DE DEPOSITOS DE AMILOIDE. SE PROPONEN MODELOS FUNCIONALES DE INTERACCION ENTRE LAS DIVERSAS PROTEINAS.

Autor: ESCARTIN ARIAS ALFREDO.
Año: 1996.
Universidad: ZARAGOZA .
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIRUGIA, GINECOLOGIA Y OBSTETRICIA PROGRAMA DE DOCTORADO: CIRUGIA DEL APARATO DIGESTIVO.

Resumen: EL TRASPLANTE DE INTESTINO DELGADO (TID) ES LA ALTERNATIVA LOGICA A LA NUTRICION PARENTERAL DEFINITIVA EN AQUELLOS PACIENTES QUE PRESENTAN UN CUADRO DE FRACASO INTESTINAL CRONICO. PERO, A DIFERENCIA DEL TRASPLANTE DE OTROS ORGANOS COMO RIÑON, HIGADO Y CORAZON, DE CUYOS COMIENZOS ES CONTEMPORANEO, EL TID NO HA TENIDO EL MISMO DESARROLLO Y NO SE HA CONSOLIDADO TODAVIA EN LA CLINICA, DEBIDO PRINCIPALMENTE A LA RELATIVA RAREZA DE SUS INDICACIONES Y LAS ESPECIALES CARACTERISTICAS INMUNOLOGICAS Y FISIOLOGICAS DEL INTESTINO DELGADO. LOS PRINCIPALES PROBLEMAS QUE EN LA ACTUALIDAD PRESENTA EL TRASPLANTE INTESTINAL CLINICO SON EL DIFICIL CONTROL DEL RECHAZO, LA ALTA FRECUENCIA DE COMPLICACIONES INFECCIOSAS Y LA FALTA DE UN MARCADOR SEROLOGICO PRECOZ DE RECHAZO AGUDO. EN LA UNIDAD MIXTA DE INVESTIGACION DEL HOSPITAL CLINICO-UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA HEMOS REALIZADO UN TOTAL DE 43 TRASPLANTES DE INTESTINO DELGADO (15 AUTO Y 28 ALO), EN CERDOS HEMBRA DE RAZA LARGE-WHITE DE 26+-10 KG DE PESO. USAMOS ANESTESIA GENERAL (FENTANILO + PROPOFOL) E INTUBACION OROTRAQUEAL. LOS 28 ALOTRASPLANTES SE HAN DIVIDIDO EN TRES GRUPOS: GRUPO A, N=9, SIN INMUNOSUPRESION; GRUPO B, N=9 INMUNOSUPRIMIDOS CON CICLOSPORINA (15 MG/KG/DIA IV Y POSTERIORMENTE 30 MG/KG/DIA ORAL); GRUPO C, N=10, INMUNOSUPRIMIDOS CON FK506 (0,3 MG/KG/DIA IM U ORAL). SE HA REALIZADO ALOTRASPLANTE ORTOTOPICO, CON EL INJERTO INTESTINAL VASCULARIZADO POR EL TRONCO DE LA ARTERIA Y DE LA VENA MESENTERICA SUPERIOR, RECONSTRUYENDO EL TRANSITO DIGESTIVO CON ANASTOMOSIS TERMINOTERMINALES DE LOS EXTREMOS DEL INJERTO A YEYUNO PROXIMAL E ILEON TERMINAL. EL FK506 HA PRESENTADO MEJORES RESULTADOS QUE LA CICLOSPORINA EN EL CONTROL DEL RECHAZO, MEJORANDO LA SUPERVIVENCIA DE LOS ANIMALES. TANTO LA CICLOSPORINA COMO EL FK506 HAN EVITADO LA APARICION DE LA ENFERMEDAD DEL INJERTO CONTRA EL HUESPED. LA CORRECTA MONITORIZACION DE LOS NIVELES SANGUINEOS DE FK506 Y DE CICLOSPORINA PERMITE EL MANTENIMIENTO DE DOSIS CLINICAS EFICACES SIN LA APARICION DE NEFROTOXICIDAD NI DE OTROS EFECTOS TOXICOS. LA ELIMINACION DE LOS CORTICOIDES DEL PROTOCOLO INMUNOSUPRESOR SE HA TRADUCIDO EN UNA AUSENCIA DE MUERTES POR INFECCION. LA PIG-MAP ES UNA PROTEINA DE FASE AGUDA CUYOS NIVELES PLASMATICOS SE HAN RELACIONADO CON LA EVOLUCION DEL ALOTRASPLANTE DE INTESTINO DELGADO EN EL CERDO. NIVELES SUPERIORES A 6 NG/ML PUEDEN SER INDICATIVOS DE RECHAZO AGUDO SEVERO.

Autor: ESCUDERO ARTIAGA M. ANGELES.
Año: 1996.
Universidad: ALICANTE .
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: NEUROQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: NEUROCIENCIAS.

Resumen: ALGUNOS COMPUESTOS ORGANOFOSFORADOS (OPS) CAUSAN UNA DEGENERACION AXONAL CONOCIDA COMO POLINEUROPATIA RETARDADA INDUCIDA POR ORGANOFOSFORADOS (OPIDP) CUYA INDUCCION SE RELACIONA CON LA MODIFICACION COVALENTE DE UNA PROTEINA DENOMINADA ESTERASA DIANA DE NEUROPATIA O NTE. SE HAN ESTABLECIDO DOS FORMAS DE NTE: PARTICULADA (P-NTE) Y SOLUBLE (S-NTE). LA FORMA PARTICULADA, MAYORITARIA EN CEREBRO, HA SIDO EXTENSAMENTE ESTUDIADA, HA SIDO CARACTERIZADA, PURIFICADA Y ESTA EN PROCESO DE SECUENCIACION Y CLONAJE. SIN EMBARGO, S-NTE, DESCRITA MAS RECIENTEMENTE EN NERVIO CIATICO, NO HA SIDO SUFICIENTEMENTE CARACTERIZADA Y ES OBJETO DE NUESTRO INTERES SU CARACTERIZACION, ESPECIALMENTE EN NERVIO CIATICO COMO TEJIDO DIANA DE LA NEUROPATIA. EN ESTE TRABAJO SE HA DEMOSTRADO LA EXISTENCIA DE LAS DOS ISOFORMAS, S-NTE1 Y S-NTE2 QUE CON DIFERENTE SENSIBILIDAD A MIPAFOX SE HABIAN PROPUESTO A PARTIR DE LOS DATOS CINETICOS DE INHIBICION CON MIPAFOX, EN FRACCION SOLUBLE DE NERVIO CIATICO. ESTAS ISOFORMAS SE HAN SEPARADO POR ROMATOGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR EN LA FRACCION SOLUBLE DE NERVIO CIATICO, MEDULA ESPINAL, CEREBRO E HIGADO Y DISCRIMINADO POR SU DIFERENTE SENSIBILIDAD A MIPAFOX. S-NTE1 SE OBTIENE EN LAS FRACCIONES SOLUBLES PREPARADOS A PH 8, PERO NO SE OBSERVA, O DISMINUYE DRASTICAMENTE EN FRACCION SOLUBLE A PH 6.8, SU SENSIBILIDAD A MIPAFOX ES SIMILAR A LA DE P-NTE Y SE LE HA ESTIMADO UN PEO MOLECULAR MAYOR DE 700 KDA. LA OTRA FORMA, S-NTE2, ESTA PRESENTE EN TEJIDOS CON ALTA PROPORCION DE ACTIVIDAD SOLUBLE, COMO EN NERVIO CIATICO, MEDULA ESPINAL E HIGADO, SIN EMBARGO, NO SE DETECTA EN CEREBRO DONDE HAY BAJA PROPORCION DE ACTIVIDAD SOLUBLE, Y ESTA ES DE TIPO S-NTE1; LA PRESENCIA DE S-NTE2 EN LA FRANCCION SOLUBLE NO DEPENDE DEL PH USADO EN EL FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR, SE LE HA ESTIMADO UN PESO MOLECULAR APROXIMADO DE 100 KDA Y POSEE UNA SENSIBILIDAD FRENTE A MIPAFOX MENOR QUE S-NTE1 Y P-NTE. TODAS ESTAS OBSERVACIONES SUGIEREN QUE S-NTE1 ES UNA MATERIAL DE MEMBRANA PARCIALMENTE SOLUBILIZADO A PH8 Y S-NTE2 ES LA UNICA ISOFORMA DE NTE DETECTADA HASTA EL MOMENTO QUE PUEDA CONSIDERARSE COMO UNA VERDADERA FORMA SOLUBLE Y DIFERENCIADA DE P-NTE. LA ISOFORMA S-NTE2 ES SENSIBLE AL ORGANOFOSFORADO BIOTINILADO S9B Y SE UNE COVALENTEMENTE Y DE FORMA IRREVERSIBLE A S-NTE2, RESULTANDO UN MARCADOR CON BIOTINA APROPIADO PARA LA DETECCION DE S-NTE2. SE HA DESARROLLADO UN PROCEDIMIENTO DE PURIFICACION PARCIAL DE S-NTE2, BASADO EN TRES ETAPAS CROMATOGRAFICAS, MEDIANTE EL CUAL SE OBTUVIERON DOS FRACCIONES DE S-NTE2 DIFERENTES QUE SE HAN IDENTIFICADO MOLECULARMENTE EN WESTERN BLOT COMO DOS POLIPEPTIDOS DE PESO MOLECULAR DE 51 Y 56 KDA. DADO QUE ESTAS MUESTRAS PROCEDEN DE UNA FRACCION SEPARADA EN CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR DE APROXIMADAMENTE 100 KDA, LA PROTEINA NATIVA PODRIA SER UN DIMERO. EL RESULTADO DE ESTE TRABAJO ABRE LAS PUERTAS A LA POSTERIOR IDENTIFICACION DETALLADA DE ESTA PROTEINA.

Autor: FERNANDEZ ALVAREZ SANTULLANO M. CONCEPCION.
Año: 1996.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOXIA E PARASITOLOXIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOXIA.

Resumen: EL PRESENTE TRABAJO DE TESIS DOCTORAL SE DIVIDE EN 3 PARTES. EN UNA PRIMERA PARTE SE CARACTERIZAN LAS CEPAS DISPONIBLES Y ELIGEN UNA CEPA COMENSAL (N. SICCA P183) Y UNA CEPA MENINGOCOCICA (N. MENINGITIDIS V14) PARA LA CLONACION DEL GEN TBPB. EN ESTA PARTE DE CARACTERIZACION, SE DETERMINA TAMBIEN EL TAMAÑO DE LA PROTEINA TBP2 EN LAS DOS CEPAS ELEGIDAS (77 KDA PARA N. SICCA P183 Y 83 KDA PARA N. MENINGITIDIS V14). EN LA SEGUNDA PARTE SE DESCRIBE LA CONSTRUCCION DE UNA GENOTECA DE ADN CROMOSOMICO DE N. MENINGITIDIS V14 EN EL PLASMIDO PUC8 UTILIZANDO EL METODO DE LA "PERDIGONADA". SE DESCRIBE TAMBIEN EL EXAMEN DE LA GENOTECA UTILIZANDO TRES TECNICAS DIFERENTES: LA DETECCION DE LA PROTEINA ACTIVA UTILIZANDO UN CONJUGADO DE TRANSFERRINA PEROXIDASA, LA DETECCION DE UNA FRACCION INMUNOGENICA DE LA PROTEINA UTILIZANDO UN SUERO POLICLONAL Y LA DETECCION DEL GEN MEDIANTE HIBRIDACION UTILIZANDO NUCLEOTIDOS DISEÑADOS A PARTIR DE LA SECUENCIA DEL EXTREMO AMINOTERMINAL DE LA PROTEINA PREVIAMENTE PURIFICADA. NO SE DETECTO NINGUN RECOMBINANTE POSITIVO UTILIZANDO ESTAS 3 TECNICAS. EN LA TERCERA PARTE SE DESCRIBE LA CLONACION DEL GEN TBPB DE N. SICCA P183. PARA ESTA CLONACION SE UTILIZARON DOS ESTRATEGIAS: LA CLONACION DIRECTA DE ADN ESPECIFICO DE N. SICCA P183, UTILIZANDO COMO SONDA UN OLIGONUCLEOTIDO DISEÑADO A PARTIR DE LA SECUENCIA AMINO-TERMINAL DE LA PROTEINA TBP2 DE N. MENINGITIDIS. V14 Y LA CLONACION PREVIA AMPLIFICACION DEL GEN MEDIANTE PCR. MEDIANTE LA PRIMERA TECNICA SE DETECTO UN RECOMBINANTE QUE AUNQUE HIBRIDABA CON EL OLIGONUCLEOTIDO, NO PORTABA EL GEN TBPB. CON LA SEGUNDA TECNICA SI SE CLONO EL GEN TBPB DE N. SICCA P183.CONFIRMADA LA IDENTIDAD DEL INSERTO CLONADO, SE PROCEDE AL ANALISIS DE SU SECUENCIA Y A LA COMPARACION DE LA MISMA CON LA DE OTROS GENES TBPB DE DIVERSAS CEPAS DE NEISSERIA.

Autor: FERNANDEZ GONZALEZ INMACULADA.
Año: 1996.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: FACULTAD DE MEDICINA: DPTO. DE CIENCIAS MORFOLOGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: CIENCIAS MORFOLOGICAS Y CIRUGIA.

Resumen: LA ETIOLOGIA DE LA LITIASIS URINARIA GENERALMENTE ES MULTIFACTORIAL. LA TEORIA DE LA SOBRESATURACION DEFIENDE QUE LA CRISTALIZACION URINARIA SE DEBE A QUE LOS SOLUTOS LITOGENOS ESTAN EN SOBRESATURACION. LA TEORIA DE DEFICIT DE INHIBIDORES CREE QUE EN LA ORINA EXISTEN SUSTANCIAS QUE REDUCEN O IMPIDEN LA CRISTALIZACION DEL SOLUTO CUANDO ESTA EN SOBRESATURACION. LA TEORIA DE LA MATRIZ PROTEICA, EN LA ORINA HAY PROTEINAS QUE ASEGURAN LA ADHESION ENTRE LOS CRISTALES REALIZANDO LA RED DEL CALCULO. EXISTEN MUY POCOS TRABAJOS DE INVESTIGACION QUE HALLAN LLEGADO AL AISLAMIENTO, PURIFICACION, Y SECUENCIACION DE AMINOACIDOS DE LAS PROTEINAS QUE FORMAN PARTE DE LOS CALCULOS URINARIOS EN SU RED MATRICIAL. SON EXCEPCIONALES SI SE TRATAN DE UN CALCULO DE PROTEINA PURA. HEMOS REALIZADO UN ESTUDIO DE MORFOLOGIA DIFERENCIAL CON DIFERENTES TIPOS DE CALCULOS, Y A PARTIR DE UN CALCULO MEDIANTE LAS TECNICAS DE HIDROLISIS ACIDA, CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO CATIONICO, ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ULTRAVIOLETA, ELECTROFORESIS SOBRE GEL SDS-PAGE CON TINCION DE AZUL DE COMMASIE, Y SECUENCIA DE AMINOACIDOS, HEMOS OBSERVADO QUE LA PROTEINA DEL CALCULO ES UN FRAGMENTO DE LA B2-MICROGLOBULINA QUE COMIENZA EN LA POSICION 20, CON UN CAMBIO SUSTITUTIVO DE LA SERINA EN POSICION 28 POR FENILALANINA. ESTA SUSTITUCION ALTERA DRASTICAMENTE LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA PROTEINA; ESTE HECHO Y/O LA PERDIDA DE LOS PRIMEROS 19 AMINOACIDOS JUSTIFICAN SU MENOR REABSORCION POR LAS CELULAS DEL TUBULO PROXIMAL, LO QUE UNIDO A LA ACIDEZ URINARIA, FAVORECEN SU NUCLEACION HOMOGENEA.

Autor: FERNANDEZ MEDARDE ALBERTO.
Año: 1996.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: ASPECTOS BASICOS EN BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN EL PRESENTE TRABAJO SE HA PURIFICADO A HOMOGENEIDAD LA ACIDO 4-HIDROXIFENILACETICO-3-HIDROXILASA (4HFA3H) DE PSEUDOMONAS PUTIDA U. A CONTINUACION HEMOS ESTABLECIDO UNAS CONDICIONES OPTIMAS DE ENSAYO PARA LA 4HFA3H A 40 GRADOS C Y PH 7,5. TAMBIEN SE HAN ESTABLECIDO LOS PARAMETROS CINETICOS PARA LA ENZIMA OBJETO DE ESTUDIO, SIENDO LA KM (CONSTANTE DE MICHAELIS) PARA LOS DISTINTOS SUBSTRATOS DE 38UM (4-HIDROXIFENILACETICO), 41UM (NADH) Y 4,2UM (FAD ). POSTERIORMENTE HEMOS ESTUDIADO LA ESPECIFICIDAD DE SUBSTRATO DE LA 4HFA3H, OBSERVANDOSE QUE LA ENZIMA PRESENTA UNA BAJA ESPECIFICIDAD DE SUBSTRATO, SIENDO CAPAZ DE RECONOCER NUMEROSOS ANALOGOS DEL ACIDO 4-HIDRO-XIFENILACETICO (4HFA). A CONTINUACION SE HAN REALIZADO UNA SERIE DE ANALISIS "IN VIVO", MEDIANTE LOS QUE SE HA VISTO QUE LA 4HFA3H ES UNA ENZIMA INDUCIBLE POR EL 4HFA Y QUE NO ESTA SOMETIDA A REGULACION CATABOLICA POR GLUCOSA. FINALMENTE SE HAN AISLADO MUTANTES INCAPACES DE UTILIZAR EL 4HFA Y A PARTIR DE LOS MISMOS SE HA AISLADO UN GEN REPRESOR DE LA DEGRAD. DE 4HFA.

Autor: FERRANDIZ AVELLANO M. JOSE.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR III PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: FTSA, PROTEINA ESENCIAL EN EL CICLO DE DIVISION CELULAR DE ESCHERICHIA COLI, COMPARTE HOMOLOGIA DE ESTRUCTURA CON PROTEINAS PERTENECIENTES A LA FAMILIA DE ACTINA, GRACIAS A ESTA HOMOLOGIA Y A QUE SE CONOCIA LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA ACTINA, SE PUDO HACER UN MODELO TRIDIMENSIONAL PARA FTSA.ESTE MODELO QUEDA CONFIRMADO EN ESTA TESIS EN DOS ASPECTOS, LA CAPACIDAD DE UNION DE ATP DE FTSA Y LA IMPLICACION EN ESTA UNION DE UN RESIDUO ALTAMENTE CONSERVADO EN TODOS LOS MIEMBROS DE LA FAMILIA DE ACTINA, LA GLICINA-336. POR OTRO LADO SE HA DETERMINADO LA EXISTENCIA DE AL MENOS DOS ESTADOS DE FOSFORILACION DIFERENTES PARA LA PROTEINA, SIENDO EL BLANCO DE ESTA MODIFICACION LA TREONINA-215, RESIDUO IGUALMENTE CONSERVADO EN LAS PROTEINAS QUE PERTENECEN A LA FAMILIA DE ACTINA. POR ULTIMO LA PURIFICACION DE FTSA GRACIAS A LA FUSION EN SU EXTREMO AMINO TERMINAL DE UNA COLA DE SEIS HISTIDINAS, HA SIDO POSIBLE POR CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD EN COLUMNAS CONTENIENDO NI2+. LA PROTEINA PURIFICADA SERVIRA PARA DETERMINAR LA ACTIVIDAD BIOQUIMICA DE ESTA, ASI COMO LA INTERACCION CON OTRAS PROTEINAS.

Autor: FIGUERAS VALLOSERA MERCE.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN ESTE TRABAJO SE HA OBSERVADO QUE LA PROTEINA RAB17 SE HALLA FOSFORILADA Y NO NO FOSFORILADA EN NUCLEO Y CITOPLASMA, CON UNA MAYOR PROPORCION DE FORMAS FOSFORILADAS EN CITOPLASMA. LA SOBREEXPRESION DE RAB17 EN UNA CEPA DE LEVADURA EN LA CUAL SE REGULA LA ACTIVIDAD DE CK2, HA PERMITIDO COMPROBAR LA CAPACIDAD DE CK2 PARA FOSFORILAR RAB17 "IN VIVO". MEDIANTE FOSFORILACION/ DEFOSFORILACION DE RAB17 SE HA OBSERVADO QUE LA FOSFORILACION FAVORECE LA DIMERIZACION DE RAB17. SE HA DEMOSTRADO QUE RAB17 SE UNE A DSDNA DE FORMA SECUENCIA INESPECIFICA, QUE ESTA INTERACCION REQUIERE UN COMPONENTE ESTRUCTURAL Y QUE RAB17 NO TIENE ACTIVIDAD DNASA. LA SOBREEXPRESION DE RAB17 EN PLANTAS DE "ARABIDOPSIS THALIANA" HA DEMOSTRADO LA IMPLICACION DE RAB17 EN LA TOLERANCIA AL ESTRES OSMOTICO. ESTAS PLANTAS TIENEN UN CRECIMIENTO NORMAL, CON UN CONTENIDO INFERIOR DE AGUA Y UNA MAYOR CAPACIDAD PARA PERDER AGUA BAJO DESECACION.

Autor: FRANCI CARRETE CLARA.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y FISIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y FISIOLOGIA.

Resumen: Lengua extrangera.

Autor: GOMEZ ORTIZ MARIOLA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Resumen: EN ESTA TESIS SE HAN ESTUDIADO TRES SITUACIONES DIFERENTES EN LAS CUALES LA ACTIVIDAD BIOLOGICA DE LA CARBOXIPEPTIDASA-A PANCREATICA BOVINA SE ENCUENTRA INHIBIDA: EN PRESENCIA DE UN EXCESO DE IONES ZN2+, EN PRESENCIA DE UN INHIBIDOR PROTEICO QUE SE ENCUENTRA EN SOLENACEAS (PATATA, TOMATE, ETC), EL PCI Y EN FORMA DE PROENZIMA. UN ELEMENTO COMUN A TODOS ELLOS COMO INHIBIDORES ES LA CAPACIDAD DE IMPEDIR EL ACCESO Y FIJACION DE SUSTRATOS EN EL CENTRO ACTIVO DE LA CARBOXIPEPTIDASA MEDIANTE IMPEDIMENTO ESTERICO. EL GRADO DE COMPLEJIDAD DE PASAR DE UN TIPO DE INHIBICION A OTRO ES CRECIENTE: ASI EN EL PRIMER CASO SOLO SE REQUIERE UN ATOMO ADICIONAL DE ZINC, EN EL SEGUNDO UNA MOLECULA INHIBIDORA DE 39 AMINOACIDOS Y EN EL TERCERO UN APENDICE N-TERMINAL DE 94 RESIDUOS. EL ANALISIS EN TODOS LOS CASOS SE HA REALIZADO MEDIANTE LA TECNICA ANALITICA DE CRISTALOGRAFIA DE RAYOS X.

Autor: GONZALEZ SILGO M. CRISTINA.
Año: 1996.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FISICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: FISICA FUNDAMENTAL Y EXPERIMENTAL PROGRAMA DE DOCTORADO: FISICA.

Resumen: SE HA EFECTUADO UN ESTUDIO SOBRE COMPUESTOS DE LA FAMILIA BK2S04 CON TRANSICION PARAELECTRICA- FERROELECTRICA, SOLUCIONES SOLIDAS DE LOS MENCIONADOS COMPUESTOS Y CON LA SAL DE ROCHELLE A FIN DE PODER DETERMINAR LAS CAUSAS QUE GENERAN LA INESTABILIDAD ESTRUCTURAL Y PROVOCAN LOS DIFERENTES TIPOS DE TRANSICIONES QUE PRESENTAN ESTOS COMPUESTOS. EL METODO DE TRABAJO QUE SE HA SEGUIDO HA SIDO: ANALISIS TERMICO DIFERENCIAL, ANALISIS POR DIFRACCION DE RAYOS X SOBRE MUESTRAS NO NOCRISTALINAS, EN DONDE SE HA TRABAJADO EN VARIAS TEMPERATURAS A FIN DE OBSERVAR LA EVOLUCION DE LA ESTRUCTURA CON LA TEMPERATURA. A PARTIR DEL RESULTADO DE LAS ESTRUCTURAS CRISTALINAS, SE HA ANALIZADO EL MOVIMIENTO LIBRACIONAL Y TRASLACIONAL DE LAS MOLECULAS O GRUPOS IONICOS Y SE HA APLICADO EL METODO DE LA VALENCIA DE ENLACE A FIN DE DETERMINAR LA INESTABILIDAD DE LOS COMPUESTOS. LOS RESULTADOS QUE SE HAN OBTENIDO HAN SIDO: A) DETERMINARLAS DIFERENCIAS ESTRUCTURALES ENTRE LOS COMPUESTOS DE LA MISMA FAMILIA, QUE DEFINEN UN COMPORTAMIENTO DIFERENTE; B) DETERMINAR LA CAUSA DE LA INESTABILIDAD ESTRUCTURAL, LA CUAL ESTA RELACIONADA CON LAS CAVIDADES ASIMETRICAS Y MAS VOLUMINOSAS QUE OCUPAN LOS IONES; C) FORMULAR UN MODELO TERMODINAMICO, BASADO EN EL TRATAMIENTO DE LAS SOLUCIONES SOLIDAS POR UN MODELO REGULAR, CON EL CUAL SE EXPLICAN LOS ESTADOS INTERMEDIOS QUE PRESENTAN ESTAS TRANSICIONES; D) PARAMETRIZAR LAS CAUSAS QUE PRODUCEN LA TRANSICION A FIN DE PODER PREVER QUE COMPUESTOS PUEDEN PRESENTAR LA MENCIONADA TRANSICION Y CUALES NO.

Autor: LATASA SADA M. JESUS.
Año: 1996.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR (UNIVERSIDAD AUTONOMA).

Resumen: LA PRODUCCION Y EL METABOLISMO DEL PRECURSOR DE LA PROTEINA BETA-AMILOIDE TIENEN GRAN IMPORTANCIA EN LA PATOGENIA DE LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER. SE HA ESTUDIADO LA REGULACION DE LA EXPRESION DEL GEN DE APP EN LAS CELULAS PC 12, UN FEOCROMOCITOMA DE RATA, Y EN LAS CELULAS PROCEDENTES DE NEUROBLASTOMAS SH SY5Y Y N2A, TODAS ELLAS CON CAPACIDAD DE ADQUIRIR UN FENOTIPO NEURONAL ANTE CIERTOS ESTIMULOS. EL TRATAMIENTO DE LA LINEA CELULAR PC12 CON FACTORES DE CRECIMIENTO QUE ACTUAN A TRAVES DE RECEPTORES CON ACTIVIDAD TIROSINA QUINASA COMO EL NGF Y CON FORSKOLINA INDUCE LA EXPRESION DEL GEN DE APP MEDIANTE UN MECANISMO DE REGULACION TRANSCRIPCIONAL DONDE LAS SECUENCIAS MEDIADORAS DEL EFECTO INDUCTOR DE ESTOS AGENTES SE ENCUENTRA SE LOCALIZAN EN EL MISMO FRAGMENTO DE 117 PB DEL GEN APP. ASIMISMO, LA REGULACION DE APP POR NGF REQUIERE LA PRESENCIA DE RAS FUNCIONAL EN LA CELULA. SE HA OBSERVADO QUE EN LA LINEA CELULAR SH SY5Y TANTO EL ESTER DE FORBOL TPA COMO EL ACIDO RETINOICO SON CAPACES DE INDUCIR TRANSCRIPCIONALMENTE LA EXPRESION DEL GEN DE APP A TIEMPOS Y DE MANERA ESPECIFICA DE LINEA CELULAR. ADICIONALMENTE SE HA ANALIZADO EL EFECTO REPRESOR DE LA HORMONA TIROIDEA SOBRE LA EXPRESION DEL PRECURSOR DE LA PROTEINA BETA-AMILOIDE EN LAS CELULAS N2A. ESTA REGULACION TRANSCRIPCIONAL NEGATIVA POR T3 NO ES ESPECIFICA DEL TIPO DE RECEPTOR PARA HORMONAS TIROIDEAS Y ES MEDIADA POR LAS MISMAS SECUENCIAS DE DNA QUE MEDIAN LA RESPUESTA A NGF Y FK EN LAS CELULAS PC12. ADEMAS, T3 ES CAPAZ DE MODIFICAR EL PROCESAMIENTO ALTERNATIVO DE LAS ISOFORMAS MAYORITARIAS DE 770 Y 695 AMINOACIDOS. EN CUALQUIER CASO, EXISTEN MECANISMOS DE REGULACION POST-TRANSCRIPCIONALES Y POST- TRADUCIONALES QUE REGULAN LA EXPRESION DE LA PROTEINA APP, SIENDO LA REGULACION DE LA PROTEINA SECRETADA AL MEDIO TOTALMENTE INDEPENDIENTE DE LOS EFECTOS SOBRE LOS NIVELES DE MRNA Y PROTEINA CELULAR.

Autor: LOPEZ ALONSO ELENA.
Año: 1996.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: NEUROQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: NEUROCIENCIAS.

Resumen: A LO LARGO DE ESTE TRABAJO SE HA CONSEGUIDO PURIFICAR LA FORMA MONOMERICA DEL ACCHR PROCEDENTE DEL ORGANO ELECTRICO DE "T.MARMORATA" A PARTIR DE LA FORMA DIMERICA NATIVA SIN INDUCIR MODIFICACIONES ESTRUCTURALES IMPORTANTES EN EL RESTO DE LA MOLECULA. UNICAMENTE SE HA REDUCIDO EL PUENTE DISULFURO RESPONSABLE DEL DIMERO, POR LO QUE NO SE HAN PRODUCIDO MODIFICACIONES EN LA ESTABILIDAD DE LA PROTEINA FRENTE A LA DESNATURALIZACION TERMICA. AMBAS FORMAS MOLECULARES CONSERVAN SUS PROPIEDADES FUNCIONALES YA QUE SE DESENSIBILIZAN EN PRESENCIA CONTINUADA DE AGONISTA Y RESPONDEN AL AGONISTA TRASLOCANDO IONES EN LA ESCALA DE TIEMPO FISIOLOGICA. LAS DIFERENCIAS OBSERVADAS ENTRE AMBAS FORMAS MOLECULARES SE BASAN EN UN MENOR INCREMENTO DE AFINIDAD A CONSECUENCIA DE LA DESENSIBILIZACION EN LA FORMA REDUCIDA, ACOMPAÑADO DE UNA MENOR AFINIDAD POR LOS AGONISTAS. A NIVEL DE CANAL UNICO EL DIMERO PARECE PRESENTAR UNA ENORME DE COOPERATIVIDAD EN CUANTO A LA APERTURA Y CIERRE DE LOS DOS MONOMEROS QUE LO FORMAN DANDO LA IMPRESION DE UN UNICO CANAL. ESTE HECHO PARECE REPRESENTAR UN IMPORTANTE EJEMPLO DE COOPERATIVIDAD EN UN SISTEMA BIOLOGICO.

Autor: LOPEZ HERNANDEZ EVA M..
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN ESTA TESIS DOCTORAL SE HA ABORDADO EL ESTUDIO DEL PROBLEMA DEL PLEGAMIENTO DE LAS PROTEINAS. SE HA UTILIZADO COMO MODELO DE ESTUDIO LA PROTEINA QUIMIOTACTICA DE ESCHERICHIA COLI, CHEY. LOS ESTUDIOS EXPERIMENTALES COMBINAN TECNICAS DE INGENIERIA DE PROTEINAS CON DIVERSAS TECNICAS BIOFISICAS (ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA, DICROISMO CIRCULAR Y FLUJO PARADO) PARA DETERMINAR LA RUTA DE PLEGAMIENTO DE ESTA PROTEINA. SE HA DETERMINADO, EN PRIMER LUGAR, EL MECANISMO DE PLEGAMIENTO DE LA PROTEINA SALVAJE CARACTERIZANDO LAS ESPECIES CINETICAS QUE APARECEN EN LA RUTA DE PLEGAMIENTO. EN SEGUNDO LUGAR SE HA CARACTERIZADO ENERGETICAMENTE EL ESTADO DE TRANSICION EN LA REACCION DE DESPLEGAMIENTO, MEDIANTE EL ESTUDIO CINETICO DE MUTANTES PUNTUALES DISTRIBUIDOS A LO LARGO DE LA SECUENCIA. Y EN ULTIMO LUGAR, SE HA LLEVADO A CABO EL ESTUDIO CINETICO DE MUTANTES CON LA PROPENSION HELICOIDAL AUMENTADA PARA OBTENER INFORMACION SOBRE EL PAPEL DE LAS INTERACCIONES DE CORTO ALCANCE EN EL PLEGAMIENTO Y PROFUNDIZAR EN LA RUTA DE PLEGAMIENTO DE LA PROTEINA CHEY.

Autor: MAHTAT SAID.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: LA CARACTERIZACION DE LOS CENTROS DE INTERACCION ENZIMA-SUSTRATO Y LA CONTRIBUCION DE AMINOACIDOS ESPECIFICOS EN LA FORMACION DEL COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO SON ASPECTOS CLAVE EN EL CONOCIMIENTO DE LA CATALISIS DE UNA ENZIMA. EL OBJETIVO GENERAL DE ESTE TRABAJO SE CENTRA EN ANALIZAR LA FUNCION DEL CENTRO DE INTERACCION DE PURINAS (B2R2) EN EL PROCESO DE CATALISIS DE LA RIBONUCLEASA A (RNAASA A). CON EL FIN DE MODIFICAR DE FORMA ESPECIFICA ESTA REGION SE HA UTILIZADO COMO MARCADOR EL NUCLEOTIDO FOTOACTIVABLE 8- AZIDOADENOSIMA 5'-MONOFOSFATO (8N3-AMP), UN ANALOGO DEL 5'-AMP. DE ACUERDO CON EL MODELO DE INTERACCION ENZIMA- SUSTRATO DE LA RNAASA A, SE PUEDE HIPOTETIZAR QUE LA INTERACCION PRIMARIA EL GRUPO FOSFATO DEL MARCADOR SE DIRIGIRIA AL CENTRO PRINCIPAL DE FIJACION DE FOSFATO O CENTRO ACTIVO (P1) Y LA REGION NUCLEOSIDICA AL CENTRO DE INTERACCION DE PURINAS (B2R2). EL PROCESO DE FOTOACTIVACION DEL GRUPO AZIDO GENERARA LA UNION COVALENTE DEL NUCLEOTIDO A LA ENZIMA Y, POR TANTO, SE OBTENDRA UNA (S) FORMA (S) DE LA ENZIMA EN LA QUE EL CENTRO B2R2 ESTARA OCUPADO DE UNA MANERA ANALOGA A LA QUE SE PRODUCE EN LA INTERACCION ENZIMA-SUSTRATO, PERO ESTABILIZADA POR LA UNION COVALENTE. EL TRABAJO SE HA ORGANIZADO EN UNA SERIE DE OBJETIVOS CONCRETOS: 1) ESTUDIO DE LA REACCION DE MARCAJE DE FOTOAFINIDAD. -DETERMINACION DE LAS CONDICIONES OPTIMAS DE REACCION: -LA SEPARACION DE LOS PRODUCTOS DE REACCION DE LA RNAASA A CON EL 8N3-AMP POR DIFERENTES METODOS CROMATOGRAFICOS Y LA CARACTERIZACION PRELIMINAR DE LAS FRACCIONES MODIFICADAS HA INDICADO QUE LA REACCION GENERA UNA MONOSUSTITUCION EN LA ENZIMA. 2) ESTUDIOS SOBRE LA LOCALIZACION DEL NUCLEOTIDO MARCADOR EN LA RNAASA A. 3) LOCALIZACION DE LA (S) POSICION (ONES) DE UNION DEL NUCLEOTIDO MARCADOR. 4) EL ANALISIS DE LAS CURVAS DE TITRACION DE LOS RESIDUOS DE HIS (HIS-12 Y HIS-119) OBTENIDAS POR ESPECTROSCOPIA DE 1H-RMN HA INDICADO QUE EN LAS DOS SUBFRACCIONES EL GRUPO FOSFATO DEL NUCLEOTIDO MARCADOR INTERACCIONA EN EL CENTRO ACTIVO DE LA RNAASA A. 5) EL ESTUDIO CINETICO DE LAS REACCIONES DE TRANSFOSFORILACION, HIDROLISIS Y SINTESIS DE LAS FORMAS MODIFICADAS HA INDICADO QUE LAS DIFERENTES LOCALIZACIONES DEL MARCADOR MODIFICAN EL COMPORTAMIENTO CATALITICO EN LA REACCION. 6) SE HAN ANALIZADO LAS POSIBLES INTERACCIONES DEL NUCLEOTIDO MARCADOR EN FUNCION DE LA UNION COVALENTE DEL NUCLEOTIDO A LA RNAASA A. EN RESUMEN, SE HAN OBTENIDO DOS FRACCIONES MONOSUSTITUIDAS (BETA1 Y BETA2) MODIFICADAS EN DIFERENTES AMINOACIDOS DEL SUBCENTRO DE INTERACCION DE PURINAS DE LA RNAASA A. EL COMPORTAMIENTO CINETICO OBSERVADO EN LAS DIFERENTES FRACCIONES SE EXPLICA COMO CONSECUENCIA DE QUE LA UNION COVALENTE DEL NUCLEOTIDO MARCADOR PERMITE LA ESTABILIZACION DE LAS DIFERENTES CONFORMACIONES DESCRITAS PARA ESTA REGION DE LA RNAASA A.