QUIMICA DE MACROMOLECULAS BIOLOGICAS

Autor: CABALLERO BARQUERO JOSÉ JUAN.
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA, UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: Las complicaciones a largo plazo son la principal causa de morbilidad y mortalidad en la diabetes. Dentro de estas complicaciones, la formación y acumulación de productos avanzados de glicosilación (AGEs) tiene un papel relevante. Estos AGEs se generan por la glicación no enzimática de proteínas, ácidos nucleicos y lípidos a causa de una hiperglucemia sostenida. Los AGEs son captados por los tejidos susceptibles a través de la interacción con receptores específicos de membrana, entre los que destaca el receptor de productos evanzados de glicosilación (RAGE). La unión de los ligandos al receptor produce su internalización y la generación de señales intracelulares que, en gran medida, van a intervenir en la progresión del síndrome diabético tardío. En esta Tesis Doctoral se describe la organización génica del receptor de AGEs de rata y se caracterizan los mecanismos de regulación de la expresión génica del mismo. El gen del receptor de productos avanzados de glicación tiene un tamaño de 6.5 Kb, con una región codificante distribuida en 11 exones. La distribución entre exones e intrones es muy semejante en los genes de rata y humano. El promotor del receptor de productos avanzados de glicación de rata presenta, al igual que el promotor del gen humano, motivos de unión para los factores de transcripción NF-kB y Spl. La transcripción desde este promotor aumenta por la presencia de AGEs, H2O2, insulina y tungstato. Existen dos inicios de la transcripción del gen en rata. El segundo de estos inicios generaría un receptor carente de la secuencia de exportación del retículo endoplásmico, originando por tanto, una isoforma del receptor con una localización subcelular distinta. Por un proceso de splicing alternativo del exón 9, se originan mRNAs del receptor de rata que codifican para isoformas que difieren en la presencia o no de 9 aminoácidos localizados en el dominio extracelular del receptor, en la zona próxima al dominio transmembrana. La isoforma carente del exón 9 tiene una localización subcelular semejante a la isoforma completa y mantiene la capacidad de unir AGEs. En el extremo 3' del gen del receptor de rata existen varias señales de poliadenilación. Esto hace posible la existencia de diferentes isoformas de mRNA que difieren en su región 3' no traducible. Una de estas isoformas contiene una secuencia rica en adeninas y uracilos, lo que produce la desestabilización de su mRNA y la disminución de la expresión del receptor. En conclusión, el análisis del gen del receptor de productos avanzados de glicación de rata muestra una alta variabilidad, producida por la existencia de dos inicios de la transcripción, un splicing alternativo y el uso diferencial de dos señales de poliadenilación. Esta variabilidad es probablemente reflejo de las múltiples funciones que tiene el receptor en diferentes tejidos y procesos fisiopatológicos.

Autor: ROSELL FEBRES ALBERT.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Resumen: La caracterización del sistema alcohol deshidrogenasa (ADH) de vertebrados llevó a nuestro grupo de investigación al descubrimiento de una ADH (ADH8), en el anfibio Rana perezi, que utilizaba el NADP(H) como coenzima. Esta especificidad de coenzima es única dentro del sistema ADH de vertebrados, utilizando el resto de ADHs el NAD(H) como coenzima. En colaboración con el grupo Estructura tridimensional de proteinas implicadas en procesos patológicos del CSIC (Barcelona), dirigido por el Dr. Ignacio Fita, se resolvió la estructura tridimensional del complejo binario ADH8-NADP. Este resultado nos permitió determinar que los residuos responsables de la especificidad de coenzima de ADH8 estaba involucrados en la unión del grupo fosfato terminal del NADP(H). Estas posiciones eran Leu200, Lys228 (ambos residuos conservados respecto a ADHs dependientes de NAD(H)), Gly223, Thr224 y His225 (Asp223, Ile224 y Asn225 en ADHs dependientes de NAD(H)). La presencia, en ADH8, de una Gly en la posición 223 permite la ubicación del 2'-fosfato del NADP(H) en la zona de unión del coenzima, mientras que un Asp223, generaría impedimentos estéricos y electroestáticos en ADH8. Por otro lado, los residuos Thr224 y his225 son más hidrofílicos que los existentes en enzimas NAD(H)-dependientes, esta mayor polaridad del entorno del grupo fosfato terminal ayudaría en la estabilización de la carga negativa del grupo fosfato. Con el objetivo de profundizar en el papel de estas tres posiciones en la especificad de coenzima de ADH8 se generaron mediante mutagénesis dirigida por PCR los mutantes G223D, T224I, H225N, T224I/H225N, G223D/T224I y G223D/T224I/H225N. Se determinaron las constantes cinéticas para el NADP(H) y NAD(H) del enzima silvestre recombinante y de todos los mutantes. La inversión total de la especificidad de coenzima respecto al enzima silvestre recombinante (kcat/KmNADPH=133330mM-1min-1, kcat/KmNADH=5580mM-1min-1) únicamente se logró en el mutante G223D/T224I/H225N (kcat/KmNADPH=760mM-1min-1, kcat/KmNADH=155000mM-1min-1). La especificidad de coenzima de ADH8 resulta por tanto, de la combinación de un residuo neutro poco voluminoso en 223 con un entorno polar (Thr224, His225). Por otro lado, el hecho de que el triple mutante se comporte como una ADH dpendiente de NAD(H) se debe a que Asp223 e Ile224 son cpaces de realizar en el triple mutante las mismas interacciones que realizan en ADHs dependientes de NAD(H).

Autor: DADDAOUA ABDELALI.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GRANADA, FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La expresión de la piruvato carboxilasa es un punto de regulación del metabolismo intermediario. Este enzima se regula mediante el control de su síntesis. Hay que destacar que el gen de la piruvato carboxilasa se encuentra controlado por dos promotores, uno proximal a la que se le ha asignado un papel relevante en gluconeogénesis y lipogénesis, y un segundo promotor, en una posición distal del gen, al que se le ha atribuido un papel importante en el mantenimiento de unos niveles transcripcionales basales en las situaciones en que es necesario un relleno anaplerótico. Estudios previos mostraban un cierto grado de variabilidad en el mRNA de la piruvato carboxilasa. De nuestros resultados se desprende que mientras que existe un alto grado de variabilidad génica en la región 5'-UTR del enzima, no existen variantes ni en la región codificante del gen ni en el extremo 3'-UTR. El análisis de la variabilidad de la región 5'-UTR nos indica que existen 7 isoformas del mRNA, dos de ellas previamente no descritas. De estas nuevas isoformas, una se genera por combinación de sub-exones regulados por lo promotores proximal y distal del gen. La función de estas regiones 5'-UTR se ha establecido mediante transfecciones de células eucariótas en cultivo con construcciones que codifican para proteínas de fusión entre la secuencia de importación a la mitocondria de la piruvato carboxilasa y una proteína fluorescente verde. Estas construcciones incluyen además el extremo 5' no traducido de cada isoforma. Todas las isoformas presentan un patrón de expresión mitocondrial. No obstante, el nivel de expresión de estas isoformas es muy diferente. El análisis de los niveles de proteína producidos en estos ensayos y la cantidad de mRNA existente, indican que para cada isoforma existe un mecanismo de regulación. Estos mecanismos afectan a la estabilidad del mRNA o a la eficiencia de traducción. Al encontrar que todas las isoformas se expresan en todos los tejidos estudiados, tanto en situación de alimentación como durante el ayuno, no podemos todavía asignar una función exclusiva a los promtorres proximal y distal del gen, por lo que cabe concluir que la compleja regulación de la expresión del enzima corresponde de manera coordinada a ambos promotores.

Autor: GALÁN COUSILLAS ASIER.
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS -UPV. LEIOA.

Resumen: El sistema de chaperoninas bacteriano formado por GroEL y su cochaperonina GroES es de vital importancia para el correcto plegamiento de numerosas proteinas celulares en R.coli. GroEL es una proteína tetradecamérica formada por dos anillos homoheptaméricos unidos entre sí que forman un cilindro o doble toroide hueco. GroES es un homohéptamero que interacciona con GroEL en ambos extremos apicales. En esta tesis se estudia mediante técnicas de espectrocoóa de infrarrojo el efecto de nucleótidos hidrolizables y no hidrolizables sonre la estructura de GroEL y las implicaciones funcionales de los cambios conformacionales generados por la unión e hidrólisis de los mismos en cada caso. Se distingue una conformación característica del estado unido a ATP diferente a la correspondiente a la unión de ADP- Por otra parte, se estudia el replegamiento de GroEL en condiciones de apelotonamiento macromolecular similares a las existentes en el interior de la célula (200-300 mg/ml de concentración macromolecular). En dichas condiciones la eficiencia en el replegamiento y reoligomerización de GroEL se triplica y el oligómero replegado es indistinguible estructural y funcionalmente de GroEL nativa. Este es el primer estudio publicado sobre el replegamiento de una proteína oligomérica en condiciones de apelotonamiento macromolecular.

Autor: RODRÍGUEZ LAGUNA M. TERESA .
Año: 2002.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: La Tesis presenta los resultados de la caracterización de diversos poliorganofosfacenos y otros polímeros mediante cromatografía de exclusión por tamaños con detección múltiple. Los poliorganofosfacenos son polímeros de cadena inorgánica y grupos laterales orgánicos con interesantes propiedades tanto desde el punto de vista científico como tecnológico. Sin embargo su comportamiento en disolución presenta diversos aspectos que lo diferencian de otros polímeros de cadena principal carbonada y sus caracterización es problemática debido, entre otros factores, a la elevada polidispersidad y difícil fraccionamiento. Además, estos polímeros muestran una tendencia a formar agregados, que producen dimensiones dispares según la técnica que se utilice en su caracterización e interaciconan con el relleno de las columnas de cromatografía. Todos estos problemas se soslayan con la utilización de la técnica de cromatografía de exclusión por tamaños con doble de detección, de índices de refracción y difusión de luz de ángulo múltiple, que ha permitido obtener distribuciones de pesos moleculares absolutas de la muestra de polímero, sin necesidad de muestras monodispersas ni de aplicar el calibrado universal. También ha sido posible determinar las distribuciones de las dimensiones, en concreto radio de giro, de cada polímero y sus relaciones con el peso molecular. Estás últimas han aportado información de la microestructura del polímero (geometría de forma que adopta en disolución) y han permitido hacer un estudio de la degradación de poliespirofosfacenos. Por último, el estudio se ha completado con la aplicación de Dinámica Molecular al cálculo de las propiedades de los polifosfacenos y de la posible influencia de los distintos tios de sustituyentes laterales en ellas. La incorporación de un tercer detector, un espectrofotómero ultravioleta, ha suministrado información adicional a la caracterización de copolímeros de distinta proporción Cz/MMA, concretamente su composición química e información a cerca de la heterogeneidad de las muestras. Para ello, se ha desarrollado un método nuevo de cálculo, que ha sido comparado con otro recogido en la bilbiografía. Y por último se han estudiado distintos sistemas hidrófilos empleando como fase móvil agua y disoluciones iónicas de K2SO4 a distintas concentraciones con el fin de modificar la fuerza iónica del disolvente y estudiar su influencia en sus dimensiones.

Autor: ANDUJAR SÁNCHEZ MONTSERRAT.
Año: 2002.
Universidad: ALMERIA.
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALMERÍA.

Resumen: La enzima conversora de angiotensina I (ECA) es una dipeptidil carboxipeptidasa que cataliza la conversión del decapéptido angiotensina I en angiotensina II, un octapéptido que al unirse a sus receptores en los vasos sanguíneos provoca una fuerte vasoconstricción y consecuentemente un aumento de la presión arterial. Los inhibidores de ECA se utilizan como fármacos antihipertensivos, sinedo importante el estudio de esta enzima ya que se utiliza como diana de dichos fármacos. Se ha desarrollado un método de purificación de ECA de pulmón de cerdo que aprovecha el carácter glicoproteico de la enzima para separarla de otras proteínas mediante cromatografía en Concanavalina A Sepharosa 4B que supone un mayor rendimiento en la purificación así como una reducción considerable del tiempo de la misma respecto a otros métodos descritos hasta este momento en bibliografía. Una vez purificada la enzima, sobre ella se han realizado estudios de caracterización molecular y cinética. Se ha determinado el valor del coeficiente de extinción molar de la enzima utilizando el método de Gill y Von Hippel. Se ha realizado un estudio de la estabilidad de la enzmia frente a la temperatura y frente a la unión de diferentes inhibidores. Se ha propuesto un nuevo método para la obtención de la enzima donde se ha sustituido el zinc del sitio activo por cobalto y sobre ésta se ha realizado un estudio molecular y cinético, comparándolo con la enzima nativa. Se ha realizado la caracterización termodinámica mediante calorimetría isotérmica de valoración de la unión de diferentes inhibidores a ECA. Se ha estudiado su unión con enalprilato, lisinoprilo y captoprilo. De forma directa no se puede medir la constante de unión de estos inhibidores con la enzima. Para medirla mediante está técnica se utiliza un método de desplazamiento donde la enzima se valora en primer lugar con un inhibidor débil libre y éste se desplaza posteriormente cuando se valora con un inhibidor de una constante mayor, obteniendo de este experimento una constante aparente que puede medirse por calorimetría isotérmica de valoración. Con los experimentos de desplazamiento de cada uno de los inhibidores se puede determinar su constante a través de un exhaustivo tratamiento de los datos obtenidos. De forma directa el área bajo los picos obtenidos enl os termogramas nos da el valor de la entalpía del proceso. Realizando el estudio en diferentes tampones con diferentes entalpías de ionización se ha determinado el número de protones intercambiados en el proceso de unión del inhibidor a la enzima. Se ha estudiado el cambio del número de protones intercambiados en función del pH para el caso de enalaprilato. Variando la temperatura se ha obtenido el cambio de capacidad calorífica para cada uno de los inhibidores en el intervalo de temperatura estudiado. Este cambio nos permite determinar los cambios de área de superficie accesible al disolvente polares y apolares. Con todos estos datos se determinan todos los parámetros termodinámicos en el proceso de unión de los inhibidores al sitio activo de ECA permitiendo con ello conocer un poco más sobre el mecanismo molecular de esta interacción.

Autor: GONZÁLEZ PÉREZ BEATRIZ.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. QUÍMICAS (UCM).

Resumen: En este trabajo se presenta el estudio estructural mediante la técnica de difracción de Rayos X de dos proteínas implicadas en el ciclo de la metionina (MAT y BHMT, ambas de hígado de rata). MAT (ATP: metionina adenosiltransferasa) cataliza la síntesis de SAM (S-adenosilmetionina), el compuesto donador de metilos más importante del organismo. En esta tesis se presenta la estructura tridimensional de esta enzima, así como la de varios complejos de MAT con su substratos o análogos de los mismos. Con todos los resultados obtenidos, se propone un mecanismo de reacción enzimática para MAT, apoyado en un gran número de datos experimentales. BHMT (Betaína: homocisteína metiltransferasa), cataliza la síntesis de metionina. En esta tesis se presentan numerosos resultados de cristalización y se describe la aplicación de diferentes técnicas de Cristalografía para la resolución de su estructura. También se detalla el procedimiento seguido para la obtención de un modelo de BHMT que aporta información muy valiosa.

Autor: SADQI MOURAD.
Año: 2000.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE LA UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: Se ha estudiado la estabilidad y el plegamiento del dominio SH3 de alfa espectrina(SH3-spc) en el estado nativo mediante el método de intercambio hidrógeno-deuterio(IHD) detectado por resonancia magnética nuclear bidimensional (RMN-2D). Por otra parte se han combinado los resultados de IHD con los obtenidos mediante el estudio del desplegamiento térmico del dominio utilizando la calorimetría diferencial de barrido(CDB) junto con técnicas espectroscópicas como el dicroísmo circular (DC) y RMN. Este trabajo se ha concentrado en el estudio de IHD modificando dos variables experimentales: el Ph y la temperatura enun intervalo amplio de condiciones, desde condiciones en que estabilidad del dominio es elevada a condiciones de estabilidad marginal. Las conclusiones más importantes que se han obtenido son: - El desplegamiento térmico del dominio SH3-spc en disolución de D2o y a baja concentración de muestra se describe bien mediante el modelo de dos estados. - Las interacciones electrostáticas juegan un papel muy importante en la estabilidad del dominio con el efecto del pH. - A 27º C y a pH* muy ácido, el intercambio H/D de la mayoría de los residuos del dominio está controlado por el desplegamiento global. Sólo unos pocos residuos se encuentran implicados en algún tipo de estructura residual en el estado desplegado. - A alta temperatura, las dependencias con la temperatura de los valores de la energía de Gibbs aparente obtenidas por IHD indican de existen un estado parcialmente plegado que es termodinámicamente diferente del nativo y del desplegado. -A partir del estudio del efecto de la concentración de muestra sobre el desplegamiento térmico del dominio a pH 3.0, utilizando diferentes observables experimentales, se ha detectado un estado parcialmente plegado, probablemente dimérico cuyas propiedades termodinámicas se han caracterizado. -Se ha obtenido información estructural del estado dimérico parcialmente plegado del dominio SH3-spc mediante el análisis conjunto de los datos de desplegamiento térmico junto con los datos de IHD a diferentes temperaturas.

Autor: BERNARDO PISA M. VICTORIA.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FARMACIA.

Resumen: En el desarrollo de esta investigación se ha evaluado la liberación controlada de bupivacaína desde dispositivos poliméricos bioestables y/o bidegradables. En cuánto a los soportes bioestables, se han sintetizado hidrogeles copoliméricos de acrilamida/monoitaconato de metilo que incluyen diferentes cargas de bupivacaína. La cinética de liberación sigue un proceso fickiano para las primeras etapas del proceso y muestra una dependencia con la acidez del medio en el cual se encuentran inmersos, aumentando el porcentaje de farmaco liberado desde el 52% a pH 7,5, hasta 80% a pH 1,5. Por otra parte, se ha estudiado la liberación de bupivacaína desde estos hidrogeles y su difusión a través de la piel de oreja de conejo. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto un aumento del flujo del fármaco a través de la piel en función de la cantidad de fármaco incluido en el gel, que determinan la capacidad del fármaco de atravesar la membrana epidérmica. Como soportes biodegradables se sintetizaron perlas de quitosano y microesferas de albúmina y policaprolactona, así como comatrices de poli(láctico-co-glicólico) que incluían microesferas de albúmina y perlas de quitosano. Los estudios de liberación de bupivacaína desde perlas de quitosano y sus comatrices se realizaron en presencia y en ausencia de lisozima. La cantidad de bupivacaína incorporada fue de 15 ug/mg perlas. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que la presencia del enzima acelera el proceso de liberación. Las microesferas de albúmina incorporan 1,9 ug de bupivacaína/mg microesferas. La incubación de las microesferas con proteasa tipo VIII, la cual ejerce un efecto degradativo sobre el fármaco,produce una completa degradación de las microesferas. La comatriz de poli(láctico-co-glicólico) que incluye las microesferas de albúmina retarda el proceso de liberación considerablemente. Los estudios in vivo, tras la implantación subcutánea de la comatriz, permiten obtener una máxima concentración plasmática de bupivacaína de 147 ng/mL alas 95 horas. Los estudios electrónicos y ópticos muestran una muy buena biodegradación de la comatriz, la cual no causa ninguna alteración, ni efecto dañino para los animales de experimentación, lo que hace suponer una buena biocompatibilidad. Los estudios in vitro de liberación de bupivacaína desde microesferas de policaprolactona muestran un elevado porcentaje de incorporación del fármaco en las microesferas, 77 ug/mg microesferas. La cinética de liberación muestra un perfil hiperbólico produciéndole la máxima liberación a las 26 horas. Los estudios in vivo, llevados a cabo mediante inyección subcutánea de las microesferas, permiten obtener una concentración plasmática de bupivacaína de 230 ng/mL a las 105 horas tras la implantación. Los estudios morfológicos muestran una lenta degradación del polimero, aunque apreciable con el paso del tiempo. Los estudios histológicos ponen de manifiesto una buena tolerancia del implante, lo que presupone unas buenas caracteristicas de biocompatibilidad.

Autor: CARRASCO ALTAMIRANO HECTOR.
Año: 2000.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES QUIMICAS.

Resumen: El concepto de diseño funcional de sólidos se basa en el control de la topologia del empaquetamiento cristalino mediante la explotación de fuerzas intermoleculares no covalentes. En este contexto la creación de estructuras ciclicas se fundamenta en la habilidad para anticipar las consecuencias que van a tener las caracteristicas estructurales de las moléculas en la organización ciclica, ya que pequeñas alteraciones estructurales afectan de manera dramatica la organización del estado cristalino. Nosotros hemos encontrado y descubrimos en este trabajo que, en estado solido, los componentes de la familia de hidroxi/acidos de estructura general (+-)-1, se ordenan en agregaciones dependientes de factores estructurales. Así, con la excepcion de las moleculas 1b y 1e, los compuestos 1a-am, que poseen sustituyentes voluminosos y conformacionalmente rigidos, se agregan en bandas y laminas en las que se alternan las subunidades enantioméricas (+) y (-) siguiendo un patron definido, acido carboxilico/alcohol, de puentes de hidrogeno. El homologo (+-)-1n que dispone de sustituyentes de mayor movilidad conformacional produce, por incorporación en la estructura de moleculas de agua, un ensamblaje cíclico hexagonal que se extiende en tres dimensiones formando una estructura tubular. Cada uno de los tubos puede considerarse formado por unidades hexagonales en conformacion de silla que se apilan estrechamente en direccion perpendicular al plano que contiene el macrociclo. Los grupos etilo que presenta la estrucutra (+-)-1n como apendice, se identifican en este trabajo como el volumen minimo y tambien máximo, para bloquear la estructura hexagonal en estado cristalino. Intentos de obtener agregaciones cíclicas usando apendices de menor volumen fracasaron, como es el caso de los compuestos 1o y 1q. Los agregados formados por compuestos que no incorporan agua en la estructuracion cristalina se extienden según patrones de puente de hidrogeno definidos en direcciones uni y bi-dimensionales, mientras que las organizaciones tridimensionales, solo estan presentes en estructuras hidratadas. La estructura cristalina del compuesto anhidro 1n confirma el importante papel que el agua juega en la formación de estructuras tubulares.

Autor: BOFILL ARASA ROGER.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTROADO Y FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Las metalotioneínas MT son proteínas de bajo pedo molecular y elevado contenido en Cys que se caracterizan por su extremada habilidad para enlazar cationes de metales pesados esenciales, como Zn(II) y Cu(I), y tóxicos, como Cd(II), Hg(II) o Ag(I). Este trabajo trata del papel estructural delZn(II) en los procesos de plegamiento de MT de mamífero, insecto y crustáceo en presencia de Cu(I). Las proteínas estudiadas han sido obtenidas mediante la técnica del ADN recombiannte, la cual ha permitido obtenerlas con un elevado grado de pureza. Se han efecutado diferentes estudios sobre su capacidad coordinante in vitro e in vivo en presencia de Cu(I) mediante el uso de diversas técnicas espectroscópicas (UV-Vis, dicroismo ciruclar (DC), emisión e ICP óptico) y mediante espectrometría de masas con ionización por electrospray (ESI-MS). Los resultados obtenidos permiten concluir que el Zn(II) es indispensable para el plegamiento in vivo de la MT recombiante de ratón y de la MT recombinante de bogavante americano (MTH) en presencia de Cu(I), mientras que en el caso de la MT recombinante de Drosophila (MTN) el Zn(II) no presenta ningún papel. Adicionalmente, la afinidad de las MT frente a los metales fisiológicamente activos permite proponer un nuevo sistema de clasificación de estas proteínas. Así, las MT que resultan en la formación exclusiva de especies homometálicas de Cu(I) cuando son expresadas heterólogamente en un medio rico en Cu són tionínas de cobre (p. Ej. MTN), mientras que las MT que resultan en la formación de especies heterometálicas conteniendo a la vez Cu(I) y Zn(II) son tioneínas de zinc (p.ej. MT de ratón, MTH). Esta característica se puede relacionar, mediante una análisis filogenética, con la estructura primaria de las MT. Así pues,la secuencia amonoacída de las MT es probablemente esencial para determinar la funcionalida de estas proteínas en los organismos vivos, la cual hoy en día aun no está totalmente establecida.

Autor: GAVALDÁ ESCUDÉ ANA.
Año: 2000.
Universidad: RAMON LLULL.
Centro de lectura: INSTITUTO QUÍMICO DE SARRIA.
Centro de realización: ESCOLA TÈCNICA SUPERIOR IQS.

Resumen: Se desarrolla un nuevo procedimiento sintético para obtener el 2,7,12,17-tetrafenilporficeno (12), que evita la obtención del 4,4'-difenil-5,5'-difornil-2,2'-bipirrol (19) por tetradescarboxilación del intermedio 3,3',5,5'-tetracarboxi-4,4'-difenil-2,2'-bipirrol (17) y posterior formilación para reintroducir los carbonilos en C5, C5'. Para ello, se ha modificado el itinerario sintético desde el inicio de forma que ha sido posible acceder a un intermedio bipirrólico 49, que contiene dos grupos éster de diferente naturaleza en las posiciones C3, C3' y C5, C5'. La desprotección selectiva de los grupos éster en C3, C3' y la posterior descarboxilación han permitido obtener el 5,5'-dietoxicarbonil-4,4'-difenil-2,2'-bipirrol (20), el cual por reacción de McFayden-Stevens ha conducido al dialdehído 19. Asimismo, se inicia el desarrollo sintético del 2,7,12,17-tetrafenil-9,20-azaporficeno (27), por acoplamiento entre el dialdehído 19 y 5,5'-diamino-4,4'-difenil-2,2'-bipirrol (28). Para ello, se ha iniciado la síntesis de dicha diamina partiendo del diéster 20, el cual se transforma vía la hidrazida 75, en la correspondiente diacilazida 83 que por reacción de Curtius rinde el dicarbamato 84b no ha permitido aislar la diamina 28 debido a su inestabilidad. En consecuencia, no ha sido posible acceder al azaporficeno 27. Por otra parte, se inicia el estudio de la síntesis del 2,7,12,17-tetra-(4-piridil)porficeno (32). Para ello, se parte del 5-metil-3-(4-piridil)pirrol-2-carboxilato de etilo (107), el cual tiene libre la posición beta. La oxidación del grupo metilo de 107 a ácido carboxilico, seguida de una yodación descarboxilativa del mismo conduce, de forma imparable, al término diyodado 135 por yodación simultánea de la posición beta. Aunque la reducción selectiva de dicho yodo en posición beta ha conducido al alfa-yodopirrol 117a, no ha sido posible acceder al 5,5'-dietoxicarbonil-4,4'-bis(4-piridil)-2,2'-bipirrol (96) por acoplamiento de Ullmann. Para ello, se plantea un segundo itinerario que parte del 5-metil-3-(4-piridil)pirrol-2,4-dicarboxilato de dietilo (113) el cual conduce, en varios pasos de síntesis, al 3-(4-piridil)-5-yodopirrol-2-4-dicarboxilato de dietilo (121). La ausencia de reacción en condiciones de Ullmann ha impedido, de nuevo, el acceso al 2,7,12,17-tetra-(4-piridil)porficeno (32). Por último, se han estudiado las propiedades fotobiológicas del 2,7,12,17-tetrafenilporficeno de paladio (II) (200) en células de adenocarcinoma humano de pulmón (A549).

Autor: LOZOYA TORIBIO M. ESTRELLA.
Año: 1997.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: Se ha puesto a punto una tecnica para la modelización molecular de receptores acoplados a proteina G en ausencia de patron tridimensional determinado experimentalmente y se ha aplicado dicha metodologia a la construccion de un modelo tridimensional del receptor 5-HT2A de rata. Dicho modelo ha superado satisfactoriamente todos los controles de calidad habituales para estructuras tridimensionales de proteinas a los que ha sido sometido. Para validar el modelo obtenido, se ha simulado su interacion con su ligando natural, la serotonina y con otros compuestos agonistas (a-metil-5-HT y DOI). Los estudios de generación automatica de complejos agonista-receptor han resultado coherentes con los datos experimentales acerca de los restos implicados en dicho interacción. La misma metodologia ha sido empleada para simular la interacion de compuestos antagonistas (ketanserina, QF610 y QF601) con el modelo de receptor obtenido. Se ha comprobado que los compuestos antagonistas estudiados tambien producen complejos estables dentro del sistio activo postulado para el receptor 5-HT 2a, si bien los restos implicados son diferentes que en el caso de los agonistas. Las comprobaciones de la estabilidad de ambos tipos de complejos mediante simulaciones de dinamica molecular mostraron que los ligandos estudiados permanecen en el sitio activo postulado durante dichos experimentos. Paralelamente, se han llevado a cabo estudios de modelizacion indirecta en los cuales se ha obtenido una buena relación entre la semejanza electrostatica y la actividad biologica al aplicar programas de analisis de la semejanza de distribuciones de Potencial Electrostatico Molecular a series de nuevos antagonistas del receptor 5-HT2a.

Autor: SAMSO ROIG MONTSERRAT.
Año: 1992.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HA DETECTADO QUE LAS HISTONAS H2A,H2B PUEDEN INTERACCIONAR CON EL DNA DE LA PARTICULA NUCLEO (146 PB) EN AUSENCIA DE LAS HISTONAS H3,H4 (ARAGAY, A., DIAZ, P. Y DABAN, J. R. (1988) J. MOL. BIOL. 204, 141-154). LOS EXPERIMENTOS DE DISPERSION DE RAYOS X DE SINCROTRON Y MODELAJE REALIZADOS SOBRE LOS COMPLEJOS DNA-HISTONA EN DISOLUCION A DIFERENTES FUERZAS IONICAS (ENTRE MUY BAJA FUERZA IONICA Y 0.2 M NACI) INDICAN QUE LAS HISTONAS H2A,H2B NO PUEDEN PLEGAR EL DNA, SINO QUE PRODUCEN ESTRUCTURAS ALARGADAS. LOS COMPLEJOS RECONSTITUIDOS PREPARADOS A CONCENTRACION SALINA FISIOLOGICA TANTO A PARTIR DE LAS CUATRO HISTONAS DE LA PARTICULA NUCLEO COMO A PARTIR DE LAS HISTONAS H3,H4 EN AUSENCIA DE LAS H2A,H2B, SON ESTRUCTURAS COMPLETAMENTE PLEGADAS CON UN RADIO DE GIRO SIMILAR AL CORRESPONDIENTE A LAS PARTICULAS NUCLEO NATIVAS (42 A). EL CONJUNTO DE LOS ESTUDIOS REALIZADOS SUGIERE QUE LA CONFORMACION ABIERTA DE LOS COMPLEJOS DNA-(H2A,H2B) FACILITA LA IMPLICACION DE DICHA ESTRUCTURA COMO INTERMEDIARIO TRANSITORIO EN LA REACCION DE FORMACION DEL NUCLEOSOMA A FUERZA IONICA FISIOLOGICA. A PESAR DEL EXTENSO USO DE LA TECNICA DE ELECTROFORESIS DE POLIACRILAMIDA-SODIO DODECIL SULFATO (PAGE-SDS) EN QUIMICA DE PROTEINAS, LA ESTRUCTURA DE LOS COMPLEJOS PROTEINA-SDS ESTA TODAVIA EN ENTREDICHO. EL MODELO MAS CONSIDERADO ACTUALMENTE ASUME QUE DICHAS ESTRUCTURAS CONSISTEN EN BASTONES RIGIDOS CON DIAMETRO CONSTANTE Y LONGITUD EN FUNCION DEL PESO MOLECULAR. EN CONTRASTE, LOS ESTUDIOS DE DISPERSION DE RAYOS X DE SINCROTRON, MODELAJE Y CRIO-MICROSCOPIA ELECTRONICA REALIZADOS EN ESTA TESIS INDICAN QUE LA ESTRUCTURA DE LOS COMPLEJOS PROTEINA-SDS CONSISTE EN UNA SUCESION DE MICELAS MIXTAS PROTEINA-SDS (EN NUMERO PROPORCIONAL AL PESO MOLECULAR DE LA PROTEINA) UNIDAS POR SEGMENTOS DE CADENA POLIPEPTIDICA SIN SDS. DICHAS MICELAS TIENEN UNA ESTRUCTURA ESFERICA CON UN RADIO DE 17 A, Y TIENEN UNA DISTRIBUCION RADIAL DE DENSIDAD ELECTRONICA HETEROGENEA EN LA CUAL EL NUCLEO, CON UNA DENSIDAD ELECTRONICA MENOR QUE LA DEL SOLVENTE, SE ENCUENTRA RODEADO POR UNA CAPA DE 2 A DE GROSOR DE ELEVADA DENSIDAD ELECTRONICA.

Autor: SANCHEZ ORZAEZ M. EMMA.
Año: 1990.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO:.

Resumen: HAN SIDO PUESTOS A PUNTO LOS SISTEMAS DE RECONSTITUCION DE LAS PARTICULAS RIBOSOMALES DE H. MEDITERRANEI, TANTO LA SUBUNIDAD RIBOSOMAL MAYOR, 50S, COMO LA MENOR, 30S, COMO EL RIBOSOMA COMPLETO, 70S, A PARTIR DE SUS COMPONENTES. LOS TRES SISTEMAS MUESTRAN TENER CONDICIONES OPTIMAS DIFERENTES, LO QUE INDICA CARACTERISTICAS DE ESTRUCTURACION DIFERENTES PARA CADA UNA DE LAS PARTICULAS. LOS RESULTADOS INDICAN QUE LOS RIBOSOMAS DE HALOFILAS SON ESTRECHAMENTE DEPENDIENTE DE LA CONCENTRACION SALINA DEL MEDIO, REQUIRIENDO UNAS CONCENTRACIONES CERCANAS A LA SATURACION. ADEMAS LOS RESULTADOS MUESTRAN QUE NO TODAS LAS SALES TIENEN LA MISMA CAPACIDAD DE ESTRUCTURAR LAS PARTICULAS RIBOSOMALES, DESTACANDO EL SULFATO AMONICO COMO SAL ESTRUCTURADORA, FRENTE AL CLORURO POTASICO, SAL MEDIANAMENTE ESTRUCTURADORA. LA IMPORTANCIA DE LA CONCENTRACION DE SAL EN EL PROCESO DE RECONSTITUCION RADICA EN EL TRIPLE PAPEL DESEMPEÑADO: DE UN LADO, ESTA DIRECTAMENTE IMPLICADA EN LA ESTRUCTURACION DE LOS COMPONENTES, Y DE OTRO REGULA LA ESPECIFICIDAD DE RELACION ENTRE ELLOS.

Autor: TIRADO GARCIA M. MERCEDES.
Año: 1981.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE QUIMICA FISICA FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: PARA SOSLAYAR LAS DIFICULTADES DE CALCULO QUE ENTRAÑA LA TEORIA RIGUROSA DE MAGNITUDES DE TRANSPORTE DE MACROMOLECULAS RIGIDAS EN DISOLUCION SE HAN CONSIDERADO EN PRIMER LUGAR POSIBILIDADES DE INCLUSION DE CONSIDERACIONES DE SIMETRIA EN LA REALIZACION PRACTICA DE DICHOS CALCULOS. SE HA ESTUDIADO CONCRETAMENTE EL CASO DE MACROMOLECULAS RIGIDAS CON GEOMETRIA TROMPOSIMETRICA COMO ANILLOS Y CILINDROS. SE HAN APLICADO LOS RESULTADOS A BACTERIOFAGOS T-PA Y ADN DE BAJO PESO MOLECULAR. EN SEGUNDO LUGAR SE HAN ESTUDIADO UNA SERIE DE METODOS APROXIMADOS QUE CON UN LIGERO SACRIFICIO DE EXACTITUD PERMITAN REDUCIR EL TIEMPO DE CALCULO Y MEMORIA DE ORDENADOR. SE HAN EVALUADO LOS ERRORES INTRODUCIDOS POR DIVERSOS METODOS APROXIMADOS PARA UNA GRAN VARIEDAD DE ESTRUCTURAS RIGIDAS DE INTERES BIOLOGICO.