ANALISIS CROMATOGRAFICO

Autor: CABELLO DIAZ MARIA DEL PILAR .
Año: 2004.
Universidad: CASTILLA-LA MANCHA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS.

Resumen: Esta memoria tiene por objeto establecer nuevos métodos analíticos que, mediante técnicas cromatográficas y electroforéticas, permitan de una manera rápida, sensible y precisa, identificas y cuantificas algunas de las drogas más empleadas en el tratamiento del cáncer de mama y de los trastornos depresivos tanto en formulaciones farmacéuticas, como en muestras de orina. La finalidad es aportar metodologías válidas para la determinación conjunta de ambos tipos de drogas, dada su común asociación en el tratamiento de pacientes afectadas por dicha enfermedad.

Autor: MAHUGO SANTANA CRISTINA.
Año: 2004.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA.
Centro de lectura: EDIFICIO DE CIENCIAS BÁSICAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DEL MAR.

Resumen: En la presente Tesis Doctoral se ha planteado, como objetivo general, el desarrollo de nuevos métodos de extracción y preconcentración de derivados fenólicos presentes en muestras medioambientales de diferente naturaleza, utilizando medios micelares como extractantes. Las técnicas estudiadas han sido extracción y preconcentración por punto de nube para muestras líquidas y la extracción asistida por microondas, con medios micelares como extractantes, para muestras sólidas. Se han elegido diferentes derivados fenólicos, entre los que se incluyen clorofenoles, notrofenoles y alquilfenoides. Los surfactantes utilizados son no iónicos, del tipo polioxietilen alquil éteres. Se pretende conseguir una reducción considerable en el timpo empleado en el análisis de las muestras y la sustitución de los disolventes orgánicos por otros extractantes, los surfactantes, menos agresivos con el medio ambiente y de menor coste. Para ello se ha optimizado la extracción de derivados fenólicos en dos tipos de muestras diferentes, muestras líquidas y muestras sólidas, estudiando los diferentes factores que influyen en el proceso. Posteriormente, se ha aplicado la metodología de extracción y preconcentración por punto de nube a muestras de agua de mar y agua depurada y la extracción asistida por microondas para la extracción de derivados fenólicos en muestras de sedimentos marinos y muestras de suelo. Los resultados obtenidos con ambas metodologías ponen de manifiesto que, para los tipos de muestras estudiadas, dichas técnicas con una buena alternativa a los métodos convencionales.

Autor: RIOS LOSADA CAROLINA.
Año: 2003.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: QUIMICA ANALITICA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA UNIVERSIDAD DE GIRONA.

Resumen: El glifosato es uno de los herbicidas más utilizados en el mundo debido a su baja toxicidad y a su amplio espectro de aplicación. Como consecuencia de su gran utilización, es necesario controlar este compuesto y su principal metabolito, ácido aminometilfosfónico (AMPA), en el medio ambiente. Se han descrito varios métodos instrumentales basados en cromatografía de gases (GC) y de líquidos (HPLC), siendo esta última opción la más adecuada debido al carácter polar de los analitos. Pero para determinar concentraciones residuales es necesaria la preconcentración de los compuestos. En este trabajo se estudian diferentes alternativas con este objetivo. Se ha evaluado la técnica de membrana líquida soportada (SLM), donde la membrana consiste en una disolución orgánica que contiene un transportador, en nuestro caso un intercambiador de aniones comercial, Aliquat 336. Los mejores resultados de preconcentración se obtienen con un sistema de fibra hueca (HFSLM), con factores de concentración de 25 y 3 para glifosato y AMPA, respectivamente. También se evalúa la aplicación de una técnica más selectiva, la cromatografía de afinidad con ión metálico inmovilizado (IMAC), que se basa en la interacción entre los analitos y un metal inmovilizado en una resina mediante un grupo funcional de ésta. En este estudio se inmovilizado paladio al grupo funcional 8-hidroxiquinolina de la resina con matriz acrílica Spheron Oxine 1000 y se evalúa para la extracción y preconcentración de glifosato y AMPA. Para ambos analitos la adsorción es del 100% y las recuperaciones son superiores al 80% y 60% para glifosato y AMPA, respectivamente. Estos resultados se comparan con los obtenidos con dos resinas más, también cargadas con paladio: Iontosorb Oxin, que tiene el mismo grupo funcional pero matriz de celulosa, y Spheron Thiol 1000, donde el grupo funcional es un tiol y la matriz también es acrílica. Para glifosato se obtienen resultados similares con todas las resinas, pero para AMPA la resina Spheron Thiol es la única que proporciona recuperaciones superiores al 93%. Finalmente, otra opción estudiada es el acoplamiento de dos columnas de cromatografía líquida (LC-LC). En este estudio el objetivo es mejorar el método existente para glifosato y AMPA en aguas naturales donde el LOD era de 0.25 ug/l. El método consiste en la derivatización precolumna con el reactivo fluorescente FMOC y el análisis mediante acoplamiento LC-LC-fluorescencia. Variando ligeramente las condiciones de derivatización se consigue cuantificar 0.1 ug/l de glifosato y AMPA. Se fortifican aguas naturales con 0.1, 1 y 10 ug/l de los analitos para validar el método. Se obtienen recuperaciones entre el 85 y el 100 %, con RSD inferiores al 8%. Aplicando una técnica de preconcentración previa a la derivatización y análisis utilizando una resina de intercambio aniónico, Amberlite IRA-900, se mejora la sensibilidad del método y se consigue un LOD para glifosato de 0.02 ug/l.

Autor: ZAMORA ZAMORA TATIANA IVETTE.
Año: 2003.
Universidad: JAUME I DE CASTELLON.
Centro de lectura: E.S. DE TECNOLOGIA Y CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: ESCUELA SUPERIOR DE TECNOLOGIA Y CIENCIAS EXPERIMENTALES.

Resumen: En la presente Tesis Doctoral se lleva a cabo el desarrollo de una metodología analítica moderna acorde con el estado tecnológico actual y con las exigencias que demanda la legislación en materia de residuos de plaguicidas, así como de metodología más convencional factible de aplicación en centros de investigación menos desarrollados. De esta manera se han desarrollado varios métodos analíticos mediante técnicas cromatográficas avanzadas (LC-FD, GC-MS, LC-LC-FD, LC-MS/MS) para la determinación de residuos de fungicidas seleccionados en muestras de banana y naranjas. La aplicación de un método multiresiduos basado en la aplicación de un solo procedimiento de extracción para el posterior análisis en paralelo de los extractos mediante cromatografía líquida y cromatografía de gases ha permitido la determinación de residuos de carbendazima, tiabendazol, o-fenilfenol y bitertanol mediante LC-FD/DAD, y de residuos de o-fenilfenol, dicloran, clorotalonil, tiabendazol, imazalil, propiconazol y bitertanol por GC-MS . Para la determinación selectiva de o-fenilfenol se propone la aplicación de un método LC-LC/FD, más rápido, sensible y selectivo que los multiresiduos. Finalmente, se desarrolla un método por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tandem (LC-MS/MS) para la determinación de tridemorf y otros fungicidas de interés. Se ha demostrado la aplicabilidad de los métodos desarrollados en muestras de naranjas y bananas, confirmándose la idoneidad de los métodos multiresiduos para fines de control (monitoring).

Autor: GÁLVEZ BUERBA EVA M..
Año: 2003.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE CARBOQUÍMICA.
Centro de realización: INSTITUTO DE CARBOQUÍMICA.

Resumen: En esta tesis se detallan los resultados y conclusiones concernientes a unas nuevas sondas moleculares que se basan en variaciones de la intensidad de emisión debidos a interacciones dipolares débiles. Cualquier compuesto químico induce un cambio, aumento o disminución en la intensidad de los espectros de fluorescencia de fluoroforos catiónicos heterocromáticos (berberina, bromuro de etidio, azul de tetrazolio) mediante una interacción ion-dipolo inducido y de la betaina de Reichardt mediante una interacción dipolo-dipolo inducido. Interacciones dipolares débiles producen emisión universal de fluorescencia. La sondas emiten en el visible. Estos fenómenos ocurren tanto en ausencia como en presencia de disolvente. La intensidad de emisión entre la sonda y un compuesto químico depende de la constante dieléctrica del medio y es un balance entre procesos radiactivos y no radiactivos. Las sondas descritas pueden ser usadas como sondas de polaridad. Cualquier compuesto químico (fluorescente o no, químico o inorgánico) puede ser detectado cuantitativamente por fluorescencia. La sondas se han acoplado a sistemas cromatográficos (HPLC, TLC) y no cromatográficos (electroforesis en gel).

Autor: FUGUET JORDÁ ELISABET.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: En esta tesis se han estudiado en profundidad los diferentes tipos de interacciones que se establecen entre solutos neutros y las fases pseudoestacionarias en cromatografía electrocinética micel.lar. Para dicho estudio se han utilizado como herramienta modelos de solvatación multiparamétricos que permiten conocer como afecta cada tipo de interacción al mecanismo de retención de los solutos. Estos estudios han permitido conocer la selectividad de las fases pseudoestafacionarias, predecir el comportamiento de los solutos en cada una de ellas y saber también cual es la más apropiada para una separación en concreto, sin la necesidad de determinarlo experimentalmente. Asimismo, en esta tesis también se han desarrollado estudios sobre algunos aspectos básicos de la técnica, como la determinación de los marcadores más apropiados para cada sistema micelar o bien el estudio del fenómeno de desoblamiento de picos, y también sobre temas más aplicados, como la caracterización de liposomas y la optimización

Autor: CARRASCAL GARCÍA VICTOR.
Año: 2003.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Se ha puesto a punto un método de análisis de ácidos orgánicos de cadena corta, mediante técnicas de cromatografía líquida de alta resolución empleando columnas de exclusión iónica y detección de conductividad aplicada a brandy. Su aplicación al 95% de las muestras comerciales de Brandy de Jerez suministradas por su Consejo Regulador permite constatar la presencia de los ácidos tártarico, cítrico, málico, succínico, láctico, fumárico, fórmico y acético en casi todos los casos. Los datos obtenidos fueron tratados mediante la técnica estadística Análisis Lineal Discriminante, que nos permite realizar una clasificación correcta en el 100% de las muestras de Brandy de Jerez Solera, del 41% de Solera Reserva y del 76% de Solera Gran Reserva. Así mismo, se comprueba que el contenido de ácidos orgánicos de cadena corta permite diferenciar al Brandy de Jerez de otros brandies como los franceses, del cognac y del armagnac. En una experiencia de envejecimiento de aguardientes de vino a 40% vol., empleando vasijas "enviadas" con vino de Jerez, requisitos imprescindible para tener derecho a la Denominación Brandy de Jerez, mediante tradicional sistema de criaderas y Solera se ha comprobado la cesión de los ácidos tartárico, cítrico, malico, succínico, siguiendo modelos de agotamiento y de los ácidos fórmicos ácetico con crecimientos en las paredes de la vasija y también ocluido en la madera, úniva vía de cítrico, málico y succínico. Se han caracterizado maceraciones y caramelo autorizadas en la elaboración de brandy mostrandose el caramelo como la única vía de aporte de ácido fumárico a los brandies comerciales. El tratamiento estadístico de los datos obtenidos para acidos en la experiencia de envejecimiento permite encontrar funciones que clasifican adecuadamente los brandies de la Solera y de sus Criaderas y otras que predicen con un 15% de promedio de desviación la vejez real de estos, no resultando de aplicación en los envejecidos por añadas.

Autor: LUQUE GARCIA JOSE LUIS.
Año: 2003.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Dentro de las 3 etapas que conforman el proceso analítico, mientras que la medida y transducción de la señal analítica y la toma y tratamiento de datos han sufrido un desarrollo muy importante en los últimos tiempos, debido principalmente en la introducción de la informática en el laboratorio analítica, la primera etapa, las operaciones previas, no ha sufrido un desarrollo paralelo. De hecho, hoy en día, se siguen utilizando métodos basados en tecnologías del siglo XIX. Dentro de las operaciones previas, el área que ha sufrido un menor desarrollo es la de tratamiento de muestras sólidas, debido a la dificultad que implica el elevado número de matrices sólidas que se pueden encontrar en la naturaleza, que pueden variar desde muestras medioambientales como suelos o sedimientos, hasta muestras biológicas o de alimentos. Dos aspectos clave a la hora de mejorar estos tratamientos de muestras sólidas son conseguir su aceleración y su automatización parcial o total. En estos dos aspectos se ha centrado la investigación recogida en esta tesis. En cuanto a la aceleración se han empleado las llamadas energías auxiliares que son la radiación de microondas, los ultrasonidos, los disolventes a alta presión y temperatura y la radiación láser. Con objeto de conseguir una automatización parcial o total del proceso analítico, se seleccionaron en esta investigación los sistemas de inyección en flujo, debido a su bajo coste y a su amplia versatilidad. Estos sistemas permiten ser usados como propios sistemas constituyentes de dispositivo de tratamiento de muestra o como simples interfaces entre el dispositivo de tratamiento y el instrumento de medida. La tesis se divide en 4 bloques diferenciados dependiendo de la energía auxiliar utilizada: 1,- La primera parte aborda el empleo de la radiación de microondas. La investigación se centró en dos aspectos diferenciados: A,- El acoplamiento de un extractor comercial asistido por microondas con las demás etapas del proceso analítico, proporcionando un sistema totalmente automatizado. B,- El diseño, construcicón y aplicación de diversos prototipos de un nuevo extractor Soxhlet asistido por microondas en la zona del cartucho, que permite actuar de forma similar al extractor convencional pero obviando sus limitaciones y de forma automatizada. 2,- El empleo de agua a alta presión y temperatura para la extracción de diferentes contamianntes de suelos, y el acoplamiento de los extractores a las demás etapas del proceso analítico. 3,- El uso de los ultrasonidos tanto en un sistema continuo de análisis para la determinación de cromo hexavalente en suelo como para asistir la extracción Soxhlet, en el caso de matrices fácilmente compactables. 4,- El empleo de la radiación láser en la técnica LIBS, comparando dicha técnica con técnicas atómicas convencionales para el análisis de muestras homogéneas y heterogéneas.

Autor: RAMIL CRIADO MARÍA.
Año: 2003.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: En esta tesis doctoral se aborda, desde el punto de vista de la Química Analítica, la problemática asociada a la determinación de dos grupos de contaminantes orgánicos persistentes en muestras de diversos orígenes. La primera parte de la memoria está dedicada al desarrollo de alternativas metodológicas que permitan evaluar el destino y la distribución medioambiental de los bifenilos policlorados (PCBs). Este grupo de compuestos tiene un origen claramente antropogénico y pesar de que actualmente su producción industrial se ha detenido, se encuentran ampliamente distribución en la troposfera y en los organismos vivos, debido fundamentalmente a su persistencia, su elevada estabilidad y su carácter lipofílico. En este sentido se ha abordado el desarrollo de metodología analítica que permita conocer su presencia en: 1,- Residuos industriales tales como cenizas y aceites de transformador que constituyen posibles fuentes de entrada de estos compuestos en el medioambiente. 2,- Las concentraciones de estas especies en muestras de aire y materia particulada (ambos considerados como el sistema de distribución de los PCBs en la troposfera), con especial atención al estudio de atmósferas en el interior de edificios y centros de trabajo. 3,- Muestras de grasa de origen animal, consideradas como indicadores por un lado de la exposición medioambiental a los PCBs, y por otro de la utilización fraudulenta de residuos industriales en la alimentación de animales de granja. Evidentemente el consumo de alimentos ricos en grasa constituye la fuente principal de exposición humana a los PCBs. La segunda parte de la memoria se centra en la determinación de fenoles, con especial atención a los clorofenoles, en muestras de aire y materia particulada, así como en cenizas generadas en procesos de incineración. Los fenoles constituyen un grupo de contaminantes orgánicos semivolátiles que suponen un serio riesgo para la salud humana. Una de las vías de entrada de estos compuestos en el cuerpo es la respiración, por ello se ha desarrollado un método para la determinación de fenoles y estos compuestos en el cuerpo es la respiración, por ello se ha desarrollado un método para la determinación de fenoles y clorofenoles en muestras de aire interior, más rápido, sencillo y sensible que los propuestos por diversos organismos tales como la EPA (Environmental Protection Agency). Por otro lado, resulta bien conocido que los procesos de incineración de residuos urbanos, agrícolas e industriales generan siempre una pequeña cantidad de dibenzodioxinas policloradas, cuya determinación analítica resulta una tarea ardua debido fundamentalmente a sus bajos niveles de concentración. Puesto que los clorofenoles puden considerarse como precursores en la formación de dioxinas durante los procesos de combustión, se ha abordado el desarrollo de métodos que permitan la determinación del contenido de clorofenoles en muestras de cenizas, con objeto de utilizarlos como potenciales indicadores de la presencia de dibenzodioxinas policloradas en las mismas.

Autor: MORENO SÁNCHEZ PATRICIA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS.

Resumen: EN la actualidad existe un creciente interés por el desarrollo de metodologías analíticas enfocadas a la identificación y cuantifiación d elas distintas formas químicas de elementos traza esenciales, entre los que destaca el selenio, fundamentalmente en alimentos debido a que, en muchos casos, la fuentes principales de incorporación al organismo proceden de la dieta. Con el fin de conseguir mayor información sobre la forma química en que el selenio se encuentra presente en muestras de interés biológico, en este trabajo se han desarrollado nuevos métodos de tratamiento de muestra sobre materiales biológicos y alimentos (atún, trucha, mejillón, ostra, krill, levadura, trébol y harian de trigo), basados en la extracción en medio acuoso e hidrólisis enzimática. Asimismo se han puesto a punto nuevos métodos de detección e identificación de las distintas especies, que presentan mejores sobre los ya existentes. Toda la metodología utilizada se validó por participación en ejercicios interlaboratorio financiados por la Unión Europea encaminados a la certificación del contenido de especies de selenio. La eficiencia de los procesos de extracción se evaluó mediante la determinación del contenido total de selenio en las muestras, previa mineralización ácida y determinación HG-AAS y HG-AFS. El tratamiento enzimático optimizado produjo la solubilización del 100% del selenio presente en los tejidos estudiados y la identificación de aproximadamente el 30% en forma de especies. La aplicación de un tratamiento basado en la extracción previa en medio acuoso seguida de una hidrólisis enzimática sobre las fracciones solubre y no soluble, mejoró la recuperación de especies de selenio hasta el 74%. Los métodos desarrollados para la detección y cuantificación de las especies de selenio incluyen la separación por cormatografía líquida de alta eficacia con detección por plasma masas, empleándose dos modos cromatográficos, d eintercambio aniónico y catiónico. En todas las muestras analzidas se detectó la especie selenometionina (0.2 to 600 ug g-1) como componente mayoritario. La selenocistina sólo se encontró en las muestras de origen vegetal (0.1-0.7 ug g-1) y las formas inorgánicas en krill, trébol y levadura (0.2-3 ug g-1). La estabilidad de las especies en estudio, durante el proceso de hidrólisis enzimática, se comprobó por análisis de disoluciones patrón bajo las condiciones experimetnales de tratamiento de muestra. También se evaluaron las condiciones más adecuadas para el almacenamiento de muestras de ostra liofilizadas y de los extractos enzimáticos. Para facilitar, se estudió la distribución de compuestos de selenio y otros metales (Co, Cu, Mn, Zn, As, Cd y Pb) en función del peso molecular, extraíbles en fase acuosa en presencia y ausencia de dodecil sulfato sódico. Se utilizó la técnica HPLC-ICP-MS con dos columnas de exclusión molecular, con intervalos de separación comprendidos entre 300-1 kDa y 7-0.1 kDa. Los porcentajes de extracción resultaron ser dependientes del metal estudiado y del tipo de muestra. La distribución de los compuestos de selenio en función del peso molecular está relacionada con el tipo de muestra, lo que supone la existencia de selenoproteínas distintas con posibles funciones biológicas diferentes. La presencia de fracciones con selenio y otros metales implica la existencia de selenoproteínas que asocian otros metales o de metaloproteínas que enlazan selenio.

Autor: BALSALOBRE SALMERÓN NURIA .
Año: 2003.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: En esta Tesis Doctoral se han desarrollado nuevos metodos analíticos para la determinación de compuestos naturales en los alimentos como son las vitaminas hidrosolubles y residuos de antibióticos. Los métodos están basados en el uso de la técnica de Cromatografía Líquida en Fase Reserva con una única fase estacionaria basada en grupos amida.se ha empleado detección espectrofotométrica utilizando un detector de barra de diodos o detección espectrofluorimétrica basada en la fluorescencia natural de los analitos o en la fluorescencia inducida mediante una reacción de derivatización post-columna. Los métodos desarrollados permiten acortar considerablemente el tiempo empleado en los análisis clásicos, incorporando tratamientos de las muestras de alimentos sencillos. Se han optimizado cuidadosamente todos los parámetros que afectan a las separaciones cromatograficas, se ha evaluado la calibración y repetibilidad, aplicado al análisis de diferentes tipos de alimentos y finalmente los métodos se han validado utilizando materiales de referencia certificados. En consecuencia, los métodos propuestos resultan aplicables con indudables ventajas en los análisis de control de calidad en la industria alimentaria.

Autor: MURO TAMAYO DAYSI.
Año: 2003.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICA.

Resumen: Los carbohidratos son los compuestos más abundantes en la naturaleza, por lo que el análisis de azúcares es de suma importancia en la industria de alimentos y bebidas. En sidras, el contenido de azúcares puede emplearse para diferenciar el tipo de mosto de manzana utilizado en su elaboración (fresco o concentrado), así como la técnica de extracción empleada (prensado o licuefacción), ya que cuando se emplea la extracción por licuefacción se incrementa la concentración de aldosas y ácidos urónicos. En aguardientes de sidra, el análisis de azúcares puede ser empleado como un indicador para constatar su autenticidad y el grado de envejecimiento de la bebida, ya que durante el envejecimiento aumenta la concentración de carbohidratos como consecuencia de la hidrólisis de las hemicelulosas que son extraídas de la madera. En nuestra trabajo, se han desarrollado dos metodologías de cromatografía líquida de alta resolución, que permiten la separación y determinación simultánea de aldosas y ácidos urónicos en muestras de sidra y aguardiente de sidra: 1) Cromatografía líquida en fase inversa previa derivatización de los carbohidratos con el reactivo 4-aminobenzoato de estilo y detección espectrofotométrica. 2) Cromatografía de intercambio aniónico en medio básico y detección electroquímica directa empleando un detector amperométrico de pulsos. El estudio del contenido en azúcares en muestras de aguardiente de sidra y el uso de técnicas quimiométricas (PCA, LDA, Análisis Bayesiano y PLS) proporcionó una correcta diferenciación de los aguardientes de sidra en función del tiempo y del tipo de madera empleado en el envejecimiento (Roble Francés y Roble Americano). La determinación de azúcares en muestras de sidra y el empleo de técnicas quimiométricas, tales como PCA y el análisis Bayesiano, permitió distinguir el tipo de mosto de manzana empleado en su elaboración (fresco o concentrado), así como la técnica de extracción usada (licuefacción o prensado). Mediante el Análisis Bayesiano fue posible detectar la adicción a las muestras de sidra de concentrado de licuefacción en cantidad igual o superior al 5% y un 10% cuando se añadió concentrado de prensa.

Autor: LAVIANA GONZALEZ LUIS.
Año: 2003.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE OVIEDO.

Resumen: ACTUALMENTE, LA INDUSTRIA FARMACÉUTICA SE VE OBLIGADA A DISPONER DE MÉTODOS DE ANÁLISIS CON LOS QUE PODER OBTENER UN COMPLETO CONOCIMIENTO DE LOS PRODUCTOS FABRICADOS ASÍ COMO DE LOS PROCESOS IMPLICADOS EN SU SÍNTESIS. CON ELLO SE PERSIGUE EL CUMPLIMIENTO DE LAS NORMATIVAS LEGALES, CADA VEZ MÁS EXIGENTES, ESTABLECIDOS POR LOS ORGANISMOS REGULADORES COMPETENTES, ASÍ COMO UNA MEJORA EN LA COMPETITIVIDAD DE LA EMPRESA. EN ESTA TESIS DOCTORAL SE HAN DESARROLLADO Y VALIDADO CUATRO MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS DE HPLC PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE DOS ANTIBIÓTICOS DE DISTINTA NATURALEZA AZITROMICINA (MACRÓLIDO) Y SULTAMICILINA (DERIVADO DE PENICILINA); Y DE DOS FÁRMACOS CON PROPIEDADES HIPNÓTICO-SEDANTES: MIDAZOLAM Y ZOLPIDEM. LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS DESARROLLADOS SE HAN UTILIZADO TAMBIÉN PARA EL CONTROL DE PROCESO DE VARIAS ETAPAS DE LA FABRICACIÓN DE CADA UNO DE LOS FÁRMACOS MENCIONADOS CONEL FIN DE OPTIMIZAR LA SÍNTESIS DE DICHOS PRODUCTOS. FINALMENTE, CABE DESTACAR QUE LA VERSATILIDAD DE LA METODOLOGÍA PUESTA A PUNTO HA PERMITIDO ABORDAR ESTUDIOS ESCAMINADOS A DISTINGUIR PRODUCTOS OBTENIDOS POR DIFERENTES VÍAS SINTÉTICAS O EVALUAR DISTINTAS FORMULACIONES GALÉNICAS PARA LA ADMINISTRACIÓN DE LOS FÁRMACOS.

Autor: ALVAREZ LLAMAS GLORIA.
Año: 2003.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: QUIMICA .
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: La presente Tesis Doctoral se ha enfocado del potencial analítico de las técnicas electroforéticas de separación (electroforesis capilar en zona o CZE, cromatografía capilar electrocinética micelar o MEKC y electromatografía capilar o CEC) propuestas en al literatura por su elevado poder de resolución y selectividad para la separación de bio-moléculas. Su estudio y aplicación se ha dirigido al análisis de metalotioneínas (MTs), proteínas de gran interés biológico por su implicación en procesos biológicos tanto de control homeostático de metales esenciales en el ámbito celuar como de detoxificación de elementos nocivos. De las características funcionales de las MTs se deduce la importancia de disponer de técnicas atómicas que permitan la identificación no sólo de las diferentes formas de proteínas presentes en un organismo sino también del elemento/s enlazao/s a cada una de ellas. De aquí la importancia de contar con un detector atómico multielemental de elevada sensibilidad como es el ICP-MS. En este sentido, las investigaciones detalladas a lo largo de la presente Tesis se han basado en la puesta a punto de distintas interfases de acoplamiento CE-ICP-MS así como de metodologías de pre-concentración en línea, tales que permitan abordar con éxito la identificación de las distintas formas de MTs unidas a metales en orgnismos vivos a niveles basales, es decir en organismos no expuestos a condiciones de inducción de la síntesis proteica.

Autor: VIVÓ TRUYOLS GABRIEL IGNACIO.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE VALÉNCIA.

Resumen: Se realizan diversos avances en el campo de Optimización y en el tratamiento de datos en Cromatografía Líquida de Alta Resolución. En el campo de la Optimización se desarrolla un nuevo concepto denominado "optimización por fases móviles complementarias", que consiste en la búsqueda de dos o más condiciones experimentales escogidas de modo que cada una de ellas se ocupe de resolver máximamente un subconjunto de solutos de interés de la mezcla. El resto de compuestos, que se deben resolver con la(s) otra(s) condición(es) experimentalmente óptimcas, pueden permanecer solapados. El método explota de una manera eficaz las capacidades de un sistema cromatográfico dado. Se proponen dos algoritmos para la búsqueda de condiciones complementarias óptimas: el barrido sistemático de todos los conjuntos de condiciones experimentales posibles y el uso de algoritmo genéticos. La primera estrategia solamente es posible cuando el número de solutos involucrados, el número de condiciones experimentales a examinar, y el número de fases móviles complementarias son suficientemente bajos. Sin embargo, con frecuencia los casos de interés son a menudo tan complejos que no pueden resolverse ni siquiera con algoritmos genéticos convencionales. Para superar estas dificultades se desarrolló un método alternativo que consiste en la hibridación de un algoritmo genético con un método de búsqueda. La optimización local se implementa como una etapa adicional dentro de las operaciones genéticas. Los resultados obtenidos con el algoritmo híbrido fueron notablemente mejores que los conseguidos con un algoritmo genético tradicional. Se realizó una extensión de la idea de fases móviles complementarias a la combinación de distintos sistemas de separación (incluyendo varios disolventes y/o columnas). Los resultados obtenidos con sistemas complementarios superaron significativamente las capacidades separadoras de cada sistema por separado. Se proponen distintos estudios para la optimización de programas de gradiente de elución. Por un lado, se evalúa la cantidad de información útil extraíble de diseños experimentales tanto de gradiente como isocráticos. Este estudio se dirige a medir regurosamente las composiciones de fase móvil en las que la retención isocrática puede ser predicha con exactitud dado un diseño de gradiente determinado. Con tal objetivo se define un nuevo concepto, el "intervalo informativo de disolvente", que se calcula a partir de la modificación de la ecuación de propagación de errores en regresión. El intervalo informativo de disolvente se utiliza para ponderar regresiones con el objetivo de mejorar la calidad de las predicciones de gradiente. En el campo del tratamiento de señales, se desarrollan métodos de análisis de datos de dos vías, construidos incorporando varios cromatogramas relacionados entre sí correspondientes a más de un experimento. Con ello, se realiza una deconvolución conmjunta de perfiles de pcio teniendo en cuenta más de una inyección que aporta un orden de medida adicional. Generalmente, los resultados mejoraron notablemente los ofrecidos por la deconvolución indpendiente de cada señal. Por otro lado, se extiende el concepto de algoritmo genético híbrido a variables contínuas, y se propone como método de deconvolución. Finalmente, se proponen nuevos criterios de optimización cromatográficos orientados a obtener las mejores condiciones experimentales si se acepta como herramienta válida al deconvolución de los datos. Para ello, se consideraron medidas de resolución derivadas del concepto de señal neta de analito (e.g., la selectividad multivariante). Esta última medida, dio lugar a resultados mejor correlacionados con el terror de deconvolución, lo que la hace recomendable como función objetivo cromatográfica.

Autor: CHECA MORENO RAMÓN.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: En la investigación llevada a cabo se ha desarrollado una metodología analítica que permite la caracterización del material aglutinante proteico habitualmente presente en obras pictóricas. Esta investigación se ha estructurado en varias etapas: * Se han seleccionado unas condiciones cromatográficas de determinación de los aminoácidos constituyentes de las proteínas suficientemente, sensibles, específicas y selectivas basadas en la derivación de los mismos mediante fenilisotiocianato (PITC). * Se ha desarrollado un procedimiento de extracción de material aglutinante proteico presente en obras pictóricas para su posterior identificación. * Seguidamente se ha elaborado una colección de sustancias de origen natural y naturaleza proteica similares a las empleadas por los antiguos artistas en sus obras que serán empleadas como patrones de comparación para la posterior identificación del aglutinante proteico. * La posterior caracterización de dichas sustancias a través de su composición en aminoácidos nos ha permitido proceder a la modelización de la naturaleza de las mismas, mediante modelos matemáticos adecuados empleando una técnica ampliamente conocida de reconocimiento de pautas como es SIMCA. * Finalmente se ha procedido a la aplicación de esta metodología a la identificación del material aglutinante proteico presente en muestras procedentes de diversas muestras de origen pictórico com pergaminos, lienzos, esculturas y pinturas murales pertenecientes al patrimonio histórico artístico de Granada.

Autor: CRESPIN AGUILERA MIGUEL ÁNGEL .
Año: 2002.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Los objetivos de esta Memoria han sido el desarrollo de nuevos métodos de extracción de compuestos fenólicos en muestras de interés medioambiental mediante sistemas semiautomáticos continuos. Se ha seguido la línea de investigación orientada a la aportación de nuevos avances en la automatización de la primera etapa del proceso analítico, las operaciones previas, que se encuentran menos desarrollada que las otras dos etapas del proceso analítico (la medida/transducción de la señal y adquisición/tratamiento de datos). A modo de resumen, en los siguientes apartados se comentan cada estudio realizado en el desarrollo de esta memoria. A,- Se ha realizado un estudio sobre las posibilidades de la espectrometría de masas en las tres modalidades de ionización (EI, PCI y NCI) para la identificación/descriminación de isómeros de compuestos fenólicos. B,- Se han desarrollado analizadores de flujo simples basados en la extracción en fase sólida para la preconcentración/limpieza de los extractos de fenoles en muestras de agua y orina. C,- Se pone a punto una metodología rápida basada en la extracción de estos compuestos por lixiviación en muestras de suelos. Por último, se realiza un estudio de campo sobre la degradación de herbicidas a sus metabolitos fenólicos en suelos agrícolas. D,- Se realiza un estudio sobre muestras de orina, poniendo de manifiesto la presencia de estos compuestos en personas expuestas y no expuestas a estos compuestos, a la vez que se llega a la conclusión de que la ingesta de alimentos es el principal factor que contribuye a la presencia de estos compuestos en la orina.

Autor: MEDINA LAMA IGNACIO.
Año: 2002.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE LA UNIVERSIDAD DE MÁLAGA (LA TESIS).

Resumen: Se diseñan métodos de determinación de la pureza enantiomérica de las sustancias estirenglicol, ácido citramálico, canadina, malacitanina y n-óxido de canadina mediante HPLC y detección polarimétrica, sin separación física de los enantiómeros, tanto en fase normal como en fase reversa. Con dos de las sustancias (Canadina y malacitanina), se desarrolla un método alternativo con separación física de los enantiómeros mediante HPLC y detección UV y fluorimétrica, usando columnas tipo Pirkle (Chirex 3019 y Chirex 3020, respectivamente). La aportación principal de la tesis es la disminución y corrección del efecto ria (refractive index artefac) sobre las medidas del detector polarimétrico. Gracias a estas correcciones es posible desarrollar los métodos de determinación de la pureza enantimérica a sustancias quirales cuyos enantiómeros poseen bajos valores de su rotación específica.

Autor: RIVED SÁNCHEZ FERNANDO.
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA .
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA.

Resumen: * Se ha explicado la variación que experimenta el pKa de cinco electrolitos (de tipo ácido, base y sal) al variar la composición del medio en que se encuentran disueltos (tert-butanol) mediante la adición de un consolvente (isopropanol, etanol, metanol, n-hexano y benceno). * Se ha utilizado la aproximación LSER para cuantificar las principales interacciones soluto-disolvente que intervienen en la disociación de los cinco electrolitos estudiados. * Se han determinado las densidades, viscosidades, índices de refracción y constantes dieléctricas de las mezclas binarias estudiadas en todo el intervalo de composición. Además se han incluido en el estudio las mezclas tert-butanol-agua. * Mediante una serie de indicadores solvatocrómicos se han determinado una serie de parámetros solvatocrómicos como Et(30), alfa, beta y * en todo el intervalo de composición mediante la utilización de un modelo de solvatación preferencial. * Se ha propuesto una modificación al modelo de solvatación preferencial inicialmente utilizado para estudiar el efecto del reforzamiento de la estructura del agua en las mezclas de alcohol-agua. * Se han establecido correlaciones lineales entre los valores de pKa en metanol y los valores de pKa en agua para los derivados del fenol, los ácidos carboxílicos alifáticos y aromáticos, aminas y bases heterocíclicas nitrogenadas protonadas. Las correlaciones obtenidas han sido buenas y permite calcular el valor de pKa en agua a partir del valor de pKa en metanol correspondiente. * Como alternativas al modelo de Izmailov para estimar los valores de pKa, se han comparado entre sí los modelos de Hammett-Taft y de Drago. Debido a que los resultados obtenidos mediante ambos modelos son comparables, aún partiendo de planteamiento diferentes, era lógico pensar que debía existir una relación entre los parámetros de ambos modelos. Esta relación se ha establecido entre el parámetro de p de Hammett-Taft, por un lado, y los parámetros dE y dC de Drago, por otro. Ha quedado demostrado que el parámetro p queda completamente explicado mediante los componentes electrostático y covalente del modelo de Drago. * A partir del modelo de solvatación preferencial se deduce la ecuación utilizada para estudiar todo el intervalo de composición de la mezcla binaria agua-metanol para los compuestos estudiados. * El mismo tipo de ecuación empleado para relacionar los valores de pKa en agua y metanol se utiliza para relacionar los valores de pKa, a diferentes composiciones del sistema binario agua-metanol frente a los valores de pKa en agua para cada una de las familias de compuestos estudiados. Estas correlaciones se han establecido exitosamente en todo el intervalo de composición. * A partir de los parámetros de las correlaciones anteriroes se ha deducido una ecuación para cada una de las familias de compuestos estudiados que permite estimar el valor de pKa de un compuesto de estas familias a cualquier composición de la mezcla agua-metanol deseada.

Autor: GARCIA FERNANDEZ ANTONIA .
Año: 2002.
Universidad: SAN PABLO CEU.
Centro de lectura: FACULTAD DE CC. EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES Y DE LA SALUD.

Resumen: En este trabajo se ha optimizado un método por electroforesis capilar zonal con detección directa, polaridad invertida y capilar recubierto que permite realizar la separación, detección e incluso confirmación de la presencia de cantidades anormalmente elevadas de 37 ácidos orgánicos de cadena corta en orina y otros fluidos biológicos. Además se ha descartado la interferencia analítica de compuestos debidos a la medicación que reciben estos pacientes. Se ha validado su capacidad de identificación en muestras patológicas reales. Basándonos en este trabajo se ha diseñado un KIT para la detección de acidurias orgánicas en orina que se ha implantado ya en algunos hospitales. Además se ha desarrollado un método para la recogida de muestras de orina en papel absorbente para su posterior estudio por el método propuesto. Asimismo, se ha optimizado el método para el análisis de ácidos orgánicos en condiciones fisiológicas. Se ha validado el método para la cuantificación de seis ácidos y se han establecido los valores control de 4 de ellos por esta técnica. Se ha validado, un método para la medida de oxalato y citrato en muestras de orina por electroforesis capilar zonal. El método es rápido, el tratamiento previo es inferior a cinco minutos y menos de 10 minutos de tiempo de análisis, es automático, simple y económico. Su implantación en laboratorios clínicos ha demostrado ya la amortización del coste del equipo en el primer año de uso respecto a la compra de kits de análisis enzimáticos. Se ha desarrollado y validado un método para la cuantificación de los ácidos vainillilmandélico, homovainíllico y 5-hidroxiindolacético marcadores de neuroblastomas, feocromocito-mas y síndrome carcinoide en orina por CZE. Se ha aplicado a su determinación en una muestra de orina de un paciente pudiendo observarse las variaciones asociadas a su situación pre- y post-intervención quirúrgica. Los trabajos realizados en la presente tesis doctoral han permitido desarrollar nuevas metodologías basadas en la electroforesis capilar para la evaluación de ácidos orgánicos en fluidos biológicos de forma rápida y sencilla que resultan de gran interés desde el punto de vista práctico y que pueden permitir avanzar en otras áreas de conocimiento.